实验一 杀虫剂初步毒力测定1、 实验原理：初筛试验，又称初步综合杀虫毒力试验。
这种试验不涉及毒杀方式和毒杀能力的大小，一般采用较高的浓度，尽量发挥综合毒效（包括胃毒、触杀、薰蒸等作用）。
一般农药初筛毒力测定方法，根据试虫对象不同，多采用浸渍法、喷雾法、喷粉法、饲料混药法等。
每处理需试虫15-30头，可以不设重复，每次试验均要设空白对照，施药时要注意各处理用药等量均匀一致。
一般液剂在0.1-1%，粉剂1-10%。
2、 实验方法与步骤1、 药剂配制：将A、B药剂配成0.1%的溶液备用。
2、 试虫移取：取小菜蛾3龄幼虫集中混匀后，用毛笔刷入培养皿，每处理10头，重复一次。
3、 喷布质量检定：用9cm的白色园纸片来检查喷雾雾滴的大小和喷布是否均匀一致，如不符合要求，可调节喷头及位置，使喷布质量达到基本要求。
4、 处理方法：采用喷雾法，选用potter喷雾塔，喷布药液前，用清水及欲喷洒的药液大量喷布。
换药前需将受药盘及雾化室底部用布充分擦净，然后大量喷布试验的药液。
在接有小菜蛾的培养皿中加入一定新鲜菜叶后，用移液管吸取3ml药液进行喷布，约10秒后，待药液全部沉降，取出培养皿，做好标记，空白对照只喷洒清水。
待药剂干后，将试虫连同饲料置于恢复室内培养24小时后检查结果。
3、 实验注意事项：1、 目标试虫的选择：应选用具有一定的代表性及经济价值，耐药性较强、生长健壮、自然死亡率底，虫龄虫体大小一致，最好采用人工饲养的试虫。
2、 环境条件的选择：温度在20-28℃，相对湿度在60%-80%，通气良好。
3、 处理设计：每处理需试虫15-30头，可以不设重复，每次试验均要设空白对照，施药时要注意各处理用药等量均匀一致。
4、 实验结果处理：处理24小时，48小时后，检查死活虫数，计算死亡率及校正死亡率，并比较不同药剂的毒力大小。
试虫死活标准，一般以能正常活动或飞翔的或能正常行动的作为活虫，其余中毒的均为死虫。
5、 思考题：1、 将筛选药剂的毒力试验结果记入杀虫剂初步毒力试验记载表，并写成报告。
2、 杀虫剂初步毒力测定在杀虫剂的筛选中有什么重要意义。
实验二 杀菌剂抑菌圈测定法二．实验原理：抑菌圈法又叫水平扩散法，此法最早曾广泛应用于抗菌素的效价测定，随后也被用于农业杀菌剂的毒力测定。
其基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂，使其接触培养基或病原菌，经过适当时间的培养后，接触部分的周围由于抗菌物质或杀菌剂的渗透扩散作用，杀死病菌的营养体（菌丝体）、繁殖体（孢子）或抑制其在培养基上生长，而产生抑菌圈。
实验证明，在一定浓度范围内的药剂浓度与抑菌圈直径大小有一定的关系，即杀菌剂在一定范围内抑制菌圈直径或其平方与浓度的对数成直线函数关系，以抑菌圈直径或直径平方为纵轴，药剂浓度的对数为横轴，可绘成直线。
如果被测的几种药剂所绘成的直线相互平行，则可根据一定浓度下抑菌圈大小进行不同药剂毒力大小的比较。
抑菌圈法已被国际上通用的抗菌素效价测定方法。
四．实验方法与步骤：1、 药液配制：使用无菌水，将四环素分别配制成0.05、0.10、0.20、0.40、0.80μg/ml，定容至10ml。
以无菌水为对照。
2、 芽孢悬浮液的制备：3、 制备载菌培养基平面：将熔化的培养基（已灭菌）冷却到45-50℃时，在无菌条件下，加入适量菌液（按0.5%加入）。
混匀后，立即注入平板，每个平板注入培养基10.0 mL，凝固后备用。
