大孔吸附树脂纯化银杏活性化合物的工艺研究

大孔吸附树脂分离纯化银杏叶总黄酮的研究李月;陈莹【摘要】利用4种大孔吸附树脂分离纯化银杏叶总黄酮.结果表明,HPD100型大孔吸附树脂最适合分离纯化银杏叶总黄酮,该树脂的静态饱和吸附量(以干树脂计)为63.8 mg·g-1,静态洗脱率为91.2%,动态饱和吸附-洗脱量为14.0 mg·g-1,洗脱剂为70%乙醇,洗脱剂用量为4倍树脂体积,树脂可重复使用7个周期.%The total flavones from Folium ginkgo leaves were seperated and purified by four kinds of macroporous adsorption resin. The results showed that resin HPD100 was the most efficient one with static adsorption capacity of 63.8 mg·g-1, static elution rate of 91.2% and dynamic saturated adsorption capacity of 14.0 mg·g-1 with 4 BV 70% ethanol as elutingreagent.Furthurmore,resin HPD100 could be repeatly used for 7 cycles.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2009(026)007【总页数】3页(P55-57)【关键词】银杏叶总黄酮;大孔吸附树脂;分离纯化【作者】李月;陈莹【作者单位】中国医科大学附属第一医院药剂科,辽宁,沈阳,110001;中国医科大学附属第一医院药剂科,辽宁,沈阳,110001【正文语种】中文【中图分类】TQ461大孔吸附树脂是一类有机高聚物吸附剂，广泛应用于中草药化学成分的分离与富集。

大孔树脂分离纯化银杏黄酮苷元的研究马朝阳，吕文平，娄在祥，王洪新*（江南大学食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡214122）摘要：以银杏提取物的酶水解液为实验材料，研究大孔吸附树脂分离纯化其中的银杏黄酮苷元的工艺。

通过静态吸附－解吸和吸附动力学实验，从3种大孔吸附树脂中筛选出非极性YWD07a 为最适合分离纯化银杏黄酮苷元的树脂。

YWD07a 树脂吸附分离银杏黄酮苷元的最佳工艺条件为：吸附：银杏黄酮苷元的浓度3．26mg /mL ，pH 5．0，流速2BV /h ；解吸：洗脱体积6BV ，流速3．0BV /h ，乙醇浓度70%。

在最优条件下得到的银杏黄酮苷元产品中银杏黄酮苷元含量由18．5%提高到80．5%，回收率为73．6%。

关键词：银杏叶；分离纯化；大孔树脂；银杏黄酮苷元中图分类号：O658．1+1文献标识码：A 文章编号：1000－2324（2013）01－0040－06收稿日期：2010－08－12作者简介：马朝阳（1970－），男，博士，工程师。

主要从事食品功能因子离纯化、构效关研究。

*通讯作者：Author for correspondence．E －mail ：hxwang1964@yahoo．com．cnSTUDY ON SEPARATION AND PURIFICATION OF GINKGO FLAVONE AGLYCONEBY MACROPOROUS ADSORPTION RESINMA Chao －yang ，LU Wen －ping ，LOU Zai －xing ，WANG Hong －xin（State Key Laboratory of Food Science and Technology ，School of Food Science and Technology ，Jiangnan University ，Wuxi 214122，China ）Abstract ：In this study ，the separation effect of macroporous resin for the purification of ginkgo flavonol aglycone prepared by the enzymatic hydrolysis of the Immobilized B －glucosidase was developed．Based on the results of static adsorption and desorption ，adsorption dynamic ，YWD07a resin was the best one for the separation and en-richment of flavonol aglycone．The optimal separation conditions were as follow ：on adsorption ，flavone aglycone concentration of sample solution ，pH ，flow rate was 3．3mg /mL ，5．0，2bed volume （BV ）per hour ，respec-tively．；on desorption ，volume of elution solvent ，flow rate ，enthaol concentration was 6BV ，3BV /h ，70%（v /v ），respectively．Under these conditions ，the content of flavone aglycone increased from 18．5%to 80．5%in the crude product ，and the recovery of flavone aglycone reached 73．6%．Key words ：Ginkgo leaf ；separation and purification ；macroporous resin ；Ginkgo flavone aglycone银杏（Ginkgo biloba L．）又名白果、公孙树、鸭掌树，系最古老的中生代孑遗稀有植物之一，仅存一科一属一种，有裸子植物“活化石”之称。

大孔树脂提取银杏叶中总黄酮最佳工艺摘要: <目的>考察大孔树脂对银杏叶中总黄酮的静态吸附和动态吸附以及解吸的最佳工艺条件。

<方法>采用多种树脂对银杏叶中总黄酮进行静态和动态吸附, 以总黄酮的吸附量或解吸量为指标, 分别考察了过柱次数、时间、水洗量、上样浓度、洗脱机浓度和用量以及泄露曲线的考察。

