红细胞凝集抑制试验
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红细胞凝集实验报告
实验目的:
通过红细胞凝集实验的方法,检测实验样本中是否存在抗体-抗原反应。
实验原理:
红细胞凝集实验是一种常见的检测血清中抗体反应的试验方法。
该方法是通过在搅拌下,将患者血清和红细胞混合在一起,观察
是否发生凝集反应,从而判断是否存在抗体-抗原反应。
实验步骤:
1.将待检血清和已知类型抗原分别加入两个试管中。
2.分别向两个试管中加入相同数量的红细胞。
3.稍微摇晃试管,混合均匀。
4.将两个试管分别标记为阳性和阴性对照。
5.观察抗体-抗原反应是否发生,根据红细胞凝集度评分。
实验结果:
本次实验中,样本为患者血清。
经过对比阳性和阴性对照的反应,观察到样本与已知类型抗原之间出现凝集现象。
根据红细胞凝集度评分,得出本次实验的凝集度为2+。
实验结论:
本次红细胞凝集实验结果显示,样本中存在抗体-抗原反应。
凝集度为2+,提示患者血清中可能存在病毒或细菌等病原体感染。
建议进行进一步检测并针对性治疗。
附注:由于红细胞凝集实验存在一定假阳性或假阴性数据,建议在诊断前综合考虑患者症状、体征以及其它检测指标等综合分析。
红细胞凝集试验(HA)与红细胞凝集抑制试验(HI)
红细胞凝集试验(HA)和红细胞凝集抑制试验(HI)是两种常见的检验手段,用于检测血液中是否存在抗体,从而诊断某些疾病或病原体感染。
红细胞凝集试验(HA)
红细胞凝集试验(HA)是一种检测抗体与抗原反应的常规方法。
在这个测试中,医生或实验室技术人员将被测血浆放入红细胞凝集剂中,然后与已知抗原混合,比如病毒、细菌或其他病原体。
如果血浆中含有与已知抗原相应的抗体,那么红细胞就会和抗原结合在一起形成凝集。
如果血浆中没有抗体,红细胞就会分散在凝集剂中。
HA 可以检测出许多病原体的抗体,包括流感病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、单纯疱疹病毒、巨细胞病毒和风疹病毒等。
红细胞凝集抑制试验(HI)
红细胞凝集抑制试验(HI)也是一种检测抗体和抗原反应的常规方法。
在这个测试中,被测血液中的抗体与已知抗原结合,形成抗原-抗体复合物。
然后,在复合物中加入未和抗原混合的红细胞,如果血浆中含有抗体,它们会与复合物结合,使得红细胞不会凝集。
如果血液中没有相应的抗体,红细胞就会在复合物中凝集。
与HA相比,HI适用于检测一些病原体,比如肝炎病毒和流感病毒等,但不是所有病原体都适合使用HI进行检测。
红细胞凝集试验(HA)和红细胞凝集抑制试验(HI)是检测抗体和抗原反应的两种常见方法。
这两种技术可用于诊断许多疾病和病原体感染,但需要在临床实验室或医疗机构进行,由专业人员执行。
尽管这些测试非常有用和重要,但仍需要与其他诊断工具和检查方法相结合,以确保诊断的准确性和病人的治疗。
红细胞凝集试验及红细胞凝集抑制试验1.红细胞凝集试验 采用50孔板或试管法按表1,若采用96孔微量板法按表2进行,用生理盐水将待检抗原按术式稀释成不同倍数,加入1%鸡红细胞悬液。
将50孔板或试管前后左右摇匀;将96孔微量板在振荡器上摇匀,置于20~30℃,20~40分钟后(微量板法时间短, 15~30分钟)判定结果,使50%红细胞凝集的最高稀释度,作为判定终点。
表1 50孔板或试管法测定凝集价 单位:ml孔或管号对照1 2 3 4 5 6 7 8…… 血凝素稀释倍数 10 20 40 80 160 320 640 1280…… 0.5生理盐水0.9 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5……} } } } } } } } 弃0.5待检抗原 0.1 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 1%鸡红细胞悬液0.50.50.50.50.50.50.50.50.5表2 96孔微量板法测定凝集价 单位:μl孔号对照1 2 3 4 5 6 7 8...... 稀释倍数 2 4 8 16 32 64 128 256 (25)生理盐水25 25 25 25 25 25 25 25…… } } } } } } } } 弃25 待检抗原 25 25 25 25 25 25 25 25 1%鸡红细胞悬液2525252525252525252.红细胞凝集抑制试验 2.1血凝素凝集价测定 50孔板或试管法按表3,若采用96孔微量板法按表4进行。
