第九章农药生物测定

《农药生物测定》教学大纲一、基本信息二、教学目标及任务通过该课程的学习，使学生在了解农药生物测定发展史、研究内容的基础上，掌握农药生物测定试验设计的基本原则和统计学基础，熟悉目标生物的选择和饲养（培育），并能独立进行农药的室内毒力测定、农药混用及大田药效试验。

三、学时分配四、教学内容及教学要求第一章生物测定实验设计与统计分析的基本原理第一节农药生物测定实验设计的基本原则1．试验方法的确定2．试验试材的选择和饲养（培育）3．其它原则第二节农药生物测定实验的统计分析原理习题要点：农药生物测定的定义，农药生物测定实验设计的基本原则本章重点、难点：农药生物测定实验设计的基本原则和生物测定的统计分析原理。

本章教学要求：了解测试对象的标准化饲养（培育）方法，掌握农药生物测定实验设计的基本原则，理解生物测定的统计分析原理。

第二章杀虫剂生物测定技术第一节触杀毒力测定第二节胃毒毒力测定第三节内吸毒力测定第四节熏蒸毒力测定第五节杀虫剂的其它作用的毒力测定1．杀卵效力的生物测定2．几丁质合成抑制剂的生物测定3．拒食效力的生物测定4．驱避效力的生物测定5．引诱剂的生物测定6．不育剂的生物测定习题要点：触杀剂、胃毒剂、熏蒸剂、内吸作用本章重点、难点：杀虫剂生物测定的理论基础和影响因素。

本章教学要求：了解不同作用方式杀虫剂的生物测定方法，掌握杀虫剂生物测定的理论基础、影响因素、操作过程中的注意事项。

第三章杀菌剂的生物测定技术第一节杀菌剂生物测定定义、测定技术的基本类型及数据分析；1．生物测定过去、现在和将来；定义2．基本类型3．数据分析第二节杀菌剂毒力测定1．孢子萌发法2．生长速率法3．附着法4．气体效力测定法5．扩散法6．形态观察法7．形态观察法第三节杀菌剂抗药性常用的检测方法1．苯并咪唑类杀菌剂2．麦角甾醇类杀菌剂3．甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂习题要点：杀菌剂的毒力测定和杀菌剂药效生物测定，生物测定的种类及其适用前提本章重点、难点：杀菌剂生物测定的理论基础和影响因素。

1、标准目标昆虫：是指被普遍采用的，具有一定代表性和经济意义，以及抗药力稳定均匀的农药杀虫毒力和毒效指示试虫群体。

2、毒力：是指药剂本身对不同生物发生直接作用的性质和程度。

3、药效：是在田间或接近田间的条件下所测定的药剂对生物的作用效果。

4、致死中量的置信限：即致死中量的可靠范围，亦即供试昆虫种群致死中量真值的波动范围。

5、内吸杀虫剂：凡是可以通过植物根茎叶以及种子等部位渗入植物内部组织，随着植物体液传导植株，不妨碍植物的生长发育，而对害虫具有很高毒效的化学物质，称为内吸杀虫剂。

6、内吸杀虫作用：昆虫由于受内吸杀虫剂的毒杀作用而致死亡的过程，称之为内吸杀虫作用。

7、杀菌剂室内生物测定：将杀菌物质作用于细菌、真菌或其它病原物（包括线虫）,根据其作用效果的大小来判断药剂毒力。

8、除草剂的生物测定：利用生物体（作物试材、杂草试材，主要指有害生物）对除草剂的反应，来测定除草剂的毒性及其效果的基本方法。

9、杀虫剂室内生物测定：在实验室条件下，以昆虫（包括螨类）对杀虫剂的反应来鉴别某一种农药或某一类化合物的生物活性测定的一种基本方法。

1、杀虫剂生物测定存在的问题（1）评判标准单一（2）人为地固定检查时间（3）无统一的标准试虫（4）一般用校正死亡率表示核心是没有系统评判生物测定结果的方法和标准。

