牛奶中酪蛋白的提取
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1. 准备原料,新鲜牛奶或脱脂牛奶。
一、实验目的1. 掌握酪蛋白的提取方法。
2. 学习利用等电点沉淀法检测酪蛋白的含量。
3. 了解蛋白质的沉淀、溶解等性质。
二、实验原理酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质,含量约为35g/L。
酪蛋白是一种含磷蛋白质的混合物,其等电点为4.7。
在等电点时,酪蛋白的溶解度最低,会以沉淀形式从牛奶中析出。
本实验通过调节牛奶的pH值至酪蛋白的等电点,使酪蛋白沉淀,然后通过离心、洗涤等步骤提取酪蛋白,并利用沉淀重量法检测酪蛋白的含量。
三、实验材料与试剂1. 材料:新鲜牛奶2. 试剂:- 95%乙醇- 无水乙醚- 0.2mol/L pH 4.7醋酸-醋酸钠缓冲液- 0.2mol/L氢氧化钠溶液- 0.1mol/L盐酸溶液- 精密pH试纸或酸度计- 离心机- 烧杯- 温度计- 研钵- 天平四、实验步骤1. 酪蛋白提取- 取50mL新鲜牛奶于150mL烧杯中,用热水浴加热至40℃,维持此温度,边搅拌边加入稀醋酸溶液约2mL,观察白色沉淀析出。
- 继续搅拌并使悬浊液冷却至室温,然后将混合物转入离心杯中,于3000r/min离心15min。
- 离心完毕后,弃去上清液,得到酪蛋白沉淀。
2. 酪蛋白洗涤- 将酪蛋白沉淀用少量去离子水洗涤2次,弃去上清液。
- 用95%乙醇洗涤沉淀2次,弃去上清液。
- 用无水乙醚洗涤沉淀2次,弃去上清液。
3. 酪蛋白干燥- 将洗涤后的酪蛋白沉淀置于研钵中,用研棒轻轻研磨,使酪蛋白沉淀充分干燥。
- 将干燥后的酪蛋白沉淀转移到称量瓶中,于105℃烘干2小时,取出,置于干燥器中冷却至室温,称量。
4. 酪蛋白含量测定- 取一定量的酪蛋白沉淀,加入0.1mol/L盐酸溶液,使酪蛋白溶解。
- 将溶液转移至容量瓶中,定容至刻度线,摇匀。
- 取一定量的溶液,加入0.2mol/L氢氧化钠溶液,使溶液pH值调至4.7,观察酪蛋白沉淀析出。
- 将沉淀转移至离心杯中,于3000r/min离心15min。
- 弃去上清液,称量沉淀重量,计算酪蛋白含量。
第1篇一、实验目的1. 理解牛奶中酪蛋白的提取原理。
2. 掌握等电点沉淀法提取酪蛋白的实验操作。
3. 学习利用pH值调节牛奶中的蛋白质状态,实现酪蛋白的分离。
二、实验原理牛奶中的主要蛋白质为酪蛋白,含量约为3.5%。
酪蛋白是一种含磷蛋白质,其等电点为4.7。
在等电点附近,酪蛋白的溶解度最低,因此可以通过调节牛奶的pH 值,使酪蛋白沉淀出来,从而实现与其它蛋白质的分离。
三、实验材料与试剂1. 材料:新鲜牛奶、pH计、离心机、烧杯、玻璃棒、滤纸等。
2. 试剂:0.2mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液(pH 4.7)、95%乙醇、无水乙醚等。
四、实验步骤1. 样品准备:取50mL新鲜牛奶于150mL烧杯中。
2. pH值调节:用pH计测定牛奶的pH值,并逐渐加入0.2mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液(pH 4.7),边加边搅拌,直至牛奶pH值达到4.7。
3. 沉淀形成:继续搅拌,使牛奶中的酪蛋白沉淀,并静置10分钟。
4. 离心分离:将混合液转入离心杯中,以3000r/min的速度离心15分钟。
