赭曲霉毒素A标准检测规程

黄曲霉毒素国标检测方法
黄曲霉毒素（AF）是一种由黄曲霉属真菌产生的有毒代谢产物。

它们被广泛分布在食品、饲料和环境中，可能对人类和动物健康造成危害。

因此，对黄曲霉毒素的快速、准确检测成为了保障公众健康的关键。

国家标准委员会制定了黄曲霉毒素国标检测方法，以保证各个检验机构的检测质量和结果一致性。

1. 检测样品的制备
样品制备过程是检测过程的关键步骤。

样品必须被精确称量和混合，以确保最终检测结果的准确性和可重复性。

样品预处理的方法通常包括研磨、切碎、混合和抽样等步骤，具体方法取决于样品的特性，如水分含量、粘度和粒度分布等。

2. 样品提取
样品提取过程中，黄曲霉毒素从样品中被提取到适当的溶剂中。

提取的选择取决于样品的特性和黄曲霉毒素的特性。

一些常见的提取方法包括回收萃取、固相萃取和羧甲基纤维素柱萃取等。

3. 分离和净化
为了获得最终准确的结果，必须分离并净化提取的样品。

对于黄曲霉毒素的分离和纯化方法主要有和阳离子交换树脂和固相萃取等方法。

检测黄曲霉毒素的方法主要包括色谱检测法、酶联免疫检测法、毛细管电泳等方法。

其中酶联免疫检测法已成为广泛使用的检测方法之一。

该方法以特异性抗体为基础，利用抗原抗体相互作用，快速、敏感地检测黄曲霉毒素。

总的来说，黄曲霉毒素国标检测方法是一系列高效准确的方法，可以帮助检验机构检测食品或饲料中的黄曲霉毒素，保证公众健康。

饲料卫生标准饲料中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的允许量
（GB 13078.2-2006）
1 范围
本标准规定了饲料中玉米赤霉烯酮（ZEN）和赭曲霉毒素A(OA)的允许量。

本标准适用于配合饲料和玉米。

2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。

凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 19539 饲料中赭曲霉毒素A的测定
GB/T 19540 饲料中玉米赤霉烯酮的测定
3 允许量
赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的允许量表1
项目适用范围允许量/（ug/kg）
赭曲霉烯酮配合饲料、玉米≤100
玉米赤霉烯酮配合饲料、玉米≤500
4 检验方法
饲料中曲赭霉毒素A检验方法按GB/T 19539的测定方法的规定执行。

饲料中玉米赤霉烯酮检验方法按GB/T 19540的测定方法的规定执行。

赭曲霉毒素A无毒ELISA检测裘雪梅;朱立鑫;刘敏;周双铭【摘要】[目的]研究赭曲霉毒素A毒素的替代ELISA检测.[方法]采用噬菌体展示技术筛选赭曲霉毒素A模拟表位,得到赭曲霉毒素A(OTA)模拟表位序列为IR(V)PMV(L)XX(X为任意氨基酸),化学合成法体外合成OTA模拟表位肽,通过化学交联法将OTA模拟表位肽与BSA连接,做成无毒抗原,建立无毒OTA间接竞争ELISA检测方法,同样通过化学交联法将OTA多肽-BSA与HRP相联,建立OTA无毒直接竞争ELISA检测方法.[结果]OTA多肽-BSA间接竞争ELISA检测50％抑制浓度(IC50)为5 ng/ml,OTA多肽-BSA-HRP一步直接竞争ELISA检测法IC50为2.5 ng/ml,二步直接竞争ELISA检测法IC50为2ng/ml.[结论]OTA模拟表位多肽能用于代替OTA毒素作为检测抗原使用,并建立无毒ELISA检测方法.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2015(000)031【总页数】3页(P35-37)【关键词】赭曲霉毒素A;模拟表位;ELISA检测【作者】裘雪梅;朱立鑫;刘敏;周双铭【作者单位】江西科技师范大学生命科学学院,江西南昌330013;江西科技师范大学生命科学学院,江西南昌330013;江西科技师范大学生命科学学院,江西南昌330013;江西科技师范大学生命科学学院,江西南昌330013【正文语种】中文【中图分类】S188赭曲霉毒素A(Ochratoxin A，OTA)是曲霉属和青霉属的某些菌种产生的有毒次级代谢产物，易蓄积于组织中[1-2]，属于烈性的肾脏和肝脏毒素[3-5]。

