常用生化试剂
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生物化学实验常用试剂的配制方法使用Ctrl+F 组合键可以快速的查找所需的配方。
1.0.5mol/L氢氧化钠溶液组份浓度0.5mol/L ;配制量2L配置方法1.准确称取氢氧化钠40g。
2.用去离子水溶解并稀释至2L。
2.0.5mol/L盐酸溶液组份浓度0.5mol/L ;配制量2L配置方法1.准确量取盐酸83.4mL。
2.用去离子水稀释至2L。
3.含0.5mol/L氯化钠的0.5mol/L氢氧化钠溶液组份浓度0.5mol/L氯化钠、0.5mol/L氢氧化钠;配制量1L配置方法1.准确量取氯化钠29.3g。
2.准确量取氢氧化钠20g。
3.用去离子水稀释至1L。
注意: 此溶液供回收纤维素时使用。
4、0.2%葡萄糖标准溶液组份浓度0.2%;配制量1L配置方法1.称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中, 在70℃干燥2小时。
2.干燥器中冷却至室温, 重复干燥, 冷却至恒重。
3.准确称取葡萄糖2.000g。
4.用去离子水溶解并定容至1L 5.于4℃保存。
5.250μg/mL牛血清白蛋白标准液组份浓度250μg/mL ;配制量2L配置方法1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白。
2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸缓冲液溶解并定容至1L。
3.4℃保存。
6、Folin试剂.配置方.1.称取10g氢氧化钠溶于400mL去离子水中,加入50g无水碳酸钠,溶解,待用。
2.称取0.5g酒石酸钾钠,溶于80mL去离子水中,加入0.25g硫酸铜?5水,溶解。
3.将1:2:去离子水按20:4:1的比例混合即可.4.4℃保存,可用一周.7、Folin试剂乙配置方法:1.在500mL的磨口回流装置内加入钨酸钠?2水25.0359g, 钼酸钠?2水6.2526g, 去离子水175mL, 85%磷酸12.5mL, 浓盐酸25mL, 充分混合。
2.回流10小时, 再加硫酸锂37.5g, 去离子水12.5mL及数滴溴。
3.然后开口沸腾15min, 以驱除过量的溴, 冷却后定容到250mL。
生物化学检验试剂总结一、引言生物化学检验是一种常用的实验方法,通过对生物样品中化学成分的分析,可以了解生物机体的生理状况和疾病发展情况。
而在生物化学检验过程中,试剂是不可或缺的工具,它们能够帮助我们进行准确、可靠的检测。
本文将对常用的生物化学检验试剂进行总结和介绍。
二、酶标仪试剂1.底物:酶标仪检测中常用的底物有TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)、ABTS(2,2'-联氨基二乙磺酸)等。
这些底物在酶的作用下会发生颜色变化,从而可以定量测定酶的活性。
2.酶标仪标准品:酶标仪检测常需要设置标准曲线来进行定量分析,而酶标仪标准品就是用于制备标准曲线的溶液。
常用的酶标仪标准品有BSA(牛血清白蛋白)、HRP(辣根过氧化物酶)等。
三、血液生化检验试剂1.血红蛋白试剂:用于检测血红蛋白含量的试剂,常用的试剂有西林试剂、盐酸氰化钾试剂等。
2.血糖试剂:用于测定血液中葡萄糖含量的试剂,常用的试剂有葡萄糖氧化酶试剂、硫酸铁铵试剂等。
3.血脂试剂:用于测定血液中脂质含量的试剂,常用的试剂有甘油三酯试剂、总胆固醇试剂等。
4.肝功能试剂:用于检测肝脏功能的试剂,常用的试剂有丙氨酸氨基转移酶试剂、碱性磷酸酶试剂等。
四、尿液生化检验试剂1.尿蛋白试剂:用于检测尿液中蛋白质含量的试剂,常用的试剂有磺酸盐试剂、硝酸银试剂等。
2.尿糖试剂:用于测定尿液中葡萄糖含量的试剂,常用的试剂有尿糖试纸、尿酮体试剂等。
3.尿酸试剂:用于测定尿液中尿酸含量的试剂,常用的试剂有磷钼酸铵试剂、尿酸酶试剂等。
五、免疫学检验试剂1.抗体试剂:用于检测特定抗体的试剂,常用的试剂有ELISA试剂盒、荧光标记抗体等。
2.抗原试剂:用于检测特定抗原的试剂,常用的试剂有流式细胞术试剂、荧光标记抗原等。
六、分子生物学试剂1.核酸提取试剂:用于提取生物样品中的核酸,常用的试剂有DNA 提取试剂盒、RNA提取试剂盒等。
2.PCR试剂:用于聚合酶链式反应(PCR)的试剂,常用的试剂有Taq DNA聚合酶、dNTPs等。