5. 收集沉淀:弃去上清液,收集离心杯中的酪蛋白沉淀。
6. 洗涤沉淀:向沉淀中加入适量95%乙醇,搅拌后静置5分钟,过滤去除杂质。
7. 重复洗涤:重复步骤6,共洗涤3次,以去除酪蛋白中的杂质。
8. 干燥沉淀:将洗涤后的酪蛋白沉淀转移至干净的烧杯中,在60℃下烘干至恒重。
五、实验结果与分析1. 通过实验,成功从牛奶中提取了酪蛋白。
2. 通过pH值调节,实现了酪蛋白的沉淀分离。
3. 洗涤步骤有助于去除酪蛋白中的杂质,提高纯度。
六、实验结论1. 等电点沉淀法是一种有效的酪蛋白提取方法。
2. 通过pH值调节,可以实现酪蛋白的分离。
3. 洗涤步骤有助于提高酪蛋白的纯度。
七、实验讨论1. 实验过程中,pH值的调节对酪蛋白的沉淀效果有重要影响。
若pH值偏离等电点,则会影响酪蛋白的沉淀效果。
2. 洗涤步骤有助于去除酪蛋白中的杂质,但过度洗涤会导致酪蛋白的损失。
一、实验目的1. 了解酪蛋白的来源和性质。
2. 掌握从牛奶中提取酪蛋白的原理和方法。
3. 熟悉等电点沉淀法提取蛋白质的实验操作。
二、实验原理酪蛋白是牛奶中主要的蛋白质,含量约为35g/L。
酪蛋白是一种含磷蛋白质的混合物,其等电点为4.7。
在等电点时,酪蛋白的溶解度最低,容易从溶液中沉淀出来。
通过调节牛奶的pH值至酪蛋白的等电点,使酪蛋白沉淀,然后进行离心、洗涤、干燥等步骤,可以得到纯酪蛋白。
三、实验材料与试剂1. 材料:新鲜牛奶2. 试剂:95%乙醇、无水乙醚、0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液3. 器具:离心机、抽滤装置、精密pH试纸或酸度计、电炉、烧杯、温度计四、实验步骤1. 酪蛋白粗提(1)取100mL新鲜牛奶,加热至40℃。
(2)在搅拌下,缓慢加入预热至40℃的0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液100mL。
(3)用精密pH试纸或酸度计调节pH值至4.7。
(4)将混合液冷却至室温,离心15分钟。
(5)弃去清液,得到酪蛋白粗制品。
2. 酪蛋白纯化(1)用水洗涤沉淀3次,离心10分钟,弃去上清液。
(2)在沉淀中加入30mL 95%乙醇,搅拌。
(3)将悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
(4)用乙醇-乙醚混合液清洗沉淀2次。
(5)最后用乙醚清洗沉淀2次,抽干。
五、实验结果与分析通过上述实验步骤,成功从牛奶中提取了酪蛋白。
实验过程中,观察到以下现象:1. 当pH值调节至4.7时,酪蛋白开始沉淀。
2. 经过离心、洗涤、干燥等步骤,得到纯酪蛋白。
六、实验结论1. 本实验成功从牛奶中提取了酪蛋白,证明了等电点沉淀法提取蛋白质的可行性。
2. 通过实验,掌握了酪蛋白的制备原理和实验操作方法。
3. 酪蛋白是一种重要的蛋白质资源,具有广泛的应用前景。
七、实验注意事项1. 在实验过程中,注意保持实验环境的清洁,避免污染。
2. 调节pH值时,应缓慢加入酸碱溶液,避免剧烈反应。
3. 离心速度不宜过快,以免损坏离心机。
一、实验目的1. 学习从牛奶中提取酪蛋白的原理和方法。
2. 掌握等电点沉淀法提取蛋白质的操作技巧。
3. 了解酪蛋白的性质和特征。
二、实验原理酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质,含量约为3.5%。
它是一种含磷蛋白质,具有等电点为4.7的特点。