OTA还具有强的致癌、致畸和致突变性[6-7]。

产OTA毒素的菌株广泛存在于自然界中，在各种农作物、食品、饲料、人类及动物的组织和血液中均能检测到OTA的污染，对人类健康构成重大威胁[8-9]。

高效液相色谱法(HPLC)等理化分析检测方法可以精确地进行定性和定量分析[10-12]，由于所需设备昂贵、操作复杂以及对样品纯度有较高的要求，导致检测成本高、周期长，无法满足大批量样本快速筛查的需要。

《粮油检测粮食中赭曲霉毒素A的测定超高效液相色谱方法》行业标准制定编制说明赭曲霉毒素A主要由曲霉属的赭曲霉（Aspergillus ochraceus）、洋葱曲霉(A．alliaceus)、硫色曲霉(A．sulphureus)、蜂蜜曲霉(A．melleus)、孔曲霉(A．ostianus)、佩特曲霉(A．petrakii)和菌核曲霉(A．sclerotiorum)、黑曲霉（A. niger）等, 青霉属的纯绿青霉（Penicillium verrucosum）、震颤青霉（Penicillium palitans）、团青霉（Penicillium commune）、变紫青霉（Penicillium purpursescens）、圆弧青霉（Penicillium cyclopium）等产生，对人、动物具有致病、致癌作用，被WHO的国际癌症研究组织列为2B级可疑致癌物质。

易污染玉米、大麦、小麦、燕麦、高粱、绿咖啡豆、豌豆、豆类、花生、面包、橄榄、啤酒、饲料、肉、奶酪、奶粉、干草、葡萄干、坚果。

我国食品安全国家标准《GB2761-2011 食品中真菌毒素限量》中规定谷物及豆类制品中赭曲霉毒素A限量为5 μg/kg。

目前报道用于检测赭曲霉毒素A的分析方法有酶联免疫法、免疫胶体金试纸法、生物传感器法、高效液相色谱法、液相色谱质谱联用法、间接竞争免疫分辨荧光免疫分析、薄层色谱法等。

薄层色谱法由于操作复杂，目前应用较少；胶体金和酶联免疫方法用于快速筛查；普通液相色谱方法目前应用较多，但分析速度较慢，耗费溶剂较多，成本增加，环保性不足；液质联用仪检测需要高端的质谱仪。

当前急需建立一种更加灵敏、高效、低溶剂量的赭曲霉毒素A微量快速定量方法。

为了满足当前我国粮食绿色检测、监测定量分析的需要，通过查阅文献，根据范德米特(van Deemeter)方程理论，结合免疫亲和净化手段，基于UPLC分离技术，建立了一种进样量小、分离度高、快速准确、环保的赭曲霉毒素A定量分析方法。

《饲料原料中赭曲霉毒素的快速筛查胶体金快速定量法》江西省地方标准编制说明一、标准制定意义（一）介绍赭曲霉毒素A是由多种生长在粮食（小麦、玉米、大麦、燕麦、黑麦、大米和黍类等）、花生、蔬菜（豆类）等农作物上的曲霉和青霉产生的。

动物摄入霉变饲料后，这种毒素也可能出现在猪和母鸡等的肉中。

赭曲霉毒素主要损害动物肝脏与肾脏，引起肝脏和肾脏损伤，大量毒素也可能引起动物肠黏膜炎症和坏死。

有报道指出，食物中的OTA与一种致命的地方性肾脏疾病（balkanendemicnephropathy）有关，且有致癌、致畸作用，近年来引起了人类营养学家的重视。

正常条件下，小麦和玉米受OTA污染的机率较小，约1%～5%，其含量为0.01～5mg/kg；大麦和燕麦被污染的机率较高，约为10%，其含量一般在0.1mg/kg以下，个别样品高达27mg/kg。

赭曲霉毒素包括3种类型，毒性强弱顺序是：OTA>OTC>OTB。

OTB是OTA的脱氯衍生物，OTC是OTA的乙基酯，OTB和OTC的含量一般较低，毒性较OTA小。

因此，饲料检测时可以主要分析OTA含量。

目前，小麦、大麦、玉米等谷类作物中OTA的测定方法有薄层色谱法（TLC）、酶联免疫吸附法（ELISA）、气相色谱法（GC）、高效液相色谱法（HPLC）、高效液相色谱-质谱法（HPLC-MS）。

