抗人球蛋白实验

直接抗人球蛋白试验1. 原理抗人球蛋白试验，又称Coombs’试验，是诊断自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的重要依据。

用人球蛋白免疫动物使其产生抗体即抗人球蛋白。

抗人球蛋白试剂可凝集被人球蛋白致敏的红细胞。

抗人球蛋白试剂可以喝致敏在红细胞上人球蛋白反应，通过桥梁作用使致敏红细胞出现凝集，呈现阳性反应。

2. 试剂组成抗IgG，C3d（多特异性）10ml/支，1支/盒抗IgG 5ml/支，1支/盒抗C3d 5ml/支，1支/盒3. 试剂保存2-8℃保存，勿反复冻融，储存条件下有效期为24个月。

4. 样本要求应用EDTA抗凝标本，可反应体内红细胞被补体致敏的真实情况，弱怀疑冷抗体引起的直接抗球蛋白试剂阳性，其血液标本凝固应保持在37℃，直到血清被分离出来为止。

5. 操作步骤5.1 直接抗球蛋白试验5.1.1将1滴受检者3%红细胞悬液加入干净的小试管中,用盐水洗涤3次以2400转/分，离心1分钟，每次洗涤后，将上清液全部倒出。

5.1.2加入2滴抗IgG，C3d（多特异性）或者抗IgG或抗C3d，以2400转/分，离心15分钟，用肉眼或借助显微镜管凝集，并按程度记录结果。

5.1.3判断结果必须一定角度轻轻地摇动试管直到松动所有的细胞，然后反复倾斜试管，直到均匀的细胞悬液（阴性）或者凝集物（阳性）为止。

5.1.4如阴性结果，在室温中放置5-10分钟，再离心一次，重读结果。

这样做，阴性反应有时会变成阳性。

注意：仅对C3D和IgA致敏的红细胞有增强作用，IgG致敏红细胞反而会变弱（见注意事项）。

5.2 阳性对照（IgG抗D致敏细胞）5.2.1每批新世纪，或在4℃保存时间过长，需做阳性对照，只要每月一次，1滴阳性对照细胞加2滴直接抗人球蛋白试剂，离心判定结果。

5.2.2在试验中，于判断为阴性的试管内加入1滴阳性对照细胞，再离心，然后重悬液，判定结果。

如果最初洗涤能充分除去所有未结合的球蛋白，结果为阳性。

这是一个重要的对照，因为这是检测细胞是否洗涤充分的唯一方法。

抗人球蛋白试验（coombs实验）
直接试验：实验原理：本实验是检查不完全抗体试验，包括直接试验和间接试验。

直接试验和间接试验阳性为红细胞表面不完
全抗体存在及血清中游离的不完全抗体存在，判定结果凝
集为阳性。

试剂：
1、受检者红细胞：取患者全血脱纤维蛋白或抗凝，离
心除上清液，用大量生理盐水洗涤红细胞3—5次，
然后制成10%的红细胞悬液。

2、受检血清
3、正常0型混合红细胞：取数名正常0型抗凝血，离
心除血浆，用大量生理盐水洗涤红细胞3—5次，然
后制成10%的红细胞悬液。

4、抗人球蛋白血清
5、抗D血清
6、AB血清
7、0.85%生理盐水
操作方法：
取试管3支
1 2 3
反应物（低）
受检者阳性对照阴性对照
受检者压积红细胞 2 ——
对照同型压积红细胞— 2 2
抗D血清— 4 —
AB血清—— 4
将2 3 管置37℃水浴中1小时，然后3支试管均用大量生理盐水洗涤两次，每管再以生理盐水配成10%的红细胞悬液。

直接试验：
取小试管4支
反应物（滴）
受检者盐水对照阳性对照阴性对照
抗人球蛋白血清 2 — 2 2。

coombs试验原理Coombs试验原理Coombs试验是一种免疫学实验方法，用于检测抗体与红细胞表面抗原的结合。

它是由英国免疫学家Robin Coombs于1945年发明的，被广泛应用于临床诊断和研究领域。

Coombs试验的原理是通过检测抗体与红细胞表面抗原的结合情况来判断是否存在自身免疫性溶血贫血等疾病。

在正常情况下，人体的免疫系统会产生抗体来对抗外来物质，但有些情况下，免疫系统会错误地产生抗体攻击自身的红细胞。

这些抗体与红细胞表面抗原结合后，会导致红细胞破裂，从而引起溶血反应。

Coombs试验主要分为直接抗人球蛋白试验（Direct Antiglobulin Test，简称DAT）和间接抗人球蛋白试验（Indirect Antiglobulin Test，简称IAT）两种。

