提取牛乳中的酪蛋白

实验五牛奶中酪蛋白的提取
一、实验目的
学习从牛奶中制备酪蛋白的方法
了解从牛奶中制取酪蛋白的原理
二、实验原理
牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为3.5/100ml。

酪蛋白是含磷蛋白质的混合物，相对密度1.25~1.31，不溶于水、醇、有机溶剂，等电点为4.7利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。

用乙醇洗涤沉淀物，除去脂质杂质后便可得到纯的酪蛋白。

三、实验材料与仪器
纯牛奶、白醋、滤纸、被子、锅等
四、实验步骤
将250ml或200ml牛奶置于锅中，隔水水浴小火加热，不断搅拌，加热至沸腾时停止搅拌和加热。

在牛奶中加入少量盐，并慢慢加入白醋，并轻轻搅拌，观察到牛奶中开始有白色絮状沉淀出现后，停止搅拌和加醋，静置10min。

待上述悬浮液冷却至室温，用滤纸过滤，得到滤渣。

用水清洗滤渣3次，每次都过滤得滤渣。

滤渣再用白酒清洗3次，每次都过滤得滤渣。

将滤渣摊在滤纸上风干，得酪蛋白制品
称重并品尝酪蛋白制品
五、实验结果记录与分析
酪蛋白（g/100ml）=（酪蛋白（g）/200ml或250ml ）*100
得率=测得含量/理论含量*100%
酪蛋白=（13.3g/200ml）*100=6.65 g/ml
结论：闻起来有较大的奶香味和酒精味。

在过滤的过程中，粘在滤纸上跟纱布，抠不下来，所以数据应该会偏小了。

竭诚为您提供优质文档/双击可除酪蛋白的制备实验报告篇一：酪蛋白的制备----生化实验酪蛋白的制备一、目的1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。

2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。

二、原理牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。

酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。

利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的ph调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。

用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。

三、材料、试剂与器具（一）材料新鲜牛奶（一）试剂1、95%乙醇1200mL2、无水乙醚1200mL3、0.2mol/Lph4.7醋酸——醋酸钠缓冲液300ml先配A液与b液A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称naAc·3h2o54.44g，定容至2000ml。

b液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000ml。

取A液1770ml，b液1230ml混合即得ph4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml。

4、乙醇——乙醚混合液乙醇：乙醚=1：1（V/V）（二）器具1、离心机2、抽滤装置3、精密ph试纸或酸度计4、电炉5、烧杯6、温度计四、操作步骤（一）酪蛋白的粗提100mL牛奶加热至40℃。

在搅拌下慢慢加入预热至40℃、ph4.7的醋酸缓冲液100mL.用精密ph试纸或酸度计调ph至4.7。

将上述悬浮液冷却至室温。

离心15分钟（3000r/min）。

弃去清液，得酪蛋白粗制品。

（二）酪蛋白的纯化1、用水洗涤沉淀3次，离心10分钟（3000r/min），弃去上清液。

2、在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。

用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。

最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。

3、将沉淀摊开在表面上，风干；得酪蛋白纯品。

（三）准确称重，计算含量和得率。

含量：酪蛋白g/100mL牛乳（g%）式中理论含量为3.5g/100mL牛乳。

五、注意事项1、由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋白质，故调节牛奶液的等电点一定要准确。

酪蛋白的制备【实验目的】1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。

2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。

【实验原理】牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。

酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。

利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。

用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。

【材料、试剂与器具】（一）材料新鲜牛奶（一）试剂1、95%乙醇 1 200mL2、无水乙醚 1 200mL3、0.2mol/L pH4.7醋酸——醋酸钠缓冲液 300ml先配A液与B液A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称NaAC·3H2O 54.44g，定容至2000ml。

B液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000ml。

取A液1770ml，B液1230ml混合即得Ph4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml。

4、乙醇——乙醚混合液乙醇：乙醚=1 ：1（V/V）（二）器具1、离心机2、抽滤装置3、精密pH 试纸或酸度计4、 电炉5、烧杯6、温度计【操作步骤】（一）酪蛋白的粗提100mL 牛奶加热至40℃。

