实验五转基因植物的检测

植物基因组dna的提取实验报告植物基因组DNA的提取实验报告。

植物基因组DNA的提取是分子生物学实验中的一项重要步骤，对于研究植物的遗传特性和基因表达具有重要意义。

本实验旨在通过提取植物细胞中的DNA，为后续分子生物学实验提供基础支持。

在本次实验中，我们选择了小麦叶片作为实验材料，采用CTAB法提取植物基因组DNA，并对提取的DNA进行质量评估。

首先，我们收集了新鲜的小麦叶片样品，并将其置于液氮中迅速冷冻保存，以保持DNA的完整性。

接着，将叶片样品磨成细末状，并加入预冷的CTAB提取液中，进行细胞破裂和DNA的溶解。

随后，通过酚/氯仿提取法分离DNA与蛋白质，最终得到DNA的沉淀物。

在实验过程中，我们注意到了一些关键的操作细节。

首先，样品的冷冻保存和研磨过程需要迅速进行，以防止DNA的降解。

其次，在加入CTAB提取液后，充分混合样品并保持恒温，有助于细胞破裂和DNA的溶解。

最后，在进行DNA的沉淀时，需要注意避免将上清液一同转移，以保证提取得到的DNA纯度。

提取得到的DNA样品经过紫外分光光度计检测，结果显示其纯度较高，吸光比值（A260/A280）约为1.8，符合DNA的纯度要求。

随后，我们进行了琼脂糖凝胶电泳实验，观察到明显的DNA条带，并通过对照DNA分子量标准品的迁移情况，初步评估了提取得到的DNA片段大小。

通过本次实验，我们成功地提取到了小麦叶片样品中的基因组DNA，并对其质量进行了评估。

下一步，我们将利用提取得到的DNA样品，开展进一步的分子生物学实验，包括PCR扩增、基因克隆等，以深入研究小麦的遗传特性和基因表达。

本次实验为我们提供了可靠的DNA样品，为后续实验奠定了坚实的基础。

总之，植物基因组DNA的提取是分子生物学研究中的重要步骤，本次实验通过CTAB法成功提取了小麦叶片样品中的DNA，并对其进行了质量评估。

提取得到的DNA样品具有较高的纯度和完整性，为后续实验提供了可靠的基础支持。

实验4转基因植物PCR检测四、转基因植物PCR基因扩增及电泳检测一、实验目的1.学习转基因植物PCR基因扩增的基本原理。

2.掌握转基因植物PCR基因扩增的基本操作技术以及琼脂糖凝胶电泳技术。

二、原理PCR检测技术的基本原理是根据食品中待检的外源基因核酸序列设计合适引物，经PCR反应使待检靶标DNA序列得以扩增放大，最后经凝胶电泳分析靶标PCR产物的有无，从而对食品中是否含有靶标转基因序列成分进行判定。

由于目前商品化的绝大多数转基因食品普遍含有CaMV35S启动子和NOS终止子这两种基因表达调控序列或其中之一，而CaMV35S启动子和NOS终止子的DNA序列早已公开。

故在对食品样品的转基因背景一无所知的情况下，根据CaMV35S启动子和NOS终止子的DNA序列设计合适引物，通过PCR反应检测食品中是否含有CaMV35S启动子和NOS终止子基因序列，来判定该食品是否为转基因食品。

三、试验材料提取的甘薯基因组DNA。

四、试剂4.1 PCR反应引物序列35S：5，-GCT CCT ACA AAT GCC ATC A-3，//5，-GAT AGT GGG ATT GTG CGT CA-3，；NOS：5，-GAA TCC TGT TGC CGG TCT TC-3，//5，-TTA TCC TAG TTT GCG CGC-3，。

4.2 PCR反应试剂：无菌去离子水；模板DNA；20 μmol / LPCR 引物；5U/μL Taq DNA 聚合酶；2.5 mmol / L dNTPs；10×PCR 缓冲液；25 mmol / L MgCl2，25 mmol / L KCl , 20 μg / mL 灭菌无核酸酶的牛血清白蛋白4.2 核酸电泳相关试剂（见实验6）五、仪器5.1 PCR扩增仪。

5.2 微量移液器。

5.3 吸头。

5.4 电泳仪。

5.5 电泳槽。

5.6 凝胶成像仪。

5.7 PCR管。

六、实验步骤6.1 转基因植物PCR基因扩增6.1.1.1 按待检样品数（每一个样品分设35S和NOS两个检测反应）并加空白对照、阴性对照、阳性对照，取一定数量的无菌无污染的洁净干燥PCR管，按下表用记号笔在管壁上编号：6.1.1.2 之后按上述顺序依次加入各PCR反应液。

