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山东省鸡源沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验作者：王晓艺李涛吕新新张敏来源：《家禽科学》2017年第04期（1.烟台市牟平区姜格庄街道畜牧兽医工作站，山东烟台 264114；2.青岛润达生物科技有限公司，山东青岛 266200）摘要：为了解山东地区鸡沙门氏菌的流行及耐药情况，本文对山东部分市县的病死鸡只进行沙门氏菌的分离培养鉴定，最终得到12株致病性沙门氏菌菌种，并对分离菌株进行耐药性试验，结果鉴定12株沙门氏菌对沙门氏菌对替米考星、阿莫西林和林可霉素等均产生了一定的耐药性，对润达炎迪克、硫酸粘菌素、呼治常安和强力霉素有一定的敏感性。
关键词：沙门氏菌；分离；药敏试验中图分类号：S858.314.4+3 文献标识码：B 文章编号：1673-1085（2017）04-0051-03沙门氏菌是肠杆菌科革兰氏阴性杆菌，广泛存在于环境或寄居于人和动物肠道内，绝大多数对人和动物具有致病性。
鸡源沙门氏菌是鸡场的重要病原菌，可引发鸡白痢、鸡伤寒和禽副伤寒[1]，其典型症状为脾脏或肝脏表面密布黄白色坏死灶，心脏出现心肌炎症状，部分肠道或肺脏长有白色肉芽。
鸡源沙门氏菌在鸡群中能垂直感染，被感染成鸡生长性能或产蛋下降，雏鸡大批死亡，死亡率高达80%，已成为危害养禽业的首要传染病之一[2]。
感染沙门氏菌或食用被带菌者粪便污染的食品，可使人发生食物中毒，人畜感染后它可能加重病态或死亡率，或者降低动物的繁殖生产力。
沙门氏菌不但会对畜牧业生产造成严重的经济损失，而且会严重威胁人类的健康，沙门氏菌病已成为一种常见多发的人畜共患病[3]。
对山东部分养鸡场的鸡源沙门氏菌病的流行情况进行调查，发现沙门氏菌广泛存在于鸡场中，由于沙门氏菌可以通过生殖道污染禽蛋，造成种蛋的孵化率降低和污染以及鸡只的大规模发病和死亡，引起严重的经济损失，极大困扰着养禽业的发展[4]。
此外，滥用抗菌药物造成耐药菌株不断产生，致使该病的治疗越来越困难，给养鸡业造成了严重的经济损失。
鸡沙门氏菌病的诊断与防治作者：王岩来源：《家禽科学》2022年第03期中图分类号：S858.31 文献标识码：C 文章编号：1673-1085（2022）03-0019-03鸡沙门氏菌病是由沙门氏菌属的一种或几种沙门氏菌引起的急性或慢性传染病，包括由鸡白痢沙门氏杆菌引起的鸡白痢，由鸡伤寒沙门氏杆菌引起的禽伤寒，以鼠伤寒沙门氏杆菌为主的多种沙门氏杆菌引起的禽副伤寒。
其中鸡白痢最为常见，危害也最大。
沙门氏菌属有2 000多种血清型，在我国就发现200多个血清型，许多血清型可使人感染后发生食物中毒和败血症，是重要的人畜共患病病原体。
在自然界中鸡是沙门氏菌的最大宿主，而人食用患病鸡的肉和蛋类后，会引起沙门氏菌的感染与食物中毒[1]。
近些年来由于抗菌素的广泛应用，使得该类细菌的耐药性日趋严重，发病率也逐渐上升，因而备受重视。
1 流行病学沙门氏菌病对各品种的鸡都易感，初生3周龄以内的雏鸡最易感，发病率与死亡率也最高，以后随着日龄增长而逐渐减少。
雏鸡和带菌鸡是本病的主要传染源，当育雏拥挤、饲舍环境污秽潮湿、通风不良、温度不适宜以及成鸡感染内寄生虫和病毒病时，都会促进本病的发生，雏鸡群感染后往往呈地方流行性。
鸡沙门氏菌病通常通过带菌母鸡产出带菌蛋进行垂直传播，此外也可水平传播。
有的健康蛋的蛋壳受到污染而感染，感染蛋在孵化时产生死胚、病雏或弱雏。