在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液100mL.用精密pH 试纸或酸度计调pH 至4.7。

将上述悬浮液冷却至室温。

离心15分钟（3000 r /min ）。

弃去清液，得酪蛋白粗制品。

（二）酪蛋白的纯化1、用水洗涤沉淀 3次，离心10分钟（3 000r/min ），弃去上清液。

2、在沉淀中加入30mL 乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。

用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。

最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。

3、将沉淀摊开在表面 上，风干；得酪蛋白纯品。

（三）准确称重，计算含量和得率。

含量：酪蛋白g/100 mL 牛乳（g%）100% 测得含量得率:理论含量式中理论含量为3.5g/100mL 牛乳。

【注意事项】1、由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋白质，故调节牛奶液的等电点一定要准确。

从牛奶中提取酪蛋白实验报告实验目的：通过牛奶中的酪蛋白提取实验，学习酪蛋白的结构、性质和提取方法，掌握酪蛋白的分离技术和纯化技术，进一步了解蛋白质的基本研究方法。

实验原理：酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质成分，它具有重要的营养和功能作用。

酪蛋白是一种具有多种构象和功能的复合蛋白质，在水溶液中可形成多种不同类型的聚集体，如微胶粒、聚集和凝胶，这些聚集类型与酪蛋白的结构和功能密切相关。

酪蛋白具有一定的疏水性，分子内具有四个疏水和一个亲水的疏水环和亲水链结构，酪蛋白还含有大量的氨基酸残基，其中包括5%左右的带电氨基酸。

牛奶中的酪蛋白可以通过离心、酸沉淀、盐析和凝胶过滤等方法进行分离和纯化。

酸沉淀法是目前常用的分离和提取方法，其原理是在酸性条件下，酪蛋白分子失去电荷平衡，发生凝固，形成凝胶状物，从而与其他物质分离。

实验步骤：1、准备工作(1) 将所有试剂和设备准备好，并洗涤干净。

(2) 将牛奶样品加热至80℃，进行杀菌处理。

2、酸沉淀法提取酪蛋白(1) 取适量的牛奶样品置于容器中，加入适量的盐酸调节至pH值为4.6，搅拌均匀。

(2) 加入同等体积的乙醇，混合均匀。

(3) 离心分离出沉淀，用纯净水洗涤数次，使沉淀中的酸性物质除去。

(4) 将沉淀转移到干燥皿，放置于低温干燥箱中干燥。

(5) 称取干燥后的酪蛋白样品重量，计算得到收率。

3、检测酪蛋白的含量和纯度(1) 构建标准曲线，按照酪蛋白样品体积一定比例浓度溶液进行稀释，分别取10μl、20μl、30μl、40μl、50μl的样品，加入PBS缓冲液中，浓度从高到低依次用Bradford 法进行检测吸光度，并通过标准曲线计算出待测样品的酪蛋白含量。

(2) 通过SDS-PAGE方法检测酪蛋白的纯度和电泳图谱。

将待测样品和已知浓度的酪蛋白标准品一同进行SDS-PAGE电泳，经过染色和脱色处理后，观察分离出的蛋白条带，利用比色、图像分析软件等工具进行定量测定，并计算出待测样品中酪蛋白的纯度和分子大小。

