免疫细胞表面标志Mark

免疫细胞分型标志物是用于识别和分类不同类型的免疫细胞的分子标记。

这些标志物可以是细胞表面的蛋白质、抗原或受体，也可以是细胞内的分子。

通过检测这些标志物，可以区分不同类型的免疫细胞，并了解它们在免疫应答中的作用。

其中，T淋巴细胞和B淋巴细胞是两种重要的免疫细胞类型。

T淋巴细胞在胸腺中发育成熟，主要参与细胞免疫应答，包括细胞毒性和调节性T细胞。

B淋巴细胞在骨髓中发育成熟，主要参与体液免疫应答，产生抗体。

非特异性免疫细胞包括吞噬细胞、NK细胞、NK1.1T细胞、γδT细胞和B-1B细胞等。

这些细胞在免疫应答中起到重要的防御作用，可以清除被感染的细胞或病原体。

此外，还有一些其他的免疫细胞分型标志物，如CD4和CD8分子，它们分别标记辅助性T细胞和细胞毒T细胞；CD20分子，它标记B淋巴细胞；以及CD56分子，它标记NK细胞和部分T细胞。

这些标志物在临床诊断和治疗中具有重要意义，可以帮助医生识别和分类不同类型的免疫细胞，从而更好地了解患者的免疫状态和制定治疗方案。

总之，免疫细胞分型标志物是用于识别和分类不同类型免疫细胞的分子标记，对于临床诊断和治疗具有重要意义。

通过检测这些标志物，可以更好地了解患者的免疫状态，制定针对性的治疗方案，提高疾病的治疗效果。

同时，这些标志物也可以用于免疫学研究，帮助科学家更好地理解免疫应答的机制和疾病的发展过程。

临床免疫学和免疫检验第十四章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术讲义第十四章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术第一节免疫细胞的分离一、外周血单个核细胞的分离外周血中单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的比重与红细胞、多核白细胞及血小板不同，介于1.075～1.090之间，红细胞及粒细胞在1.092左右，血小板在1.030～1.035之间，因而可利用一种比重介于1.075～1.092之间而近于等渗的溶液作密度梯度离心，使一定比重的细胞按相应密度梯度分布而加以分离。

分离介质是分离各类细胞的关键，对分离介质的基本要求是：①对细胞无毒；②基本等渗；③不溶于血浆及分离物质；④有特定的比重。

Ficoll分离液为常规的淋巴细胞分离液，其比重为1.077±0.002，主要用于分离外周血中单个核细胞。

其分布由上到下依次为：稀释的血浆层、单个核细胞层、粒细胞层和红细胞层。

二、淋巴细胞的分离纯淋巴细胞群的采集是利用单核细胞在37℃和Ca2+存在时，能主动黏附在玻璃、塑料、尼龙毛、棉花纤维或葡聚糖凝胶的特性，从单个核细胞悬液中除去单核细胞，从而获得纯淋巴细胞群。

主要的方法有：1.黏附贴壁法；2.吸附柱过滤法；3.磁铁吸引法；4.Percoll分离液法。

三、T、B细胞和T细胞亚群的分离（一）磁性微球分离法（二）荧光激活细胞分离仪分离法四、分离细胞的保存及活力测定1.短期保存技术：将分离的细胞用适量含10%～20%灭活小牛血清的Hanks、T c-199、RPMI1640或其他培养液稀释重悬。

短期保存可置于4℃保存。

2.长期保存技术：液氮深低温（-196℃）环境保存细胞，加入二甲亚砜作为保护剂。

活力测定最简便常用的为台盼蓝染色法。

这是一种阴离子型染料，不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色，但死亡细胞的细胞膜通透性增加，可使染料通过细胞膜进入细胞内，使死细胞着色呈蓝色，通过死亡细胞与活细胞的百分比可反映细胞活力。