转基因筛选实验报告1. 实验目的本实验旨在通过转基因技术筛选出具有目标基因的转基因植物，并验证其功能表达。

同时，对转基因技术的应用进行探究与分析。

2. 实验方法2.1. 材料准备- 野生型植物种子- 目标基因载体- 转化载体（包含选择标记基因）- 催化剂（如乙酰丙酮）- 局部细菌感染试剂2.2. 实验步骤1. 制备植物组织培养基，包括必需的无机盐、营养物质以及植物激素。

2. 将野生型植物种子在无菌条件下在培养基上培养，保持温湿度合适。

3. 将目标基因载体和转化载体分别在乙酰丙酮的催化作用下加入植物组织培养基中。

4. 收取转基因植株，将其转移到相应的培养基中继续培养。

5. 利用PCR等方法对转基因植株进行基因分析，验证是否成功转化目标基因。

6. 进行型和酶解析实验，验证目标基因的功能表达情况。

3. 实验结果经过一段时间的培养和筛选，我们成功获得了若干转基因植株。

通过PCR实验验证，其中的部分植株确实成功转化了目标基因。

进一步的酶解析实验结果显示，这些转基因植株中的目标基因被成功表达，产生了相应的功能酶。

4. 实验分析通过转基因技术的应用，我们成功地筛选出了具有目标基因的转基因植物。

这为进一步研究和应用提供了重要的基础。

转基因技术的应用不仅可以用于改良作物品种，提高农作物的抗病虫能力和产量，还可以用于生物医学研究，产生用于疾病治疗的蛋白质等。

然而，转基因技术也面临一些争议和风险。

一方面，转基因植物可能对环境产生不可逆转的影响，对生态系统造成潜在风险。

另一方面，转基因植物可能引发食品安全问题，对人体健康构成潜在威胁。

因此，在推广应用转基因技术的过程中，需要更加严格的监管和安全评估。

5. 结论通过转基因筛选实验，我们成功获得了具有目标基因的转基因植物，并验证了目标基因的功能表达。

这为转基因技术的应用提供了实验依据和理论基础。

转基因技术具有广阔的应用前景，但也需要高度重视风险评估和监管措施，确保其安全使用。

转基因大豆的检测实验设计生物技术安全评估 092012年5月目录前言........................................................................3. 实验一大豆样品的准备 (4)实验二大豆DNA的提取和纯化 (4)实验三靶标基因的扩增 (6)实验四反应产品检测 (10)实验五结果分析 (12)参考文献 (12)前言随着转基因工程技术的迅速发展与在生物改良及遗传育种中的大规模应用，转基因生物（Genetically Modified Organism）及其产品的种类越来越多，含有的外源基因类型也越来越多。

抗草甘膦（glyphosate）大豆（商品名，roundup ready soybean）是在传统大豆株Variety A5403中转入外源基因CAMV-35S启动子、抗草甘膦基因CP4-EPSPS和NOS终止子而得到。

它是目前使用最广的转基因作物之一，每年至少有800万吨转基因大豆进入我国市场。

因此，研究抗草甘膦大豆的快速检测方法具有重要意义。

基于核酸的检测技术主要有PCR 方法和基于PCR 原理的其他检测方法如多重PCR、巢式PCR 等等。

普通PCR 方法已经成为转基因检测中常用的方法，通常是作为定性检测方法，早在2003 年就成为出入境检验检疫系统的行业标准。

这些标准涉及的转基因作物有大豆（SN/T 1195-2003）、玉米(SN/T 1196-2003)、棉花(SN/T 1199-2003)、油菜籽(SN/T 1197-2003)、烟草(SN/T 1200 -2003) 和马铃薯(SN/T 1198 -2003)。

目前广泛应用于进出口商品的转基因成分检测。

随后在2004 年又制定了转基因定性检测的国标(GB/T 19495.4-2004)，该国标中用的方法还是普通PCR。

因此，普通PCR 方法的研究主要在于新的转基因作物的鉴定研究。

《基因工程学》课程教学大纲（Genetic Engineering）一、课程说明课程编码：02200200课程总学时（理论总学时/实践总学时）：48（48/0）周学时（理论学时/实践学时）：4（4/0）学分：31．课程性质：专业必修课。

