激光共聚焦显微镜操作方法-confocol

(1)用室温下的PBS洗涤细胞三次，弃去PBS；

(2)用4%的多聚甲醛溶液37o C固定细胞15-30min；

(3)用PBS洗三次，每次5min；

(4)用0.2%的TritonX-100透化细胞10min；

(5)PBS洗三次，每次5min；

(6)用含1%的二抗来源血清(消除非特异性影响)的PBS封闭1h；

(7)PBS洗三次，每次5min；

(8)室温孵育一抗1h(用封闭液配制,1:50)；(两个抗体可以一起孵育)

(9)PBS洗三次，每次5min；

(10)室温避光孵育二抗1h(用封闭液配制,1:50)；

(11)用PBS洗三次，每次5min (以下步骤均需避光进行) ；

(可省略)(12)用RNase在37o C下消化细胞30min(使用终浓度为20μg/ml)以除去细胞内的RNA；

(13)PBS洗三次，每次5min；

(14)用Hochest33342对细胞核进行染色(使用浓度为1μg/ml,1:1000),室温避光处理20min；

(15)用PBS洗三次，每次5min；

(16)置于激光共聚焦扫描显微镜下,用100×油镜进行观察,并保存结果。