TLC法繁琐费时，且灵敏度、特异性较差，提取过程中所需有机溶剂品种多且量大，易污染环境，对人体有较大危害。

ELISA法测定结果受试剂盒差异、实验温度、仪器灵敏度等条件影响较大。

GC、GC-MS、HPLC和HPLC-MS法普遍存在着样品前处理过程复杂，灵敏度易受样品的净化、浓缩等步骤的影响，耗时，检测设备昂贵，并要求有专业的技术人员及较长的分析周期。

同时，这些检测方法无一例外要求在检测过程中使用毒素标准溶液，给环境和检测人员的安全造成风险。

本标准项目是通过化学合成法制备赭曲霉毒素A人工抗原，利用此抗原免疫实验动物制备赭曲霉毒素A单克隆抗体，基于此原料基础上开发赭曲霉毒素A快速检测试纸条，再通过胶体金读数仪进行大米、玉米、小麦等样品中赭曲霉毒素的定量分析。

《葡萄酒和咖啡中赭曲霉毒素A限量》（征求意见稿）编制说明一、标准起草的基本情况根据《食品安全法》和《食品安全国家标准管理办法》有关规定，为进一步完善我国食品安全国家标准《食品中真菌毒素限量》（GB 2761-2011），受国家卫生和计划生育委员会（原卫生部食品安全综合协调与卫生监督局）委托，由中国食品发酵工业研究院与天津科技大学共同承担食品安全国家标准《葡萄酒和咖啡中赭曲霉毒素A限量》的制定工作。

《葡萄酒中赭曲霉毒素A限量》标准主要起草单位为中国食品发酵工业研究院，参与单位有中国酒业协会葡萄酒分会，宁波进出口检验检疫局，河北科技大学，西北农林科技大学和相关葡萄酒企业等。

主要起草人：熊正河，钟其顶，邢江涛，王祖明，陈树兵，殷居易，李艳和王华。

《咖啡中赭曲霉毒素A限量》标准起草单位为：天津科技大学；主要起草人：王硕、王俊平、朱华平、石楠、白茹、陈煜润。

二、标准的重要内容及主要修改情况1.葡萄酒。

起草工作组根据葡萄酒赭曲霉毒素A普查数据，结合我国葡萄酒膳食调查数据，依照国际膳食暴露点评估模型，开展了我国葡萄酒赭曲霉毒素A的暴露量评估，结果表明我国葡萄酒高消费人群的赭曲霉毒素A暴露量应引起关注，但总体食品安全风险是可控的。

经起草工作组会议研究，综合考虑到国际葡萄酒组织（OIV）和欧盟地区法规中规定葡萄酒中赭曲霉毒素A限量标准μg/kg，提出我国葡萄酒中赭曲霉毒素A限量标准为μg/kg。

2.咖啡。

目前我国的咖啡市场的市售咖啡90%来自于进口，国产咖啡只有10%。

进口咖啡货源分布广泛，亚洲地区主要来源于越南和印尼，中南美地区只要进口自哥伦比亚、古巴、巴西牙买加等地，非洲地区主要来源于肯尼亚、埃塞俄比亚等国家。

由于赭曲霉污染主要发生在咖啡原料生产过程，未烘干的咖啡豆由于水分含量较高，较容易滋生霉菌、另外产地潮湿也容易产生霉菌污染，从而导致咖啡受到毒素污染。

根据上述情况，样本按照三大类产品进行采集，即咖啡豆、咖啡粉和速溶咖啡。

真菌毒素限量标准
真菌毒素的限量标准因不同的毒素和食品类型而异。

以下是一些常见的真菌毒素及其限量标准：
黄曲霉毒素B1：在饲料中，黄曲霉毒素B1的限量标准根据饲料类型和动物种类而异。

例如，在奶牛饲料中，黄曲霉毒素B1的限量标准为50μg/kg；在猪饲料中，其限量标准为100μg/kg。

赭曲霉毒素A：在配合饲料中，赭曲霉毒素A的限量标准为100μg/kg。

脱氧雪腐镰刀菌醇：在猪、犊牛和泌乳期复合饲料中，脱氧雪腐镰刀菌醇的限量为1mg/kg；在牛、禽饲料中，其限量标准为5mg/kg。

T-2毒素：在猪、家禽饲料中，T-2毒素的限量为1mg/kg。

以上信息仅供参考，如有需要，建议查阅相关网站。

•26 •现代畜牧科技 2018年第8期总第44期doi:10.19369/ki.2095 —9737.2018.08.018酶联免疫法测定大豆中赭曲霉毒素A冯莉(哈尔滨市兽药饲料监察所，黑龙江哈尔滨150026)摘要：赭曲霉毒素A易溶于水和小苏打溶液，并且于极性有机溶剂中化学性质稳定不易发生反应。