病雏排出的含有大量病菌的分泌物、排泄物污染饲料和饮水、孵化和育雏设备以及饲养场地，健康鸡接触后可经眼结膜、消化道与呼吸道感染。
2 临床症状2.1 鸡白痢鸡白痢主要危害2～3周龄的雏鸡，发病率在20%～40%，雏鸡出生之后抵抗能力较差，很容易受到沙门氏菌的侵袭而表现出腹泻症状[2]。
感染的雏鸡出壳后，经过4～5 d潜伏期后开始出现症状，一周左右雏鸡发病率和病死率逐渐升高，2～3周龄达最高峰。
大多数病雏表现精神萎靡、闭眼、缩颈、翅尾下垂、聚团挤在一起，不食，排白色糊状粪便，肛门周围的绒毛被粪便污染，有的因粪便与绒毛干结一起而封住肛门，影响排粪，故病雏排便时常发出叫声，终因呼吸困难和衰弱死亡。
鸡伤寒沙门菌的分离鉴定及药敏试验刘素英;王晶钰;董睿;王利勤;王慧【摘要】为给鸡伤寒沙门菌病的防控提供理论依据与数据参考,采集疑似鸡伤寒病死鸡的肝、脾病料,进行细菌分离.根据细菌形态、培养特性、生化试验等鉴定出13株沙门菌.对分离到的菌株进行21种常用抗菌药物的敏感性试验,结果显示,分离株对阿米卡星、新霉素高度敏感,对卡那霉素、痢特灵中度敏感,而对其他药物则表现为耐药.将筛选出的阿米卡星对发病鸡场后续发病鸡群采用肌肉注射和硫酸新霉素饮水治疗和痢特灵拌料饲喂,用药5d后,鸡群鸡伤寒沙门菌病的发病率从50％降到了5％左右.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2011(032)009【总页数】5页(P37-41)【关键词】伤寒沙门菌;分离鉴定;药敏试验;鸡【作者】刘素英;王晶钰;董睿;王利勤;王慧【作者单位】西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100;西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100;西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100;西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100;西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100【正文语种】中文【中图分类】S852.612沙门菌属(Salmonella)是一群寄生于人和动物肠道内的无芽胞杆菌,是一大属血清学相关的革兰阴性杆菌[1-3]。
引起禽类发病的沙门菌主要有鸡白痢沙门菌、鸡伤寒沙门菌及其他有鞭毛能运动的多种沙门菌[2-4]。
禽沙门菌病(Avian Salmonellosis)是由多种沙门菌引起的一类传染病的总称,临床上多表现为败血症和肠炎[5-6]。
沙门菌病能导致禽的生产性能下降,种蛋的孵化率降低,对养禽业造成巨大的经济损失[7]。
我国目前控制该病的主要措施是检疫淘汰带菌鸡,净化培育鸡群;对于一些没有条件净化或短期内还无法净化的鸡群则采用抗菌药物进行预防和治疗,但是由于抗菌药物的不合理使用,在抗生素的选择性压力下使得沙门菌产生的耐药性越来越快,耐药谱越来越广[5-7],因此,在目前还没有有效免疫制剂的情况下,敏感而有效的抗菌药物的筛选对该病的防控具有一定的实际意义[8]。
2019年第10期（总第267期) 试验研究1禽沙门氏菌鉴别培养基和PCR 检测方法的建立张富友 宋 艳 徐煜琳 鞠孜敬 崔治中 孙淑红*（山东农业大学动物科技学院 山东 泰安 271018）摘要 禽沙门氏菌是常见的一种人畜共患病原菌，快速准确地检测对于防控沙门氏菌病非常重要。
