第二十章常用分子生物学技术的原理及应用The Principle and Application of Common Used Techniquesin Molecular Biology掌握：1.分子杂交技术的概念及基本原理2.Southern、Northern、Western印迹法的适用范围。
3.聚合酶链式反应的概念及基本原理4.了解基本概念学习要求学习要求第二十章 常用分子生物学技术第一节 核酸分子杂交第二节 聚合酶链反应第三节 基因文库第四节 生物芯片技术第五节 生物大分子相互作用研究技术核酸的分子杂交：碱基序列互补的单链核酸，根据碱基互补原则，借助氢键相连而形成双链杂交分子的过程。
以DNA的变性和复性为理论基础复性RNA DNA•将探针与固定在NC膜上的DNA或RNA进行结合反应，探针的序列如与NC膜上的核酸序列相互补，就可结合到膜上的相应区带，经放射自显影或其他检测手段就可判断膜上是否有同源的核酸分子存在。
•硝酸纤维素膜(nitrocellulose filter membrane，简称NC 膜)探针(probe)的概念用来检测某一特定核苷酸序列或基因序列的已知被标记的DNA片段或RNA片段探针的种类o寡核苷酸探针o基因组DNA探针o cDNA探针o RNA探针•常用探针标记方法：1.放射性核素标记(放射自显影）2.生物素标记（酶联反应-显色）3.地高辛标记（酶联反应-显色）4.分子信标（荧光）第一节 分子杂交技术 – 应用1.Southern印迹杂交法：检测特异DNA片段2.Nouthern印迹杂交法：检测特异的RNA片段3.Western印迹杂交法：检测蛋白质（一）Southern blottingl1975年，英国Edwen Southern创建l检测DNA杂交方法，即将DNA电泳、转印到固相支持物上，用探针进行检测的方法。
l原始文献出处：Southern EM. Detection ofspecific sequences among DNA fragmentsseparated by gel electrophoresis. J Mol Biol，1975, 98(3):503-517.（一）Southern blotting10×SSC转移缓冲液Whatman 滤纸凝胶Whatman 滤纸纸巾玻璃板重物支持物500g与探针同源杂交的基因组DNA DNA 酶切片段内切酶NC 膜或尼龙膜Southern转膜---如何转膜？•常用方法：毛细管虹吸印迹法电转印法真空转移法电转印法Southert blotting用途•1、酶切图谱分析•2、特定基因定性和定量•3、基因突变分析•4、限制性片段长度多态性的分析（二）RNA 印迹技术(Northern blotting)相同点：Alwine JC , et al . Method for detection of specific RNA s in agarose gels by transfer to diazobenzyloxymethyl-paper and hybridization with DNA probes.Proc Natl Acad Sci USA, 1977, 74(12):5350-5354原始文献出处名称相对于Southern blotting•转移的是RNA •转移前无需酶切•转移效率较高•变性方法不同点原理均为毛细作用。