表3 50孔板或试管法测定凝集价 单位:ml孔或管号对照1 234567 8……血凝素稀释倍数5 10 20 40 80 160 320 640……0.25生理盐水0.4 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25……}} } } } } } } 弃0.25血凝素 0.1 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.251%鸡红细胞悬液 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.250.25 0.25 生理盐水0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.250.25 0.25表4 96孔微量板法测定凝集价 单位:μl孔号对照1 2 3 4 5 6 7 8…… 稀释倍数 2 4 8 16 32 64 128 256……25生理盐水25 25 25 25 25 25 25 25……血凝素 25 25 25 25 25 25 25 25 1%鸡红细胞悬液 25 25 25 25 25 25 25 25 25 生理盐水252525252525 2525252.2.1 4单位抗原工作液配制 选用上述2.1项抗原进行。
血凝抑制试验结果判断 [血凝血凝抑制试验说明书]鸡新城疫血凝与血凝抑制实验鸡新城疫血凝(ha)及血凝抑制(h1)试验基本原理:许多病毒表面具血凝素,具有凝集某些动物或人红细胞的特性,称为血凝现象,可用于鉴定病毒。
血凝现象可以被特异性抗体所抑制,称为血凝抑制现象,利用这种特性可进行血清学试验,称为血凝抑制试验。
器材及试剂:待检病毒:鸡新城疫病毒鸡胚尿囊液;待检血清:抗鸡新城疫病病毒阳性血清;生理盐水/pbs、1%鸡红细胞、96孔v形微量血凝板、加样器等。
实验步骤pbs的配制:1%鸡红细胞的配制:(一)血凝试验(ha)取96孔板,按以下步骤操作:1、第一排1-12孔各加生理盐水50ul,第二排1-12孔加生理盐水50ul为红细胞对照;2、吸50ul病毒液于第一排第1孔,混匀后取50ul至第2孔,依次稀释至第12孔,弃去50ul,各孔经倍比稀释后稀释度依次为2-1~2-12。
3、第一排1-12孔及第二排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul,微型震荡器震荡2min混匀。
4、室温静置10-30分,观察结果(见下表)。
5、结果判定:红细胞对照组红细胞完全沉降,以试验排中能使等量红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数,作为病毒的血凝价,即hi效价,用2n表示。
(二)四单位检测:(三)血凝抑制试验(hi)取一96孔板,按以下步骤操作:1、4个单位抗原的制备:按ha试验测出的病毒血凝价除以4即为4个单位血凝素的稀释度。
2、待检血清的稀释:第一、二、三排1-12孔各加生理盐水50ul,于第一排第1孔中加入50ul待检血清,反复吹吸3-5次混匀后,取50ul至第2孔混匀,吸取50ul至第3孔,依次稀释至第12孔,弃去50ul,经倍比稀释,血清的稀释倍数为21~212。
3、第一、二排1-12孔各加4个单位血凝素50ul,微量震荡器震荡2min混匀;4、室温静置20min;5、第一、二、三排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul,微量震荡器震荡2min混匀混匀。
红细胞凝集试验(HA)与红细胞凝集抑制试验(HI)用疫苗按一定免疫程序进行免疫接种是控制鸡病流行的主要途径之一,这种观点已被广大养殖户接受并引起足够重视。
