浓缩血小板悬液的三种制备方法比较

用白膜回浆法制备浓缩血小板
邹元国;陈兆铭;张益红;虞洪芳
【期刊名称】《中国输血杂志》
【年(卷),期】1990(3)1
【摘要】目前制备浓缩血小板大多采用富含血小板血浆法(简称PRP)。

这种工艺制备的浓缩血小板中含有较多的红细胞和大量的白细胞,制备后的浓缩血小板要经过再悬浮处理,得率也不稳定。

国内有人作过这方面研究,发现全血离心后的白膜中含有90%以上的血小板,于是便以白膜作为浓缩血小板。

以上两种方法制备的浓缩血小板在输注前都必须进行交叉配血试验。

这不仅使输注过程繁琐,更为不利的是,大量白细胞的混入更易引起病人发生输血反应。

【总页数】3页(P45-47)
【关键词】白膜回浆法;制备;血小板;血液制品
【作者】邹元国;陈兆铭;张益红;虞洪芳
【作者单位】南京红十字中心输血站
【正文语种】中文
【中图分类】R457.14
【相关文献】
1.新白膜法与富浆法制备浓缩血小板的质量比较 [J], 杨丽美
2.富含血小板血浆法和白膜回浆法制备浓缩血小板的比较 [J], 梁忠欢
3.富含血小板血浆法和白膜回浆法制备浓缩血小板比较 [J], 梁芬;李小梅
4.白膜回浆法及富板浆法制备浓缩血小板质量初探 [J], 晏治华;王娟娟
5.白膜回浆法和富血小板血浆法制备浓缩血小板的比较 [J], 邱东飚;陈君敏;卢赛玉;关家瑞
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手工分离浓缩血小板(PC)的制备Ⅰ.富含血小板血浆(PRP)法分离制备血小板法（富浆法）先将全血经轻离心，分离制备富含血小板血浆，之后将富含血小板血浆重离心，移去上层血浆，下层沉淀即为浓缩血小板。

在第二次重离心制备浓缩血小板前，可将第一次轻离心获得的富含血小板血浆进行白细胞过滤处理。

具体操作如下：1.采血2.轻离心成分分离制得红细胞、富含血小板血浆。

建议离心条件：温度：22℃±2℃，加速：9 r/min，减速：3 r/min，200ml袋离心力为478g，400ml袋离心力为850g，离心时间为8分钟。

（贺利氏离心机）轻离心,使红细胞（RBC）、白细胞（WBC）沉淀，上层血浆的大部分血小板（PLT）尚未沉淀，分离此血浆即为富含血小板血浆，约含全血中70%的PLT（根据调节离心机的离心力和时间有所不同）。