2．适用专业与学时分配：适用生物技术专业。

教学内容与学时分配3．课程教学目的与要求：本课程的授课对象是生物技术专业的本科生。

课程简介：《基因工程》是生物技术专业的专业必修课程。

其以分子遗传学理论为基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段而建立起来的一门技术学科。

基因工程兴起于20世纪70年代初，它的问世带动了生物技术的兴起和发展，是现代生物技术的核心内容。

基因工程课程的主要内容包括基因的分离、基因的克隆、基因的表达、植物基因工程、动物基因工程、药物基因工程和基因治疗等。

它是生命科学学院生物技术专业本科生的主干专业课程之一，它是生物工程（包括基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程）中最重要的课程，其它三大工程是建立在基因工程基础之上的，同时也为生物技术制药等后继学科奠定了重要的理论基础。

课程目标：设置本课程是为了让生物技术专业的学生理解和掌握基因工程的技术原理，通过本课程学习，掌握基因操作的工具酶，基因克隆常用载体，目的基因的分离与合成，重组体的构建，重组体向宿主细胞的导入，重组体克隆的筛选与鉴定以及克隆基因的表达，同时了解基因工程在生物学领域中的应用与发展前景。

对学生达到毕业要求贡献如下：1）了解基因工程学的历史、发展和前沿知识。

2）掌握基因工程学的基础理论、基本知识和基本技能；教学要求：学完基因工程学后，学生将具备以下能力：1）具有良好的自学能力；2）综合运用所掌握的基因工程学理论知识和技能、从事生物科学及其相关领域科学研究的能力。

4．本门课程与其它课程关系：先修课程为生物化学、微生物学、分子生物学、细胞学等，具备基础理论知识及实验能力是基因工程学课程的基础。

水稻转基因实验操作方法步骤一、水稻愈伤组织的诱导（一）以水稻幼胚为试材诱导愈伤组织1．消毒：取水稻未成熟种子（灌浆期），按以下步骤消毒：1）用自来水冲洗种子，去掉浮起的瘪谷；2）将种子放入250ml无菌烧杯中（种子数量约占1/3体积），用200ml70%酒精消毒2分钟；（在操净工作台上进行无菌操作）3）加入250ml25%次氯酸钠（NaClO）溶液，同时加数滴吐温-20，浸泡90分钟；4）倒去NaClO溶液，用无菌蒸馏水清洗种子4-5遍。

2．诱导与继代培养：（以下步骤需无菌操作）1）用镊子夹住种子，在无菌滤纸上用钢钩挤出幼胚，置入诱导培养基中；2）操作完毕后封好培养皿（一般保鲜膜），在暗处适温下（25-28℃）培养5天；3）继代培养。

用镊子剥下胚性愈伤组织（去掉芽及膜状物），置入继代培养基中（凸起面向上），暗处适温下（25-28℃）培养3天。

（二）以水稻成熟胚为试材诱导愈伤组织1．消毒：取水稻成熟种子，人工或者机械脱壳，挑选饱满光洁无菌斑的种子，按以下步骤消毒：1）将适量种子放入10ml离心管中（100颗左右），倒入75%酒精消毒2分钟；2）倒去酒精，加入一定量的0.1%升汞溶液，浸泡10分钟；3）倒去次氯酸钠溶液，用无菌蒸馏水清洗种子5-6遍，最后一遍浸泡30分钟。

2．诱导与继代培养：（以下步骤需无菌操作）1）种子放在无菌滤纸上吸干，置入成就胚诱导培养基中，每皿12－14颗；2）操作完毕用封口膜（MicroporeTMSurgicalTape）封好培养皿，在28℃光照培养箱，暗培养培养3周；3）在超净工作台上打开培养皿，用镊子挑取自然分裂的胚性愈伤组织（淡黄色，致密呈球状，去除种子和芽），置入继代培养基中，在28℃光照培养箱，继代培养1周（2周愈伤组织更为松散）。

（如不马上用，需转移至暗处，于22℃继续培养1周）二、农杆菌培养挑取农杆菌单克隆或吸取所保藏的农杆菌菌液100国于4mlYEP（含50mg/lKan和50mg/lStr）培养液中，28℃,250rpm振荡培养20-36h至菌液OD600为0.8-1.0（颜色接近橙黄色）。