直接抗人球蛋白试验通过将患者的红细胞与抗人球蛋白抗体结合，然后观察是否发生凝集反应，来判断是否存在抗体与红细胞表面抗原的结合。

这种试验通常用于检测自身免疫性溶血贫血、新生儿溶血病等疾病。

间接抗人球蛋白试验则是通过将患者的血清与已知具有特定抗原的红细胞结合，再加入抗人球蛋白抗体，观察是否发生凝集反应。

这种试验常用于血型鉴定、输血前的抗体筛查、妊娠期的抗体检测等。

Coombs试验的操作步骤较为繁琐，需要严格控制实验条件，避免假阳性或假阴性结果的出现。

首先，需要收集患者的血液样本，并离心分离红细胞。

然后，将红细胞与抗人球蛋白抗体或抗人免疫球蛋白抗体结合，形成抗原-抗体复合物。

最后，通过观察是否发生凝集反应来判断试验结果。

Coombs试验的结果分为阳性和阴性两种。

阳性结果表示抗体与红细胞表面抗原结合，存在溶血现象。

阴性结果则表示未能检测到抗体与红细胞表面抗原的结合，不存在溶血现象。

Coombs试验在临床诊断和研究中具有重要意义。

它可以帮助医生确定溶血性疾病的诊断和治疗方案，指导输血前的血型鉴定和抗体筛查工作，确保输血安全。

此外，它还可以用于研究免疫学和血液学领域，深入了解免疫反应的机制和异常情况。

抗人球蛋白试验名词解释抗人球蛋白试验，这名字一听就让人觉得很专业，但其实它背后隐藏的故事可有意思了。

这项试验主要用来检查我们身体里是否有抗人球蛋白，简单说就是看看咱们的免疫系统是不是在“闹脾气”。

想象一下，如果你身体里有些小家伙，不太喜欢人家进来，那就可能会出现一些问题。

这种情况就像是家里来了不速之客，你的免疫系统就像是家里的大保镖，准备上阵把他们赶走。

说到抗人球蛋白试验，得先来个背景介绍。

这试验最早是用来检测Rh血型的。

不知道大家有没有听过Rh阴性和阳性，有点像是血液的身份标签。

你要是Rh阴性，怀孕的时候可得多留意，这就像是一个隐形的风险。

想象一下，孕妈肚子里有个小宝宝，万一宝宝的血型和妈的不一样，这可就麻烦了。

抗人球蛋白试验就像是给妈妈做的一次安全检查，看看是否会对宝宝造成影响。

听起来很严肃，但其实就是为了确保妈妈和宝宝能平安无事。

再说说这试验是怎么做的。

你得去医院，医护人员会抽一点血，简单得就像打个小针一样，没啥好怕的。

血抽完之后，实验室的小伙伴们就开始忙碌了。

他们会把血液放到特定的试剂里，看看有没有抗体出现。

要是抗体阳性，那就意味着免疫系统在“闹脾气”，可能会对胎儿造成威胁。

这个结果就像是给你发的“注意信号”，提醒你注意身体，别让不该来的小家伙上了你的船。

不过，别担心，如果结果是阴性，那就是大大的安心了！就像是过关斩将，一路畅通无阻。

那时候，你只需继续享受怀孕的快乐，顺其自然就好。

可如果结果是阳性，医生会给你一些建议，可能需要进一步检查，甚至可能要考虑一些治疗措施。

别急，这些都是为了确保宝宝的安全，医生就像是守护者，时时刻刻为你和宝宝的健康把关。

说到这里，有些朋友可能会想，为什么我们身体里会有抗人球蛋白呢？这其实跟我们的免疫系统有关，免疫系统是个复杂的大家伙，时不时就会对外界的“入侵者”作出反应。

这种反应是过度的，就像是一个小孩儿在看到陌生人时特别紧张，结果把所有人都当成了“坏人”。

这时候，身体里的抗人球蛋白就可能出现了，开始对抗那些本不该对抗的东西。

抗人球蛋白实验步骤
抗人球蛋白实验是一种常用的免疫学实验方法，以下是一种常见的实验步骤：
1. 准备实验材料：包括待检样本、抗人球蛋白抗体、标记有荧光物质的二抗、缓冲液和试管等。

