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流式细胞术免疫标记简介(完整)演示教学

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医学免疫学实验五 流式细胞术检测免疫细胞表面标记PPT文档42页

医学免疫学实验五 流式细胞术检测免疫细胞表面标记PPT文档42页

36、自己的鞋子，自己知道紧在哪里。——西班牙
37、我们唯一不会改正的缺点是软弱。——拉罗什福科
xiexie! 38、我这个人走得很慢，但是我从不后退。——亚伯拉罕·林肯
39、勿问成功的秘诀为何，且尽全力做你应该做的事吧。——美华纳
40、学而不思则罔，思而不学则殆。——孔子
医学免疫学实验五 流式细胞术检测免疫 细胞表面标记
•
46、寓形宇内复几时，曷不委心任去 留。
பைடு நூலகம்
•
47、采菊东篱下，悠然见南山。
•
48、啸傲东轩下，聊复得此生。
•
49、勤学如春起之苗，不见其增，日 有所长 。
•
50、环堵萧然，不蔽风日；短褐穿结 ，箪瓢 屡空， 晏如也 。
谢谢！

医学免疫学实验五 流式细胞术检测免疫细胞表面标记

医学免疫学实验五 流式细胞术检测免疫细胞表面标记
流式细胞术检测免疫细胞表面标记
实验目的
1 了解BD FACS Verse的流式细胞术 2 学习并掌握FCM 的原理 3了解FCM 的运用 4 简单运用FCM检测免疫细胞特性
✓ Introduction FCM Principles FCM Applications
Introduction
BD是由Maxwell W. Becton和Fairleigh S. Dickinson 于
BD Introduction FCM Principles ✓ FCM Applications
Flow Cytometry Applications Flow Cytometry Applications
• 细胞结构
• • 细胞大小 • • 细胞颗粒度 量与细 胞周 期
利用优化的缓冲液和抗体借 助 流式细胞仪检测转录因子 表达
用流式细胞仪分选细胞或 检测细胞表面蛋白表达
用 BD Phosflow 抗 体 检测关键蛋白的磷酸化水平
用 ELlSA或 ELISPOT方 法 检 测
分泌的细胞因子
..，.---\1 用 流 式 细 胞 仪 检 测 特 异 细 胞 胞内细胞因子表达
1897年在纽约创立的，总部设在新泽西州。
Maxwell W. Becton
Fairlegh S. Dickinson
经过一百多年的发展，BD已成为世界上最大的医疗技术及医
疗设备公司之一，它以领先的技术、卓越的产品质量和诚实可
信的服务赢得了全球用户及合作伙伴的广泛赞誉。
BD Introduction ✓ FCM Principles
Flow Cytometry Principles
某些物质在特定波长范围内的光线照射下，可发出波长比 照射光波长长的光线-即荧光。而这些受激发后能产生荧 光的物质称为荧光素

医学免疫学实验五 流式细胞术检测免疫细胞表面标记

医学免疫学实验五 流式细胞术检测免疫细胞表面标记
➢每管分1mL细胞； ➢4℃，400g离心5min； ➢弃尽上清，每管加50μL Fc block彻底悬浮，4℃孵育
15min； ➢每管加10μL对应的抗体稀释液，4℃避光孵育30min（铝
箔包好）； ➢每管加500μL PBS，4℃，400g离心5min； ➢弃尽上清，每管加500μL PBS悬浮细胞，尼龙膜过滤后流
1897年在纽约创立的，总部设在新泽西州。
Maxwell W. Becton
Fairlegh S. Dickinson
经过一百多年的发展，BD已成为世界上最大的医疗技术及医
疗设备公司之一，它以领先的技术、卓越的产品质量和诚实可
信的服务赢得了全球用户及合作伙伴的广泛赞誉。
BD Introduction ✓ FCM Principles
流式细胞术检测免疫细胞表面标记
实验目的
1 了解BD FACS Verse的流式细胞术 2 学习并掌握FCM 的原理 3了解FCM 的运用 4 简单运用FCM检测免疫细胞特性
✓ Introduction FCM Principles FCM Applications
Introduction
BD是由Maxwell W. Becton和Fairleigh S. Dickinson 于
利用优化的缓冲液和抗体借 助 流式细胞仪检测转录因子 表达
用流式细胞仪分选细胞或 检测细胞表面蛋白表达
用 BD Phosflow 抗 体 检测关键蛋白的磷酸化水平
用 ELlSA或 ELISPOT方 法 检 测
分泌的细胞因子
..，.---\1 用 流 式 细 胞 仪 检 测 特 异 细 胞 胞内细胞因子表达
BD Introduction FCM Principles ✓ FCM Applications