应用农杆菌介导法的烟草转基因实验一、实验目的烟草是遗传转化的模式植物，已经建立了一套完善的转化再生体系。

本实验以烟草为实验材料，使同学们了解根癌农杆菌介导法的基本原理和一般步骤，掌握遗传转化的基本操作技术。

二、实验用具及药品烟草叶片，LBA4404质粒载体，摇床，培养皿(带滤纸)，移液枪，镊子，手术刀，无菌水三、实验方法根癌农杆菌介导转化的方法已经比较成熟，易于在植物细胞和组织培养实验室进行。

具体操作程序如下：(1)根癌农杆菌质粒的保存：构建好的根癌农杆菌质粒接种在YEP固体培养基上，YEP 固体培养基的成分为每100mL含NaCl 0.5g，酵母1 g，水解酪蛋白1g，琼脂1.5g，pH值7.0，在冰箱中冷藏，一个月换一次培养基，保证菌种正常生长。

(2)配制YEP液体培养基：成分同上，只是不添加琼脂，分装于试管中，每试管加入5mL 左右的液体培养基，包好后高压灭菌，放置于冰箱中待用。

(3)摇菌：用灭菌后的牙签或者火柴棍等挑出一些菌液，一起放入上述YEP液体培养基中，然后置于振荡器上摇菌16—17h(180r／min)，直至溶液变浑浊，即有大量菌丝长出。

(4)用消毒后的0.5mm打孔器从叶片上切出叶盘，然后将叶盘投入农杆菌悬液中培养5min(5)用滤纸吸干多余的菌液，叶片放在MS+6-BA 1.0 mg/L十IAA 0.1 mg/L培养基上共培养2d，随后转至附加卡那霉素100mg/L，羧苄青霉素500 mg/L的培养基上筛选培养，(25±1)℃，16h光周期。

(6)2周后分化出卡那霉素抗性芽（应为绿色），从基部将芽切下，转至含100mg/L卡那霉素和500 mg/L羧苄青霉素的MS+0.1 mg/LIAA上生根培养，生根后的植株移入温室内栽培。

四、预期结果愈伤组织：一周后在脱分化培养基上长出淡黄色、松散的愈伤组织。

幼芽：愈伤组织转入分化培养基两周后分化出卡那霉素抗性芽。

生根：芽转入生根培养基后可以生根。

转基因技术及其在植物育种中的应用一、概述从70年代重组DNA技术创建，到1983年第一株转基因烟草获得以来，国际上对转基因作物就存在着截然不同的观点：接受？抵制？随着技术日趋成熟，转基因作物由实验室进人大田中试，不少作物已向商品化发展。

与此同时，转基因作物的生态风险，可能带来的环境问题、转基因产品作为食品对人体健康问题、产品贴标签问题、运输问题、国际贸易问题、知识产权问题等已引起世界性的所谓“生物安全”的论战。

转基因技术实际上已由学术观点分歧，发展到知识产权问题、环境问题、经济问题甚至政治问题二、什么是转基因技术转基因技术是将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中，由于导入基因的表达，引起生物体的性状的可遗传的修饰，这一技术称之为转基因技术（Transgene technology）。

又名"遗传工程"、"基因工程"、"遗传转化"。

三、几种常用的植物转基因方法遗传转化的方法按其是否需要通过组织培养、再生植株可分成两大类，第一类需要通过组织培养再生植株，常用的方法有农杆菌介导转化法、基因枪法；另一类方法不需要通过组织培养，目前比较成熟的主要有花粉管通道法，花粉管通道法是中国科学家提出的。

1．农杆菌介导转化法农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。

根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中。

因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。

人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。

农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中，自从技术瓶颈被打破之后，农杆菌介导转化在单子叶植物中也得到了广泛应用，其中水稻已经被当作模式植物进行研究。

第1篇一、实验目的本实验旨在通过分子生物学技术检测转基因烟草植株中目标基因的整合和表达情况，验证转基因植株的遗传稳定性，为后续的转基因烟草的研究和应用提供科学依据。

