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本次实验项目：
肝脏谷丙转氨酶活力测定
本次实验课时：验证性 4学时
教学要求：
1．掌握实验原理，了解转氨酶的性质及临床意义
2. 掌握谷丙转氨酶活力的测定方法
重 点：实验原理、转氨酶的转氨基作用。
教学手段及教具：课堂讲授，学生实验操作。
肝脏谷丙转氨酶活力测定（验证性）
相关知识
１．酶的提纯基本操作程序及基本原则
２．酶的活力单位（IU）的定义及酶活力的测定（酶的定量测定）
３．测定酶活力一般经如下几个步骤
①选择适宜的一定浓度的底物。
②确定酶促反应的条件。优化条件
③将一定量的酶液和底物溶液混合，确定反应时间（因要测定酶促反应初速度） 。
④反应到一定时间后取出反应液终止反应。
⑤测定产物的生成量。
⑥计算酶活力、酶的比活力。
４．酶的比活力－－表示酶纯度的指标
每单位酶蛋白所含的活力单位数。
➢ 对固体酶：比活力＝活力单位/mg酶蛋白
➢ 对液体酶：比活力＝活力单位/ml酶液
比活力越大，酶的活力越大，含酶量或有活性的酶量越多。
５．总活力、纯化倍数和回收率
讲授内容及时间分配：
课堂讲授
1．相关知识…………………………………………………………… …… 0.1 学时
2．实验目的………………………………………………………………… … 0.1 学时
3．实验原理…………………………………………………………………… 0.3 学时
4．实验操作 …………………………………………………… … 0.2 学时
实验教学
肝脏谷丙转氨酶活力测定实验的操作技术…………………………… …… 3 学时
参考资料
《生物化学实验》
６．酶活力测定方法—不同酶选用不同的方法
７．氨基酸转氨基作用、联合脱氨基作用
８．谷丙转氨酶及临床意义: 查肝功为什么要抽血化验转氨酶指数呢？
谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST，GOT）是人体内糖和蛋白质互相转变所需的酶，人再生体内分布广泛。ALT的分布以肝中最高，主要存在于肝细胞浆中，AST存在于肝细胞浆和线粒体内。其次是肾、心、骨骼肌、脾等。AST的分布则以心肌最高，其次为肝、骨骼肌、肾脏等。
谷草转氨酶（GOT、AST、SGOT）测定及意义
谷草转氨酶又名天门冬氨酸氨基转移酶，在心肌细胞中含量最高，所以当心肌细胞受到损伤时，大量的酶释放人血，使血清含量增加，临床一般常作为心肌梗塞和心肌炎的辅助检查，但肝脏损害时其血清浓度也可升高，当谷丙转氨酶（ALT）明显升高，谷丙/谷草比值>1时，就提示有肝实质的损害。
1．正常参考值
速率法：8～40 U/L
赖氏法：8～28 卡门单位
2．临床意义
病理性升高：
（1）心肌梗塞发病6～12小时显著升高，增高的程度可反映损害的程度，并在发作后48小时达到最高值，约3～5天恢复正常；
（2）各种肝病AST可增高，肝病早期和慢性肝炎增高不明显，AST/ALT比值小于1。严重肝病和肝病后期增高，AST/ALT比值大于1；
（3）其他疾病如心肌炎、肾炎及肺炎等AST也轻度升高。
肝功能中各检测项目的测定方法、测定原理和临床意义
1、血清总胆汁酸TBA：
（1）测定方法：A、酶循环法，B、3a-HDS法（3-a羟类固醇脱氧酶）
（2）测定原理
方法A：胆汁酸被3α羟基类固醇脱氢酶（3a-HSDH）及口-硫代烟酰胺嘌
呤二核苷酸氧化型特异性的氧化，生成3酮类固醇及}硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸
还原型。此外，生成的3酮类固醇在3α羟基类固醇脱氢酶及β硫代烟酰胺嘌
呤二核苷酸还原型存在下，生成胆汁酸及β烟酰胺嘌呤二核苷酸氧化型。以上
依据循环酶而放大量的胆汁酸测定生成的β-硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸还原型