流式细胞术免疫标记简介完整ppt课件

流式细胞术免疫标记简介完整ppt课件

免疫标记技术
免疫标记技术（immunolabelling technique）:是指用荧光素、放射性同位 素、酶、发光剂或电子致密物质等作为 示踪剂，标记抗体或抗原进行的抗原抗 体反应。
流式细胞术检测蛋白质分子：免疫荧光 标记技术
“雪亮工程"是以区（县）、乡（镇） 、村（ 社区） 三级综 治中心 为指挥 平台、 以综治 信息化 为支撑 、以网 格化管 理为基 础、以 公共安 全视频 监控联 网应用 为重点 的“群 众性治 安防控 工程” 。
FACSCalibur流式细胞仪能够检测的荧 光（Fluorescence）信号
FL1 （第一荧光） -FITC(异硫氰酸荧光素） FL2 （第二荧光） -PE（藻红蛋白） FL3 （第三荧光） -PerCP, PeCy5等 PL4 （第四荧光） -APC（藻青蛋白）
双色直接染色
“雪亮工程"是以区（县）、乡（镇） 、村（ 社区） 三级综 治中心 为指挥 平台、 以综治 信息化 为支撑 、以网 格化管 理为基 础、以 公共安 全视频 监控联 网应用 为重点 的“群 众性治 安防控 工程” 。
正常外周血中通常存在的T细胞亚群
CD3+、CD4+、CD8-：T辅助/诱导细胞（Th/Ti），
占T细胞总数的60%~70%；
CD3+、CD4-、CD8+：T抑制/杀伤细胞（Ts/Tc） ，
20%~30%； CD3+ CD4+ CD8+ ： 1%~3%； CD3+ CD4- CD8-：1%~10%。
CD7+、CD1+、CD2+、CD3+、CD4+、CD8+、TCR+ （即CD4、CD8双阳性）

流式细胞术 ppt课件

流式细胞术 ppt课件
制备(如染色)无关。
✓前向角散射(FS)反映被测细胞的大小，它由 正对着流动室的光电二极管装置，接收并 转变为电信号。
✓侧向角散射(SS)反映被测细胞的细胞膜、细 胞质、核膜的折射率和细胞内颗粒的性状， 它由一个光电倍增管(PMT) 接收并转变为 电信号，这些电信号存储在流式细胞仪的 计算机硬盘或软盘内。
➢荧光信号也有两种：
✓一种是细胞自发荧光，它一般很微弱。
✓一种是细胞样本经标有特异荧光素的单克 隆抗体染色后，经激光激发发出的荧光， 它是我们要测定的荧光，荧光信号较强。
✓这两种荧光信号的同时存在是我们测定时 需要设定阴性对照的理由，以便从测出的 荧光信号中减去细胞自发荧光和抗体非特 异结合产生的荧光。
(1)单参数数据显示和分析
➢ 细胞的每一个单参数测 量数据用直方图来显示
➢ 横坐标表示散射光或荧 光信号相对强度值，其 单位是道数，可以是线 性的，也可以是对数的
➢ 纵坐标表示细胞数。
(2)双参数数据显示和分析：
➢细胞的双参数测量数据和细胞数量的关系 用一维直方图、二维点阵图、假三维地形 图、等高线图和密度图显示和分析。
✓流动室孔径有60μm、100μm、150μm 、 250μm等多种，供检测者选择。小型仪器一 般固定装置了一定孔径的流动室。
➢流动室里的鞘液流一般是稳定流动，控制鞘 液流的装置是在流体力学理论的指导下由一 系列压力系统、压力感受器组成。
➢调整好鞘液压力和标本管压力, 鞘液流包绕 样品流并使样品流保持在液流的轴线方向， 能够保证每个细胞通过激光照射区的时间相 等，从而使激光激发的荧光信息准确无误。Fra bibliotek等高线图
分别是测定细胞的两种荧光双参数数据，横坐标 和纵坐标分别代表一种荧光参数，同理只要设定 “十字门”就可得到两种荧光的各种测定值，密 度图和等高线图较点阵图更直观。

