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实验二线粒体和液泡系的超活染色与观察一、实验目的：（1）观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。
（2）学习一些细胞器的超活染色技术。
二、实验原理：线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。
詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。
中性红为弱碱性染料，对液泡系（即高尔基体）的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。
三、实验用品：1、材料：人口腔上皮细胞。
小麦种子或黄豆幼根根尖。
2、试剂：（1）Ringer溶液：氯化钠—0.85g氯化钾—0.25g氯化钙—0.03g蒸馏水—100ml（2）1%，1/3000中性红溶液（已配好）（3）1%，1/5000詹纳斯绿B溶液（已配好）3、器材：显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸等四、实验方法：1、人口腔黏膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察：（1）取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。
（2）实验者用牙签宽头在自己口腔颊黏膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的黏液状物放入载玻片的染液滴中，染色10-15分钟（注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。
2、植物细胞液泡系的超活染色与观察：（1）用双面刀片把初生的小麦或黄豆幼苗根尖（1-2cm长）小心切一纵切面，放入载玻片中的1/3000中性红染液滴中，染色5-10分钟。
（2）吸去染液，滴一滴Ringer 液，盖上盖玻片，并用镊子轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察。
小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察-实验报告姓名班级 13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察【实验题目】小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察【实验目的】1、掌握线粒体的超活染色原理及方法。
2、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。
【实验材料与用品】1. 试剂：0.02%的詹纳绿B染液、Ringer试剂2. 器具：解剖盘、镊子、剪刀、双凹片、小烧杯、载玻片、盖玻片、胶头滴管、显微镜等3. 材料：小鼠【实验原理】I.线粒体线粒体是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包裹的细胞器，直径在0.5-10微米左右；线粒体是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷的主要场所，为细胞的活动提供了能量，有“细胞动力工厂”之称。
线粒体在代谢活动旺盛的细胞，如肌肉细胞，肝细胞，神经细胞等中大量存在；线粒体的数量差异巨大，如在肝脏细胞中有1000-2000个线粒体，而有些细胞只有一个线粒体，如酵母菌细胞的大型分支线粒体，大多数哺乳动物成熟红细胞不具有线粒体。
线粒体分布方向与微管一致，通常分布在细胞功能旺盛的区域：如在肾脏细胞中靠近微血管，呈平行或栅状排列；在肠表皮细胞中呈两极分布，集中在顶端和基端，在精子中分布在鞭毛中区。
姓名班级 13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察II.超活染色实验原理超活染色也称活体染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法；超活染色的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞死亡。
应用活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理病理状态。
活体染色根据染色剂的性质和染色方法不同分为：体内活染（注入、固定、堆积）、体外活染（分离、浸染、固定）1）体内活染：是以胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的作用。
科目细胞生物学实验题目小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察【实验目的】1．掌握线粒体的超活染色原理及方法。
2．观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。
【实验原理】1．线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B（Janus green B）是线粒体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
线粒体的细胞色素氧化酶能使詹纳新绿染料始终保持在氧化状态而呈蓝色，周围细胞内的染料却被还原成无色的色基，在进行细胞的体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿染料中染色15min后再盖上盖玻片，以使材料充分氧化。
2．活体染色是指用燃料标记生活有机体的细胞或组织但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示活细胞内的某些结构，同时即不影响细胞的生命活动也不会产生任何物理、化学变化导致细胞的死亡。
活染技术可用来研宄生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起作用。
碱性燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子；而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们被此就发生了吸引作用。
但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料配成稀的溶液来使用。
一般以碱性染料最为常用，因为碱性染料具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，如中性红、詹钠斯绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等。
实验八线粒体和液泡系的超活染色与观察实验目的1.观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。
2.学习一些细胞器的超活染色技术。
实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。
活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类，体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。
体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学“特性起重要作用。
碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。
但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用；一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。
詹纳斯绿B(Janus green B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。
詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。
中性红为弱碱性染料，对液泡系(即高尔基体)的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关实品验用一、材料人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞二、器材显微镜、恒温水浴锅、表面皿，吸管、牙签、吸水纸三、试剂1．Ringer溶液氯化钠 0.85g (变温动物用0.65g)氯化钾 0.25g氯化钙 0.03g蒸馏水 100ml2.1%詹纳斯绿B溶液（原液）称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加微热(30~40℃)，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。