2、影响杀虫剂毒力测定的主要因素分析（1）杀虫剂和溶剂杀虫剂：其理化性质是决定毒力的根本原因。

溶剂：对药剂本身的理化性质一般不产生影响，但不同溶剂会影响昆虫表皮。

（2）环境条件温度：影响到处理前---养虫；影响到处理过程中---挥发、吸收等；影响到处理后---昆虫的死亡率。

湿度：一般不影响杀虫剂的穿透性及作用速度，也不影响解毒过程，通常它只影响昆虫对杀虫剂的忍受力。

光照条件以及昆虫在药剂处理前后的食物供应，营养条件等也会影响到测定结果。

（3）供试昆虫：不同种类的昆虫敏感性不同；同种昆虫不同品系对杀虫剂的敏感性也不同；昆虫不同发育阶段对杀虫剂的敏感性也不同（卵期通常对杀虫剂的敏感性比较低，通常以为有杀虫卵作用的杀虫剂，有很多主要是杀了初孵幼虫）；昆虫的性别与生殖对杀虫剂的敏感性（一般雌性昆虫对杀虫剂的敏感性比雄性昆虫低，但对有机磷杀虫剂来讲，则雌性个体比雄性个体感受性低。

《农药生物测定》复习重点农药生物测定的简史第一时期：19世纪末~ 1920至1923年间:研究出测定白喉抗毒素含量的标准方法.特点：都是用单个动物体作直接的效力测定，将待测的药剂与标准药剂相比较来估计其相对药效。

第二时期：20世纪30年代至20世纪70年代1937年欧文首先提出了系统的生物测定方法报告;1947年芬尼出版了系统的生物测定统计方法;1950年芬尼及古德温出版《生物测定标准化》一书;1957年布斯维纳（）出版《杀虫剂生物测定评述》;1959年张宗炳在其《昆虫毒理学》一书中,以专章对杀虫剂生物测定及统计分析作了系统的论述;1963年张泽溥等出版《杀虫剂及杀菌剂的生物测定》;1984年张泽溥出版《生物测定统计》专着。

特点：研究出以生物群体为反应基础的生物测定方法，提高了测定精度。

第三时期：20世纪70年代至今1. 研究利用昆虫神经电生理方法检测化合物对昆虫的拒食活性已取得进展。

2. 杀菌剂也由以传统的病原菌离体试验方法为主，转变为寄主植物上的活体试验为主。

3. 20世纪80年代以来介于活体与离体之间的植物组织培养生物测定方法受到了广泛的重视，有可能发展成一类新的杀菌剂生物测定方法。

如适用于细菌性病害筛选的块根法；适用于大麦白粉病筛选的芽鞘表皮法等。

第四时期：20世纪70年代至今发展趋势：1.随着分子生物学及生理、生化方面研究技术的提高，运用分子生物学技术和生化技术进行生测的研究亦发展很快，如对新药剂的筛选及利用酶学试验进行害物抗药性的监测和增效剂的筛选等等。

2.由于电子计算机软、硬件的迅速发展，农药生物测定中的统计分析，早已普遍程序化和微机化，使生物测定结果的分析计算更加简便、快捷，也更加准确、可靠。

农药生物测定中应注意的几点：1.运用特定的试验设计；2.在一定条件下（局部控制）进行；3.均以群体反应为基础，以生物统计为工具。

农药生物测定的定义:运用特定的试验设计，利用生物对农药的反应，并以生物统计为工具，分析供试对象在一定条件下的效应，来度量某种农药的生物活性。

名词解释：1，生物测定：生物测定是通过生物活体产生的反应来评价一种物质或一种过程的本质、组成或效力的一种方法。

农药生物测定：度量农药对生物体群体、个体和活体组织、细胞产生效应大小的生物测定技术。

杀虫剂生物测定：度量杀虫剂对螨类及昆虫产生效应大小的生物测定方法引诱剂生物测定：通过诱聚昆虫数量的变化来反映引诱剂效力的生物测定方法杀菌剂生物测定：是将一种杀菌活性化合物作用于靶标生物或施药于植物或非靶标生物产生各种效应的测定技术除草剂生物测定：度量除草剂对杂草生物效应大小和对作物安全性的生物测定方法植物生长调节剂生物测定：利用某些敏感植物某些性状作为指标，对生理活性物质进行定性测量或定量测定的生物测定技术。

2，LD50：（致死中量）能使供试昆虫50%死亡的所用试剂剂量LC50：（致死中浓度）能使供试昆虫50%个体死亡所用的药剂浓度LT50：（致死中时）能使供试昆虫50%个体死亡所用的时间KT50：（击倒中时）能使供试昆虫50%个体中毒击倒所用的时间3，ED50：（有效中量）能使供试病原菌半数表现出某种药效所用的剂量EC50：（有效中浓度）能使供试菌体半数表现出某种药效所用的药剂浓度4，IC50：（抑制中浓度）能使某种杂草供试群体的生长发育和生理生化指标减少或抑制50%所需要的药剂浓度。