流式细胞术简介课件

流式细胞术简介课件

PPT学习交流
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PPT学习交流
12
流式细胞仪可检测到的细胞参数 • 荧光信号
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13
R1
File: 4
Acquisiti on Date: 06-Mar-03
Quad UL UR LL LR
Events % Gated
254
2.40
1067 10.08
5291 49.98
3975 37.55
X Mean 37.47
密度图
二维等高图ຫໍສະໝຸດ 直方图图 报告中常见的几种流式细胞图
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仪器设置调节
1. 用未染色细胞 2. 调整仪器PMT电压
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开机需准备试剂
• 建议首次试机避免进行大量试验，仅需准备下列 样品
（1）Negative Control（不加任何抗体）。 （2）CD3-FITC（FL1 单染） （3）CD19-PE（FL2 单染） （4）CD3-FITC /CD19-PE（FL1/FL2 双染）。
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数据分析
• 设门 • 设定阴性与阳性群体的界限 • 确定阳性与阴性细胞群体 • 统计阳性或阴性细胞群体的百分率，平
均荧光值，绝对数或抗体结合数
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2. 用单染色的细胞调节仪器补偿
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流式细胞术(免疫学检验课件)

流式细胞术(免疫学检验课件)

Region设置 Gate设置
第四节 FCM的临床应用
一、淋巴细胞亚群分析
淋巴细胞是机体免疫系统中的一群重要细胞群， 是执行免疫功能和参与免疫调节的免疫活性细胞， 主要分为T细胞、B细胞和NK细胞3大类。
不同淋巴细胞表达的CD抗原都有独自的抗原特性， 在临床疾病发生过程中对各淋巴细胞的CD抗原进 行测定，对于判断机体免疫功能状态、了解免疫 相关疾病的发病机制具有十分重要的意义。
最常用的方法是酶消化法、机械法、化学处理法 和表面活性剂处理法等。
（四）石蜡包埋组织单细胞悬液制备
该制备方法的建立扩大了流式细胞术的应用范围， 有利于进行临床回顾性研究和利用。
常用的方法有二甲苯脱蜡法、组织清洁剂脱蜡法和 甲氧-双氧水处理法。
石蜡切片一般适宜厚度是40μm~50μm，脱蜡须彻底， 获取组织后，用酶进行消化处理，消化时间不宜过 长，以免细胞核被消化溶解，经过滤、漂洗后即可 获得单细胞悬液。
三、三参数直方图
三维坐标均为参数 （散射光或荧光）而 非细胞数
对复杂的细胞亚群观 察更为直观、准确， 但对其数据的统计分 析较难
四、多参数组合分析
FCM常常需要分析三个以上的参数，但软件技术 能够无法显示四维空间结构。
随着FCM多色荧光信号检测的发展，所得到的荧 光信号和散射光信号需根据需要进行组合分析以 获得所需的信息。
SSC信号的强弱与 细胞内颗粒结构的 质量成正比，用于 检测细胞内部结构 属性
前向散射光示意图 细胞大小
结构复杂程度
侧向散射光示意图
血
液
白
细
胞
粒细胞
散
点
单核细胞
图
淋巴细胞
荧光信号：由待检细胞上标记的特异性荧光染料 受激光激发后产生。