第十四章免疫细胞的分离及表面标志检测技术第十五章免疫细胞功能检测技术Separation and Assays for Immunocyte第一部分目的要求和教学内容一、目的要求掌握：Ficoll—hypaque分层液分离PBMC的原理、方法，淋巴细胞亚群分离的原理、方法及应用，T细胞增殖试验的方法，B细胞的数量及功能的检测，NK细胞的活性、中性粒细胞、巨噬细胞功能的检测方法；熟悉：T细胞功能的体内试验、T细胞介导的细胞毒检测的方法；了解：淋巴细胞的纯化与亚群分离的方法、吞噬细胞的分离方法、溶血空斑试验。

二、教学内容1．免疫细胞的分离与纯化：细胞的分离，外周血单个核细胞的分离，淋巴细胞的纯化与亚群分离，吞噬细胞的分离。

2．淋巴细胞的数量检测：T细胞数量检测，B细胞数量检测。

3．淋巴细胞的功能检测：T细胞功能检测，B细胞功能检测，NK细胞活性测定。

4．吞噬细胞功能检测：中性粒细胞功能检测，巨噬细胞功能检测。

第二部分测试题一、选择题(一)单项选择题(A型题)1．外周血中的单个核细胞主要是指A．淋巴细胞B．嗜酸粒细胞C．单核细胞一淋巴细胞D．单核细胞E．中性粒细胞2．分离人外周血淋巴细胞分层液的最佳密度为A． 1.030B． 1.035C． 1.092D． 1.020E． 1.0773．用FicolI—hypaque分层液分离PBMC,分离的PBMC层位于试管的A．血浆层之上B．血浆层之中C．血浆层与分层液之间D．分层液之中E．试管底部4．用玻璃纤维或葡聚糖凝胶Sephadex-G10柱分离细胞时，从柱上洗脱下的细胞主要是A．粒细胞B．淋巴细胞C．单核细胞D．T细胞E．B细胞5．能与SRBC占合形成E花环的细胞主要是A．T细胞B．B细胞C．单核细胞D．粒细胞E．血小板6．用小鼠抗人CD3单克隆抗体检测T细胞，其结果代表的是A．T 细胞总数B．Th 胞数C．Ts细胞数D．CD4＋细胞数E．CD8＋胞数7．用尼龙棉柱分离细胞时，不易黏附尼龙棉纤维而被洗脱的细胞是A．粒细胞B．B 细胞C．单核细胞D．T 细胞E．血小板8．表示淋巴细胞的活力常用A．活淋巴细胞占总淋巴细胞的百分比B．活细胞浓度C．淋巴细胞浓度D．活细胞和总细胞的比值E．T细胞和B细胞的比例9．用腹腔渗出法可从动物的腹腔渗出液中分离出A．血小板B．B细胞C．单核细胞D．T细胞E．巨噬细胞10．活细胞经台盼蓝染色后呈A．蓝色B．棕色C．红色D．不着色E．天青色11．荧光标记法计数外周血B淋巴细胞，检测的特有的表面标志是A．CDl9B．CD20C．补体受体D．SmIgE．FcR12．NK细胞特有的表面抗原是A．CD2B．CDl6C．无特异的表面抗原D．CD23E．CD5613．仅能使T细胞发生淋巴母细胞转化的因子是A．PHAB．PWMC．．LPSD．ConAE．EBV14．能使B细胞和T细胞发生淋巴母细胞转化的因子是A．PHAB．PWMC．．LPSD．SPAE．EBV15．检查体液免疫功能最常用的方法是A．血清免疫球蛋白定量测定B．溶血空斑试验C．B淋巴细胞计数D．淋巴母细胞转化试验E．SmlgG测定16．溶血空斑试验用于检测下列何种细胞的功能A．T细胞B．B细胞C．中性粒细胞D．吞噬细胞E．NK细胞17．测定T淋巴细胞功能的体内试验是A．锡克试验B．狄克试验C．结核菌素试验D．天然血型抗体滴度E．血清：IgG测定18．正常人外周血T淋巴细胞转化率为A． <40％B．40％～50％C．60％～80％D．80％E． >90％19．常用检测细胞毒效应的方法是A．3H-TdR掺人法B．125I释放法C．51Cr释放法D．形态学检测法E．CD8检测法20．包被有抗Ig抗体的亲和板，其吸附的是A．T细胞B．B细胞C．NK细胞D．NKT‘细胞E．吞噬细胞21．Ficoll—hypaque液分离淋巴细胞是一种A．不连续密度梯度离心法B．连续密度梯度离心法C．亲和层析法D．离子交换层析法E．自然沉降法22．