传统的沙门氏菌检测方法准确，但操作繁琐、费时费力。
本研究拟建立准确快速的检测技术。
选择疑似发生沙门氏菌病的某种鸡群3个批次共计119份未出壳死胚样品，分别经BPW 增菌，SC 和TTB 分别增菌后，再利用XLD 鉴别培养基培养后，利用PCR 方法进行沙门氏菌的分离鉴定。
同时，所有样品均按照国家标准检测方法(国标法)进行沙门氏菌的分离鉴定。
结果显示，本研究建立的沙门氏菌快速检测方法与国标法相比，沙门氏菌检出率均为41.2%，吻合率100%；血清分型试验显示，该49株沙门氏菌均为鸡白痢沙门氏菌；本研究建立的检测方法用时3~6d ，而国家标准检测方法需要6~9d 。
本研究表明，禽沙门氏菌鉴别培养基和PCR 检测技术可准确、快速地完成沙门氏菌的检测，而且成本更低。
该技术方法可用于种鸡群沙门菌感染状态评估和调查分析以及规模化种禽场沙门菌净化，对生产实践具有重要的指导意义。
关键词 禽沙门氏菌 鉴别培养 国家标准 PCR中图分类号：S852.61+2 文献标识码：A 文章编号：1007-1733(2019)10-0001-03 禽沙门氏菌病是由不同血清型的沙门氏菌引起的禽类不同类型传染病的总称，根据病原体的抗原结构不同可以分为鸡白痢、禽伤寒和禽副伤寒[1]。
禽沙门氏菌在世界各地普遍存在，对养禽业危害很大[2]。
同时，部分血清型的沙门氏菌是人畜共患病原菌，防控禽沙门氏菌病对公共卫生有重要意义[3]。
目前国家标准检测方法(国标法)是用于禽沙门氏菌分离鉴定最常用的方法，该标准可保证检测结果的准确性，但是在疾病预防和疫情的应急处理中不能够适用。
试验研究空鸡场沙门氏菌分离鉴定及药敏试验乜英青（青海省贵德县农畜产品质量检验检测中心811799）摘要：本文对青海省贵德县鸡沙门氏菌的流行及耐药情况、最佳治疗和预防效果进行分析。
试验对该地部分鸡场病死鸡只进行细菌分离，用革兰氏染色、三糖铁试验、尿素酶试验、靛基质（吲哚）试验和赖氨酸脱羧酶试验进行菌株鉴定，并进行14种药物敏感性试验。
结果：试验成功分离到6株禽沙门氏菌，革兰氏染色均为红色，三糖铁试验和赖氨酸脱羧酶试验结果均为阳性，尿素酶试验和靛基质（吲哚）试验结果均为阴性。
药敏性试验结果显示，该地区禽场沙门氏菌对头孢噻肟、阿米卡星和多西环素的敏感率超80%,属高度敏感，而对阿莫西林、恩诺沙星、卡那霉素、林可霉素和磷霉素具有不同程度的耐药性。
结论：禽沙门氏菌对鸡群的危害较大，鸡场需要定期进行沙门氏菌的药敏性试验才能更好地了解菌株耐药性，为合理选择抗菌药物和防治沙门氏菌感染提供参考依据遥关键词：禽沙门氏菌；分离鉴定；药敏试验沙门氏菌为肠杆菌科革兰氏阴性杆菌，广泛存在于人和动物肠道内，是一种人畜共患性致病菌，严重威胁食品安全，国际兽疫局将其定为B类传染病。
鸡群感染沙门氏菌后可引发鸡白痢、鸡伤寒和禽副伤寒等疾病，且可通过垂直感染影响产蛋率和雏鸡存活率。
随着我国养鸡业的现代化和规模化发展，鸡群免疫力逐步下降，依赖疫苗免疫或抗生素药物来防治，虽然抗生素能有效控制禽沙门氏菌，但由于药物使用不当造成菌株耐药性越来越严重。
本文对贵德县青源土鸡养殖场沙门氏菌进行分离鉴定，并对分离到的菌株进行多种药物的敏感性试验，为当地鸡场抗菌药物的合理使用提供依据。
1材料与方法1.1试验材料1.1.1培养基营养琼脂培养基，SS琼脂培养基，三糖铁琼脂，尿素酶生化鉴定管，蛋白胨水培养基，赖氨酸脱羧酶肉汤和氨基酸脱羧酶对照生化鉴定管均购自青岛高科技工业园海博生物技术有限公司。
1.1.2病料来源试验所用菌株来自贵德县青源土鸡养殖场所饲养的病死鸡，取其病料组织分离菌株共6株。