实验五：小鼠肝细胞线粒体超活染色及观察一、实验目的1、掌握解剖小鼠的基本技术与方法；2、掌握线粒体的超活染色原理及方法；3、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。
二、实验原理1、线粒体线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B（JanusgreenB）是线粒体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
线粒体的细胞色素氧化酶能使詹纳新绿染料始终保持在氧化状态而呈蓝色，周围细胞内的染料却被还原成无色的色基，在进行细胞的体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿染料中染色15min后再盖上盖玻片，以使材料充分氧化。
2、活体染色活体染色是指用燃料标记生活有机体的细胞或组织但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示活细胞内的某些结构，同时即不影响细胞的生命活动也不会产生任何物理、化学变化导致细胞的死亡。
活染技术可用来研宄生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起作用。
碱性燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子；而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们被此就发生了吸引作用。
但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料配成稀的溶液来使用。
一般以碱性染料最为常用，因为碱性染料具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，如中性红、詹钠斯绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等。
小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察实验报告精编实验目的：通过超活染色技术观察小白鼠肝细胞线粒体的形态、数量和功能，以进一步了解线粒体在细胞代谢中的作用。
实验材料：实验步骤：1.提取小白鼠肝细胞：a.将小白鼠宰杀，取出肝脏。
b.肝脏放入含有适量预冷PBS的离心管中，进行冲洗，去除血液。
c.肝脏切成细胞块，加入适量的胰蛋白酶，37℃消化2小时。
d.消化结束后，加入适量的DMEM培养基，通过滤网过筛，得到小白鼠肝细胞悬液。
2.超活染色：a.取适量的小白鼠肝细胞悬液，离心收集细胞沉淀。
b.用预冷PBS洗涤细胞沉淀，去除细胞培养基。
c.加入超活染色试剂盒中的线粒体荧光探针，荧光增强剂混合液，混匀，孵育30分钟。
d.用预冷PBS洗涤细胞沉淀，去除多余试剂。
3.观察实验：a.将上述细胞沉淀均匀涂抹在显微镜载片上。
b.覆盖显微镜盖玻片，用封口胶固定。
c.将载片放入显微镜镜台上，使用适当放大倍数的镜头观察。
实验结果：通过超活染色技术观察小白鼠肝细胞线粒体的结果如下：1.形态观察：线粒体呈现椭圆形或长圆形，大小约为1-2微米，分布于细胞质中。
2.数量观察：通过观察细胞中的线粒体数量，可以初步了解细胞的代谢活跃程度。
代谢活跃的细胞通常线粒体数量较多，而代谢不活跃的细胞线粒体数量较少。
3.功能观察：通过观察线粒体荧光的亮度和分布情况，可以初步判断线粒体的功能状态。
荧光亮度较高且均匀分布的细胞表明线粒体功能正常，而荧光亮度较低或不均匀分布的细胞则可能存在线粒体功能缺陷。
实验结论：通过上述实验可以初步了解小白鼠肝细胞中线粒体的形态、数量和功能。
进一步的研究可通过比较不同疾病模型下线粒体的状态来探究线粒体在疾病发生发展中的作用，为研究疾病的治疗和预防提供理论基础。
此外，超活染色技术的应用也有助于深入了解线粒体在细胞代谢中的具体机制。
【实验目的】
掌握动物细胞活体染色的原理和相关的技术。
【实验原理】
活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。
活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。
体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。
体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部位，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。
碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子的，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。
但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。
一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。
詹纳斯绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。
线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。
詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。
【实验用品】
1、材料：
小白鼠肝脏、睾丸
2、试剂：
Ringer溶液：NaCl 0.85g + KCl 0.25g + CaCl2 0.03g + 蒸馏水100ml；
1%、1/5000詹纳斯绿B溶液：称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，30-40℃加热，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。
取1%原液1ml加入49ml Ringer溶液，即为1/5000工作液装入棕色瓶中备用。
3、器材：
显微镜、解剖盘、剪刀、吸管、载玻片、盖玻片、擦镜纸
【实验步骤】
1、用断头法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取小白鼠肝组织，选取边缘较薄的肝组织0.5cm3，
放入小烧杯中，用Ringer液冲洗去血污。
2、在干净的凹面载玻片的凹穴中，滴加1/5000詹纳斯绿B溶液，再将肝组织块移入染液中，注意不
可将组织块完全淹没，要使组织块上面部分半露在染液外，这样细胞内的线粒体酶系可充分得到氧化，易被染色。
当组织块边缘被染成蓝绿色即成(—般需染20～30min)。
3、吸去染液，用眼科剪将组织块着色部分剪下重置小烧杯中，滴加Ringer溶液0.5ml，用剪刀充分
剪碎制悬液。
4、取上述细胞悬液滴片，加盖玻片，高倍镜下观察。
5、 将小鼠的睾丸连带附睾一起分离取下，放置于小烧杯中并用剪刀充分剪碎至匀浆状，滴加1/5000
詹纳斯绿B 溶液进行染色，重复第4步观察并比较肝细胞线粒体与精子线粒体鞘。
【实验结果】
在高倍镜下观察到了小鼠肝细胞，肝细胞质中的线粒体被染成蓝绿色。
每个细胞中都有一些被染成蓝绿色的球状结构，为线粒体。
另外，在观察小鼠附睾中的精子细胞可见长形的线粒体鞘也被染成蓝绿色。
如图所示：
图1 高倍镜下肝细胞线粒体超活染色图（10×40）
线粒体
肝细胞
精子线粒体鞘
图2 高倍镜下精子线粒体鞘超活染色图（10×40）
【观察结果分析】
1、实验制得的装片在显微镜下不容易找到线粒体被染色的肝细胞，原因是染色不够彻底。
染色过程
中未注意不断添加染色剂。
2、观察时发现肝细胞周围有许多小细胞，即红细胞，原因是在使用Ringer液浸泡组织块时，没有使
血完全渗出；而精子周围有许多圆形细胞，即睾丸中的精原细胞或精母细胞。
【分析与讨论】
1、在取肝脏时要注意大小，大概为指甲盖的1/3左右为宜，且不宜太厚，防止里面的线粒体不宜被
染色，影响实验结果的观察。
2、在染色过程中要注意不可把肝脏小块全部浸没在染色液下，这样会使肝脏小块进行有氧呼吸，则
詹纳斯绿B无法被细胞色素氧化酶充分氧化，导致实验失败。
3、染色过程中要注意滴加染液，防止染色液挥发干，使肝脏小块充分染色。
4、观察时要注意区分肝细胞和红细胞，肝细胞体积相对于红细胞来说较大。
5、制片之前要将组织块尽量剪碎分散，以保证较好的观察效果。
6、在观察小鼠精子线粒体鞘时操作要迅速，捣碎充分，才能有机会看到精子的游动过程。