Ficoll—hypaque淋巴细胞分离液的主要成分是A．聚蔗糖B．泛影葡胺C．聚乙二醇D．聚蔗糖+泛影葡胺E．聚蔗糖+聚乙二醇23．Percoll分离液的主要成分是A．聚蔗糖B．泛影葡胺C．聚乙二醇D．聚乙烯吡咯烷酮E．经聚乙烯吡咯烷酮处理的硅胶颗粒24．检测中性粒细胞杀菌功能的方法是A．NBT还原试验B．白细胞计数C．溶血空斑试验D．淋巴母细胞转化试验E．补体介导的细胞毒试验25．MTT比色法检测IL-2活性，下列哪项是错误的A．需要IL一2依赖细胞株B．增殖细胞具有吸收MTT的能力C．颜色的深浅代表细胞代谢活性的强弱D．可反映B细胞的功能E．可反映T细胞的功能(二)多项选择题(x型题)1．淋巴细胞分离液要求符合的条件有A．对细胞无毒B．高渗C．不溶于血液D．无色E．有合适的比重2．与T细胞计数有关的表面抗原是A．CD2B．CD3C．CD4D．CD8E．CDl93．与B细胞计数有关的表面标志是A．SmIgB．CDl9C．CD20D．CD21E．CD24．符合淋巴母细胞转化的形态学特征有A．细胞体积变小B．核仁明显、核染质疏松C．可见有丝分裂D．胞浆极少，呈天青色E．胞内可见空泡5．用酶联免疫斑点试验检测B细胞功能的优点有A．稳定、特异 B．可检测抗体分泌细胞C．可检测抗体的分泌量 D．可同时进行B细胞计数 E．可同时检测不同抗原诱导的不同抗体的分泌6．细胞免疫功能测定包括以下哪些A．T细胞计数B．B细胞计数C．T细胞功能测定D．Tc细胞效应测定E．细胞因子测定7．检测淋巴细胞亚群常用的方法有A．免疫荧光法B．流式细胞仪测定C．酶免疫组化法D．放射免疫法E．免疫金染色法8．细胞免疫功能体内试验方法有A．细胞毒试验B．混合淋巴细胞反应C．皮肤试验D．淋巴细胞增殖试验E．接触性过敏试验9．T细胞增殖试验常用的检测方法有 A．流式细胞仪法B．形态学方法C．51Cr释放法D．MTT检测法E．3H一FdR掺人法10．检测吞噬细胞功能的方法有A．吞噬试验B．杀菌试验C．NBT还原试验D．化学发光测定法E．趋化功能测定法11．淋巴细胞亚群的分离方法有A．E花环分离法B．尼龙棉柱分离法c．亲和板结合分离法D．免疫磁珠分离法E．超速离心分离法12．T细胞数量检测包括A.T细胞增殖试验B．间接荧光免疫法C．酶免疫组织化学法D．微量细胞毒试验E．花环技术13．检测T细胞数量的花环试验有A．酵母菌花环试验B．补体C3b花环试验C．E花环试验D．葡萄球菌花环法E．抗体致敏细胞花环法14．B细胞表面具有、A．mIgB．CD抗原C．Fc受体D．补体受体E．EB病毒受体15．B细胞数量检测的方法包括A．mIg的检测法B．CD抗原检测法C．Fc受体检测法D．补体受体检测法E．小鼠红细胞受体检测法16．B淋巴细胞功能的测定方法有A．B细胞增殖试验B．溶血空斑试验C．酶联免疫斑点法D．体内测定法E．形态学检查法17．中性粒细胞吞噬和杀菌功能的测定方法A．形态学检查法B．显微镜检查法C．溶菌法D．NBT还原试验E．化学发光测定法18．巨噬细胞功能的检测方法包括A．炭粒廓清试验B．吞噬功能检测C．巨噬细胞溶酶体酶测定D．细胞毒作用测定E．巨噬细胞促凝血活性测定(三)配伍题问题1-3A．红细胞层B．粒细胞层C．单个核细胞层D．血浆与血小板层E．淋巴细胞分离液层1.采用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，最上层是2.采用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，最下层是3.采用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，第二层是问题4-6A．淋巴细胞转化试验B．溶血空斑试验C．炭粒廓清试验D．琼脂糖凝胶平板法E．化学发光测定法4．巨噬细胞吞噬功能的检测：5．中性粒细胞趋化功能的检测：6．中性粒细胞吞噬和杀菌功能的检测：二、填空题1．PBMC包括（）和（）。