二、实验材料1. 转基因烟草植株：含有目标基因的烟草再生植株。

2. 实验试剂：DNA提取试剂盒、PCR试剂盒、DNA分子量标准、限制性内切酶、连接酶、T载体、感受态细胞、质粒提取试剂盒等。

3. 实验仪器：PCR仪、凝胶成像系统、离心机、电泳仪、显微镜等。

三、实验方法1. DNA提取- 将转基因烟草植株的叶片剪成小块，使用DNA提取试剂盒提取总DNA。

2. PCR扩增- 设计特异性引物，针对目标基因进行PCR扩增。

- 将提取的DNA作为模板，进行PCR扩增。

3. 电泳检测- 将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察扩增条带。

4. 测序验证- 对扩增的特异性条带进行测序，验证其序列与目标基因的一致性。

5. Southern blot检测- 使用限制性内切酶酶切转基因烟草植株DNA和野生型烟草DNA。

- 将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，转移至硝酸纤维素膜上。

- 使用放射性同位素标记的目标基因探针进行杂交。

- 显影后观察杂交信号。

6. Northern blot检测- 提取转基因烟草植株RNA，进行反转录PCR，扩增目标基因mRNA。

- 将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，转移至硝酸纤维素膜上。

- 使用放射性同位素标记的目标基因探针进行杂交。

- 显影后观察杂交信号。

四、实验结果1. PCR扩增- 转基因烟草植株DNA的PCR产物在预期位置出现特异性条带，而野生型烟草DNA没有扩增产物。

2. 测序验证- 测序结果显示，扩增产物序列与目标基因序列一致。

3. Southern blot检测- 转基因烟草植株DNA的酶切产物与探针杂交后，在预期位置出现杂交信号，而野生型烟草DNA没有杂交信号。

4. Northern blot检测- 转基因烟草植株RNA的RT-PCR产物与探针杂交后，在预期位置出现杂交信号，而野生型烟草RNA没有杂交信号。

第1篇一、实验背景随着生物技术的飞速发展，转基因技术在医学、农业等领域发挥着越来越重要的作用。

小鼠作为生物医学研究中常用的实验动物，其基因编辑技术的应用为疾病模型构建、药物筛选和基因功能研究提供了有力工具。

本实验旨在通过基因编辑技术构建转基因小鼠模型，研究特定基因在小鼠体内的表达和功能。

二、实验材料1. 实验动物：C57BL/6小鼠，雄性，8周龄。

2. 基因构建材料：目的基因（GFP基因）、启动子（CMV启动子）、荧光素酶报告基因（Luc基因）、pEGFP-C1质粒载体、pGL3-Basic质粒载体。

3. 实验试剂：限制性内切酶、DNA连接酶、T4 DNA连接酶、DNA聚合酶、PCR引物、Trizol试剂、RNA提取试剂盒、反转录试剂盒、荧光定量PCR试剂盒、细胞培养试剂等。

4. 仪器设备：PCR仪、凝胶成像系统、实时荧光定量PCR仪、细胞培养箱、显微镜等。

三、实验方法1. 目的基因构建：将GFP基因和Luc基因分别插入到pEGFP-C1和pGL3-Basic质粒载体中，构建重组质粒。

2. 重组质粒转染：将构建好的重组质粒通过脂质体转染法转染C57BL/6小鼠胚胎干细胞（ES细胞）。

3. 转基因小鼠胚胎细胞筛选：通过GFP荧光筛选，得到阳性细胞克隆。

4. 胚胎细胞传代培养：将阳性细胞克隆进行传代培养，筛选出稳定表达的细胞系。

5. 胚胎细胞冻存：将稳定表达的细胞系进行冻存，以备后续实验使用。

6. 胚胎移植：将冻存后的胚胎细胞进行移植，获得转基因小鼠。

7. 转基因小鼠表型鉴定：通过GFP荧光显微镜观察转基因小鼠体内GFP表达情况，并通过实时荧光定量PCR检测GFP基因在转基因小鼠体内的表达水平。

四、实验结果1. 重组质粒构建：成功构建了含有GFP基因和Luc基因的重组质粒。

2. 转基因小鼠胚胎细胞筛选：通过GFP荧光筛选，得到阳性细胞克隆。

3. 胚胎细胞传代培养：成功传代培养出稳定表达的细胞系。

4. 胚胎移植：成功获得转基因小鼠。

转基因实验室验收项目
转基因实验室验收项目涉及到许多方面，包括实验室设备、实
验操作流程、安全标准、人员培训等多个方面。

首先，实验室设备
的验收是非常重要的，包括PCR仪、离心机、电泳仪等设备的性能
和准确性需要进行检查。

此外，实验室的环境条件也需要符合相关
标准，例如温度、湿度和洁净度等。

对于实验操作流程，需要确保
实验方法的准确性和可重复性，以及实验记录的规范性和完整性。

另外，实验室的安全标准也是验收项目中不可忽视的部分，包括化
学品的储存和处理、生物安全操作等方面需要进行严格检查。

此外，实验室人员的培训和资质也需要进行评估，确保实验人员具备相关
的专业知识和操作技能。

总之，转基因实验室验收项目需要从设备、操作流程、安全标准和人员培训等多个方面进行全面评估，以确保
实验室的正常运行和科研工作的顺利开展。

实验6 转基因植物PCR检测一、植物DNA的提取技术(CT AB法)一、实验目的1.掌握用CTAB法提取植物总DNA的方法和基本原理。

2.学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。

二、原理CTAB法[十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide，简称为CTAB)]是一种快速简便的提取植物总DNA的方法。