实验题目：牛奶中酪蛋白的提取与分析实验材料：牛奶小组成员：实验时间：一：实验题目：牛奶中酪蛋白的提取与分析二：报告撰写者三、小组成员实验仪器 温度计、布氏漏斗（*）、pH 试纸（*）、抽滤瓶（*）水浴锅、烧杯、量筒、表面皿（*）、电子天平（*）、2个1000ml 的容量瓶（*）、2张醋酸纤维薄膜（2cm ×8cm 厚度120nm ）成品（*）、培养皿9—10cm （*）、毛细管（*）、尺子、铅笔、单面刀片（*）、镊子、普通滤纸（*）、电泳槽、玻璃板8cm ×12cm （*）、752型分光光度计（*）、细布（*）0.5ml 、1.0ml 、2.0ml 、5.0ml 的移液管、试管、试管架、 四、实验材料牛奶（蒙牛特仑苏和伊利金典） 五、实验试剂 特仑苏400ml 、金典200ml 、1.66g 巴比妥（*）、12.76g 巴比妥钠（*）、0.5g 氨基黑10B （*）、50ml 甲醇AR （*）、100ml 冰醋酸AR （*） 、95%的乙醇250ml （*)、95%的乙醚100ml （*）、0.2mol/L 的乙酸100ml （*）、0.2mol/L 的乙酸钠100ml （*）、25g 氢氧化钠固体（*）标准酪蛋白、15mg 五水硫酸铜（*）、60mg 酒石酸钾钠（*） 所需试剂配制方法：乙醇乙醚混合液的配制： 10ml95%的乙醇10ml95%的乙醚乙醇钠缓冲液的配制： 0.2mol/L 的乙酸51ml0.2mol/L 的乙酸钠49ml 巴比妥钠缓冲液的配制： 巴比妥1.66g巴比妥钠12.76g染色液的配制： 0.5g 氨基黑10B 50ml 甲醇AR 10ml 冰醋酸AR 漂洗液的配制： 45ml95%乙醇AR 5ml 冰醋酸AR 蒸馏水透明液的配制： 25ml 的冰醋酸AR 75ml 的无水乙醇AR0.05mol/L 氢氧化钠溶液的配制： 16g 的氢氧化钠固体定容至1000ml 10%氢氧化钠溶液的配制： 5g 的氢氧化钠固体定容至50ml 双缩脲试剂的配制：15mg 五水硫酸铜60mg 酒石酸钾钠标准酪蛋白溶液A 的配制（10mg/ml ）： 用0.05mol/L 氢氧化钠溶液配制10ml从特仑苏和金典中提取的酪蛋白样品液1、2的配制（2-9mg/ml ）：配制巴比妥钠缓冲液（pH8.6,0.06mol./L ）,将上述二者混合后定容于1000ml+40ml 蒸馏水，混匀既得染色液配制乙醇乙醚1:1的混合液配制pH4.6的乙酸钠缓冲液（0.2mol/l ）混匀得染色液混匀得透明液溶于5ml 蒸馏水，在搅拌情况下，加入10%氢氧化钠溶液3ml ，用蒸馏水稀释到10ml ，用棕色瓶避光保存用0.05mol/L氢氧化钠溶液配制10ml标准酪蛋白溶液B的配制（1500μg/ml）：用0.05mol/L氢氧化钠溶液配制从特仑苏和金典中提取的酪蛋白样品液3、4的配制（50-1500μg /ml）：用0.05mol/L氢氧化钠溶液配制七、实验目的1.掌握从牛奶中提取酪蛋白的方法2.了解蛋白质分离纯化的基本办法3.学习电泳的基本原理及掌握醋酸纤维素薄膜电泳分离酪蛋白的具体操作4.掌握双缩脲法和紫外吸收法测定蛋白质含量的原理及操作方法并比较两种方法5.熟悉分光光度计的原理和操作6.比较特仑苏与金典中的酪蛋白含量八、实验原理酪蛋白在其等电点时静电荷为零，同种电荷的相互排斥作用消失，溶解度很低，利用这一性质，将牛乳调节到PH4.6，酪蛋白就可以从牛乳中分离出来。

实验二从牛奶中提取酪蛋白一、实验目的要求1.学习从牛乳中制备酪蛋白的方法。

2.了解从牛奶中制取酪蛋白的原理。

二、实验原理牛乳中的主要蛋白质是酪蛋白，含量约为3.5g/100ml。

酪蛋白是含磷蛋白质的混合物，相对密度1.25-1.31，不溶于水、醇、有机溶剂，等电点为4.7.利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH值调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。

用乙醇洗涤沉淀物，除去脂质杂质后便可得到纯的酪蛋白。

三、原料与器材鲜牛奶、恒温水浴锅、台式离心机、抽滤装置。

四、试剂1.95%乙醇2.无水乙醚3.0.2mol/l的醋酸-醋酸钠缓冲液A液（0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液）：称取NaAc.3H2O54.44g，定容至2000ml。