第二篇研究内容第1章山西省鸡沙门氏菌病流行特性研究鸡沙氏门菌病（包括鸡白痢、鸡伤寒和鸡副伤寒）一直是影响养鸡业的重要细菌性传染病之一，近年来呈现扩大流行的趋势。
为了解山西省鸡沙门氏菌病流行情况，我们对省内有代表的养鸡场进行了鸡沙门氏菌病病原、传播途径等进行了分离、调查、分析和研究。
1 材料与方法1.1 材料⑴培养基营养琼脂培养基、麦康凯琼脂、S.S琼脂、营养肉汤、三糖铁培养基、微量生化鉴定管,均购自杭州天和生物制品公司。
B-P增菌液、亚硒酸盐增菌培养基（SF）基础购自北京奥博星生物技术责任有限公司。
⑵鸡沙门氏菌因子血清购自卫生部兰州生物制品研究所。
⑶药敏纸片恩诺沙星、氨苄青霉素、卡那霉素、阿米卡星、庆大霉素、链霉素、左旋氧氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星、头孢噻呋、购自购自杭州天和生物制品公司, 批号: 20080806。
⑷实验动物1日龄蛋公雏，购自山西省军区种鸡场，经平板凝集反应检测，鸡白痢和副伤寒均为阴性的种鸡蛋孵出的雏鸡。
⑸菌株分离材料①在山西市场上销售的部分“浓缩饲料”、“全价配合饲料”；②部分种鸡场2008年正值生产的种鸡泄殖腔棉拭子；③部分种鸡场2008年正值生产的种鸡所产种蛋；④部分种鸡场周龄内的父母代雏鸡；⑤部分种鸡场、规模化商品鸡场鸡舍地面、饲槽；⑥周龄内疑似鸡沙门氏菌病死亡的临床病例。
1.2 方法1.2.1 分离材料的采集1.2.1.1 选择在山西境内销售的鸡用“浓缩饲料”和“全价饲料”适量，于无菌包装袋中，尽快送往实验室。
1.2.1.2 选择山西省规模化父母代种鸡场，对不同批次正值生产的种鸡，以每批10只无菌采集泄殖腔棉拭子。
1.2.1.3 无菌采集来自不同祖代鸡场的周龄内父母代雏鸡泄殖腔棉拭子。
1.2.1.4 选择代表性的种鸡场和商品蛋鸡场，无菌采集鸡舍地面和饲槽的样本。
具体方法是：在被选择的鸡舍地面和饲槽各选2个点，每点面积为5×5厘米的正方形（规板），以灭菌的棉拭子蘸取B-P前增菌液，在采样点5×5厘米的地面或饲槽上，滚动涂擦两次后，剪断棉拭子手持端，使其落入试管的增菌液中。
1.2.1.5 部分种鸡场的新鲜种蛋，实验室无菌条件下取其卵黄0.5毫升。
1.2.1.6 无菌操作采集疑似鸡沙门氏菌病死亡的雏鸡肝组织或胆囊，冷藏保存3小时内进行培养分离。
1.3 实验室分离培养1.2.1 将以上浓缩饲料、全价饲料，泄殖腔棉拭子，地面、饲槽棉拭子，种蛋卵黄经过24小时，37℃恒温B-P前增菌培养，接种于SF增菌液中24小时，无菌条件下接种于S.S琼脂培养基，37℃恒温培养24小时。
1.2.2 将死亡雏鸡的病变肝组织或胆汁，无菌条件下接种于S.S琼脂培养基，37℃恒温培养24小时。
1.4 分离菌的培养特性挑取S.S琼脂培养基上，呈灰色、圆形、中心带黑色的可疑菌落，接种于三糖铁琼脂斜面、营养肉汤等培养基中,37℃培养24小时，观察结果。
1.5 分离菌的生化试验和血清型鉴定1.5.1 形态及生化试验按常规方法进行形态结构与染色特性观察；用分离菌的纯培养物进行糖发酵试验、靛基质试验等生化反应。
1.5.2 运动性试验以灭菌的接种针蘸取细菌的纯培养物，垂直穿刺接种于半固体培养基的琼脂柱内，置37℃温箱内培养18～24h，取出观察，运动性的细菌沿穿刺线向四周扩散生长，使培养基变混浊；无运动性的细菌只沿穿刺线生长，周围的培养基仍保持澄清。
1.5.3 血清型鉴定挑取典型三糖铁培养物进行沙门氏A--F多价O诊断血清、O单因子血清玻片凝集反应，并设生理盐水对照观察。