2. 样本处理：待检样本（如血清、尿液等）需要进行预处理，例如离心等操作，以提取样本中的球蛋白。

3. 制备工作液：根据实验要求和所使用的抗体种类，配制合适的缓冲液。

4. 样本和标准品的加样：将待检样本和不同浓度的标准品加入试管中。

5. 加入抗体：向每个试管中加入特异性的抗人球蛋白抗体，与样本中的球蛋白结合形成免疫复合物。

6. 反应：将试管放置在适当的温度和时间下，使抗体与球蛋白反应。

7. 洗涤：用适当的缓冲液洗涤掉未结合的抗体和其他杂质。

8. 加入二抗：加入标记有荧光物质的二抗，与抗人球蛋白抗体结合。

9. 再次洗涤：用缓冲液洗涤去除未结合的二抗。

10. 测定：使用荧光分析仪等设备进行测定，检测样本中荧光强度的变化。

11. 数据分析：根据测定结果，计算出样品中球蛋白的浓度。

以上是抗人球蛋白实验的一般步骤，不同实验目的和实验方法可能会有所不同，具体操作的详细步骤应根据具体实验方案进行。

抗人球蛋白试验（coombs实验）
直接试验：实验原理：本实验是检查不完全抗体试验，包括直接试验和间接试验。

直接试验和间接试验阳性为红细胞表面不完
全抗体存在及血清中游离的不完全抗体存在，判定结果凝
集为阳性。

正常结果：均为阴性。

临床意义：阳性见于自身免疫性溶血性贫血、冷凝集素综合征、阵发性寒冷性血红蛋白尿、药物致免疫性溶贫、输血引起溶贫和新生儿同种免疫性溶贫。

阴性不能排除免疫性溶贫。

试剂：
1、受检者红细胞：取患者全血脱纤维蛋白或抗凝，离
心除上清液，用大量生理盐水洗涤红细胞3—5次，
然后制成10%的红细胞悬液。

2、受检血清
3、正常0型混合红细胞：取数名正常0型抗凝血，离
心除血浆，用大量生理盐水洗涤红细胞3—5次，然
后制成10%的红细胞悬液。

4、抗人球蛋白血清
5、抗D血清
6、AB血清
7、0.85%生理盐水
操作方法：
取试管3支
1 2 3
反应物（低）
受检者阳性对照阴性对照
受检者压积红细胞 2 ——
对照同型压积红细胞— 2 2
抗D血清— 4 —
AB血清—— 4
将2 3 管置37℃水浴中1小时，然后3支试管均用大量生理盐水洗涤两次，每管再以生理盐水配成10%的红细胞悬液。

直接试验：
取小试管4支
反应物（滴）
受检者盐水对照阳性对照阴性对照
抗人球蛋白血清 2 — 2 2。

抗人球蛋白试验，又称Coombs’的重要依据。

【参考值】正常人直接与间接试验均为阴性，Coombs’试验阴性有时并不能排除AIHA。

【临床意义】直接试验是检查被检红细胞上有无不完全抗体，间接试验是检查血清中游离的不完全抗体。

直接Coombs’试验较间接试验对AIHA更有诊断价值。

用特异性单价抗血清可将AIHA 分为三型：IgG／C3阳性，占67％；单独IgG性，占20％；单独C3性，占13％；阳性结果本试验阳性结果主要见于下列几种情况：1.自身免疫性贫血，（IgG）型引起的溶血性贫血，本试验直接反应常呈强阳性，间接反应大多阴性，但亦可阳性。

2.型：直接反应阳性，间接反应阴性，以上二型如以正常红细胞先与有关药物于37℃培育后再加病人血清、间接反应均为阳性。

③福阿亭型：（奎宁等药物）抗体通常为IgM，偶有IgG 型者，直接反应为阳性，间接反应阴性，但如用IgG抗血清做试剂则结果大部分均为阴性，但如培育时加入新鲜正常人血清（供应补体）则结果为阳性。

37℃下进行）由于本病红细胞膜附着的是补体C4和C3而不是IgG或IgM，如果用抗IgG或抗IgM抗血清做试验时，则结果阴性，如以抗补体的抗血清做试验则直接反应阳性。

4.新生儿同种免疫溶血病，因Rh血型不合所致溶血病，直接及间接反应均强阳性，持续数周、换血输血后数天内可变为阴性，由于“ABO”血型不合引起的溶血病，结果常为阴性或弱阳性。

5.红细胞血型不合引起的输血反应，ABO或Rh血型不合输血，供者的红细胞被受者的血型抗体致敏，在供者被致敏的红细胞完全破坏以前，直接反应阳性，Rh阴性者如过去不曾接受过Rh阳性者的血或曾妊娠胎儿为Rh阳性者，间接反应阳性，如无上述接触，第一次输血后（Rh阳性的血），数天之内间接反应也会变为阳性。

6.SLE铅中毒、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等，病人直接反应亦可阳性，阵发性寒冷性血红蛋白尿症患者中，急性发作后用抗补体血清做试验直接反应常为阳性。