实验室常用生化试剂配方1.常用抗生素配制以及使用说明(参考链霉菌室操作手册2019版)抗生素英文名称及缩写抗性基因贮藏液浓度(mg/ml) 10025(无水乙醇配) 50 25 50 50 25(DMSO配) 100 50 3525(0.15M NaOH配) 50(DMSO配)50 50MM使用终浓度(μg/ml)链霉菌2CMYEME大肠杆菌LA或LB氨苄青霉素氯霉素潮霉素卡那霉素壮观霉素链霉素硫链丝菌素红霉素阿泊拉霉素紫霉素萘锭酮酸 TMPAmpicillin, Amp bla Chloramphenicol, Cml Hygromycin, Hyg Kanamycin, Km Spectinomycin, Spc Streptomycin, Str Thiostrepton, Thio Erythomycin, Ery Apramycin, Am Viomycin,Vio Nalidixic acid Trimethoprimcat hyg aac/aph aadA str tsr ermE aac(3)IV vph-* 10 10 2 5 10 5 100 10-- 25 25 20 25 10 - 50------ 2.5 - 550-100 25 - 25 50 25 25 20 10-30注意事项:(1) –表示无记录或不能使用,贮存液除特别说明外均用无菌水配制,配制过程请确保抗生素粉末充分溶解混匀后再分装;(2)Km 和Am有交叉抗性,同时具有这两种抗性基因时应适当提高抗生素的量,并设置阴性对照;(3)Hyg、Vio易见光分解,配制好后应用锡箔纸包好,使用过程中建议避光操作。
有些抗生素需要在低盐的环境(如DNA培养基)下筛选效率较高,如Hyg, Km, Vio(4)用无菌水配制的抗生素需在超净工作台内用0.22 μm一次性过滤器过滤除菌并分装;氯霉素、TMP、硫链丝菌素可以在超净工作台外配制分装,无需过滤除菌,但需确保配制贮存液所用溶剂(无水乙醇、DMSO)未遭受污染,建议配制氯霉素时使用新的无水乙醇,不要使用抽提质粒或总DNA时用的无水乙醇,以防止污染;DMSO,即二甲亚砜,易挥发,有剧毒;(5)长期不用的抗生素请置于-20℃保存,抗生素粉末按照使用说明一般置于4℃保存,经常使用时可以暂置于4℃保存;(6)抗生素的实际使用浓度请结合实验经验进行适当调整;(7)配制抗生素时应尽量一次性称取抗生素粉末,配制过程中建议穿工作服,戴一次性橡胶手套及口罩,及时清理称量配制抗生素时使用的台面及器具,以避免抗生素及溶剂对自身的损伤及对工作环境的污染。
常用生化试剂品名Tris:Tris(Hydroxymethyl)aminomethane 三羟甲基氨基甲烷分子式: NH2C(CH2OH)3 分子量: 121.14 TRIS 是一种最常用的生物缓冲液,常配成PH 值为 6.8,7.4,8.0,8.8。
其PH 值随温度变化很大。
一般来说,温度每升高一度,PH 值下降0.03。
EDTA:Ethylene Diamine Tetraacetic Acid 乙二胺四乙酸分子式: C10H16N2O8 分子量: 292.248 EDTA 是化学中一种良好的配合剂,它有六个配位原子,形成的配合物叫做鳌合物,EDTA 在配位滴定中经常用到,一般是测定金属离子的含量。
尿素:(脲碳酰胺; 碳酰二胺脲)尿素:脲; 碳酰胺碳酰二胺脲)Urea (分子式: CH4N2O 分子量: 60.05 尿素易溶于水,在20℃时100 毫升水中可溶解105 克。
SDS:dodecyl sulfate, sodium salt 十二烷基硫酸钠:分子式: C12H25SO4Na 分子量: 288.38 溶解性:溶于水,微溶于醇,不溶于氯仿、醚。
健康危害:对粘膜和上呼吸道有刺激作用,对眼和皮肤有刺激作用。
可引起呼吸系统过敏性反应。
SDS 是一种已知的能够使蛋白质变性的去污剂。
它用于确定蛋白分子量的聚丙烯酰胺凝胶电泳。
它也可以用于核酸抽提操作中破坏细胞壁及裂解核酸:蛋白复合物。
在乳液聚合反应中,可充当两相溶液的乳化剂。
DTT:DL-Dithiothreitol二硫苏糖醇分子式为C4H10O2S2,分子量为154.25 常用还原剂,有抗氧化作用,进口分装。
DTT 和巯基乙醇相比,作用相似,但DTT 的刺激性气味要小很多,毒性也比巯基乙醇低很多。
DTT 的用途之一是作为巯基化DNA 的还原剂和去保护剂。
巯基化DNA 末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体,特别是在存在氧气的情况下。
这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验(如DNA 在生物感应器中的固定)的效率;而在DNA 溶液中加入DTT,反应一段时间后除去,就可以降低DNA 的二聚化。
引言概述:化学试剂在科研实验、工业生产和医学诊断等领域中起着不可或缺的作用。
本文将对一些常用的化学试剂进行汇总,包括无机试剂、有机试剂和生化试剂等。
通过详细介绍这些试剂的特性、用途、制备方法和安全注意事项,旨在帮助读者更好地理解和应用这些试剂。
正文内容:一、无机试剂1.硫酸:介绍硫酸的化学性质、制备方法以及常见的应用领域,如制造肥料、蓄电池和矿石加工等。
还需注意硫酸的腐蚀性和安全操作方法。
2.氢氧化钠:阐述氢氧化钠的性质、制备方法和主要用途,如作为钠盐的原料、制造肥皂和纸浆工业中的碱性酶处理等。
同时,要提醒读者注意氢氧化钠的碱性和对皮肤和眼睛的刺激性。
3.氯化钠:介绍氯化钠的性质和制备方法,并重点阐述其在食品加工、医学及实验室中的广泛应用。
提醒读者避免与硫酸和氯化银等物质同时接触。
4.硫化氢:详细介绍硫化氢的特性,包括物理性质、制备方法和化学反应等。
着重讲解其在油田开采和化学实验中的重要用途,并强调硫化氢的毒性和防护措施。
5.氧化铜:介绍氧化铜的化学性质、制备方法和应用领域。
包括其作为催化剂、染料、防腐剂以及电子元件中的应用。