1.6 动物感染实验1日龄雏鸡130只,随机分为15组, 第1～ 13组皮下接种培养18 小时的分离鉴定的沙门氏菌肉汤培养液0. 2 mL，具体地：取从以上六种材料中，分离并鉴定为沙门氏菌的菌株各两株，共12株作动物感染试验；剩余1组用同样的方法接种生理盐水作为对照。
每6 小时观察发病和死亡情况, 并记录到24 小时。
1.6 药敏试验按WHO推荐的Kir-by-Baner法进行。
2结果沙门氏菌实验室分离结果2.1分离菌的培养及形态特性共分离培养鸡沙门氏菌媒介材料及病理材料961份（羽），详细结果见表1.1.分离菌的形态特征数 量 （ 份或羽） BP 前增菌+（份或羽）SF 增菌+（份或羽）SS 培养 +（份或羽） TSI 接种 +（份或羽）饲 料80 80 80 8 4 鸡舍环境160 160 160 11 3 成鸡肛拭300 300 300 30 17 种 蛋100 30 30 20 15 种雏肛拭200 200 200 44 40 疑似病料(2006-2008年）121 -- -- 114 98 961 227 177表1.1 分离菌的形态特征Tab.1.1 The morphological characteristic of isolated strainsBP 增菌液有菌生长，一般显示淡黄色混浊；SF 增菌液有菌生长，培养液多红色并混浊。
SS 琼脂上菌落呈灰色、边缘整齐、多数菌落的中心带有黑色。
SS 琼脂上的可疑菌落三糖铁（TSI ）琼脂培养特性为：底层变为黄色，斜面维持原有的红色，有的菌株培养基中有黑色硫化氢产生，有的菌株培养基底部高层有气泡产生。
同时接种于营养肉汤中，培养结果为液体均匀混浑浊，不形成菌膜或菌环。
半固体培养结果为皆无运动性。
三糖铁琼脂细菌革兰氏染色，镜检，为革兰氏阴性小杆菌。
2.2生化鉴定试验对TSI 琼脂培养基上符合沙门氏菌生长特征的177株菌中的91株进行了生化鉴定（其中饲料4株、环境3株、成鸡拭子8株、种蛋7株、种雏拭子20株、病料49株），结果见表1.291株分离菌生化鉴定结果葡 萄 糖 麦芽糖 蔗 糖 乳 糖蕈 糖甘露醇肌 醇卫矛醇 山梨醇 M.R 试验 V .P 试验 H 2S 试验+ + - - = + + - + - + - + - + - 饲料4 3 1 4 4 4 4 4 1 3 0 4 4 4 1 3 环境3 2 1 3 3 3 3 3 0 3 0 3 3 3 0 3 成鸡拭子8 5 3 8 8 8 8 8 2 6 1 7 8 8 3 5 种蛋7 3 4 7 7 7 7 7 0 7 1 6 7 7 1 6 种雏拭子20 6 14 20 20202020 3 17 5 15 20 20 4 16病料49 1039 49 49494949 5 441237 49 49 9 40阳性率 91 /91 29/91 62 /91 91 /91 91/9191/9191/9191/9111/9180/9119/9172 /91 91 /91 91 /91 18/9173/91表 1.2 91株分离菌生化鉴定结果Tab 1.2 The identification results of 91 strains by biochemical tests从表1.2可看出被检菌株的生化反应结果皆符合鸡白痢鸡伤寒沙门氏菌的生化特性，但其中菌株对麦芽糖、卫矛醇、山梨醇、H2S的反应无论是同一种媒介材料和病料，还是不同的媒介材料都无规律。