B液（0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液）：称取优级纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g，定容至1000ml。

取A液1770ml与B液1230ml混合即得pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3000ml。

4.乙醇-乙醚混合液乙醇：乙醚=1：1（体积比）。

五、操作步骤1.将5ml牛奶置试管或小烧杯中，在水浴中加热至40℃，在搅拌下漫漫加入预热至40℃（应注意两种液体都应先预热至40℃再用），pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液5ml，用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7(用1%NaOH或10%醋酸溶液进行调整)。

观察牛奶开始有絮状沉淀出现后，保温一定时间使沉淀完全。

将上述悬浮液冷却至室温。

离心分离8min（8000r/min）或15min（2000r/min），弃去上清液，得到酪蛋白粗制品。

2.用蒸馏水洗涤沉淀3次（洗涤时将沉淀颗粒用干净吸管吹开或用毛细管的封闭一端搅开，充分洗涤），离心5min（12000r/min）或10min（3000r/min），弃去上清液。

3.在沉淀中加入3ml95%的乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。

用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次，最后用乙醚洗涤沉淀2次，抽干。

牛奶中酪蛋白的分离
一、引言
牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。

酪蛋白在乳中是以酪蛋白酸钙-磷酸钙复合体胶粒存在，胶粒直径约为20～800纳米，平均为100纳米。

在酸或凝乳酶的作用下酪蛋白会沉淀，加工后可制得干酪或干酪素。

本实验利用加酸，当达到酪蛋白等电点PH=4.7-4.8时，酪蛋白沉淀。

二、实验材料和试剂
1.脱脂乳或脱脂奶粉。

2.器材：（1）台式离心机；（2）精密pH试纸或酸度计；（4）表面皿；（5）纱布或滤纸；（6）毛细管或细口吸管；（7）离心管（10mL，或与离心机配套）若干，本实验中用10mL离心管约5个/小组。

三、实验步骤
1. 从牛奶中分离酪蛋白
在烧杯中加入2g脱脂奶粉（纯牛奶水分含量87-88%），再加入40℃，PH=4.7的醋酸-醋酸钠缓冲溶液(0.2mol/L或1mol/L)，用PH精密试纸检验液体的PH值，调至PH4.8。

静置冷却至室温，倾去上层清液，剩下的悬浮液分别装入两支离心试管中，用转速为3000转/分离心分离3～5分钟，倾出上层清液，（合并于上一清液中），得酪蛋白粗品。

2. 酪蛋白含量的测定
离心管中加入5mL蒸馏水，用玻棒充分搅拌，洗涤除去其中的水溶性杂质（如乳清蛋白，乳糖以及残留的缓冲溶液），离心后弃去上层液，再用蒸馏水洗一次。

于试管中加入5mL95%乙醇，充分搅拌，离心后弃去乙醇溶液，用乙醇洗涤主要是除去磷脂类物质。

最后再用5mL 乙醚以同样方法洗涤，以除去脂肪类物质。

将酪蛋白沉淀物凉干，称重、并计算得率（酪蛋白约占牛奶蛋白80%）。

实验二从牛奶中提取酪蛋白一、实验目的要求1.学习从牛乳中制备酪蛋白的方法。

2.了解从牛奶中制取酪蛋白的原理。

二、实验原理牛乳中的主要蛋白质是酪蛋白，含量约为3.5g/100ml。

酪蛋白是含磷蛋白质的混合物，相对密度1.25-1.31，不溶于水、醇、有机溶剂，等电点为4.7.利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH值调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。

用乙醇洗涤沉淀物，除去脂质杂质后便可得到纯的酪蛋白。

三、原料与器材鲜牛奶、恒温水浴锅、台式离心机、抽滤装置。

四、试剂1.95%乙醇2.无水乙醚3.0.2mol/l的醋酸-醋酸钠缓冲液A液（0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液）：称取NaAc.3H2O54.44g，定容至2000ml。

B液（0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液）：称取优级纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g，定容至1000ml。

取A液1770ml与B液1230ml混合即得pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3000ml。