在等电点时,酪蛋白的溶解度最低,因此可以通过调节牛奶的pH值至酪蛋白的等电点,使其沉淀出来。
沉淀物经过离心、洗涤、干燥等步骤,可以得到纯净的酪蛋白。
三、实验材料与试剂1. 材料:新鲜牛奶、离心机、烧杯、温度计、pH计、抽滤装置、布氏漏斗、玻璃棒等。
2. 试剂:95%乙醇、无水乙醚、0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液、蒸馏水等。
四、实验步骤1. 酪蛋白的提取(1)取50mL新鲜牛奶于150mL烧杯中,用热水浴加热至40℃,维持此温度,边搅拌边加入2mL稀醋酸溶液,观察白色沉淀的形成。
(2)继续搅拌并使悬浊液冷却至室温,然后将混合物转入离心杯中,于3000r/min离心15min。
(3)离心完毕后,弃去清液,得到酪蛋白粗制品。
2. 酪蛋白的纯化(1)用水洗涤沉淀3次,每次离心10min,弃去上清液。
(2)在沉淀中加入30mL乙醇,搅拌,悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
(3)用乙醇和乙醚混合液清洗沉淀2次。
(4)最后用乙醚清洗沉淀2次,抽干。
(5)沉淀风干,得到纯净的酪蛋白。
3. 酪蛋白的性质研究(1)观察酪蛋白的外观,记录其颜色、形状等特征。
(2)取少量酪蛋白加入蒸馏水中,观察其在水中的溶解情况。
(3)用pH计测定酪蛋白的等电点。
(4)对酪蛋白进行缩二脲反应、蛋白黄色反应和茚三酮反应,观察其颜色变化。
五、实验结果与分析1. 酪蛋白的提取实验中观察到白色沉淀的形成,表明牛奶中的酪蛋白已经沉淀出来。
通过离心、洗涤、干燥等步骤,得到了纯净的酪蛋白。
2. 酪蛋白的纯化经过洗涤、抽滤、干燥等步骤,得到了纯净的酪蛋白。
酪蛋白呈白色粉末状,无异味。
3. 酪蛋白的性质研究(1)酪蛋白在水中溶解性较差,部分溶解。
牛奶中提取酪蛋白[目的与要求]1、了解等电点沉淀法2、学习从牛奶中制备酪蛋白的方法3、加深对蛋白质等电点性质的理解[原理]蛋白质是一种亲水胶体,在水溶液中蛋白质分子表面形成一个水化层。
另外,蛋白质又是一种两性离子,在一定pH溶液能够维持一个稳定的状态。
但是调节蛋白质溶液的pH值至等电点时,蛋白质会因失去电荷而变得不稳定,此时若再加脱水剂或加热,水化层被破坏,蛋白质分子就相互凝聚而析出。
等电点沉淀法主要利用两性电解质分子在等电点时溶解度最低的原理,而多种两性电解质具有不同等电点而进行分离的一种方法。
牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白含量约为35g/L。
酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物,等电点为4.7。
将牛乳的pH调至4.7时,酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀,除去脂类杂质后便可得到较纯的酪蛋白。
但单独利用等电点沉淀法来分离生化产品效果并不太理想,因为即使在等电点时,有些两性物质仍有一定的溶解度,并不是所有的蛋白质在等电点时都能沉淀下来,特别是同一类两性物质的等电点十分接近时。
生产中常与有机溶剂沉淀法、盐析法并用,这样沉淀的效果较好。
本实验目的是使学生运用等电点沉淀法制备酪蛋白,从中加深对蛋白质等电点性质的理解。