同时提醒读者注意避免与可燃物质和有机物接触。
二、有机试剂1.丙酮:详细介绍丙酮的物理性质、制备方法和主要用途。
阐述其在工业生产、溶剂和化学分析中的广泛应用。
同时提醒读者防止丙酮的蒸气进入呼吸道。
2.乙醇:介绍乙醇的理化性质、制备方法和主要应用领域,包括作为溶剂、燃料、消毒剂和药物等方面的应用。
同时要注意乙醇的易燃性和适当的储存方式。
3.甲醛:详细阐述甲醛的化学性质、制备方法和主要应用。
包括其作为消毒剂、防腐剂和合成材料中的应用。
强调甲醛对人体的刺激性和致癌性。
4.苯酚:介绍苯酚的特性、制备方法和主要用途,如作为消毒剂、染料和合成材料中的应用。
要注意苯酚的毒性和防护措施。
5.氯仿:详细介绍氯仿的物理性质、制备方法和主要用途。
主要用于医学和化学实验中的溶剂,并提醒读者注意氯仿的毒性和适当的使用方式。
常用生化试剂品名Tris:Tris(Hydroxymethyl)aminomethane 三羟甲基氨基甲烷分子式: NH2C(CH2OH)3 分子量: 121.14 TRIS 是一种最常用的生物缓冲液,常配成PH 值为 6.8,7.4,8.0,8.8。
其PH 值随温度变化很大。
一般来说,温度每升高一度,PH 值下降0.03。
EDTA:Ethylene Diamine Tetraacetic Acid 乙二胺四乙酸分子式: C10H16N2O8 分子量: 292.248 EDTA 是化学中一种良好的配合剂,它有六个配位原子,形成的配合物叫做鳌合物,EDTA 在配位滴定中经常用到,一般是测定金属离子的含量。
尿素:(脲碳酰胺; 碳酰二胺脲)尿素:脲; 碳酰胺碳酰二胺脲)Urea (分子式: CH4N2O 分子量: 60.05 尿素易溶于水,在20℃时100 毫升水中可溶解105 克。
SDS:dodecyl sulfate, sodium salt 十二烷基硫酸钠:分子式: C12H25SO4Na 分子量: 288.38 溶解性:溶于水,微溶于醇,不溶于氯仿、醚。
健康危害:对粘膜和上呼吸道有刺激作用,对眼和皮肤有刺激作用。
可引起呼吸系统过敏性反应。
SDS 是一种已知的能够使蛋白质变性的去污剂。
它用于确定蛋白分子量的聚丙烯酰胺凝胶电泳。
它也可以用于核酸抽提操作中破坏细胞壁及裂解核酸:蛋白复合物。
在乳液聚合反应中,可充当两相溶液的乳化剂。
DTT:DL-Dithiothreitol二硫苏糖醇分子式为C4H10O2S2,分子量为154.25 常用还原剂,有抗氧化作用,进口分装。
DTT 和巯基乙醇相比,作用相似,但DTT 的刺激性气味要小很多,毒性也比巯基乙醇低很多。
DTT 的用途之一是作为巯基化DNA 的还原剂和去保护剂。
巯基化DNA 末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体,特别是在存在氧气的情况下。
这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验(如DNA 在生物感应器中的固定)的效率;而在DNA 溶液中加入DTT,反应一段时间后除去,就可以降低DNA 的二聚化。
常用生化试剂作用:1、蛋白酶K:能水解消化蛋白质,特别是与DNA结合的组蛋白,在尿素和SDS中稳定。
一般工作浓度是50—100μg/ml,推荐反应缓冲液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2。
2、SDS:十二烷基硫酸钠,溶解细胞膜上的脂类与蛋白质,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜,并解离细胞中的核蛋白,SDS 还能与蛋白质结合而沉淀。
3、IPTG:异丙基-β-D-硫代半乳糖苷,常用于蓝白斑筛选及IPTG 诱导的细菌内的蛋白表达等。
IPTG和乳糖的结构相似,所以它和乳糖一样,可以与乳糖操纵元的阻遏蛋白结合,使阻遏蛋白的空间构像变化,四聚体解聚成单体,失去与操纵子特异性结合的能力,从而解除了阻遏蛋白的作用,使其后的基因得以转录合成利用乳糖的酶类。
与乳糖不同的是,IPTG不被β-半乳糖苷酶水解。
常与X-GAL一起用于蓝白斑筛选。
作用极强的诱导剂,不被细菌代谢而十分稳定。
4、X-gal:5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷,是IPTG的显色试剂,在IPTG的催化下显蓝色。
常跟IPTG一起用与蓝白斑筛选。
5、G418:一种抗生素,对几乎所有的细胞都有毒性,是稳定转染最常用的选择试剂。
当neo基因被整合进真核细胞基因组合适的地方后,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达,使细胞获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长。
G418的这一选择特性,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。
6、DMSO:二甲基亚砜。
实验室常用于作液体层析溶剂,同时用作测试物质紫外消光值上时用作参照物。
能溶于所有烷烃和烯烃。