抗人球蛋白实验，又称Coombs’实验，是诊断(AIHA)的重要依据。

【参考值】正常人直接与间接实验均为阴性，Coombs’实验阴性有时并非能排除AIHA。

【临床意义】直接实验是检查被检红细胞上有无不完全抗体，间接实验是检查血清中游离的不完全抗体。

直接Coombs’实验较间接实验对AIHA更有诊断价值。

用特异性单价抗血清可将AIHA分为三型：IgG／C3阳性，占67％；单独IgG性，占20％；单独C3性，占13％；阳性结果本实验阳性结果主要见于下列几种情形：1.自身免疫性贫血，（IgG）型引发的溶血性贫血，本实验直接反映常呈强阳性，间接反映大多阴性，但亦可阳性。

2.药物诱发的①型：直接及间接反映均阳性。

②青霉素型：直接反映阳性，间接反映阴性，以上二型如以正常红细胞先与有关药物于37℃培育后再加病人血清、间接反映均为阳性。

③福阿亭型：（奎宁等药物）抗体一般为IgM，偶有IgG型者，直接反映为阳性，间接反映阴性，但如用IgG抗血清做试剂则结果大部份均为阴性，但如培育时加入新鲜正常人血清（供给补体）则结果为阳性。

3.综合征直接反映阳性，间接反映阴性（实验需在37℃下进行）由于本病红细胞膜附着的是补体C4和C3而不是IgG或IgM，若是用抗IgG或抗IgM抗血清做实验时，则结果阴性，如以抗补体的抗血清做实验则直接反映阳性。

4.新生儿同种免疫溶血病，因Rh血型不合所致溶血病，直接及间接反映均强阳性，持续数周、换血输血后数天内可变成阴性，由于“ABO”血型不合引发的溶血病，结果常为阴性或弱阳性。

5.红细胞血型不合引发的输血反映，ABO或Rh血型不合输血，供者的红细胞被受者的血型抗体致敏，在供者被致敏的红细胞完全破坏以前，直接反映阳性，Rh阴性者如过去不曾同意过Rh阳性者的血或曾怀胎胎儿为Rh阳性者，间接反映阳性，如无上述接触，第一次输血后（Rh阳性的血），数天之内间接反映也会变成阳性。

6.其它在、SLE、恶性淋巴瘤、、癌肿、铅中毒、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等，病人直接反映亦可阳性，阵发性酷寒性血红蛋白尿症患者中，急性发作后用抗补体血清做实验直接反映常为阳性。

【名称】抗人球蛋白试验【英文名】anti-human globulin test【别名】Coombs试验【概述】抗人球蛋白试验又称Coombs试验，是检查不完全抗体的一种很好的方法。

将抗人球蛋白血清加入已致敏的红细胞盐水悬液中，红细胞表面的抗体球蛋白(即使其致敏的不完全抗体)与抗人球蛋白血清中的抗体发生特异性反应，使红细胞发生凝集。

抗人球蛋白血清除了可以测定红细胞上IgG抗体外，还可以测定IgM和IgA，也可以测补体组分(C、C)。

【原理】凝集反应。

【试剂】(1)直接抗人球蛋白试验：①抗人球蛋白血清(广谱及单价)。

②5%受检者红细胞。

③5%IgG致敏红细胞。

(2)间接抗人球蛋白试验：①抗人球蛋白血清(广谱及单价)。

②受检血清(或已知抗体的血清)。

③5%已知抗原的红细胞悬液(或5%受检红细胞悬液)。

④不完全抗D血清。

⑤AB型血清。

⑥5%D阳性红细胞悬液。

【操作方法】(1)直接抗人球蛋白试验：①在标记好的10或12×60mm试管内加1滴5%受检者红细胞生理盐水悬液。

再用生理盐水洗涤3～4次。

末次洗涤后，将上清液全部倾出，尽量吸干，立即加入1～2滴最适广谱抗人球蛋白血清，混匀。

②以1000r/min离心15s，借助光镜检查。

从试管底部松动红细胞，轻轻地摇动试管直到松动所有的细胞，然后反复轻轻地倾斜试管，直到呈现均匀的细胞或者凝集物为止。

③若为阴性，再加1滴5%IgG致敏的红细胞，以1000r/min离心15s。

如凝集，表明原先的阴性结果是正确的。

如不凝集，则不是先前的洗涤不充分，就是抗人球蛋白试剂失效之故。

这是一个很重要的对照。

④直接抗人球蛋白试验判断为阳性者，应继续用单特异性的抗人球蛋白血清试验，以便确定红细胞是被IgG致敏，还是受补体致敏。

单价特异性抗人球蛋白血清的使用方法与广谱抗人球蛋白血清相同。

(2)间接抗人球蛋白试验：①在标记好的10(12)×70mm试管内加3滴患者血清，再加5%红细胞悬液1滴，另外将2滴不完全抗D血清加入阳性对照管中2滴AB型血清加入阴性对照中，分别加入5%阳性红细胞悬液1滴，混合后，放37℃水浴1h。