4、 药剂处理：在载菌培养基平面上放置牛津杯，（或将配好的药剂倒入灭菌的小培养皿内，用消毒镊子将已灭菌的滤纸片放入药液中浸泡1分钟后取出，放在消毒滤纸上，使滤纸片上多余的药剂被吸去，在无菌条件下，放入载菌培养基平面上）。
共需要4只载菌培养皿，2只为一组，分成二组。
在每只培养皿放6个牛津杯（或滤纸片），放置位置如下图所示，图中O代表牛津杯（或滤纸片），1，2，3，4，5分别代表配制的0.05、0.10、0.20、0.40、0.80μg/ml 5种药剂浓度，每个牛津杯内加入药液0.2ml，并作好标记。
5、 培养：处理的培养皿，先放置在2-4℃的冰箱内4-6小时，待药剂在培养基中充分扩散后，再放入28℃培养。
五．实验注意事项：1、本实验要注意无菌操作，整个实验操作过程在无菌操作台上完成。
2、药液和培养基混合时注意培养基的温度（45-50℃，温度过高会烫死病菌，过低培养基会凝固），并保证混合均匀。
3、检查结果时十字交叉量抑菌圈直径，取其平均值。
（以毫米为单位）六．实验结果处理：处理的培养皿，先放置在2-4℃的冰箱内4-6小时，待药剂在培养基中充分扩散后，再放入28℃培养，30-40小时后检查结果，用尺十字交叉测量抑菌圈直径（以毫米为单位），取平均值。
将每个培养皿中的0.20μg /ml的抑菌圈直径（共8个）求出总平均值；求出每组（2个）培养皿中0.20μg /ml直径（共4个）的平均值。
总平均值与各组平均值的差数即为该组培养皿的校正值。
用校正值来校正本组其他浓度的抑菌圈直径（比总平均值小的加上校正值，比总平均值大的则减去校正值）。
以药剂浓度对数为横轴，以抑菌圈直径为纵轴绘制曲线，如果各曲线平行，根据药量反应曲线上的中等浓度比较不同的的药剂的抑菌圈大小，以此来判定药剂毒力大小。
七．思考题：1、将实验结果记载于抑菌圈测定结果记载表上，整理的结果在方格纸上或对数纸上绘成药量反应曲线。
以药剂浓度对数为横轴，以抑菌圈直径为纵轴绘成曲线。
如果各曲线平行，根据药量反应曲线上的中等浓度比较不同的药剂的抑菌圈大小，以此来判断药剂毒力。
并完成实验报告。
2、水平扩散法包括哪些试验方法，各有何特点。
3、影响试验结果有哪些关键因子，应从哪些地方注意操作才能避免。
实验三 高粱根茎法测定除草剂的毒力二．实验原理：大多数除草剂在其亚致死剂量（或浓度）下，常对测试材料的幼根和幼茎的生长影响很大，这种影响程度的大小与除草剂的剂量正相关。
高粱根茎法适用于大多数非光合作用抑制剂的测定。
它具有操作简单，测定周期短的优点。
四．实验方法与步骤：1. 药液的配制：将除草通乳油配制成浓度为0，0.5，2.0，8.0，16.0ppm的溶液各100mL，贴好标签。
（注明药剂名称、浓度、配制日期等）2． 装砂：把经过高温消毒的石英砂或黄砂装满直径为9cm的培养皿，用砂盖将砂刮平。
3． 滴施药液：按浓度由低至高的顺序，分别取20mL的待测药液缓缓滴加与全皿砂中。
为保证药液均匀，药液不可滴得太快，滴至药液刚刚将全皿砂湿透为止。
重复3次。
写好标签。
4． 播种培养：首先用细玻璃棒在砂皿下半部均匀地扎10个小孔，孔径的大小应与高粱种子大小相近。
选取10粒根长为0.1-0.2cm的萌发种子，均匀地排列与小孔中，注意胚根、胚芽向上应一致，盖好皿盖，用红笔在盖上点出胚芽尖的位置（橡皮筋固定后），再将各处理培养皿按浓度次序排列与瓷盘中（直立稍斜，与垂直面成15°角），置于26-28℃，在黑暗培养箱中培养36-42小时。
五．实验注意事项：1、植物种子的选择，应选取饱满，大小一致，健康无病虫害的种子。
2、掌握植物种子的浸种、催芽方法，选取刚萌发的种子来进行实验。
3、注意本法适用的除草剂、植物种子的范围。