7、曲拉通X-100:TritonX-100,用的细胞裂解液成分之一,在保护蛋白活性方面有一定作用,能力介于NP40和SDS之间,偏向于NP40。
8、NP-40:很温和的去垢剂,1%浓度的基本可以破坏掉胞膜,而对核膜破坏的作用弱,结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白。
生化试剂的基础知识——详解一、生化试剂的分类(一)按照化学性质分类1.酶类:包括ALT,AST,ALP,ACP,r-GT,α-HBDH,LDH,CK,CK-MB,α-AMY,MSO,ADA,ChE 等。
2.底物/代谢产物类:包括TG,TC,HDL-C,LDL-C,UA,UREA,Cr,Glu,TP,Alb,T-Bil,TBA,NH4+,CO2等。
3.无机离子类:包括Ca,P,Mg,Cl等。
4.特种蛋白类:包括apoAl,apoB,Lp(a),C3,C4,PFB(B因子),IgG,IgA,IgM等。
(二)按照临床应用分类1.无机离子:包括Ca,P,Mg,Cl等。
2.肝功能:包括ALT,AST,r-GT,ALP,MSO,T-Bil,D-Bil,TBA,TP,Alb等。
3.肾功能:UA,UREA,Cr等。
4.心肌酶谱:CK,CK-MB,LDH,α-HBDH,AST,MSO。
5.糖尿病:GLU等。
6.前列腺疾病:ACP,p-ACP等。
7.胰腺炎:α-AMY。
8.血脂:TC,TG,HDL-C,LDL-C,apoA1,apoB,Lp(a)。
9.痛风:UA。
10.有机磷中毒:ChE。
11.免疫性疾病:C3,C4,PFB(B因子),IgG,IgA,IgM,Kappa链,Lambda链。
二、反应速度特性按照反应速度,可以分为终点法试剂和动力学试剂。
而动力学试剂又可再分为零级动力学法和一级动力学法。
(一)终点法试剂终点法,指经过一段时间(一般为几分钟)的反应,反应进行到完全,使全部底物(被测物)转变成产物,称终点法,更确切地说应称平衡法,这是最理想的分析类型。
如图(1)。
整个反应达到平衡,由于正向反应的平衡常数很大,可认为所有的被测定物已转变为产物,反应液的吸光度不再增加(或降低),吸光度的增加(或降低)程度与被测定物的浓度成正比。
终点法对反应条件(如酶量、pH、温度)小的改变不敏感,只要这种改变不影响在一定时间内反应达到平衡即可,是最理想的反应模型。
检验科常用试剂与耗材知识归纳在检验科的工作中,常用试剂与耗材是必不可缺的工具,对于检验结果的准确性和可靠性起着至关重要的作用。
本文将针对检验科常用的试剂和耗材进行归纳总结,旨在帮助从事检验科工作的同行更好地了解和掌握相关知识。
一、试剂的分类与作用1. 生化试剂:生化试剂是检验科中最常用的试剂之一,主要用于检测体液、组织等样本中的生化指标,如血糖、总胆固醇、肝功能等。
常见的生化试剂包括葡萄糖氧化酶、胆固醇酶、尿素酶等,通过对样本中特定底物的催化反应进行检测,从而得出相应的生化指标结果。
2. 免疫试剂:免疫试剂主要用于检测体液中的免疫学指标,如抗体、抗原等。
常见的免疫试剂包括ELISA试剂盒、荧光素酶标记抗体、血型试剂等,通过对样本中特定抗原与抗体的相互作用进行检测,从而获得免疫学指标结果。
3. 分子生物学试剂:分子生物学试剂主要用于核酸的提取、扩增、分析等实验。
常见的分子生物学试剂包括PCR试剂盒、蛋白酶K、RNA酶等,通过对核酸分子的特异性识别和操作,实现对DNA、RNA 等分子的检测和分析。
4. 离心管和离心管架:离心管和离心管架是检验科中常用的耗材之一,用于样本的分离、纯化和离心等操作。
合适的离心管和离心管架不仅可以提高工作效率,还能保证实验结果的准确性和稳定性。
5. 移液器和移液管:移液器和移液管是进行实验操作时必不可少的工具,主要用于样本的移液、混合、分配等操作。
正确选择合适的移液器和移液管,可以有效避免污染和误差,确保实验结果的准确性和可靠性。
二、试剂与耗材的选购与管理1. 选择正规渠道购买:检验科常用的试剂和耗材种类繁多,质量参差不齐。
建议选择正规厂家或经销商的产品,避免使用假冒伪劣产品,确保实验结果的准确性和可靠性。
2. 注意试剂和耗材的保存:不同的试剂和耗材有着不同的存储条件和有效期限,使用前应仔细阅读产品说明书,并按照要求进行储存和保管,及时查看有效期,避免使用失效产品。
3. 合理使用试剂和耗材:在实验操作过程中,要根据实验需要合理选择试剂和耗材,避免浪费和过度使用。
体外诊断试剂物料分类原则六大类第一类:生化试剂生化试剂是体外诊断试剂中最为常见和基础的一类。
生化试剂主要用于测定和检测人体血液、尿液、分泌物等生物体内的生化成分,如糖类、脂质、蛋白质、电解质、酶类、激素等,以评估人体内的健康状况。
生化试剂广泛应用于临床分析和实验室研究中。
常见的生化试剂有血糖试剂、肝功能试剂、肾功能试剂、电解质试剂等。
第二类:免疫试剂免疫试剂是体外诊断试剂中应用最广泛的一类。
免疫试剂利用免疫学原理来检测人体免疫系统中的免疫相关成分,如抗体、抗原、免疫球蛋白等,以判断人体是否受到细菌、病毒、寄生虫等的感染,并预测疾病的进展和治疗效果。
免疫试剂包括抗原检测试剂盒、抗体检测试剂盒、免疫分析仪器等,被广泛应用于感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤和孕产妇保健等领域。