的吸光度，计算血清中胆汁酸的量。
方法B：在3-a羟类固醇脱氧酶作用下，各种胆汁酸C3上α位的羟基脱
氧形成羰基，同时氧化型NAD还原成NADH随后NADH上的氢由黄递酶催化转移
给硝基四氮唑蓝（NTB）产生甲替,用磷酸中止反应,甲替的产量与总胆汁酸成正
比，在波长540nm比色,与同样处理的标准品比较，计算其含量。
（3）临床意义
1.测定血清中胆汁酸可提供肝胆系统是否正常，肝、胆疾病时周围血循环中的
胆汁酸水平明显升高。急性肝炎早期和肝外阻塞性黄疸时可增至正常值的100
倍以上。对肝胆系统疾病的诊断具有特异性。
2．可敏感地反映肝胆系统疾病的病变过程。肝胆疾病时血清胆汁酸浓度的升高
与其他肝功能试验及肝组织学变化极为吻合，在肝细胞仅有轻微坏死时，血清
胆汁酸的升高，常比其他检查更为灵敏。据报道，急性肝炎、肝硬化、原发性
肝癌、急性肝内胆汁郁滞、原发性胆汁性肝硬化以及肝外阻塞性黄疸，其血清
胆汁酸均100 ％出现异常。上述疾病时均有血清胆汁酸含量的增高。
2、丙氨酸氨基转移酶ALT（1）测定方法：酶偶联法，赖氏法，连续监测法（2）测定原理：L-丙氨酸 + α-酮戊二酸---ALT----L-丙酮酸 + L-谷氨酸 丙酮酸 +NADH+H+---------LD-------L--乳酸+NAD+
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201628
毒死蜱对大鳞副泥鳅的急性毒性和生理毒性研究
摘要：为了估测农药毒死蜱的环境毒性，以大鳞副泥鳅（paramisgurnus dabryanus）为受试动物，研究毒死蜱对大鳞副泥鳅的急性毒性和生理毒性作用。研究结果表明，毒死蜱稀释液对大鳞副泥鳅的24、48、96 h的半数致死浓度（lc50）分别为524.76、291.53、193.20 μg/l，安全浓度为26.99 μg/l；对照组肝组织谷丙转氨酶（gpt）和谷草转氨酶（got）的平均活力分别为24.53 u/g和16.69 u/g；试验组肝组织的gpt和got活力最低分别可达到2.65
u/g和2.81 u/g。毒死蜱对大鳞副泥鳅具有明显的急性毒性和生理毒性效应，并表现出明显的剂量-时间效应。
关键词：毒死蜱；大鳞副泥鳅（paramisgurnus dabryanus）；急性毒性；谷丙转氨酶；谷草转氨酶
中图分类号：s948；q958.116 文献标识码：a 文章编号：0439-8114（2013）09-2116-03
鱼类是水生生物链的重要环节，对水质变化尤为敏感，是水质污染的高危种群。大鳞副泥鳅（paramisgurnus dabryanus）属鱼纲鲤形目鳅科花鳅亚科副泥鳅属，其肉质鲜美，营养丰富，富含蛋白质和多种维生素，并具有较高的药用价值，是人们所喜爱的水产佳品。常散养于田间和池塘，因此是检测水体中农药残留的理想水生生物。
毒死蜱（chlorpyrifos）又名氯吡硫磷，其化学名称为o，o-二乙基-o-（3，5，6-三氯-2-吡啶基）硫代磷酸酯，是一种广谱、高效的有机磷农药。其具有杀虫范围广、毒性较小等特点，在农业病虫害防治上被广泛使用；但由于农业生产中的不合理使用，雨水冲刷、淋溶及农药厂污水的任意排放等，使毒死蜱进入河流、湖泊、海洋等水生生态系统，对水生生物的生存及人类健康构成潜在威胁，成为常见的农药污染物之一。
近年来，li等[1]曾报道过毒死蜱对草鱼的毒性效应，侯方浩等[2]报道过毒死蜱对锦鲫性腺的影响及其在鱼组织中的富集。因此，研究毒死蜱对水生生物的毒性效应，特别是利用生物标志物为指标，评价毒死蜱对水生生态的影响具有重要意义。国内目前尚未见有毒死蜱对大鳞副泥鳅肝细胞转氨酶影响方面的研究。本研究以大鳞副泥鳅为材料，探究了毒死蜱对大鳞副泥鳅的急性毒性效应和肝脏中两种转氨酶活性的影响，旨在探索毒死蜱对大鳞副泥鳅的毒害作用，从而为杀虫剂的合理使用、保障渔业生产和生物安全提供一定的科学依据。