3.重离心富含血小板血浆。

第二次离心：温度：22℃±2℃，加速：9 r/min，减速：3 r/min，离心力2988g，离心时间为10分钟。

浓缩血小板1个单位留浆20－25ml，2个单位留浆30－45ml。

4.挤去上层贫血小板血浆, 再回部分贫血小板血浆置血小板内, 形成血小板悬液，静置1.5-2h；8h内制备必须完毕。

5.血小板悬液振荡保存，等待检测报告,不合格剔除。

6.根据需求选择合格血小板悬液进行汇集过滤。

7.开放式6h内输完。

8.密闭式振荡保存（无菌接驳，血小板贮存袋，细菌监测）。

富浆法的特点：PRP-PC质量不稳定，WBC残留量高，输洼安全性差，反复输注常会诱发血小板输注无效。

Ⅱ.白膜(BC)法分离制备血小板法全血首先经重离心后分离白膜层，将白膜层再经轻离心后，去除红细胞和白细胞，即得浓缩血小板。

具体操作如下：1.采血2.成分分离并制备白膜得少白红细胞（白细胞去除率约85 %）、血浆、白膜。

建议离心条件：温度：22℃±2℃，400ml袋离心力转速2515转/2100g，离心时间为14分钟。

prp的制备方法PRP(Platelet-Rich Plasma)是一种含有高浓度血小板的血浆，常用于医疗和再生医学领域。

以下是一种制备PRP的常用方法。

制备PRP的方法主要分为以下几个步骤：1.采集血液：首先，需要从患者或受试者的体内采集一定量的血液。

常用的采集方法是通过鹿皮针或静脉穿刺在静脉中采集血液。

通常，采集的血液量为8-16毫升。

2.血液离心：采集到的血液需要进行离心分离。

这一步的目的是将血液分成不同的组分，其中目标是收集血小板丰富的血浆。

3.离心过程：血液被装入离心管中，并放入离心机中。

离心机以高速旋转的方式将血液分离成不同的层次。

离心通常以2000-3500转/分钟的速度进行，持续10-20分钟。

4.血浆收集：离心过程后，可以观察到血浆和红细胞的分离。

这时，将旋转离心管从离心机中取出，用无菌注射器将血浆收集到另一个容器中。

收集血浆时，需要注意避免红细胞的污染。

5.血小板计数：采用血小板计数仪或显微镜等设备，对收集到的血浆中的血小板数量进行计数。

通常，PRP的目标是获得比正常血液中更高浓度的血小板。

6.血小板濃縮：将收集到的血浆经过进一步处理，以提高血小板的比例，即制备PRP。

常见的一种处理方法是通过沉淀技术，使用血小板超滤膜或血小板聚集剂，将血浆中的血小板与其他成分（如红细胞和白细胞）分离。

7.最终血浆收集：经过血小板濃縮后，收集血浆，即可得到PRP。

PRP可以直接应用于患者体内，或者通过冷冻或冻干保存以备后续使用。

需要注意的是，PRP的制备方法可能会有所不同，根据不同的实验目的和需求进行微调。

例如，一些方法可能会使用添加剂来激活血小板，以增强PRP的效果。

总结起来，在制备PRP的过程中，采集血液、离心、血浆收集、血小板计数、血小板濃縮和最终血浆收集是常见的步骤。

通过这些步骤，可以得到含有高浓度血小板的PRP，用于医疗和再生医学领域的治疗。

• 422 •云南医药2017年第38卷第4期•西南采供血交流专栏-Compo mat血细胞分离机制备浓缩血小板的制备工艺探讨彭楷，黄霞，马姗姗，邓莉，骆展鹏(重庆市血液中心，重庆400015)关键词：浓缩血小板；血小板含量；血小板回收率；红细胞混人量中图分类号：R457.1 文献标志码：B文章编号：1006-4141 (2017) 04-0422-03随着我国临床医学的发展，血小板的应用越来越广泛。

由于单采血小板的采集时间较长，献血者难以招募，目前已不能满足临床日益增长的血小板用量。

浓缩血小板作为单采血小板的后备血液成 分，受到临床的青睐。

目前我国采供血机构有的使用手工的方法制备浓缩血小板，有的利用血细胞分离机来制备完成制备。

手工方法受制备者的手法及经验影响较大，浓缩血小板质量不稳定;血细胞分离机制备的血小板质量易控制，但需对分离参数和分离条件有严格要求。

因此，本文将对血细胞分离机制备浓缩血小板的制备工艺流程做一探讨。

材料和方法一、材料1.仪器：T h e m o大容量离心机（美国太平洋公司）、C o m p a tm a t血细胞分离机（德国费森尤斯卡比公司）、C A620全自动血细胞分析仪（瑞典M e d o n ic公司）。

2.耗材：400m L四联袋（山东威高）、50m L二联袋（广州费森尤斯卡比）。

二、方法1.样本分组：随机抽取重庆市血液中心采集的400m L规格新鲜全血（1~3h内）40袋，平均分成2组。

2.C om pat m a t血细胞分离机制备参数设置：第1次分离时，将血细胞层提升至A2+1s；第2次分离时将红细胞层提升至A8+B fa s te r，同时第2次分离时流速由5°%缓慢提升至10°%。

3.第1组制备方法（工艺1)：将全血按2 800r/m in x15m i n的离心条件置大容量离心机内离心；离心后的血袋置于Com pat m a t血细胞分离机上自动分离血浆和白膜层；分离完毕取下红细胞袋、血浆袋并热合，余下的含白膜和空转移袋的二联袋，按1 000r/m in x8m in的离心条件置大容量离心机内离心离心；离心完毕后将二联袋置于C om pat m a t血细胞分离机自动分离富含血小板血浆层并热合，即为浓缩血小板。