4.乙醇-乙醚混合液乙醇：乙醚=1：1（体积比）。

五、操作步骤1.将5ml牛奶置试管或小烧杯中，在水浴中加热至40℃，在搅拌下漫漫加入预热至40℃（应注意两种液体都应先预热至40℃再用），pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液5ml，用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7(用1%NaOH或10%醋酸溶液进行调整)。

观察牛奶开始有絮状沉淀出现后，保温一定时间使沉淀完全。

将上述悬浮液冷却至室温。

离心分离8min（8000r/min）或15min（2000r/min），弃去上清液，得到酪蛋白粗制品。

2.用蒸馏水洗涤沉淀3次（洗涤时将沉淀颗粒用干净吸管吹开或用毛细管的封闭一端搅开，充分洗涤），离心5min（12000r/min）或10min（3000r/min），弃去上清液。

3.在沉淀中加入3ml95%的乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。

用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次，最后用乙醚洗涤沉淀2次，抽干。

酪蛋白的制备牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。

酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。

材料：新鲜牛奶试剂：95%乙醇、无水乙醚、0.2mol/L pH=4.7醋酸-醋酸钠缓冲液0.2mol/L pH=4.7醋酸-醋酸钠缓冲液配置A：0.2mol/L醋酸钠溶液，称量醋酸钠54.44g，定容至2000mlB：0.2mol/L醋酸溶液，称量纯醋酸12.0g，定容至1000ml取A液1770ml，B液1230ml混合即得pH=4.7醋酸-醋酸钠缓冲液3000ml 乙醇乙醚混合液：95%乙醇：无水乙醚=1：1（V/V）器具：离心机、抽滤装置、精密pH试纸、电炉、烧杯、温度计、酸度计操作步骤：（一）酪蛋白的粗提10mL牛奶加热至40℃。

在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液10mL.用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。

将上述悬浮液冷却至室温。

离心8-10分钟(3500-4000 r /min)。

弃去清液，得酩蛋白粗制品。

(二）酪蛋白的纯化1、用水洗涤沉淀3次，离心5分钟（3500-4000 r /min)，弃去上清液。

2、在沉淀中加入20mL 95%乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。

用乙醇一乙醚混合液洗沉淀2次。

最后用无水乙醚洗沉淀2次，抽干。

3、将沉淀摊开在表面皿上，风干;得酪蛋白纯品。

(三）准确称重，计算含量和得率。

含量=酪蛋白g/10mL牛乳（g%)得率=（测得含量/理论含量〕X100%式中理论含量为3.5g/100mL牛乳。

酪蛋白的制备实验报告酪蛋白的制备实验报告一、引言酪蛋白是一种重要的蛋白质，在食品工业、医药领域和生物科学研究中都具有广泛的应用价值。

本实验旨在通过酪蛋白的制备过程，了解其制备原理和方法，并探究实验条件对酪蛋白产率的影响。

二、实验材料与方法1. 实验材料：- 牛乳：新鲜牛乳1000ml- 醋酸：纯醋酸100ml- 酪蛋白试剂：酪蛋白提取试剂盒2. 实验方法：- 步骤一：将1000ml牛乳倒入锅中，加热至80℃，保持温度10分钟。