第三类:分子诊断试剂分子诊断试剂是近年来快速发展的一类体外诊断试剂。
分子诊断试剂主要用于检测人体细胞和组织中的分子水平的异常变化,如基因突变、基因表达水平改变、DNA/RNA的结构和数量改变等,以达到疾病的早期诊断、个体化治疗和预后判断。
常见的分子诊断试剂有PCR试剂盒、基因芯片、基因测序试剂盒等。
分子诊断试剂在肿瘤学、遗传学和感染病学领域发挥着重要的作用。
第四类:细胞学试剂细胞学试剂主要用于分析和检测人体组织和细胞的形态学结构、数量和功能等方面的变化。
细胞学试剂广泛应用于临床病理学、细胞学、组织学等领域,如细胞涂片染色试剂、细胞培养试剂、细胞凋亡试剂等。
细胞学试剂通过显微镜观察和信号染色等方法,可以帮助医生及时发现细胞和组织的异常变化,提供疾病诊断的依据。
第五类:微生物学试剂微生物学试剂主要用于检测人体内的病原微生物,如细菌、病毒、寄生虫、真菌等。
微生物学试剂常用于感染性疾病的快速诊断,帮助医生判断病原微生物的类型和敏感性,以指导抗感染治疗。
常见的微生物学试剂有细菌培养基、病毒抗原检测试剂盒、快速血培养试剂等。
第六类:其他试剂除了以上五大类试剂外,还有一些不易归类的试剂被划分为其他试剂。
PBS:我们去买复合片,直接配制。
试剂名称:4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠:40ml500ml 配方操作过程A 液最好在500ml 的三角烧瓶中加热配制(低温比较难溶),至多聚甲醛完全溶解后冷却待 用。
注意,在溶解多聚甲醛时,要尽量避免吸入气体或溅入眼内。
B 液和C 液配制好后, 将B 液倒入。
液中,混合后再加入A 液,将pH 调至7.2〜7.4,最后,补充蒸馏水至500ml 充分混合。
或者将多聚甲醛 20g 、Na 2HPO4・2H 2O 3.44g 、NaOH 1.93g 直接溶于500ml 蒸馏水,将pH调至7.2〜7.4即可。
5>Tris-硼酸(TBE )缓冲液(配制1L 溶液各成分的用量)Tris 碱54 g 硼酸27.5 g EDTA 2.92 g实际配 500ml ,那么 Tris 碱 27g ,硼酸 13.75g ,EDTA 1.46gWestern bloting 10%分离胶(两块胶,15ml ) 4%浓缩胶(两块胶 ,5 ml ) 超纯水6ml 超纯水 3.2ml 40%Acr/Bic5.25ml 40%Acr/Bic 0.55ml (37.5: 1)(37.5: 1) LT3.75 HT 1.25 10%AP80 m 10%AP 50 m TEMED 7.6 m TEMED 12.5 mRunning buffer (IX): Trisbase 3.03g;Glycine 18.8g;SDS1.0g 加水至1L所需药品及剂量:A 液:多聚甲醛20g溶于200ml 蒸馏水 B 液:N a HPO4-2H O 3.44g 溶于150ml 蒸馏水 C 液: NaOH1.93g 200ml 蒸馏水可以配成5X(5X电泳缓冲液配方:总量为1L; 15.1g Tris碱;72.0g甘氨酸;5.0gSDS)Transfer Buffer (IX):甘氨酸 2.9gTris (MW121.14) 5.8gSDS 0.37g甲醇200ml,加蒸馏水至1000ml溶解后4°C保存,溶液可重复使用2-3次。
1生化试剂介绍生化试剂是一类用于生物化学、分子生物学、细胞生物学及其他生命科学研究领域的化学试剂。
它们一般用于检测、分析和测量生化过程中的分子、酶、蛋白质等,可用于生物标记、酶活性测定、DNA/RNA分离纯化、细胞培养、免疫分析等多个领域。
本文将对生化试剂的分类、功能以及常见应用进行详细介绍。
一、分类根据其功能与应用的不同,生化试剂可以分为许多不同的类别。
以下是一些常见的生化试剂分类:1.缓冲液和盐溶液:生化试剂常常用于调节酸碱度和离子浓度,以维持反应体系的平衡。
2.染料:用于检测和观察生物分子的染色试剂,如染蓝、染红等。
3.底物和试剂盒:用于测定特定酶活性的物质。
常见的底物有还原剂、显色剂等。
4.标准品和质控品:用于进行质量控制和标定仪器的标准物质。
5.抗体:特异性识别和结合特定抗原的蛋白质,广泛应用于免疫印迹、免疫组化等实验中。
6.酶:催化生物反应的蛋白质分子,如DNA酶、蛋白酶等。
7.DNA/RNA相关试剂:用于DNA/RNA的提取、纯化、扩增和测序等实验。
8.蛋白质相关试剂:用于蛋白质的提取、纯化、定量和研究。
二、功能与应用1.生物标记:如离子荧光染料、荧光素、生物素等,用于检测、定位和量化生物分子。
2.酶活性测定:通过添加特定的底物和试剂盒,测定酶的活性,以研究酶的性质和功能。
3.DNA/RNA提取与纯化:通过化学方法,可以从生物样本中提取DNA 或RNA,并经过纯化得到高质量的核酸样品。
4.细胞培养:提供细胞所需的培养基、添加剂和生长因子等,用于细胞的培养和增殖。
5.免疫分析:通过特异的抗体与抗原结合反应来检测和分析生物样本中的分子、蛋白质等。
6.分子诊断:通过分离、扩增和测序DNA/RNA,进行疾病的诊断、基因突变分析等。
三、常见应用生化试剂广泛应用于生命科学研究和医学诊断领域。