<!--[if !supportEmptyParas]--><!--[endif]-->[方法和步骤]1、取预先放冰箱中冷却的消毒牛奶6mL,3 000r/min离心10min,除去脂肪层的乳液置50毫升烧杯内,加热至40℃左右,在搅拌下慢慢加入10mL左右预热的醋酸-醋酸钠缓冲液,此时混浊液中有大量絮状物沉下。
冷至室温,3 000r/min离心10min,弃去上清液,得酪蛋白粗品。
2、用蒸馏水洗沉淀三次(每次5mL左右),3 000r/min离心10min,弃去上清液。
3、将沉淀置研钵中,研碎后,渐加5mL 95%乙醇,静置片刻,将全部悬浮液转移至布氏漏斗抽滤,抽干后的制品,用乙醇-乙醚混合液洗沉淀二次(每次5mL),最后用无水乙醚洗沉淀二次(每次5mL),抽干。
一、实验目的1. 了解酪蛋白的化学性质和等电点;2. 掌握从牛奶中提取酪蛋白的方法;3. 学习酪蛋白的鉴定方法。
二、实验原理酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质,含量约为3.5%。
酪蛋白是一种含磷蛋白质,其等电点为4.7。
在等电点附近,酪蛋白的溶解度最低,容易从溶液中析出。
本实验利用等电点沉淀法从牛奶中提取酪蛋白,并采用生物化学方法对提取的酪蛋白进行鉴定。
三、实验材料与试剂1. 材料:新鲜牛奶、蒸馏水、95%乙醇、无水乙醚、pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液、硫酸铜、氢氧化钠、茚三酮等。
2. 试剂:0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液、0.1mol/L氢氧化钠溶液、0.1mol/L硫酸铜溶液、1%茚三酮溶液等。
四、实验步骤1. 酪蛋白提取(1)取50mL新鲜牛奶于150mL烧杯中,用热水浴加热至40℃,维持此温度,边搅拌边加入2mL稀醋酸溶液。
(2)继续搅拌并使悬浊液冷却至室温,然后将混合物转入离心杯中,于3000r/min离心15min。
(3)离心完毕后,弃去清液,得到酪蛋白粗制品。
2. 酪蛋白纯化(1)将酪蛋白粗制品用蒸馏水洗涤3次,每次洗涤后离心10min,弃去上清液。
(2)在沉淀中加入30mL乙醇,搅拌后转入布氏漏斗中抽滤。
(3)用乙醇-乙醚混合液清洗沉淀2次,再用乙醚清洗沉淀2次,抽干。
(4)风干后得到纯酪蛋白。
3. 酪蛋白鉴定(1)蛋白质两性反应鉴定取少量纯酪蛋白,加入0.1mol/L氢氧化钠溶液和0.1mol/L硫酸铜溶液,观察是否出现紫色络合物。
(2)茚三酮反应鉴定取少量纯酪蛋白,加入1%茚三酮溶液,共热,观察是否产生蓝紫色缩合物。
五、实验结果与分析1. 酪蛋白提取在实验过程中,观察到牛奶中加入稀醋酸溶液后,出现白色沉淀,表明酪蛋白已从牛奶中析出。
2. 酪蛋白纯化通过洗涤、离心、抽滤等步骤,得到纯酪蛋白,外观呈白色粉末状。
3. 酪蛋白鉴定(1)蛋白质两性反应鉴定将纯酪蛋白加入氢氧化钠溶液和硫酸铜溶液后,观察到溶液变为紫色,表明存在蛋白质两性反应。
一、实验目的1. 了解酪蛋白的基本性质及其在牛奶中的存在形式。
2. 掌握从牛奶中提取酪蛋白的原理和方法。
3. 学习利用等电点沉淀法提取蛋白质的实验操作。
二、实验原理牛奶中的主要蛋白质为酪蛋白,其含量约为35g/L。
酪蛋白是一种含磷蛋白质的混合物,具有等电点4.7。
在等电点时,酪蛋白的溶解度最低,因此可以通过调节牛奶的pH值至4.7,使酪蛋白沉淀出来。
随后,通过洗涤、离心等操作,可以得到纯净的酪蛋白。