根据菌株对麦芽糖生化反应为依据，区别鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌（即发酵麦芽糖的为鸡伤寒沙门氏菌、否则为鸡白痢沙门氏菌），本研究鸡白痢沙门氏菌占68.13%，鸡伤寒沙门氏菌占31.87%。
2.3血清学鉴定将三糖铁培养基上的177株菌与鸡白痢鸡伤寒沙门氏菌阳性诊断血清进行玻板凝集反应，结果全部呈阳性凝集，并且大多呈强阳性凝集，盐水对照凝集反应阴性。
对其中20株进行了0血清型分析，结果皆为血清型09、012类型株。
2.4本动物感染试验结果各组在皮下接种6小时后，部分鸡出现不同程度精神萎顿、嗜睡的临床病症，到24小时可见部分死亡，详细情况是：饲料组（第1、2组）3只、5只；环境组（第3、4组）4、5只；成鸡拭子组（第5、6组）2、4只；种蛋组（第7、8组）5、5只；种雏拭子组（第9、10组）5、7只；病料组（第11、12组）8、9只；盐水对照组（第13组）0只。
死亡鸡肝脏皆分离出了与接种菌同样的沙门氏菌。
2.5 20株菌对10种药物敏感性试验结果见表1.3项目高敏中敏耐药株数比例% 株数比例% 株数比例%阿米卡星 20 100 - - - - 卡那霉素 18 90 2 10 - - 庆大霉素 13 65 4 20 3 15 链霉素 5 25 3 15 12 60 左旋氧氟沙星11 55 4 20 5 25 环丙沙星 14 70 1 5 5 25 诺氟沙星 2 10 3 15 15 75 头孢噻呋 20 100 - - - - 恩诺沙星 5 25 5 20 10 50 氨苄青霉素 0 0 2 10 18 90表1.3 药敏结果Tab 1.3 The results of susceptibility test结果说明：卡那霉素、阿米卡星、头孢噻呋高敏比例为90% ～100%效果最好，可作为以临床防治的首选药物；庆大霉素、环丙沙星抑菌能力次子，高敏比例为65%～70%，临床谨慎使用；链霉素、诺氟沙星和氨苄青霉素敏感性低，耐药比例为60%～90%，临床避免使用。
3讨论3.1媒介材料中3日龄内的父母种鸡，泄殖腔分离阳性率为10%，父母代种蛋的分离阳性率为4%，这些是鸡沙门氏菌病传入我省并蔓延的重要原因，提醒广大养殖者，应选择无鸡沙门菌病的祖代或父母代种鸡场引进雏鸡。
3.2 饲料中致病菌的分离率约为 8.7%，环境中为 5 %，病鸡的阳性率为100%，这些媒介是该病在山西省水平传播的重要因素。
应加强饲料原料病原菌的控制，严格鸡舍的消毒，病死鸡的无害化处理以及亚健康鸡的预防和治疗。
3.3 鸡白痢沙门氏菌属于胞内寄生菌，当遇到抗菌素时一方面可躲进动物体细胞内避免药物的作用，另一方面产生耐药性，所以临床上盲目地或超剂量、超疗程使用抗生素是防控该病之大忌，科学的用药方法应该是通过药敏试验，使用高度敏感的药物，此外还可以多种敏感性药物轮换使用或用不常使用的药物。
4小结鸡沙门氏菌病包括鸡白痢、鸡伤寒和鸡副伤寒三种病，一直是鸡的重要传染病。
通过对鸡沙门氏菌可能存在的媒介材料进行了分离和鉴定，结果表明，被分离的媒介材料中皆有鸡沙门氏菌病病原菌的存在，为血清型09、012类型株。
这为从生物安全技术方面有效的控制该病，提供了科学的依据。
第2章PCR技术在鸡沙门氏菌分离鉴定中的应用当前应用在鸡沙门氏菌检测的主要途径就是利用，其在微生物学上的特性，对其进行生化和血清学上的鉴定，这个过程需要5-7天，时间较长。
为此国外的一些专家在PCR技术上对鸡沙门氏菌进行了一些研究和探索，取得了一定的成果。
因此我根据山西地区鸡沙门氏菌的特点，在PCR技术上对其进行了些研究。