以下是一些常见的生化试剂应用:1.实验室研究:生化试剂常用于生物学、生物化学、分子生物学、遗传学等实验室的常规实验。
生化中常用缓冲试剂及应用生化实验中常用的缓冲试剂包括盐酸/氯化钠缓冲液、磷酸缓冲液、Tris缓冲液、乙二胺四乙酸(EDTA)缓冲液、碳酸氢盐/碳酸钠缓冲液等。
首先,盐酸/氯化钠缓冲液是一种弱酸/弱碱缓冲液,常用于酶活性测定、蛋白质提取和分离等实验中。
其pH调节范围一般在2.0-7.5之间,具有很好的稳定性和可靠性。
然后,磷酸缓冲液可分为无机磷酸盐缓冲液和有机磷酸盐缓冲液。
无机磷酸盐缓冲液可以提供更广泛的pH范围,适用于分子生物学、酶学研究以及细胞培养等实验。
有机磷酸盐缓冲液常用于生物化学分离、柱层析、电泳等实验中。
Tris缓冲液是一种常用的弱酸/弱碱缓冲液。
由于其pKa值较接近生物体内的pH 值,所以在生化实验中被广泛应用。
Tris缓冲液的最适pH范围为7.0-9.0,适用于蛋白质电泳、DNA/RNA纯化等实验。
乙二胺四乙酸(EDTA)缓冲液常用于螯合金属离子,维持实验体系中金属离子的稳定性。
在细胞培养、核酸提取、膜蛋白分离等实验中,EDTA可有效地去除对实验干扰的金属离子。
碳酸氢盐/碳酸钠缓冲液在生化实验中用于模拟生物体内酸碱环境。
这种缓冲液根据需要可调节pH值,并且稳定性较高。
碳酸氢盐/碳酸钠缓冲液在酶活性测定、细胞生长等实验中被广泛应用。
这些缓冲试剂在生化实验中起到了非常重要的作用。
它们能够稳定实验环境的pH值,提供合适的酸碱条件,维持酶的活性,同时可以优化化学反应。
不同的缓冲试剂适用于不同的实验需求。
在实际操作中,要根据所需pH范围、实验样品的性质和实验条件的要求选择合适的缓冲试剂。
除了上述常见的缓冲液外,还有一些特定用途的缓冲试剂。
例如,Tris-EDTA(TE)缓冲液常用于储存DNA和RNA样品,以保持其稳定性。
Tween缓冲液常用于蛋白质或细胞膜的提取和溶解,起到增加样品溶解度和提高蛋白质提取效果的作用。
总之,缓冲试剂在生化实验中是不可或缺的。
它们通过调节溶液的酸碱度,稳定实验条件,保证实验结果的准确性和可重复性。
实验室常用生化试剂配方实验室中常用的生化试剂有很多种,下面是一些常见的生化试剂及其配方的介绍:1.磷酸缓冲液(PBS)PBS是一种常用的缓冲液,用于洗涤细胞和组织,以及稀释试剂等。
它的配方通常包括:-NaCl:8g-KCl:0.2g-Na2HPO4:1.44g-KH2PO4:0.24g将以上试剂溶解于1L去离子水中,调节pH至7.42. Tris缓冲液Tris缓冲液用于调节溶液的pH值,常用于分子生物学实验。
其配方为:- Tris-HCl:12.11 g将Tris-HCl溶解于1L去离子水中,调节pH至所需值。
3.氢氧化钠(NaOH)溶液NaOH是一种常用的碱试剂,可用于调节pH、溶解蛋白质等。
其常见配方为:-NaOH:4g将NaOH溶解于1L去离子水中。
4.氯仿/异丙醇提取液氯仿/异丙醇提取液常用于分离DNA或RNA。
其配方为:-氯仿:24mL-异丙醇:25mL-TE缓冲液:1mL将以上试剂混合,并轻轻摇匀。
5.碳酸氢钠(NaHCO3)缓冲液NaHCO3是一种常用的缓冲液,可用于调节溶液的pH值。
其配方为:-NaHCO3:8.4g将NaHCO3溶解于1L去离子水中,调节pH至所需值。
6.绿色荧光蛋白(GFP)提取液GFP提取液用于提取含有GFP标记的蛋白质。
其配方为:- Tris-HCl(pH 7.5):50 mM-NaCl:150mM-EDTA:1mM- Triton X-100:1%将以上试剂混合,并用PBS稀释至所需浓度。
7.锌离子(Zn2+)溶液锌离子溶液可用于一些酶活性实验。
其配方为:-ZnSO4·7H2O:2.19g将ZnSO4·7H2O溶解于1L去离子水中。
8.溶血液溶血液常用于红细胞计数等实验。
其配方为:-生理盐水:9mL-甲苯:1mL将以上试剂混合,即可得到溶血液。
这只是一小部分生化试剂配方的介绍,实验室中常用的试剂配方非常多,根据具体实验的需要,需要选择合适的试剂及其配方。
关于生化单试剂和双试剂的基本概念
生化单试剂是指含有单个试剂或化学物质的生化试剂。
它们常用于生物学、生物化学和分子生物学等领域中的实验操作。
单试剂通常具有固定的化学组成和浓度,可以用于特定的实验目的,如测定物质的浓度、结构分析、酶反应等。
常见的生化单试剂包括缓冲液、酶、抗体、染色剂等。
生化双试剂是指含有两种试剂或化学物质的生化试剂。
双试剂通常需要在实验操作中混合使用,通过相互作用来完成特定的化学反应或实验操作。
双试剂的组成可以根据实验的需要进行调整,通常包括底物、辅酶、离子等。
常见的生化双试剂包括PCR反应液、酶联免疫吸附试验(ELISA)液等。
生化单试剂和双试剂在实验操作中都起着重要的作用。
单试剂可以提供特定的物质或反应条件,以便进行精确的测定或实验。
双试剂则可以通过相互作用来实现特定的化学反应,从而完成一系列实验操作。
根据实验的需要选择合适的单试剂或双试剂对实验结果的准确性和可靠性都有重要影响。
生物化学检验试剂总结生物化学检验试剂总结一、引言生物化学检验试剂在现代医学和生物研究中起着至关重要的作用。
它们被广泛应用于疾病的诊断、研究的实验室工作以及药物开发等领域。