- 步骤二：将100ml纯醋酸加入牛乳中，搅拌均匀。

- 步骤三：将混合液静置20分钟，待凝块形成。

- 步骤四：用纱布过滤凝块，收集蛋白质沉淀。

- 步骤五：将沉淀与酪蛋白试剂按比例混合，制备酪蛋白溶液。

三、实验结果与分析1. 实验结果：- 经过实验操作，成功制备了酪蛋白溶液。

- 蛋白质沉淀的收率为40%。

2. 实验分析：- 在实验过程中，加热牛乳能够破坏脂肪膜，使蛋白质易于析出。

- 醋酸的加入能够改变牛乳的酸碱度，促使酪蛋白凝聚成块。

- 过滤凝块时使用纱布能够有效分离酪蛋白沉淀与乳清。

四、实验讨论1. 实验条件对酪蛋白产率的影响：- 温度：在80℃下加热牛乳能够促进蛋白质的析出，但过高的温度会导致蛋白质变性，影响产率。

- 酸度：适量的醋酸能够使酪蛋白凝聚成块，但过多的醋酸会使酪蛋白溶解度增加，降低产率。

- 时间：静置时间过短，酪蛋白凝块未充分形成；静置时间过长，酪蛋白易被细菌污染，影响产率。

2. 酪蛋白的应用价值：- 食品工业：酪蛋白可用于制作乳制品、奶酪、酸奶等，增加产品的营养价值和口感。

- 医药领域：酪蛋白具有抗菌、抗炎、抗氧化等生物活性，可用于药物载体和医用材料的制备。

- 生物科学研究：酪蛋白在细胞培养、基因工程和生物学实验中具有重要作用，可用于细胞培养基的配方和蛋白质分离纯化。

五、实验总结通过本次实验，我们成功制备了酪蛋白溶液，并了解了酪蛋白的制备原理和方法。

实验条件对酪蛋白产率有一定影响，需要在适宜的温度、酸度和时间下进行操作。

实验二牛乳中酪蛋白的制备（等电沉淀法）171850044钱诗晨 实验目的1.学习从牛乳中制备酪蛋白的方法2.了解从牛乳中制备酪蛋白的原理3.验证蛋白质的双缩脲反应性质4.学习和掌握蛋白质双缩脲反应的原理和方法实验原理（一）牛乳成分及酪蛋白性质牛乳中含有碳水化合物、脂类蛋白质、维生素、微量元素和水。

其中蛋白质的种类有酪蛋白和乳清蛋白。

乳清蛋白水合能力强，分散性高，在牛乳中呈高分子状态；酪蛋白含量较高，为80%，白色至淡黄色，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。

酪蛋白是等电点为PH4.8的两性蛋白质，对酸敏感，PH较低时会沉淀。

用途有食品如牛奶、奶粉、奶酪；医药保健如酪蛋白磷酸肽（CPP），其他行业如制备颜料等。

（二）测定方法测定蛋白质常用的几种方法有：凯氏定氮法（蛋白质测定的国标规定方法）双缩脲法（Biuret法）Folin-酚试剂法（Lowry法）紫外吸收法、考马斯亮蓝法（Bradford法）本次实验采用了双缩脲法：蛋白质含有两个以上的肽键，因此有双缩脲反应。

在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫色配合物，在540nm处有最大吸收。

在一定浓度的范围内，蛋白质浓度与双缩脲反应所呈的颜色深浅成正比，可用比色法定量测定。

实验试剂1.0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液2.醇醚混合液3.无水乙醚4.市售牛奶5.标准酪蛋白溶液6.0.9%NaCl7.双缩脲试剂8.0.05mol/L NaOH实验操作（一）制备酪蛋白1.称取20mg牛奶样品盛于100ml烧杯中，水浴加热至40℃。

在搅拌下慢慢加入预热至40℃的醋酸钠缓冲液20ml，用冰醋酸调节溶液pH至4.7（用精密pH试纸3.8-5.4检测）。

2.将上述悬浮液冷却至室温，转移到100ml离心管中，4000r/min离心5min，弃去上清液，沉淀为酪蛋白粗品。

3.用蒸馏水洗涤沉淀3次（每次20ml），3000r/min离心5min，弃去上清液。

在沉淀中加入20ml95%乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移到布氏漏斗中进行抽滤。

实训等电点沉淀法分离牛乳中的酪蛋白［任务描述］蛋白质是一种亲水胶体，在水溶液中蛋白质分子表面形成一个水化层。

另外，蛋白质又是一种两性离子，在一定pH溶液能够维持一个稳定的状态。

但是调节蛋白质溶液的pH值至等电点时，蛋白质会因失去电荷而变得不稳定，此时若再加脱水剂或加热，水化层被破坏，蛋白质分子就相互凝聚而析出。

等电点沉淀法主要利用两性电解质分子在等电点时溶解度最低的原理，而多种两性电解质具有不同等电点而进行分离的一种方法。

牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白含量约为35g/L。

酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。

将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。

用乙醇洗涤沉淀，除去脂类杂质后便可得到较纯的酪蛋白。

但单独利用等电点沉淀法来分离生化产品效果并不太理想，因为即使在等电点时，有些两性物质仍有一定的溶解度，并不是所有的蛋白质在等电点时都能沉淀下来，特别是同一类两性物质的等电点十分接近时。