但鸡群免疫抗体的产生及维持时间受到鸡群免疫应答能力、所用疫苗种类、免疫方法、免疫次数、疫病流行状况等方面的影响,良好的免疫接种不等于鸡群能够产生良好的保护力。
因而通过对鸡群进行抗体监测,及时检查鸡群的免疫状态、疫苗使用效果,为制定合理的免疫程序提供依据就显得非常重要。
通过对广大养殖户的大量调查发现,由于缺乏有效的监测手段,养殖户普遍存在盲目免疫的现象。
因此,建立合理的抗体监测制度,开展免疫抗体监测工作,已经成为我们当前养鸡生产中急需开展的一项重要工作。
下面将抗体监测所需设备及监测过程向大家做一说明。
一、实验用设备:1、离心机 1台*(3000转离心红细胞)2、冰箱 1台*(存放抗原)3、振荡器 1台*(振荡96孔V型板)4、抗原新城疫(ND)、减蛋(EDS)、流感(AI)抗原,从正规厂家进。
5、96孔V型板稀释血清清洗后可重复使用6、八道移液器 1把(5-50微升稀释血清)7、吸头和八道移液器配套使用,清洗后重复使用)8、积液槽配制4个单位抗原及盛放生理盐水加样用9、一次性采血管采血用10、2毫升注射器采血用11、红细胞非免疫鸡心脏采血或免疫鸡也可,但需离心5次后使用。
12、柠檬酸三钠配制3.8%抗凝剂用13、重铬酸钾配制清洁液用14、硫酸配制清洁液用15、吸管 1毫升、10毫升16、吸耳球和吸管配套使用17、针头 9*13(采雏鸡)、9*25(采大鸡)18、蒸馏水当地买。
清洗96孔V型板、吸头用19、10毫升离心管离心红细胞用(塑料制)20、生理盐水做血清稀释液用、配制4单位抗原二、实验前的准备:1.抗原:从指定厂家购买稳定浓缩抗原。
2.抗凝剂的配制:用天平称量3.8克柠檬酸三钠,溶入100ml生理盐水中,待溶解完全后即可使用。
3.1%红细胞悬液:由鸡心脏或翅静脉采血,放入加有抗凝剂的离心管内(按抗凝剂:全血=1:2的比例),迅速混匀。
用户名: 密码: 登录注册畜牧兽医知识的天堂主页博客相册|个人档案|好友查看文章红细胞凝集试验(HA)与红细胞凝集抑制试验(HI)2007-12-07 11:42用疫苗按一定免疫程序进行免疫接种是控制鸡病流行的主要途径之一,这种观点已被广大养殖户接受并引起足够重视。
但鸡群免疫抗体的产生及维持时间受到鸡群免疫应答能力、所用疫苗种类、免疫方法、免疫次数、疫病流行状况等方面的影响,良好的免疫接种不等于鸡群能够产生良好的保护力。
因而通过对鸡群进行抗体监测,及时检查鸡群的免疫状态、疫苗使用效果,为制定合理的免疫程序提供依据就显得非常重要。
通过对广大养殖户的大量调查发现,由于缺乏有效的监测手段,养殖户普遍存在盲目免疫的现象。
因此,建立合理的抗体监测制度,开展免疫抗体监测工作,已经成为我们当前养鸡生产中急需开展的一项重要工作。
下面将抗体监测所需设备及监测过程向大家做一说明。
一、实验用设备:1、离心机1台*(3000转离心红细胞)2、冰箱1台*(存放抗原)3、振荡器1台*(振荡96孔V型板)4、抗原新城疫(ND)、减蛋(EDS)、流感(AI)抗原,从正规厂家进。
5、96孔V型板稀释血清清洗后可重复使用6、八道移液器1把(5-50微升稀释血清)7、吸头和八道移液器配套使用,清洗后重复使用)8、积液槽配制4个单位抗原及盛放生理盐水加样用9、一次性采血管采血用10、2毫升注射器采血用11、红细胞非免疫鸡心脏采血或免疫鸡也可,但需离心5次后使用。
12、柠檬酸三钠配制3.8%抗凝剂用13、重铬酸钾配制清洁液用14、硫酸配制清洁液用15、吸管1毫升、10毫升16、吸耳球和吸管配套使用17、针头9*13(采雏鸡)、9*25(采大鸡)18、蒸馏水当地买。
清洗96孔V型板、吸头用19、10毫升离心管离心红细胞用(塑料制)20、生理盐水做血清稀释液用、配制4单位抗原二、实验前的准备:1.抗原:从指定厂家购买稳定浓缩抗原。
2.抗凝剂的配制:用天平称量3.8克柠檬酸三钠,溶入100ml生理盐水中,待溶解完全后即可使用。
血凝抑制试验
血凝抑制试验介绍:
有血凝素(HA)的病毒能凝集人或动物红细胞,称为血凝现象,血
凝现象能被相应抗体抑制称为血凝抑制试验,一种测定抗原或抗体的
技术。