本文将总结常见的生物化学检验试剂,包括常规试剂、特殊试剂和新型试剂,并介绍其应用领域和特点。
二、常规试剂1. 比色试剂比色试剂主要用于测定生化指标,如葡萄糖、蛋白质、尿素等。
常见的比色试剂有本果试剂、费林试剂和尼龙试剂等。
本果试剂主要用于葡萄糖的测定,其原理是通过和葡萄糖发生化学反应,产生带有颜色的化合物,利用比色法测定其浓度。
2. 免疫学试剂免疫学试剂用于检测血清中的抗体和抗原,常见的试剂有酶标法试剂、荧光试剂和放射性同位素试剂等。
酶标法试剂是一种免疫学试剂中使用最广泛的方法,其原理是通过将抗体或抗原标记上特定的酶,然后利用酶的催化作用测定样本中抗体或抗原的浓度。
3. 酶试剂酶试剂主要用于测定酶的活性或酶在生物体内的含量,常见的试剂有还原型辅酶、底物和酶抑制剂等。
还原型辅酶是一种用来传递电子的小分子,通过与底物和酶发生反应,可以测定酶的活性。
酶抑制剂能够抑制特定酶的活性,起到分析和研究酶功能的作用。
三、特殊试剂1. 分子生物学试剂分子生物学试剂主要用于DNA和RNA的分析和操作,常见的试剂有DNA聚合酶、限制性内切酶和荧光染料等。
DNA聚合酶是一种用来合成DNA的酶,广泛应用于PCR反应和DNA文库构建等实验中。
限制性内切酶能够识别DNA上的特定序列并切割,用来进行DNA的重新组装和重组。
荧光染料用于可视化DNA分子或蛋白质的表达,可以通过荧光显微镜或流式细胞术进行观察。
2. 细胞培养试剂细胞培养试剂主要用于细胞的培养和增殖,常见的试剂有细胞培养基、培养补充物和细胞分裂抑制剂等。
细胞培养基提供细胞生长所需的营养物质和环境,是细胞培养的基础。
培养补充物含有细胞生长和增殖所需的生长因子和激素。
细胞分裂抑制剂能够抑制细胞的分裂和增殖,常用于细胞周期研究和药物筛选等实验中。
培养基LB液体培养基:胰化蛋白胨:1%,酵母抽提物:0.5%,NaCl:1%,pH 7.5LB固体培养基:在LB液体培养基中加入1.5%的琼脂粉YPD液体培养基:酵母抽提物:1%,蛋白胨:2%,葡萄糖:2%,pH自然YPD固体培养基:在YPD液体培养基中加入1.5%的琼脂粉完全极限省却成分培养基(CM):YNB:0.67%,葡萄糖:2%,其中含(mg/L):苏氨酸150 酪氨酸30 缬氨酸150赖氨酸30 谷氨酸100 丝氨酸150天冬氨酸100 甲硫氨酸20 苯丙氨酸50异亮氨酸30 精氨酸20其它营养成分(mg/L):腺嘌呤50 尿嘧啶50 组氨酸100亮氨酸100 色氨酸100省却特定的氨基酸成分,液体培养基pH 5.6,固体培养基加1.5%的琼脂粉,pH 6.510×YNB(13.4%酵母氮源,含硫酸铵不含氨基酸):溶解13.4gYNB于100mL水中,过滤除菌,加热至YNB完全溶解,存于4℃。
500×B(0.02%生物素):溶解20mg生物素于100mL 水中,过滤除菌,放于4℃。
100×AA(0.5%各种氨基酸):溶解各50mg L-谷氨酸,L-蛋氨酸,L-赖氨酸,L-亮氨酸,L-异亮氨酸于100mL 水中,过滤除菌,存于4℃。
10×D(20%葡萄糖):溶解200g D-葡萄糖于1 000mL水中,高压灭菌15min。
500×生物素(0.02%):溶解20mg生物素于100mL水中,过滤除菌,放于4℃,可放1年。
100×H(0.4%组氨酸):溶解400mg L-组氨酸于100mL水中,低于50 度加热以促溶解,过滤除菌,可放1年。
10×D(20%葡萄糖):溶解200g D-葡萄糖于1 000mL水中,高压灭菌15min或过滤除菌,可放1年。
10×M(5%甲醇):混合5mL甲醇与95mL水,过滤除菌存于4℃,可放2个月。
常用生化试剂
中文名英文名品牌货号规格零售价2,6-二氯靛酚(DCIP DPIP) 2,6-Dichlroindophenol Sigma D1878 1g 140 β-巯基乙醇 2-Mercaptoethanol Amresco 500ml 320
2-硫代巴比妥酸 2-Thiobarbituric acid Sigma 10g 110
8-羟基喹啉 8-Hydroxyprolineine Sigma H6878 25g 80
乙酰丁香酮 Acetosyringone Amresco A2203 1g 280
β-甘油磷酸钠 B-Glycerophosphate disodium Sigma G6251 50g 140
硼酸 Boric Acid Amresco 500g 80
二甲基砷酸钠 Cacodylic acid sodium Salt Sigma C0250 5g 220
氯化钙 Calcium Chloride Sigma C7902 100g 40
胆酸钠 Cholic aicd sodium Salt Sigma C1254 5g 50 40
二甲基二氯硅烷 Dimethyl Dichlorosilane Fluka 40140 100ml 240 190
十六烷基三甲基溴化铵 CTAB Amresco 100g 105 80
3'3-二氨基联苯胺四盐酸盐 DAB USA 1g 280 180
脱氧胆酸 Deoxycholic acid Sigma D-2510 10g 110 80
脱氧胆酸钠 Deoxycholic acid sodium salt Amresco 25g 155 110