三、实验材料与试剂1. 材料:新鲜牛奶2. 试剂:- 95%乙醇- 无水乙醚- 0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液- 精密pH试纸或酸度计- 离心机- 抽滤装置- 电炉- 烧杯- 温度计四、实验步骤1. 酪蛋白粗提- 将25mL新鲜牛奶加热至40℃。
- 在搅拌下慢慢加入预热至40℃的0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液25mL。
- 用精密pH试纸或酸度计调节pH值至4.7。
- 将上述悬浮液冷却至室温。
- 离心15分钟(3000r/min)。
- 弃去清液,收集沉淀物。
2. 酪蛋白纯化- 将收集到的沉淀物用水洗涤3次,离心10分钟,弃去上清液。
- 在沉淀中加入30mL乙醇,搅拌。
- 将悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
- 用乙醇-乙醚混合液清洗沉淀2次。
- 最后用乙醚清洗沉淀2次,抽干。
3. 干燥与称重- 将得到的酪蛋白沉淀物在电炉上低温烘干。
- 称量干燥后的酪蛋白,记录质量。
五、实验结果与分析1. 通过实验,成功从牛奶中提取出酪蛋白。
2. 干燥后的酪蛋白呈白色粉末状,无味无臭。
3. 实验过程中,通过调节pH值至4.7,使酪蛋白沉淀出来,验证了等电点沉淀法的有效性。
六、实验总结本次实验成功从牛奶中提取出酪蛋白,并对其进行了初步纯化。
通过实验,我们了解了酪蛋白的基本性质及其在牛奶中的存在形式,掌握了从牛奶中提取酪蛋白的原理和方法。
同时,本次实验也验证了等电点沉淀法的有效性,为后续相关研究提供了基础。
综合实验:从牛奶中分离乳脂、酪蛋白和乳糖一、引言牛奶约含有3.4%乳脂,经离心就可上浮,撇出乳脂层可加工奶油,剩余的即脱脂乳,可用于分离酪蛋白和乳糖。
牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白,含量约为35g/L。
酪蛋白在乳中是以酪蛋白酸钙-磷酸钙复合体胶粒存在,胶粒直径约为20~800 纳米,平均为100 纳米。
在酸或凝乳酶的作用下酪蛋白会沉淀,加工后可制得干酪或干酪素。
本实验利用加酸,当达到酪蛋白等电点pH=4.6 时,酪蛋白沉淀。
脱脂乳中除去酪蛋白后剩下的液体为乳清,在乳清中含有乳白蛋白和乳球蛋白,还有溶解状态的乳糖,乳中糖类的99.8%以上是乳糖,可通过浓缩、结晶制取乳糖。
二、实验材料和试剂1.新鲜牛奶。
2.试剂:10%醋酸,95%乙醇,乙醚,碳酸钙,5%醋酸铅溶液,10%氯化钠,0.5%碳酸钠,0.1mol/L,氢氧化钠,0.2%盐酸,饱和氢氧化钙溶液,米伦试剂。
米伦试剂的配制:将汞100g 溶于140ml(密度1.42)的浓硝酸中(在通风橱内进行)。
然后加两倍量的蒸馏水稀释。
三、实验步骤1. 从牛奶中分离乳脂及转变为奶油取20 mL新鲜牛奶,于普通生化离心机上3500rpm 离心5分钟,取出离心管后,小心将乳脂层与脱脂乳分离,将乳脂层冻结,然后回放到室温下,将要重新融化前,快速搅动使脂肪球膜破裂以及脂肪球膜蛋白变性,倾出释放出的少量水后,继续搅动形成油包水式的奶油。
称量后计算得率。
2. 从牛奶中分离酪蛋白将脱脂乳在恒温水浴中加热至40℃,边轻轻搅拌边慢慢加入10%醋酸溶液,使牛奶pH = 4. 7,放置冷却、澄清后,用尼龙布过滤或直接用玻璃棒挑出酪蛋白粗品。
滤液(乳清)留作乳糖的分离。