流式细胞术PPT课件

流式细胞术PPT课件

电荷式分选
lasers
–超声振动器(15-100kHz)
–液流充电系统
–高压偏转板
–收集装置(流式管、培养板)
断裂点(充电) 高压偏转板
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四路分选原理
电荷式分选装置
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分选指标
• 分选时间由三方面决定：进样速度、目标细胞所占比例、 需要收集的细胞数。
需要细胞数
目标细胞所占比例(%)
1
5
50
104
• Hoechst（343, 450）常见为Hoechst33342和Hoechst33258，非嵌入的 方式与DNA链上的A-T碱基对结合。能对活细胞染色，用于活细胞 DNA定量分析，如精子分选；还用于侧群细胞的分选。
• PY（派若宁 560, 573） RNA染料，能进入活细胞。
• AO（吖啶橙 509, 525） DNA、RNA染料，染色后DNA呈黄绿色荧光， RNA呈橙黄色荧光，可进行DNA/RNA双参数分析。
• 多色标记荧光素搭配原则：每个通道只能选择一种荧光素； 各个通道之间的荧光素可以随意搭配。
FACSCalibur常用四色搭配：FITC、PE、PerCP、APC。
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B 根据抗原表达强弱合理选择 抗体
• 不同的荧光素强度有所不同；
CD5
• 高表达的抗原可用不太“亮” 的染料，更“亮”的荧光素分 配给表达低的抗原：
99%以上。 • 分选收获率是指被分选出的细胞与原来总细胞的百分比。 • 分选纯度和收获率永远是相互矛盾的，纯度提高，收获率
降低，反之亦然。
– 富集模式(enrich mode) – 纯化模式(purify mode) – 单细胞模式(single cell mode)

流式细胞术精品PPT课件

流式细胞术精品PPT课件
4
四、 流式细胞术的应用
1 细胞DNA含量检测：
细胞固定后用PI染色，因为PI特 异性结合于细胞DNA，荧光强度与PI 的结合量呈良好的线性关系，根据这 个原理，并通过专用的DNA分析软件， 可测出细胞的DNA含量。用于细胞周 期、细胞倍体以及凋亡的检测。
5
• 肿瘤诊断：
•
DNA异倍体的出现是癌变的一个重
• 一、 流式细胞术的概念 流式细胞术（FCM）就是对在的鞘
液包括下的细胞、粒子进行分析和分选 的技术，这种细胞或粒子是经过特异荧 光标记的。其特点是测量速度快，每秒 钟能测数千个乃至上万个细胞，且可进 行多参数测量，另一特点是在分析的同 时可把具有指定特征的细胞分离出来， 这就是分选技术。
1
二、流式细胞仪的工作原理
产生及发展，现在CD系统已有247种之多。
细胞用带有荧光的单克隆抗体标记后，用
流式细胞仪可对其进行检测分析，可分析
出荧光细胞的含量，也可分析出这种阳性
细胞的CD分子的相对含量。标记的方法一
般用直标法，也可用间标法。荧光探针多
为FITC、PE、PE-CY5、PerCP、CY5、
APC等。
9
淋巴细胞分类：
•
红细胞表面CD59缺失
18
5 细胞内蛋白的分析：
•
细胞破膜后将细胞内某一蛋白成分进行荧
光标记，用流式细胞仪进行测量分析，同表型
分析一样，可以测量出这种阳性细胞的数量和
这种蛋白的相对含量。并且，结合细胞表型分
析，进行多标记和多参数分析，可以检测出含
这种蛋白的细胞是属于哪一种表型的细胞。多
用间标法，荧光探针多为FITC。也可以与周期
27
•
流式细胞仪对一个样品提供的结果是否可