通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，然后加入CTAB，CTAB是离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使核酸(DNA、RNA)得以游离出来。

再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。

上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE溶液中，即得植物总DNA溶液。

三、实验材料大豆幼苗[材料的采集与保存对提取DNA的产量和质量有很大影响。

通常应尽可能采集新鲜、幼嫩的组织材料，采集过程中应尽可能保持组织材料所含的水分。

通常的做法是取样时立即用浸湿的纱布包裹采集到的组织材料，放置在带有冷藏功能的采集箱中，这样通常使组织材料在3-5d内仍然保持新鲜。

野外远距离采集样本时，在可能的条件下应冷冻保存（如放置于液氮中）；当不具备冷冻条件时，最好用盛有无水CaSO4的瓶子分别保存，使其迅速干燥，这种方法可将材料保存数月，返回后应尽快进行DNA的提取工作。

那些具有大量次生代谢产物（如单宁、酚类、醌类等）的植物材料，应尽可能采集幼嫩组织。

]四、试剂4.1 CTAB提取缓冲液：100 mmol/L Tris-HCl （pH8.0），20 mmol/L EDTA-Na2，1.4mol/L NaCl（如表1），2% CTAB，使用前加入0.1%（V/V）的β-巯基乙醇。

表1 CTAB提取缓冲液配制试剂*名称M.W. 配制1 000mL 配制100mLTris 121.14 12.114g 1.2114gEDTA-Na2372.24 7.4448g 0.74448gNaCl 58.44 81.816g 8.1816g* 用HCl调pH值。

一、实验目的本实验旨在通过农杆菌介导法对拟南芥（Arabidopsis thaliana）进行遗传转化，将目的基因导入拟南芥基因组中，并通过筛选和鉴定得到转基因植株。

二、实验材料1. 拟南芥（T0代）植株2. 根癌土壤杆菌（Agrobacterium tumefaciens）GV3101菌株3. 目的基因质粒（含有荧光素酶基因）4. 抗生素：卡那霉素、氯霉素5. 培养基：MS培养基、N6培养基、再生培养基6. 仪器：离心机、PCR仪、荧光显微镜等三、实验方法1. 构建重组表达载体将荧光素酶基因插入到农杆菌转化载体pCAMBIA1300中，构建重组表达载体pC1300-FRT::GUS。

2. 农杆菌转化将重组表达载体转化根癌土壤杆菌GV3101菌株，通过平板划线法筛选阳性克隆。

3. 拟南芥转化将阳性克隆的农杆菌悬浮液与拟南芥（T0代）花序进行蘸花处理，将蘸花后的拟南芥放入MS培养基中培养。

4. 筛选和鉴定在含有卡那霉素的培养基上筛选转基因植株，通过PCR检测和荧光显微镜观察GUS 基因的表达情况，鉴定转基因植株。

5. 再生和繁殖将转基因植株移栽至N6培养基中培养，待植株生长稳定后，收集种子进行繁殖。

四、实验结果1. 构建重组表达载体成功构建了含有荧光素酶基因的重组表达载体pC1300-FRT::GUS。

2. 农杆菌转化通过平板划线法筛选到阳性克隆，表明重组表达载体已成功转化根癌土壤杆菌GV3101菌株。

3. 拟南芥转化蘸花处理后，部分拟南芥植株在含有卡那霉素的培养基上生长，表明转基因植株已成功筛选。

4. 筛选和鉴定通过PCR检测和荧光显微镜观察，发现部分转基因植株GUS基因表达阳性，荧光素酶活性明显。

5. 再生和繁殖将转基因植株移栽至N6培养基中培养，植株生长良好，繁殖成功。

五、实验讨论1. 本实验通过农杆菌介导法成功将荧光素酶基因导入拟南芥基因组中，获得了转基因植株。

2. 在实验过程中，农杆菌转化和拟南芥转化效果良好，表明该实验方法适用于拟南芥遗传转化。