值得注意的是，赭曲霉毒素A具有较强的耐热性，烘烤只能使其毒性减少1/5,而水煮或者水蒸也不能破坏其毒性。

有研究者对赭 曲霉毒素A的耐热性做了研究，以半数存活量及50%有效性发现赭曲霉毒素A对热因素比较稳定，100"200°C间没有发现完全分解。

检测赭曲霉毒素A常用的方法有很多，现介绍的酶联免疫法（ELISA)则具有检测速度快、灵敏 度高、准确性强、可以方便准确的定量、操作相对简便等优点，得到了快速发展和广泛的应用。

关键词：酶联免疫法；赭曲霉毒素A;大豆；真菌毒素中图分类号：S565.1 文献标识码：B赭曲霉毒素是粮食真菌毒素污染的主要品种之一，赭 曲霉毒素由赭曲霉和青霉菌污染大豆、玉米等饲料原材料及其他农副产品后所产生的一种具有强烈毒性的有害代谢物质。

赭曲霉毒素产生速度快，存在范围广，许多菌种都可以产生赭曲霉毒素A,常用的实验室检测赭曲霉毒素A的方法 很多，包括薄层色谱层析法（TLC)、高效液相色谱法(HPLC),现主要介绍的是酶联免疫吸附法（ELISA)。

1仪器试剂试剂：氯化钠；氯化钾；磷酸二氢钾（十二水磷酸氢二钠（吐温20;柠檬酸钠；柠檬酸；四甲基联苯胺；过氧化氢（30%)(浓硫酸（98%);赭曲霉毒素A标准物质；抗抗体;包被有抗抗 体的48孔微孔板；赭曲霉毒素A单克隆抗体;赭曲霉毒素A 酶标抗原；仪器:美国bi〇rad680型酶标仪；实验粉碎机;微量 移液器（多空能旋转混合器（涡旋混合器（电子天平(0.01g)20目标准筛。

以上药品未特殊注明的均为分析纯，水为一级水。

2实验原理酶联免疫分析法（ELISA)结合了抗原抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化显色反应。

各国饲料中霉菌毒素的标准1.关于黄曲霉毒素（Aflatoxin，简称AFT）限量标准：a)世界卫生组织(WHO)和世界粮农组织所属的食品法典委员会(CAC)推荐食品、饲料中AFT最大允许量标准为总量(B1+B2+G1+G2)小于15ppb；b)美国联邦政府法律规定：奶牛饲料中的AFT总量(B1+B2+G1+G2)不得超过20ppb，其它动物饲料中的AFT总量(B1+B2+G1+G2)不得超过300ppb。

2.关于T-2毒素的限量标准：a)前苏联提出的T-2毒素国家食品卫生限量标准为100ppb；b)以色列规定谷物饲料中T-2毒素不得超过100ppb；c)我国《配合饲料中T-2毒素的允许量（GB 21693-2008）》规定，在猪、禽配合饲料中，T-2毒素的允许量必须≤1mg/kg，即≤1ppm(1000ppb)。

3.关于玉米赤霉烯酮（Zearalenone,简写ZEN）的限量标准:a)澳大利亚规定谷物中的ZEN的含量不能超过50ppb；b)意大利规定在谷物和谷类产品中ZEN的含量不能超过100ppb；c)法国规定植物油和谷类当中ZEN的含量必须低于200ppb；d)欧盟规定仔猪日粮中ZEN的最高限量为100ppb；e)我国《饲料卫生标准饲料中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的允许量（GB 13078.2-2006）》规定配合饲料和玉米中ZEN的最高限量为500ppb。

4.到目前为止，各国针对伏马毒素还没有一个广泛的限量标准；关于伏马毒素（Fumonisins）的限量标准问题，这两天我尝试查找了一些资料：a)瑞典规定人类食物中伏马毒素限量为1ppm；b)2001年美国食品与药物管理局（FDA）发布公告，规定人类食用玉米中伏马毒素最高限量为2ppm；c)2001年FDA的畜牧医学中心(CVM)也发布了动物饲料中伏马毒素的最高限量指导性公告，规定其限量范围为1-50ppm。