流式细胞术的原理及应用ppt课件

流式细胞术的原理及应用ppt课件
➢可把感兴趣细胞分 选到特定培养孔或板 上（4路和24孔板）
➢适用于高速分选和 多色分析
6
在整堂课的教学中，刘教师总是让学 生带着 问题来 学习， 而问题 的设置 具有一 定的梯 度，由 浅入深 ，所提 出的问 题也很 明确
流式细胞仪检测范围
细胞大小
细胞粒度
细 细胞表面面积
胞 结
核浆比例
构 DNA含量与细胞周期
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在整堂课的教学中，刘教师总是让学 生带着 问题来 学习， 而问题 的设置 具有一 定的梯 度，由 浅入深 ，所提 出的问 题也很 明确
散射光
它反应细胞的物理特性,根据前侧向散射光，可以把不同 类型的细胞群加以区分
FSC（小角散射光)它反 应细胞的相对大小和截 面积的大小
SSC (90度角散射光)代 表细胞的颗粒度和精细 结构的变化
1.液流系统： 细胞悬液被吸入检测室后，在鞘液
(sheath)的约束下，通过喷嘴，使其形成单细 胞悬液。
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在整堂课的教学中，刘教师总是让学 生带着 问题来 学习， 而问题 的设置 具有一 定的梯 度，由 浅入深 ，所提 出的问 题也很 明确
2.光学系统： 激光是较常用的光源, 稳定性好、单色性好。 散射光和荧光信号被收集、处理转化为数字信号。
FACS Vantage DiVa
科研型（大型机）
特点： ➢多数字化 ➢适用于各类细胞分选 ➢4路分选
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在整堂课的教学中，刘教师总是让学 生带着 问题来 学习， 而问题 的设置 具有一 定的梯 度，由 浅入深 ，所提 出的问 题也很 明确
FACSAria
科研型
特点： ➢分辨率高
➢选配多种波长和类 型激光器
成,将产生的光信号引导至检测器

流式细胞术ppt课件

流式细胞术ppt课件
可区分高FL细胞与低FL细胞。 一般的流式细胞仪装有一个激光光源（488nm），可
测出三个FL，即FL1、FL2、FL3，大型的流式细胞仪 装有三个激光光源（488nm、633nm和407nm），可测 出13个FL。
2、荧光信号
双色直接染色
二、荧光染料的选择
选择荧光染料要考虑: 1、流式细胞仪配置的激光可否激发该荧光染料； 2、流式细胞仪可否检测该荧光染料的发射波长； 3、使用多种荧光染料时，要考虑荧光染料之间的干扰。
二、荧光染料的选择
颜色补偿
➢荧光染料的发射波长范围一般宽于检测器检测到的波 长范围；检测范围之外的波长可能会进入相邻的检测器 被检测，从而造成荧光信号之间的干扰。流式细胞仪可 以通过“颜色补偿”校正这一干扰。 ➢ 单标管用于调补偿。
Fluorescein (FITC)
300 nm
400 nm
Excitation
500 nm
Wavelength
Emisson
600 nm
700 nm
400 nm
500 nm
600 nm
700 nm
Protein
Phycoerytherin (PE)
300 nm 400 nm
Excitation Emisson
500 nm
600 nm
700 nm
Protein
FITC和PE荧光光谱
直接染色
间接染色
样品制备过程中常见的问题及解决对策
常见问题 细胞密度低 非特异荧光
强
碎片多 细胞聚集
荧光弱
原因 细胞损失 抗体不纯、死细胞多
细胞死亡、机械损伤 消化不完全
抗体少、反应时间短
解决对策 增加离心时间、弃上清 选择纯度高的抗体、用同型 对照抗体或双标记排除非特

流式细胞术免疫标记简介(完整)

流式细胞术免疫标记简介(完整)