浓缩血小板悬液的三种制备方式比较杨世明张勇萍杨枨林费红毅【关键词】制备方式关键词:制备方式;检测比较;血小板悬液0引言浓缩血小板悬液（PC）在白血病、再障等血小板减少的出血及外科手术中均有显著的止血作用，而PC中血小板数量的多少和质量的高低又是阻碍临床输注成效的重要因素.为探讨PC的最正确制备方式和条件，咱们对二次离心法、白膜回浆法和机械单采法三种方式制备的PC细胞参数进行了检测比较.1材料和方式供血者选择按国家卫生部规定标准，对献血员进行体魄检查和ALT，HAV，HBV，HCV，HIV及RPR等化验检测均合格，5d内未服阿斯匹林等阻碍血小板功能的药物，静脉血管良好，血小板计数在150×109・L-1以上者.器材设备图门产LSG-04R型大容量低温离心机，超净台，分浆夹，F-800型血细胞分析仪（日本产），CPD保养液三联血袋，规格为400mL.制备方式①二次离心法:搜集全血400mL按文献［1］规程进行分离制备;②白膜回浆法:搜集与受血者ABO血型相同的全血400mL，置低温离心机，在22℃以3500r・min-1离心10min，在超净台内分出血浆至1号袋，保留80～100mL血浆，白膜层分至2号袋，静置30～40min后，在22℃以1400r・min-1离心6min后，将白膜层以上部份分出约60mL呈浑浊状的血浆，即为白膜回浆法制备的1U浓缩血小板悬液;③机械单采法:由西安市中心血站制备.检测方式及指标血小板、红细胞、白细胞计数，均用F-800型血细胞分析仪进行测定.血小板回收率=（PC中血小板数/制备前血小板总数）×100%;PC中血小板数=血小板计数/L÷1000×容量（mL）. 2结果用F-800型血细胞分析仪，对三种不同方式制备的浓缩血小板悬液细胞参数检测，结果见表1.表1三种方式制备浓缩血小板悬液的检测结果（略）3讨论二次离心法制备浓缩血小板悬液的优势是简单易行，缺点是PC中血小板数量少，而WBC含量较多.PC中混入过量的WBC无益于血小板的贮存，另外血小板的贮存质量也与制备进程中血小板的损伤程度有关.PC中混入过量的WBC可使患者产生白细胞凝集素或HLA抗体而阻碍输注成效，一样以为PC中WBC<106才能有效地避免同种免疫，本文二次离心法制备的PC中WBC计数达×109・L-1，输注后仍有产生免疫的可能.机械单采法制备血小板的优势是能够取得高质量的血小板制品，可从单个供体搜集到浓度高、纯度好、体积小、无聚集的8～10个单位的血小板制品［2］，但由于其设备昂贵，在基础医院目前还难以普及.最近几年来已采纳白膜回浆法制备PC，该法的优势是简便易行，血小板取得量较多，制备进程中血小板损伤小，最终PC中混入的WBC 数量较少，只要把握好离心条件，克服制备进程中的各类阻碍因素，可取得符合质量操纵标准的血小板数量，在无机械单采条件的单位能够利用白膜回浆法制备浓缩血小板制品，以便取得较为中意的输注成效.参考文献:［1］肖星甫.输血技术手册［M］.成都:四川科学技术出版社，1992:180-182.［2］何慧平.血细胞分离机搜集血小板的初步探讨［J］.临床输血与查验，1999;1（2）:30-31.。

改良白膜法手工制备浓缩血小板摘要】目的简化改良白膜法，提高血小板(Pt)的回收率、降低浓缩血小板中WBC、RBC的残存。

方法采用新工艺、器材如新型血袋、自动分浆仪、离心悬挂器等。

结果改良的白膜法(改良的白膜法NBC)所制备的PC：Pt(7.8±2.9)×10加／2、RBC(O.008±O.006)×109／2、wBc(0.8±O.4)×106／2、血小板回收率(82.1±7.2)％。