关键词:银杏叶/化学; 总黄酮/分析; 大孔树脂;静态吸附；动态吸附; 紫外线，分光光度法一、实验器材1.1 主要实验材料与试剂大孔吸附树脂,：AB-8、LKY-02、HPD750、MD130、D101、HPD450、HPD5000、MD131；银杏叶、工业乙醇1.2 主要实验器材与设备紫外可见分光光度计、粉碎机、真空干燥器、水浴锅、提取装置、电子天平、旋转蒸发器、恒温振荡器。

二、实验步骤与结果1.1 标准曲线的绘制精确称取芦丁1mg。

用60%乙醇溶解并定容到25ml容量瓶中，摇均配制得0.4mg/ml的标准溶液。

分别准确量取该芦丁标准溶液0、0.25、0.5、0.75、1.00、1.25、1.50mL到10mL容量瓶中，分别加60%乙醇到溶液3ml，摇匀；分别加入5%NaNO2溶液0.30mL，摇匀静置6min；再每个容量瓶分别加入10%A1（NO3）3溶液0.30mL，摇匀后静置6min；再每个容量瓶分别加入4.00mlL4%NaOH溶液，用60%乙醇溶液稀释定容至刻度线，摇均静置15min后，在510nm处测吸光度。

以不加芦丁标准品的溶液为空白对照。

（吸光度为纵坐标，浓度为横坐标作图一）图一2、提取银杏叶中总黄酮2.1提取时间探究:称取银杏叶粉末5g五份,分别加体积分数60%的乙醇加热回流提取, 每份15倍量的溶剂，保持在75°C下分别提取1、2、3、4小时后过滤。

测吸光度。

结果如下时间（h） 1 2 3 4吸光度0.178 0.183 0.213 0.195提取率(%) 0.516 0.516 0.71 0.64乙醇浓度60%物料比1：15温度80°C2.2乙醇浓度探究:称取银杏叶粉末5g四份,分别加体积分数20%40%60%80%的乙醇加热回流提取, 每份6倍量的溶剂，保持在75°C下提取2小时后过滤。

大孔吸附树脂纯化银杏黄酮的工艺研究作者：程再功顾雪梅胡进维李银来源：《中国保健营养·中旬刊》2013年第08期【摘要】目的：研究大孔吸附树脂纯化银杏总黄酮的工艺条件及参数。

方法：采用静态吸附、解吸，从6种大孔树脂中筛选用于银杏总黄酮分离的最佳树脂，并通过动态行为系统考察最佳大孔树脂的吸附性能和最优洗脱参数。

结果：HPD-450型大孔树脂为分离银杏黄酮的最佳树脂，其分离的最佳工艺为，上样量为6.5倍柱体积药液，以5mL/min的流速，pH值为4.0上柱，用400mL85%乙醇以4mL/min流速进行洗脱，结论：按照最佳工艺可获得总黄酮纯度达26%以上的银杏叶提取物。

【关键词】银杏叶提取物；大孔吸附树脂；黄酮；正交试验银杏树是中国古老的树种之一，占世界总量的70%，其叶片是一种具有很高药用价值的植物，含有黄酮、萜类内酯等多种有效成分，对于心脑血管、肿瘤、衰老等疾病的治疗和预防具有重要意义，并具有广阔的市场前景[1]。

银杏叶中含量最高的是黄酮类物质。

银杏叶黄酮的主要提取分离方法有：溶剂法、树脂法、超临界萃取法、毛细管电泳法、高效液相色谱法、酶法、细胞和组织培养法等[2-4]。

其中树脂法为目前广泛使用的方法，本文旨在研究不同型号大孔树脂对银杏黄酮的吸附行为，确定最佳吸附树脂并优化其工艺参数，以指导大生产，提供重要参考数据。

1 试验部分1.1 仪器与试剂Agilent1200型高效液相色谱仪、梅特勒XS205电子天平、梅特勒S20KPH计、IKA公司RV-10旋转蒸发仪；甲醇（色谱级）、盐酸、氢氧化钠、亚硝酸钠均为分析纯；槲皮素对照品（批号：100081-200907）、山柰素对照品（110861-201209）、异鼠李素对照品（批号：110860-201109）均购自中检所；银杏叶（商丘嘉信医药商贸有限公司）。

1.2 大孔树脂的预处理称取树脂适量，以95%乙醇浸泡24h，使其充分溶胀。

采用湿法装柱，以95 %乙醇冲洗至流出液与水混合（1∶5）不再产生白色浑浊时，用蒸馏水洗至无醇味，然后用1mol/L HCl以4BV/h的流速冲洗0.5h，即2BV，浸泡4h后，用蒸馏水洗至中性，再用1mol/LNaOH以4BV/h的流速冲洗0.5h，浸泡4h后，用蒸馏水洗至中性，备用。