其中规定伏马毒素在马饲料中应低于5ppm，猪饲料中应低于10ppm，肉牛和家禽饲料中应低于50ppm。

全自动免疫亲和在线净化—高效液相色谱法快速测定粮食中赭曲霉毒素AXie Gang;Li Li;Li Rui;Wang Songxue;Wang Shuo【摘要】建立了全自动免疫亲和在线净化-高效液相色谱法快速测定粮食中赭曲霉毒素A(Ochtatoxin A,OTA)的方法.玉米、小麦样品经乙腈-水(60∶40,V∶V)提取,3％ Tween-20 (m/V)水溶液10倍稀释后,用自动进样器注入RIDA(R) CREST 在线固相萃取系统,经赭曲霉毒素A免疫亲和小柱净化后,以乙腈-2％乙酸水(50∶50,V∶V)为流动相,流速为1.0 mL/min,C18色谱柱(150 mm×3.5 mm,3.5 μm)分离,荧光检测器测定.根据3倍信噪比的峰响应值,确定赭曲霉毒素A的检出限为0.24 μg/kg,在0.012 5～0.5μg/L范围内呈线性相关,R2值为0.999 8;在玉米、小麦样品中加标回收率为80.1％～ 106.9％,变异系数为2.4％～8.2％.本方法一次装柱可检测60个样品,24 h可检测100个样品,满足谷物中赭曲霉毒素A快速准确定量检测的需要.【期刊名称】《中国粮油学报》【年(卷),期】2019(034)006【总页数】6页(P114-119)【关键词】玉米;小麦;赭曲霉毒素A;在线免疫亲和柱净化;高效液相色谱【作者】Xie Gang;Li Li;Li Rui;Wang Songxue;Wang Shuo【作者单位】;;;;【正文语种】中文【中图分类】TS210.7赭曲霉毒素主要是由曲霉属和青霉属产生的一类有毒的次生代谢物，其中赭曲霉毒素A(ochratoxin A，OTA)毒性最强，能产生如胚胎毒性、致畸性、致癌性、免疫毒性、肝毒性等严重的毒性，被世界卫生组织的国际癌症研究组织列为2B级疑致癌物质 [1]。

此外，OTA稳定存在于谷物、酒类、干果、坚果、咖啡和豆类等农作物及其制品中[2-3]。

新版标准GB2761发布葡萄酒、咖啡中新增赭曲霉毒素A限量据卫计委消息，3月17日，国家卫计委发布GB2761-2017《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》及GB2762-2017《食品安全国家标准食品中污染物限量》并将于2017年9月17日正式施行。

其中，此次GB2761标准的修订，新增了葡萄酒和咖啡中赭曲霉毒素A限量。

葡萄酒中赭曲霉毒素A限量标准为2.0μg/kg；咖啡豆和咖啡粉中赭曲霉毒素A限量标准为5.0μg/kg，速溶咖啡中赭曲霉毒素A限量标准为10.0μg/kg。

在欧洲食品中赭曲霉毒素A风险评估报告曾指出，人类摄入赭曲霉毒素A主要来自谷物，其次是葡萄酒和咖啡等。

结合我国葡萄酒和咖啡中赭曲霉毒素A污染及产品消费量情况，对我国葡萄酒和咖啡中赭曲霉毒素A的暴露风险进行了评估。

根据风险评估结果，新的GB2761中增加了葡萄酒和咖啡中赭曲霉毒素A限量要求。

据资料显示，赭曲霉毒素是一种有毒真菌代谢产物。

赭曲霉毒素是由纯绿青霉、赭曲霉和碳黑曲霉等真菌产生的一组结构类似的毒素，其中毒性最大、与人类健康关系最密切、对农作物污染最广泛的是赭曲霉毒素A（OchratoxinA，OA）。

赭曲霉毒素A具有很强的肝脏毒性和肾脏毒性，并有致畸、致突变和致癌作用。

赭曲霉毒素A 广泛分布于自然界，粮谷类、咖啡、茶叶等多种农作物和食品均可被赭曲霉毒素A污染，是欧洲部分国家膳食中的主要污染物之一。

目前，世界上有40多个国家规定了粮食及其制品、果酒、干果及婴幼儿食品中赭曲霉毒素A的限量，但仅有古巴、新加坡和意大利等国家制定了咖啡中赭曲霉毒素A的限量标准（限量值在2.5-50μg/kg），台湾2012年9月修订发布的咖啡中赭曲霉毒素A的限量标准值为5μg/kg。

另外，2005年欧盟规定葡萄酒、以及用于饮料制作的葡萄酒或者葡萄，限量为2.0μg/kg；葡萄汁和其他饮料中的葡萄汁成分中为2.0μg/kg。

国际葡萄与葡萄酒组织（OIV）将葡萄酒中OTA的限量标准定为2μg/kg。