辅助性T细胞的典型表面标志：CD3+CD4+CD8-。

（Th1主要分泌IL-2，IFN-γ或TNF-β等辅助细胞免疫或参与迟发型超敏反应；Th2主要分泌IL-4/5/6/10等辅助体液免疫、参与速发型超敏反应）细胞毒性T细胞的典型表面标志是CD3+CD4-CD8+。

（CD3+CD8+CD30-可认定为Tc1细胞；CD3+CD8+CD30+可认定为Tc2）调节性T细胞：自然存在的，其典型标志为CD4+CD25+Foxp3+ （最重要的分子标记是一种转录因子Foxp3）成熟B细胞均表达CD19，B1细胞CD19+CD5+，B2细胞CD19+CD5-NK细胞的典型标志：CD3-CD16+CD56+。

单核-巨噬细胞的典型表面标志为CD14。

人成熟DC的主要特征表面标志为CD1a、CD11c和CD83，但不表达MPST/B/NK细胞的典型表面标志（CD14/3/19和CD20/16/56）。

小结淋巴细胞并不是功能单一的群体，但其在光学显微镜下的形态基本是一样的，因此要对其进行进一步的分类和观察就不能采用形态学的方法，而要依靠对其表面标志的检测。

常用于鉴定和检测计数淋巴细胞的表面标志是CD抗原。

进一步区分淋巴细胞亚群可使某一类淋巴细胞的功能趋向一致和单一。

但目前看来，还很少有只通过一个CD抗原就能将某一类淋巴细胞亚群指示出来的CD抗原，CD抗原指示出来的淋巴细胞亚群多数都是相对特异。

根据T细胞的免疫效应功能和表面CD分子表达至少可以分为：辅助性T 细胞、细胞毒性T细胞和调节性T细胞；SmIg为B细胞所特有，是鉴定B细胞可靠的指标，以CD5和CD19为标志可将B细胞分为B1和B2两个亚群；目前多以CD3一、CD16+、CD56+作为NK细胞的典型标志。

人T细胞（CD3+CD19-）、B细胞（CD3-CD19+）、辅助T细胞（CD3+CD4+）、NK细胞（CD3-CD56+）、细胞毒性T细胞（CD3+CD8+CD28+）、DC细胞（CD80等）。

医疗卫生专业知识：免疫学知识点-B细胞表面标志
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B细胞表面标志
1.B细胞抗原受体(BCR)
是存在于B细胞表面的膜免疫球蛋白(SmIg)。

这种SmIg的分子结构与血清中的Ig相同，其Fc段的几个氨基酸镶嵌在细胞膜脂质双层中，Fab段则向细胞外侧以便与抗原结合。

SmIg 既是抗原的受体，能与相应的抗原特异性结合，又是表面抗原，具有免疫球蛋白的抗原决定簇，能与抗免疫球蛋白的抗体特异性结合。

SmIg是鉴别B细胞的主要特征。

2.Fc受体(FcR)
此受体能与免疫球蛋白的Fc片段结合，大多数B细胞有IgG的Fc受体称Fc(γ)R，能特异性地与IgG的Fc片段结合。

B细胞表面的Fc(γ)R与抗原抗体复合物结合，有利于B 细胞对抗原的捕获和结合以及B细胞的激活和抗体的产生。

Fc受体还能与靶细胞(如肿瘤细胞)上的抗体结合，借以杀死靶细胞。

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