焦炭酸二乙酯 DEPC Amresco 10ml 220 120
二甲基甲酰胺 DMF Amresco 0464 100ml 120 80
二甲基亚砜 DMSO Amresco 0231 100ml 55 40
十二烷基三甲基溴化铵 DTAB Amresco 500g 300
十二烷基三甲基氯化铵 DTAC Amresco 500g 300
福林酚 Folin-Ciocalteu's Phenol Reagent Sigma 50ml 100 80
甲酰胺 Formamide Amresco 0314 500ml 320 240
去离子甲酰胺 Formamide deionizde Amresco 0606 500ml 672 520
明胶 Gelatin Amresco 500g 400 280
甘油 Glycerol Amresco 0854 500ml 240 160
盐酸胍 Guanidine Hyiochloride Amresco 500g 240 160
异硫氰酸胍 Guanidine Thiocyanate Amresco 0380 500g 720 500
咪唑 Imidazole Sigma 100g 240 180
(牛)胰岛素 Insulin Sigma I5500 10mg 130 100
碘代乙酰胺 Iodoacetamide Sigma 5g 360 300
亚油酸 Linoleic Acid USA 50ml 1400 1000
石蜡油 (矿物油) Mineral oil Amresco 500ml 330 260
叠氮钠 NaN3 Sigma 100g 200 140
十二烷基肌氨酸钠 N-Lauroyl sarcosine Na Sigma 100g 120 90
脱脂奶粉 Nonfat-Dried Milk BD 500g 500 360
乙基苯基聚乙二醇 NP-40 Fluka 100ml 165 120
邻苯二胺 OPD Amresco 10g 72 55
聚乙二醇1500 PEG1500 Amresco 250g 95 62
聚乙二醇1500 PEG1500 Amresco 500g 160 90
聚乙二醇2000 PEG2000 Amresco 500g 160 90
聚乙二醇4000 PEG4000 Amresco 500g 160 90
聚乙二醇6000 PEG6000 Amresco 500g 160 90
聚乙二醇8000 PEG8000 Amresco 500g 160 90
聚乙二醇10000 PEG10000 Amresco 500g 160 90
聚乙二醇20000 PEG20000 Amresco 500g 160 90
戊巴比妥钠 Pentobarbital Na sigma 5g 480 350
植酸钠 Phytic acid dodecasodium salt Sigma P3169 5g 120 90 苯甲基黄酰氟 PMSF Amresco 1g 75 50
聚乙烯醇 Polyvinyl Alcohol Sigma P1763 100g 480 380
1.4-双(5-苯基-2-恶唑)苯 POPOP BDH 500mg 110 80
2.5-二苯基恶唑 PP0 BDH 1g 100 70
聚乙烯吡咯烷酮 40 PVP 40 Amresco 0507 100g 140 110
聚乙烯吡咯烷酮 K-30 PVP K-30 Fluka 100g 140 100
聚乙烯吡咯烷酮 360 PVP-360 Sigma P3254 100g 140 100
聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP) PVPP Sigma P6755 50g 180 140
丙酮酸钠 Pyruvi cacid sodium Amresco 0342 100g 480 340
莽草酸 Shikimic acid Sigma S-5375 100mg 200 160
透明质酸钠 Sodium Hyaluronate USA 1g 540 440
氯化钠 Sodium Shloride Amresco 100g 100 60
亚精胺 Spermidine Sigma S0226 1g 260 200
精胺 Spermine Sigma S3256 1g 280 220
牛磺酸 Taurine Sigma T0625 25g 120 80
三氯乙酸 TCA Sigma T4885 100g 190 130
三氟乙酸 TFA Sigma T4508 25ml 450 340
曲拉通X-100 Amresco 500ml 144 110
曲拉通X-114 Triton-X-114 Amresco 100ml 95 60
十四烷基三甲基溴化铵 99.5% TTAB Amresco 500g 420 300
十四烷基三甲基氯化铵99.5% TTAC Amresco 500g 420 300
吐温20 Tween 20 Amresco 500ml 200 140
吐温60 Tween 60 Amresco 500ml 240 150
吐温80 Tween 80 Amresco 500ml 260 160。