5，生物源农药：指直接利用生物活体或生物代谢过程中产生的具有生物活性的物质或从生物体提取的物质作为防治病虫草害的直接农药。

植物源农药：指利用植物杀菌、杀虫、杀草的某部位或提取的有效成分制成的农药。

6，触杀毒力测定：使杀虫剂经体壁进入虫体，到达作用部位而产生中毒致死反应，由此来衡量杀虫剂触杀毒力的生物测定。

胃毒毒力测定：通过试虫吞食带药食料，引起消化道中毒致死反应，由此来。

內吸毒力测定：使药剂经根茎叶或种子吸收传导后，通过供试昆虫吸食含毒汁液而引起中毒反应，由此来、、、、、、熏蒸毒力测定：使药剂从气门进入虫体，到达作用部位而引起昆虫中毒致死反应，由此来。

第九章杀虫剂残留分析杀虫剂种类多、应用广泛，对粮食生产和人类疾病控制意义重大。

杀虫剂在农产品和环境中的残留尤其受到人们普遍的关注。

按照化学结构不同，杀虫剂可分为有机氯杀虫剂、有机磷杀虫剂、氨基甲酸酯杀虫剂、有机氮杀虫剂、拟除虫菊酯杀虫剂以及其他种类杀虫剂。

本章介绍主要类别杀虫剂的单残留测定方法。

9.1 有机氯杀虫剂9.1.1 概述有机氯杀虫剂是发现和应用最早的一类人工合成杀虫剂。

20世纪40～70年代，该类农药在全世界广泛应用，其中，滴滴涕和六六六是当时生产量最大、使用最广泛的品种。

数十年中，滴滴涕广泛用于灭虱和灭蚊，对控制斑疹伤寒和疟疾的传播起了重大作用，挽救了几千万人的生命。

有机氯杀虫剂除了滴滴涕、六六六以外，还有一些其他曾广泛使用的品种，如毒杀芬、艾氏剂、异艾氏剂、狄氏剂、异狄氏剂、七氯、氯丹、硫丹等。

这些有机氯杀虫剂品种在环境中性质稳定，广泛使用后，会造成环境污染，通过食物链进行生物浓缩，破坏生态平衡，对人畜可能产生慢性中毒，甚至进入人体或牛奶中，对婴儿的健康造成潜在危害。

1970年前后，许多国家都颁布了禁用或限制使用有机氯杀虫剂的规定，只有少数品种，如甲氧滴滴涕、三氯杀虫酯等对环境污染小，没有累积作用，还在继续应用。

有机氯杀虫剂的环境污染主要在于这些农药对水体、土壤等的污染。

由于有机氯农药在环境中性质稳定，有生物积累作用，因此这类农药的残留分析始终具有特殊的意义。

9.1.2 分析特点1.提取方法对有机氯杀虫剂残留的提取，根据基质不同，一般采用索氏提取法、振荡法、超声波法、捣碎法、固相提取法以及洗脱法、消化法、液-液分配法等。

⑴.土壤对于土壤中有机氯农药残留，常采用浸渍法、振荡法、索氏提取法进行提取，提取剂一般采用极性较强的丙酮或乙腈；或者采用混合溶剂正己烷（石油醚）-丙酮或正己烷（石油醚）-异丙醇，其中正己烷（石油醚）-丙酮较常用。

提取过程中，土壤一般取湿样，或风干后加入一定量的水，使土壤中保持一定的水分，有利于提取溶剂的浸入，提高提取效果。

农药生物活性测定实验指导实验指导游洪扁1农药生物活性的测定实验一供试目标昆虫的饲养--棉铃虫的取食一、实验目的：1.阐明标准靶昆虫取食在生物测定中的意义；2.了解常见目标昆虫的取食条件和方法；3.学习棉铃虫的饲养方法。

二、实验原理：农药生物测定必须使用大量数量整齐、健康状况一致、年龄一致的标准目标昆虫，以确保对农药毒力的准确反应。

因此，有必要人为提高农药生物测定的目标昆虫标准，以确保被测昆虫的充足供应，这是农药毒性试验最基本的部分。

饲养目标昆虫的种类，除采用农作物害虫外，仓库害虫、卫生害虫及其他繁殖力强，便于饲养的昆虫也可采用，通过饲养条件的控制，促使供试目标昆虫尽量达到生理状况一致，以减少试验中的误差。