生产中常与有机溶剂沉淀法、盐析法并用，这样沉淀的效果较好。

本次实训任务的目的是使学生学会运用等电点沉淀法制备酪蛋白，从而掌握等电点沉淀操作方法；加深对蛋白质等电点性质的理解。

［任务实施］一、准备工作1. 建立工作小组，制定工作计划，确定具体任务，任务分工到个人，并记录到工作表。

2. 收集等电点沉淀法工作中必须信息，掌握相关知识及操作要点，与指导教师共同确定出一种最佳的工作方案。

3.完成任务单中实际操作前的各项准备工作。

（1）材料准备新鲜牛乳。

（2）试剂95％乙醇、乙醚、0.2mol/L醋酸溶液、0.2mol/L pH 4.7醋酸-醋酸钠缓冲液（配制方法如下：先分别配制A 液和B 液：A 液（0.2mol/L醋酸O）27.22g溶于蒸馏水中，定容至1000mL，钠溶液）称取分析纯醋酸钠（NaAc·3H2B 液（0.2mol/L醋酸溶液）称取分析纯冰醋酸（含量大于99.8％）12.0 g溶于蒸馏水中，定容至1000mL，取A液885 mL和B液615mL混合，即得pH 4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液1500 mL）。

一、实验目的1、掌握一种提取蛋白的方法。

2、掌握一种检测牛乳质量的方法。

二、实验原理酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质，约占乳蛋白的80~82%，酪蛋白不是单一的蛋白质，是一类含磷的复合蛋白质混合物，以一磷酸酯键与苏氨酸及丝氨酸的羟基相结合。

它还含有胱氨酸和蛋氨酸这两种含硫氨基酸，但不含半胱氨酸。

它在牛乳中的含量约为35g/L，比较稳定，利用这一性质，可以检测牛乳中是否掺假。

酪蛋白在其等电点时由于静电荷为零，同种电荷间的排斥作用消失，溶解度很低，利用这一性质，经牛乳调到pH4.6，酪蛋白就从牛乳中分离出来。

酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中将脂类杂质除去。

三、仪器和试剂仪器：温度计、布氏漏斗、pH 试纸、抽滤瓶、电炉、烧杯、量筒、表面皿、天平等。

试剂：1. 95%乙醇、乙醚2. pH4.6乙酸钠缓冲液0.2mol/L3. 乙醇、乙醚混合液：乙醇∶乙醚=1∶1（体积比）4. 市售牛乳四、实验步骤1.酪蛋白等电点沉淀将100ml牛乳放到500ml烧杯中，加热至40℃左右的乙酸钠缓冲液，直到pH达4.6左右，用pH试纸或酸度计调试。

将上述悬浮液冷却至室温，然后放置5min，用细布过滤，收集沉淀。

2.除脂类杂质将上述沉淀用少量水洗数次，然后悬浮于30ml95%的乙醇中。

将此悬浮液倾于布氏漏斗中，抽滤除去乙醇溶液，再倒入乙醇—乙醚混合液洗涤沉淀两次，最后再用一米洗涤沉淀两次，抽干。

将沉淀从布氏漏斗中移去，在表面皿上摊开以除去乙醚，干燥后得到的是酪蛋白纯品。

准确称重后，计算出每100ml牛乳所制备出的酪蛋白数量（g%），并与理论产量（3.5g%）相比较，求出实际获得百分率。

一、实验目的酶是植物体内具有催化作用的蛋白质，植物体内的生化反应，一般都是在酶的作用下进行的，没有酶的催化反应，植物的生命也就停止了，因此对酶的研究是阐明生命现象本质中十分重要的部分。

为要研究酶首先要将酶从组织中提取出来，加以分离、纯化，不同的研究目的对酶制剂的纯度要求也不相同，有些工作只需要粗的酶制剂即可，而有些工作则要求较纯的酶制剂，需根据不同情况区别对待。