即加入特异性抗体或特异性抗原后,使原有的血凝反应被抑制。
血凝抑制试验正常值:
试验后的结果呈阴性。
血凝抑制试验临床意义:
异常结果:相应抗体与病毒结合后,阻止病毒表面HA与红细胞结合,常用于正粘病毒、副粘病毒及黄病毒等的辅助诊断、流行病调查,也可用于鉴定病毒型与亚型。
需要检查的人群:新生儿和孕妇者有需要,和带有相关病毒的患者,以做医疗的测定。
血凝抑制试验注意事项:
不合宜人群:无特殊要求。
检查前禁忌:禁忌暴饮暴食,和剧烈运动,一般是早晨空腹检测。
检查时要求:要注意试验时室内的温度,注意血清标本不被污染,会导致结果呈假阳性。
血凝抑制试验检查过程:
首先是从检测者取得血清标本,鉴定病毒的血抑试验,最后是血凝滴度的判定,检查过程主要是医生的操作。
本SOP 是为了规范红细胞凝集抑制试验(HI ,hemagglutination inhibition test )的操作规程,确保试验质量而制定。
二、范围适用于中国国家流感中心所有技术人员进行红细胞凝集抑制试验,鉴定流感/禽流感病毒。
三、程序(一)生物安全要求季节性流感病毒及经完全灭活的高致病禽流感病毒和H2N2流感病毒操作可以在BSL-2实验室里进行,操作人员采取BSL-2级防护。
禽流感H5、H7亚型高致病性禽流感病毒及H2N2亚型流感病毒的操作需要在BSL-3级实验室中进行,操作人员采取BSL-3级防护。
具体防护参见“流感中心生物安全个人防护SOP ”。
(二)材料1.流感病毒参比抗原及参比抗血清2.待检病毒3.1%红细胞悬液(鸡、豚鼠红细胞,由于“O ”相毒株不能凝集鸡红细胞,所以在对该种病毒进行鉴定时应使用豚鼠红细胞)4.磷酸缓冲液(PBS ),0.01M ,pH 7.4 (Sigma P 3813)5.多道及单道可调加样器单通道可调加样器量程为 20μL ~200μL 、200μL ~1000μL8通道或12道可调加样器量程为 20μL ~200μL6.96孔微量板:鸡红细胞选择“V ”型或“U ”型底微量板;豚鼠红细胞选一、目的标准操作规程(SOP )——试验鉴定流感/择“U”型底微量板。
7.其它耗材,200μL、1000μL滴头、试管、加样槽等。
(三)实验步骤1.试验前准备(1)PBS配制:按照Sigma的说明书的要求配制PBS缓冲液。
121℃高压灭菌20min,分装,4℃储存。
(2)1%红细胞悬液:按照“1%鸡红细胞悬液配制SOP、1%豚鼠红细胞悬液配制SOP”配制红细胞悬液。
(3)制备用于红细胞凝集抑制试验的4个红细胞凝集单位的抗原1)一个红细胞凝集单位指能引起等量标准化的红细胞凝集时病毒的量。
进行红细胞凝集抑制试验时一般用4个红细胞凝集单位(指25μL体积中含有4个红细胞凝集单位)的病毒量。
试验红细胞凝集及红细胞凝集抑制试验流感病毒表面的血凝素(HA)蛋白,含有识别和结合宿主细胞表面受体的结构,能使一些特定的红细胞发生凝集现象。
当红细胞和病毒按适当的比例混合后,由于病毒的作用使红细胞发生凝集,此为凝集现象。
含有特异的抗流感病毒HA蛋白的抗血清,能抑制红细胞凝集现象的出现,即抗体与病毒结合后,可以使血凝素不能吸附于红细胞表面的受体上,此为红细胞凝集抑制(HAI)。
微量红细胞凝集抑制试验是目前最常用的一种鉴定流感病毒型/亚型及分析流感病毒HA抗原性变异的试验方法,也可以用于对一般人群抗体水平的检测和疫苗效果的评价等方面。
用于HAI试验的标准参照血清必须及时更新,用于鉴定流感病毒型/亚型应包括当年的国际疫苗株或国内流行代表株的抗血清,可以用羊、鸡、雪貂、兔等实验动物的抗血清;用于抗原分析的抗血清建议包括同一型别和亚型不同毒株免疫的标准参考抗血清,由于用雪貂制备的抗流感病毒血清特异性高,易将不同毒株间抗原性差异显示出来,因此常用免疫雪貂的抗血清进行抗原分析。
HAI试验中所用的血清必须经特殊处理以去除非特异性抑制素及非特异性凝集素。
(一)生物安全要求所有有关试验操作都应在相应生物安全级别的实验室中进行,必须遵守生物安全规定,严格执行标准操作规程和废弃物管理规定,做好个人防护要求。
季节性流感病毒病毒或经完全灭活的高致病性禽流感病毒操作可以在BSL-2实验室里进行,高致病性禽流感病毒的操作在BSL-3级实验室中进行。