T细胞标志
T细胞及其亚群 T祖细胞（pro-T）的表型为CD34+、TdT+、CD10+、
CD7+ 未成熟T细胞标志CD3、CD4和CD8。 在T细胞发育过程中，CD7是最早出现的T细胞标志，
且贯穿表达在整个T细胞分化发育过程中。 胸腺细胞要分化发育为有功能的成熟T细胞，细胞
表面标志需经历一定的变化过程。
如与CFSE 进行不同细胞亚群增殖分析。
流式细胞术表面分子免疫标记操作举例
淋巴细胞亚群检测操作程序
一、实验原理：
人的淋巴细胞根据其生物功能和细胞表面抗原的表达可分为 三大类：T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK自然杀伤细胞。T淋 巴细胞表达CD3；B淋巴细胞表达CD19；NK自然杀伤细胞 表达CD56或CD16，并且不表达CD3。利用各种单克隆抗体 与淋巴细胞表面抗原结合，再配多色荧光染料，即可以把 淋巴细胞区分为各种亚型。进面得到各亚群的比例。
（6）浆细胞（plasma cell）：激活B细胞进 一步分化成为产生抗体的浆细胞，这时获得 PC-1、PCA-1和CD138浆细胞特异抗原，CD85表 达增加，CD38抗原再出现。而SIg和上述B抗原 消失。CD79仍可存在于胞质中。
B细胞上的CD抗原分为：
①B细胞限制性（特异性）抗原： CD19、CD20、 CD21、 CD22、CD77 和CD79， 它们的表达只限 于B细胞上，在鉴别细胞系上是十分重要的标志。
（5）活化B细胞（activated B cell）：成熟 B细胞被抗原或丝裂原刺激后，成为活化B细胞， 继之增生和分化。在此过程伴随表达B细胞激 活抗原CD23、CD77、CD80、CD86和其他激活相 关 抗 原 如 CD25 、 CD26 、 CD30 、 CD69 、 CD70 、 CD71、CD38等。膜结合型Ig逐渐减少，分泌型 Ig逐渐增加。
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（2）前B细胞（pre-B）：CD34和TdT消失，出现 CyCD79 、 CD10 、 CD20 、 CD9 、 CDw78 、 CD74 ， cμ+ （胞浆IgM重链）。
（ 3 ） 未 成 熟 （ 早 期 ） B 细 胞 （ immature B cell）：CD9、CD10消失，出现 SIgM、CD22。 CD20、CD24、CD40、CD72、CD74、CDw78、CD79 表达增加。其他新的B抗原CD37、CD2、CDw75、 CDw76相继出现。
检测细胞表面蛋白抗原 检测细胞胞浆内蛋白性抗原 检测细胞内细胞因子 优势：在同一细胞上同时检测
多种标志
血液系统各型细胞免疫标志
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
造祖/干细胞
CD34+抗原在早期造血祖细胞内呈高水平表达，随着 细胞成熟其表达呈进化性下降，继而消失。
CD38抗原是造血干细胞向多系定向分化的标志之一， 并随一定的分化过程表达上调
细胞功能 细胞表面蛋白抗原 细胞胞浆内蛋白性
抗原 细胞内细胞因子 细胞增殖 细胞内钙离子浓度
免疫标记技术
免疫标记技术（immunolabelling technique）:是指用荧光素、放射性同位 素、酶、发光剂或电子致密物质等作为 示踪剂，标记抗体或抗原进行的抗原抗 体反应。
流式细胞术检测蛋白质分子：免疫荧光 标记技术
80％～90％和95％以上的NK细胞表达CD16 和CD56。用CD3-CD16+CD56+可定义NK 细胞。
B细胞标记
B细胞 B细胞的分化主要分为B祖细胞、前B细 胞、未成熟B细胞、成熟B细胞、活化B细胞和浆细 胞6个阶段。
（1）B祖细胞（pro-B）：此期最早表达的B细胞 特异性抗原是CD19，同时表达CD34、细胞核TdT、 HLA-DR、CD40、CyCD22。
最近发现CD90（Thy-1）是比CD34更早的干、祖细胞 标志