银杏酸（Ginkgolic acids，GA）属于6-烷基或6-烯基水杨酸的衍生物，存在于银杏的叶、果和外种皮中[1-2]。

银杏酸具有强烈的杀虫、抗霉菌、杀菌、抗病毒活性，已在化妆品、生物农药等方面开发出一系列产品[3]。

目前银杏酸的纯化方法主要有有机溶剂萃取、二氧化碳超临界萃取、柱层析等方法，生产成本高[4]。

树脂吸附分离技术近年在天然产物提取分离中广为应用[5]，本实验以银杏叶为原料，选择大孔树脂纯化银杏酸，研究其对银杏酸的吸附分离特性，为银杏酸的工业化生产提供一定的参考。

1材料与方法1.1主要材料与试剂材料：新鲜银杏叶：2010年6月采摘于陕西科技大学银杏园林银杏树枝干的中下部；大孔吸附树脂（D101-1，DA201，DM301，DS401）：安徽三星树脂有限公司。

试剂：对照品银杏酸A（C15∶0，C17∶1，C13∶0，C15∶1，C17∶2）：中国药品生物制品检定所，（111594-200502），正己烷、乙醇、无水甲醇等均为国产分析纯。

1.2主要仪器与设备紫外可见分光光度计SP-752（PC）型：上海光谱仪器有限公司；索氏提取仪：北京中西远大科技有限公司；电热恒温水浴锅HH-S4型：北京科伟永兴仪器有限公司；高速万能粉碎机FW100型：天津市泰斯特仪器有限公司；电热鼓风干燥箱CS101-2A型：中国重庆银河试验仪器有限公司；循环水式多用真空泵SHB-B95型：郑州长城科工贸易有限公司；回转式恒温调速摇瓶机HYG-Hɑ：上海欣蕊自动化型设备有限公司；层析柱（20×400mm规格）：江苏省高邮市亚泰科教仪器厂。

1.3实验条件1.3.1标准曲线的绘制准确称取对照品银杏酸用无水甲醇溶解、定容，得银杏酸对照品溶液。

以无水甲醇为参比，吸取适量银杏酸标准液，在波长200nm~400nm处进行紫外光谱扫描分析，选取合适的吸收波长。

分别吸取银杏酸标准液0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL用无水甲醇定容至5mL，摇匀。

Monograph and Re view　专论与综述吸附树脂提取分离银杏叶提取物的研究进展卢锦花　胡小玲　岳　红(西北工业大学化工系,西安,710072)提　要　银杏叶中含有具有药理作用的黄酮类化合物和银杏内酯类化合物。

吸附树脂是提取分离银杏叶提取物(GBE)银杏黄酮化合物和银杏内酯化合物的有效试剂。

本文综述了树脂提取分离GBE的机理,比较了用不同树脂提取分离GBE的分离效果,并总结了影响吸附树脂分离提取GBE的多种因素,为树脂提取分离银杏黄酮提供了较为全面的科学信息。

关键词　银杏黄酮,吸附树脂,提取分离 银杏为银杏科银杏叶属植物,银杏叶为银杏的叶子。

近10多年来,银杏叶的研究开发成为国内外的瞩目热点,它不仅是一种天然药物,其药品及有关产品在国际上十分走俏,而且还是一种优良的功能性食品添加剂。

银杏叶制品在世界范围内销售额高达50亿美元/年[1],销售市场遍布亚、欧、美许多国家。

以银杏叶为原料制成的药物,具有扩张血管、降低血清和胆固醇、解疼、抗菌、抑制脂质过氧化、松弛支气管等作用[2～7],长期服用几乎没毒副作用,这是同类西药无法达到的[8]。

国外加工银杏叶每吨获纯利达1.2万美元[9]。

我国银杏资源占世界银杏资源的3/4以上,是世界上最大的银杏生产国和出口国,但在银杏叶的研究开发利用上,落后于世界上一些发达国家,较长时间停留在叶子出口的水平上,而且存在产品收率低、产品质量差等问题,造成了国有资源的浪费。

近年虽然有部分产品面市,但多属于初级产品。

因此,现阶段致力于这一领域的研究与开发,对促进我国科技进步,提高产品竞争力和经济发展有着极其重要的意义。

银杏叶有效成分(黄酮类化合物和银杏叶内酯)的提取直接决定着银杏叶的药用价值。

有效成分的收率主要受原料(银杏叶)和富集分离过程的影响,采集银杏叶的时间对有效成分提取的收率也有较大的影响。

据报道[10],秋季黄叶中有效成分的含量是春季绿叶的3.6倍,是夏季绿叶的4.3倍,而且秋季黄叶中的其他成分也比春夏季绿叶中的要少,易于进行后续的分离和提取。