结论改良的白膜法简化了操作、提高了血小板的收集率，各项指标都可以达到或超过国家标准。

【关键词】改良白膜法血小板去除法／方法近年来国内输血界工作者对手工血小板的制备方法进行过一系列研究，取得了一些成果，比较有代表性的有“新白膜法”[1]、“梯度离心结合白膜法制备浓缩血小板(VDF)”[3]。

TDF大幅提高了PC中血小板的含量，但制备的浓缩血小板悬液(PC)红、白细胞的污染严重。

改良白膜法(BBC)各项指标都可以达到或超过国家标准，不过操作比较烦琐。

BBC被列入了国家卫生部的十年百项推广计划。

笔者对改良白膜法进行了改进，研发了新改良白膜法，现报告如下。

1 材料与方法1.1 仪器设备美国ThermoJ-6B大容量离心机、自动分浆仪、400 ml顶底结构五联血袋、离心悬挂器，等。

l.2 原料血400 ml全血，采血后室温保存，于采血后6 h之内完成浓缩血小板的制备工作。

1.3 方法1.3.1 NBC法制备浓缩血小板 NBC法制备浓缩初回收率、总血小板于2008年4—7月在本站完成。

(1)重离心 RCF=2560 g力，T=20 min，离心温度(22±2)℃。

(2)分白膜将离心后的全血置于自动分浆仪上，目视挑选，凡白膜发生了凝聚及太薄者予以淘汰。

白膜较好者，在分去上层贫血小板血浆、底层贫血小板红血球后，将白膜用一定量的血浆洗入悬挂袋中。

(3)悬挂离心将悬挂袋用悬挂器悬挂于离杯上，轻离心：RCF=410 g力，T=130 S，离心温度(22±2)℃。

手工浓缩血小板的汇集滤白及深低温保存郝俊海（通辽市中心血站）血小板输注是治疗各种因血小板减少或功能障碍引起出血的有效治疗手段。

目前国内血小板制备多采用机采制备，由于机采无偿献血者的招募有一定难度并且随着临床血小板用量的逐年增加，很多地方的血小板供应单独靠机采已不能满足临床需求，而现有的血液资源大量被浪费，如何利用现有的血液资源分离手工浓缩血小板供应临床，同时尽量减少手工血小板多人份输注，容易引起同种免疫导致输注无效的弊端是解决目前血小板临床供应的一个有效途径。

由于血小板免疫性输注无效主要为HLA抗体引起，其次为HPA 抗体[1，2]，去除手工浓缩血小板中的白细胞就可减少输血反应和最大限度地避免同种免疫的发生。

本站采用血小板专用滤白滤器以每10u为一治疗量，制备新鲜汇集滤白血小板用于预防性血小板输注患者，同时制备冰冻汇集滤白血小板，用于急诊和手术止血患者，取得了较好的临床效果。

现将方法报告如下。

1 材料与方法1.1 材料200ml或400ml于6小时内采集22℃±2℃保存的三联袋全血；血小板专用汇集滤除白细胞输血器（南京双威生物医学科技有限公司提供）；二甲基亚砜（DMSO）上海博光生物科技有限公司提供。

1.2 仪器设备Cyrofuge 6000i大容量离心机（德国贺利氏）；BC-2800全自动血液细胞分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）；SANYO MDF-U52V -86℃医用冰柜（日本三洋）；KJX-1A冰冻血浆解冻箱（苏州市医用仪器厂）PC-100血小板保存箱（美国HELMER）。

1.3 浓缩血小板的制备，采用富浆法制备。

，贺利氏6000i离心机，22℃±2℃，加速度为9，减速度为4，200ml袋离心力465g，离心7min，400ml袋离心力1012g，离心8min。

1.3.2 注意血袋装杯时不能打褶，防止离心后红细胞挂壁。

最佳离心效果以离心后上层血浆中无肉眼可见红细胞，血浆与红细胞分层清楚并且无明显白膜层出现为标准，如果分层不清要混匀后适当加大离心机转速重离。