将酪蛋白粗品转入另一烧杯,加20ml蒸馏水,用玻棒充分搅拌,洗涤除去其中的水溶性杂质(如乳清蛋白,乳糖以及残留的缓冲溶液),离心后弃去上层液,加15ml乙醇,洗涤除去其中的磷脂,离心后弃去上层液,加15ml乙醚洗涤除去其中的脂肪, 离心后弃去上层液,待酪蛋白充分干燥后称量其重量,并计算酪蛋白的得率。
[精品]牛奶中酪蛋白和乳糖的分离和鉴定随着牛奶的广泛应用,对其中成分的研究越来越深入。
牛奶的主要成分包括蛋白质、乳糖、脂肪、微量元素等。
其中,蛋白质和乳糖是牛奶中的两个主要成分。
酪蛋白是牛奶中主要的蛋白质成分,而乳糖则是牛奶中独有的糖类成分。
本实验将介绍利用离心、沉淀、超滤和染色等技术,对牛奶中的酪蛋白和乳糖进行分离和鉴定的方法。
实验仪器:1. 离心机2. 沉淀管3. 超滤膜4. 热水浴5. 真空干燥装置6. 过滤纸7. 比色皿8. 比色计实验步骤:1. 样品制备取1 mL 牛奶放入离心管中,加入2 mL 85% 硫酸滴定至沉淀产生。
将沉淀离心5 min,弃去上清液,残留物称量并记录。
2. 酸解将沉淀物加入50 mL 的0.025 mol/L HCl 溶液中,放在水浴中煮沸10 min,冷却后过滤。
3. 超滤将过滤液倒入超滤装置中,以15000 rpm 的速度离心10 min,除去上清液。
4. 分离将上一步得到的膜筒用0.1 mol/L NaOH 溶液洗涤后插入新的容器中,加入适量纯水,以 5000 rpm 的速度离心10 min,除去洗涤液。
重复以上步骤,直到洗涤液 pH 值为7。
5. 紫外吸收分析取得样品过滤液后,比色皿中加入2 mL 样品和5 mL 乙醇,然后进行紫外吸收分析,记录吸收峰的波长。
结果分析:1. 酪蛋白的分离通过离心、沉淀和酸解等步骤,可将牛奶中的酪蛋白分离出来。
通过超滤和洗涤等步骤,可以得到纯的酪蛋白。
3. 酪蛋白和乳糖的鉴定通过紫外吸收分析,记录吸收峰的波长,可以鉴定出样品中酪蛋白和乳糖的含量。
总之,通过离心、沉淀、超滤和染色等技术,可以对牛奶中的酪蛋白和乳糖进行有效的分离和鉴定,提高对牛奶成分的认知。
实验五牛奶中酪蛋白的提取
一、实验目的
学习从牛奶中制备酪蛋白的方法
了解从牛奶中制取酪蛋白的原理
二、实验原理
牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白,含量约为3.5/100ml。
酪蛋白是含磷蛋白质的混合物,相对密度1.25~1.31,不溶于水、醇、有机溶剂,等电点为4.7利用等电点时溶解度最低的原理,将牛乳的PH调至4.7时,酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物,除去脂质杂质后便可得到纯的酪蛋白。
三、实验材料与仪器
纯牛奶、白醋、滤纸、被子、锅等
四、实验步骤
将250ml或200ml牛奶置于锅中,隔水水浴小火加热,不断搅拌,加热至沸腾时停止搅拌和加热。
在牛奶中加入少量盐,并慢慢加入白醋,并轻轻搅拌,观察到牛奶中开始有白色絮状沉淀出现后,停止搅拌和加醋,静置10min。
待上述悬浮液冷却至室温,用滤纸过滤,得到滤渣。
用水清洗滤渣3次,每次都过滤得滤渣。
滤渣再用白酒清洗3次,每次都过滤得滤渣。
将滤渣摊在滤纸上风干,得酪蛋白制品
称重并品尝酪蛋白制品
五、实验结果记录与分析
酪蛋白(g/100ml)=(酪蛋白(g)/200ml或250ml )*100
得率=测得含量/理论含量*100%
酪蛋白=(13.3g/200ml)*100=6.65 g/ml
结论:闻起来有较大的奶香味和酒精味。
在过滤的过程中,粘在滤纸上跟纱布,抠不下来,所以数据应该会偏小了。