棉铃虫属于鳞翅目夜蛾科。

它的饮食很杂，可以长时间饲养。

然而，幼虫在三龄后有互相残杀的习惯，因此必须单独饲养。

这种昆虫可以用天然植物饲料喂养，如棉花芽、青豆、新鲜玉米和胡椒。

如果连续大规模喂食，必须使用人工喂食。

三、主要仪器及试材：1.试验昆虫：棉铃虫；2、饲养用具：养虫室，培养皿（15cm），培养皿（5cm）,养虫缸，纱布等。

3、饲料：（1）、饲料组成：熟大豆粉（g）20.0玉米粉（g）30.0大麦粉（g）30.0抗坏血酸（g）1.0干酵母（g）8.0琼脂（g）3.5苯甲酸钠（g）0.8棉油(ml)0.536％醋酸(ml)6.010％甲醛(ml)1.0水(ml)200(2)、配制方法：取总水量的30%，加入玉米粉等成分搅拌；另取70%水溶解琼脂，冷却至70℃后与上述成分混合；饲料应均匀倒入培养皿（15cm），厚度为1.0-1.5cm，冷却备用。

四、实验方法与步骤：1.喂食条件：养虫室温度保持26――28℃，相对湿度60%――70%，12小时光照。

2、饲养方法：（1）、在培养皿（16cm）放入约0.3――0.5mm厚的饲料若干块，将附有卵块的纱布放入皿内，用黑布将皿口封住，布上压玻璃板，缸下部对着光源，孵化的幼虫可很快到饲料上取食。

《农药生物测定》课程教学大纲一、课程基本信息课程代码：课程名称：农药生物测定英文名称： Bioassay of Pesticide课程类别：专业选修课学时： 30学分： 1.5适用对象 : 植物保护考核方式：考试 ( 期末考试占 70%、试验占 20%、平时占 10%)先修课程：《植物化学保护》、《农业昆虫学》、《农业病理学》、《杂草学》、《田间试验和统计方法》、《普学》、《有机化学》、《仪器分析》等。

二、课程简介农药生物测定是度量农药对动植物群体、个体、活体组织或细胞产生效应大小的生物测定技术，是制药工程专业重要的必修课之一。

三、课程性质与教学目的学习本课程的主要目的是使学生学习并掌握杀虫剂、杀菌剂、除草剂及杀线虫剂的室生物测定和大田药效试验的基本理论和基本技能。

掌握各类农药生物测定结果的评判和统计分析方法。

通过本课程的学习，要求学生掌握杀虫剂的室毒力测定原理、触杀毒力、胃毒毒力、吸毒力、熏蒸毒力、拒食活性等生物活性测定的方法；掌握杀菌剂室孢子萌发法，含毒介质培养法及盆栽试验等的测定方法；掌握除草剂生物测定原理及种子发育、植株生长量、生理生化指标的测定方法；掌握大田药效试验的设计原理和统计分析方法。

四、教学容及要求第一章绪论（一）目的与要求（二）教学容1.主要容：论述农药生物测定的概念、发展历史、农药生物测定的容及地位。

2.基本概念和知识点：3．问题与应用（能力要求）：正确理解生物测定、农药生物测定的定义，了解农药生物测定的发展历史，掌握农药生物测定研究容，领会农药生物测定的地位和作用。

( 三) 课后练习1．查阅资料，了解农药生物测定的现状及主要技术。

（四）教学方法与手段本课程采用课堂教学与课堂讨论的形式开展教学。

第二章杀虫剂的生物测定（一）目的与要求：1．正确理解和熟练掌握杀虫剂（包括特异性昆虫抑制剂）基本理念和概念和具体方法；2．掌握农药室生物测定的评判和统计分析方法；3．熟悉标准目标昆虫的饲养。

农药⽣物测定实验指导农药⽣物测定实验指导（⾃编试⽤1.0）主编：姜兴印副主编：赵春青张卫光制药⼯程专业⽤⼭东农业⼤学植物保护学院2008年9⽉棉铃⾍⼈⼯饲料制备⼀、实验⽬的学习棉铃⾍⼈⼯饲料制备技术和⽅法。

本⽅法还适合⽟⽶螟等⼈⼯饲料的制备。

⼆、实验⽤品和仪器设备仪器设备：天平、⾼压灭菌器、罐头瓶、电饭锅、筛⼦（40⽬）、量筒、搪瓷盘、温度计实验物品：⼩麦粉、⽟⽶粉、黄⾖粉、啤酒酵母粉、琼脂、棉叶、V C、棉油、苯甲酸钠、⼭梨酸钾、兽⽤链霉素、⽔等三、实验⽅法1. 配⽅：2. ⼩麦粉、⽟⽶粉、黄⾖粉、酵母粉和棉叶装⼊罐头瓶中，⾼压灭菌40min.（120℃）3. ⽔+琼脂煮开冷却⾄70℃，加⼊Vc、防腐剂、棉油混匀，再加⼊混合好的其他成分，充分混匀。