结合多种分化抗原的表达可以作为造血细胞不同发育 阶段的标志。 如CD34+、CD33+细胞群为多能干细胞向髓系定向的标 志； CD34+、CD19+多为多能干细胞向B系定向的祖细胞。 CD34+、TdT+、CD10+、CD7+则被认为是向T系定向 的祖细胞。
CD5、CD7是T细胞白血病较特异的标记， 也是髓系白血病时最常见的伴随标记。 CD45则是白细胞的共同标记抗体
CD25和CD28主要分布于活化T淋巴细胞表 面，为活化T淋巴细胞标志。胸腺细胞、静 止T细胞、静止B细胞以及NK细胞表面无表 达。
末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）和II类人类 白细胞抗原（HLA-DR）的阳性表达对早期 T细胞白血病的诊断有重要价值。
前 三 种 表 型 细 胞 的 TCR 主 要 为 TCRαβ ， 而 CD4CD8- T细胞主要表达TCRγδ，他们都执行细胞免 疫功能。
CD2是绵羊红细胞受体和淋巴细胞功能相 关抗原-2（LFA-2），表达于人95%T细胞、 50%～70％胸腺细胞和大颗粒淋巴细胞 （LGL／NK）的表面。
CD3是T细胞表面抗原，表达于成熟胸腺细 胞、静息和激活的的外周血T细胞，是鉴定 T细胞的重要标志，其胞浆和膜CD3是早期 和普通型T细胞白血病的主要分型标记。
（6）浆细胞（plasma cell）：激活B细胞进 一步分化成为产生抗体的浆细胞，这时获得 PC-1、PCA-1和CD138浆细胞特异抗原，CD85表 达增加，CD38抗原再出现。而SIg和上述B抗原 消失。CD79仍可存在于胞质中。
CD7+、CD2-、CD3-、CD4-、CD8-、TCR-
CD7+、CD2+、CD3+、CD4-、CD8-、TCR（即CD4、CD8双阴性）
CD7+、CD1+、CD2+、CD3+、CD4+、CD8+、TCR+ （即CD4、CD8双阳性）
CD7+、CD2+、 CD3+、CD4+、 CD8-、TCR+
（4 ）成熟B 细 胞（mature B cell）：SIgM 和 IgD同时表达，并出现CR、FcR和丝裂原受体，上 述B细胞抗原继续存在。
（5）活化B细胞（activated B cell）：成熟 B细胞被抗原或丝裂原刺激后，成为活化B细胞， 继之增生和分化。在此过程伴随表达B细胞激 活抗原CD23、CD77、CD80、CD86和其他激活相 关 抗 原 如 CD25 、 CD26 、 CD30 、 CD69 、 CD70 、 CD71、CD38等。膜结合型Ig逐渐减少，分泌型 Ig逐渐增加。
CD7+、CD2+、 CD3+、CD4-、 CD8+、TCR+
进入外周淋巴器官和血液，执行免疫功能
正常外周血中通常存在的T细胞亚群
CD3+、CD4+、CD8-：T辅助/诱导细胞（Th/Ti），
占T细胞总数的60%~70%；
CD3+、CD4-、CD8+：T抑制/杀伤细胞（Ts/Tc） ，
20%~30%； CD3+ CD4+ CD8+ ： 1%~3%； CD3+ CD4- CD8-：1%~10%。
T细胞标志
T细胞及其亚群 T祖细胞（pro-T）的表型为CD34+、TdT+、CD10+、
CD7+ 未成熟T细胞标志CD3、CD4和CD8。 在T细胞发育过程中，CD7是最早出现的T细胞标志，
且贯穿表达在整个T细胞分化发育过程中。 胸腺细胞要分化发育为有功能的成熟T细胞，细胞
表面标志需经历一定的变化过程。
流式细胞术系列讲座之——免疫标记
流式细胞术免疫标记应用简介
2009-12-03
上次流式细胞术讲座内容（概述）
流式细胞术的一般介绍 流式细胞术在临床检测和科研中的应用
流式细胞仪可检测的细胞参数
细胞结构 细胞大小 细胞颗粒性程度 细胞表面面积 核浆比例 DNA含量与细胞周
期 RNA含量
FACSCalibur流式细胞仪能够检测的荧 光（Fluorescence）信号
FL1 （第一荧光） -FITC(异硫氰酸荧光素） FL2 （第二荧光） -PE（藻红蛋白） FL3 （第三荧光） -PerCP, PeCy5等 PL4 （第四荧光） -APC（藻青蛋白）
双色直接染色
流式细胞术免疫荧光标记的应用