六．实验结果处理：将高粱种子培养一段时间后，取出培养皿，仔细量取高粱的幼根、幼芽的长度，并作好记录。
将各处理结果取平均值分别计算抑制生长率，根据测定结果，以药剂浓度的对数值为x，抑制率换算成机率值为y，求毒力回归方程y=a+bx，并求抑制中浓度（IC50）值，且进行可靠性检验。
实验四 杀菌剂温室盆栽实验——棉籽药剂拌种实验二．实验原理：药剂拌种的作用是杀死或抑制附着在种子表面或潜育在种子内部的病菌，保护幼苗不被病菌侵染而发病。
药剂拌种可用于多种作物，如禾谷类小麦、高粱、玉米等可用药剂拌种防治附着在种子表面的黑穗病和黑粉病菌；用于棉花种子上，可防治棉花炭疽、立枯病菌等。
室内药剂拌种试验的方法有两种：1）、利用人工保存菌种处理种子，将带菌种子用药剂进行处理，处理后的种子放在有琼脂培养基的培养皿中或放在细菌难以生长的培养基中，并放在病菌适宜的温度下保持7-10天，观察种子周围有无此病菌生长，是何状态，判断药剂效果。
2）、利用天然带菌种子，以各种不同药剂处理后，播种在盆钵土壤内，一定时间后观察种子发芽率、发病率、苗高及有无病斑。
本实验采用的供试种子是棉花种子，供试菌种为棉花炭疽病菌，用第一种方法进行人工接种，制成带菌种子。
四．实验方法与步骤：1、选种：选取粒大、饱满、色泽一致、健壮无病虫的棉花种子，每个处理称取20克，共称8份。
2、温汤浸种：将挑选的棉花种子（留1份作对照）放在温水（45℃左右）浸泡一下湿润绒毛，然后捞出棉籽放入50-55℃温水中烫30分钟，并不断上下翻动棉籽，使受热均匀。
30分钟后捞出棉籽，凉至七成干。
3、菌液拌种：取在棉杆上培养15天（或在试管斜面上培养7天）的棉花炭疽病菌，用无菌水制成孢子悬浮液，用纱布过滤，在显微镜下检查孢子数目，低倍镜下每个视野30-100个左右，共制备150ml菌液。
将晾至七成干的棉花种子（留1份不拌菌液作对照）放入装有一定量菌液的烧杯中，用玻棒搅拌，使棉籽表面均匀的附着棉花炭疽病菌的孢子，取出晾至七成干，分别进行药剂处理。
4、药剂处理：分别称取多菌灵等药剂，药量分别为种子重量的0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%，按种子重量分别计算所需药量。
用分析天平称取所需药剂，放入拌种容器内，再加入晾至7成干的带菌棉籽（留1份不拌药剂作对照），用玻棒搅拌使药剂均匀附着在棉籽上。
5、种子的培育：（1）室内培养基培养带菌种子：将融化的马铃薯培养基均匀地倒入灭菌的培养皿内（每个培养皿15ml），凝固后放入药剂处理的种子，每皿放10粒，每处理设三个重复。
对照共三个：1）、未经任何处理的棉籽；2）、温汤浸种未拌菌液的种子；3）、温汤浸种拌菌液但未拌药剂的种子。
每个处理完成后，应作好标记，放入25-28℃下培养7天以后观察种子的发芽率和发病率。
（2）温室带菌种子培育的方法：将经过高压灭菌的土壤装入花盆内（每盆装土为花盆的2/3），用自来水浇湿土壤，等水渗透后，用镊子夹取处理的棉籽播种于花盆内，每盆播种20粒，先播对照，再播种药剂处理的种子，然后在种子上盖一层干的灭菌土壤。
每个处理作好标记，放在25℃下培育，经过2周左右观察种子的发芽率和发病率。
五．实验注意事项：1、植物种子的选择，应选取饱满，大小一致，健康无病虫害的种子。
2、药剂拌种一定要均匀。
3、种子培育过程中，要注意无菌操作，尽量减少杂菌污染。
六．实验结果处理：（1）室内培养基培养带菌种子：处理后的棉籽培养7天以后，检查种子的发芽率和发病率。
决定种子是否带菌，看种子周围的培养基上有无病菌生长，此病菌是何状态。