4. 倒⼊搪瓷盘，加盖冷却后放⼊冰箱中备⽤。

四、质量检查饲料冷却后观察颜⾊和固化成型情况。

五、实验报告农药⽣物测定药剂配制⼀、实验⽬的学习⽣物测定药剂配制的实验操作技术和⽅法。

⼆、实验⽤品和仪器设备电⼦天平、计算器、烧杯、移液管、吸⽿球、记号笔、容量瓶、量筒等。

实验原药：93%顺式氯氰菊酯，95%吡⾍啉实验制剂：50%多菌灵WP，2.5%功夫EC(w/w)，33%施⽥补EC(w/v)三、实验⽅法1. 原药母液的配制与稀释（1）⽤丙酮配制2％顺式氯氰菊酯母液50mL，然后稀释成200mg/L 50mL 丙酮液。

（2）⽤丙酮配制1％吡⾍啉母液50mL，然后稀释成125mg/L 50mL丙酮液（3）将顺式氯氰菊酯和吡⾍啉按照5：2的⽐例混合，配制1.5%混剂50mL 丙酮液。

2. 制剂的稀释（1）50%多菌灵WP，稀释成200mg/L 100mL的⽔溶液（烧杯）。

（2）2.5%功夫EC，稀释成1000mg/L 100mL的⽔溶液（烧杯）。

（3）33%施⽥补EC，稀释成150mg/L 100mL的⽔溶液（烧杯）。

四、结果计算和处理将以上每⼀种母液配制和稀释需要原药和制剂的量计算，并详细描述配制和稀释过程。

农药生物测定实验指导（研究生）实验一培养基的制作、灭菌和病原菌的接种、培养一、实验目的：1、熟悉并掌握微生物用培养基的制作及灭菌的原理及使用；2、熟悉并掌握微生物的接种、培养及保存方法。

二、实验原理：培养基是供微生物生长的基物，分液体和固体两种。

按成分又可分为天然培养基、半组合培养基和组合培养基。

培养真菌所用的培养基一般用马铃薯培养基，它是半组合培养基，制作比较简单，且能够完全满足微生物的营养要求。

灭菌是杀死所有微生物，保证培养基不被杂菌污染的重要手段之一。

灭菌的方法有四种：热力灭菌、过滤灭菌、化学灭菌和物理灭菌。

热力灭菌在微生物灭菌中占主要地位，分干热灭菌和湿热灭菌。

干热灭菌是利用热空气来灭菌，将玻璃器皿等放入烘箱中加热，一般用160-170℃处理1小时或150℃处理2小时，适用于经高温处理不易损坏的干燥物质。

湿热灭菌，即高压蒸汽灭菌，是将灭菌物放入灭菌锅内，维持一定的蒸汽压力，一般为1公斤/cm2左右（相当于121℃），维持半小时，以确保杀死所有微生物，适用于高温高压下不易分解变质的物质和玻璃器皿。

湿热灭菌比干热灭菌效率高。

病原菌接种培养是杀菌剂毒力测定经常进行的工作之一，因培养基性状不同，可采用不同的接种方法。

本实验是练习在固体培养基上接种。

固体培养基的接种方法分倾注和斜面两种接种方法。

接种后的菌种，必须放在适温下培养，在培养期间注意观察菌种的生长情况和有无杂菌污染，温度要保持恒温，培养成熟的菌种必须很好地保存。

三．主要仪器及试材：1、实验器皿：培养皿、容量瓶、移液管、无菌水、PDA培养基[注：以上器皿须经灭菌。

]2、实验仪器：超净工作台、灭菌锅、培养箱、打孔器、酒精灯等。

四．实验方法与步骤：（一）、培养基的制作：1、培养基的组成（PDA）：去皮马铃薯块200克葡萄糖（或蔗糖）10-20克琼脂17-20克水1000ml2、步骤：（1）、在大烧杯中加入1000ml的水，作上标记；（2）、称取去皮马铃薯200克，切成小块，放入盛有水的烧杯中，煮沸30分钟左右，将薯块捞出，留下汁液；（3）、称取17-20克琼脂（事先用水浸泡），加入烧杯中，煮溶后，称取葡萄糖（或蔗糖）10-20克，加入汁液中溶解。