(二)实验所用试剂1.标准参考抗原:以国际疫苗株和国内流行株作为标准参考抗原,新分离的毒株作为待测抗原。
2.标准参考抗血清:以国际疫苗株和国内流行株制备的抗血清作为标准参考血清。
血清要经RDE处理。
(三)其他试剂/材料/仪器1. 红细胞悬液2. RDE(日本生研)3. 水浴箱(37℃,56℃)4. 台式离心机5. 多道可调加样器、单道可调加样器6. 离心管7. 96孔微量血凝板(使用豚鼠和人红细胞进行实验须用“U”底板,使用火鸡红细胞进行实验用“V”底板)8. 200µL、1000µLTIP头、水槽表1. 流感病毒红细胞凝集试验各项条件比较红细胞火鸡豚鼠人“O”型血终浓度孔底部形状V型U型U型孵育时间25-30min 45-60min 45-60min红细胞沉积形状细胞沉积成点状,倾斜时细胞向下流成泪细胞沉积成环状细胞沉积成环状滴状(四)流感病毒鉴定和抗原分析步骤1. 实验前准备(1)标准参考抗血清的处理1)去除血清中的非特异性抑制素a)所谓抑制素是指各种动物血清、体液、组织液中所含与红细胞表面受体相似的物质,它们能与红细胞受体一起竞争性地被病毒表面血凝素所识别和结合。
高致病性禽流感红细胞凝集(HA)与凝集抑制(HI)试验1.原理:禽流感病毒具有凝集鸡的红细胞的能力,称为病毒的血凝,利用这种特性设计的试验称血球凝集(HA)试验,以此来推测被检材料中有无病毒存在,是非特异性的,但病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制,即血球凝集抑制(Hl)试验,具有特异性。
通过HA-HI试验,可用已知血清来鉴定未知病毒,也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。
2.用途:用于禽流感病毒的血凝素亚型鉴定和抗体检测。
3.试剂:禽流感病毒标准抗原、禽流感标准阴、阳性血清、阿氏液、1%的鸡红细胞、pH7.2的磷酸盐缓冲液。
4.设备耗材:普通天平、分析天平、普通离心机、微量振荡器、微量移液器、高压灭菌器、微量移液器、V形血凝反应板、吸头等。
5.操作步骤6.1血凝试验:5.L1取96孔V形微量反应板,用微量移液器在1孔〜12孔每孔加25μLPBS;5.L2吸取25μL病毒悬液加入第1孔中,吹打3〜5次充分混匀;5.L3从第1孔中吸取25uL混匀后的病毒液到第2孔,混匀后吸取251IL加入到第3孔,依次进行倍比稀释至第11孔,最后从第11孔吸取25UL弃之,设定第12孔位PBS对照;每孔再加入25μLPBSo5.1.4每孔加入25μLl%的鸡红细胞悬液(用前将鸡红细胞悬液充分混匀);振荡混匀反应混合液,室温(20-25。
C)静置40min后观察结果。
5.L5结果判定:在PBS对照出现正确结果的情况下,将反应板倾斜,观察红细胞是否完全凝集,以完全凝集的病毒最大稀释倍数为该抗原的血凝滴度。
完全凝集的病毒的最高稀释倍数为1个血凝单位(HAU)。
5.2血凝抑制试验:1.1.11配制4单位抗原:根据血凝试验结果配制4单位抗原,以能引起100%血凝的病毒最高稀释倍数代表1个血凝单位,4血凝单位抗原即为最高稀释倍数除以4。
加入抗原的血凝滴度为1:256,则4HAU抗原的稀释倍数为1:64,即ImI抗原加入到63mlPBS中即为4HAU 抗原;1.1.2取96孔V形微量反应板,用移液器在第1〜11孔各加入25ULPBS,第12孔加入50ULPBS;1.1.3第1孔加入25UL新城疫标准阳性血清,充分混匀后移出25μL至第2孔,依次倍比稀释至第10孔,第10孔弃去25μL,第11孔做阴性对照,第12孔为PBS对照。
病毒的血凝试验名词解释病毒的血凝试验是一种常见的检测方法,用于确定病毒感染的存在以及病毒类型的鉴定。
该试验利用了人体免疫系统对病毒的免疫反应,通过检测血浆中的凝集反应来判断病毒感染的有无。
本文将对与病毒的血凝试验相关的一些术语进行解释。
1. 血凝试验(Hemagglutination):血凝试验是一种常用的免疫学方法,通过观察红细胞的凝集反应来判断病毒的存在。
在病毒感染的情况下,病毒可以使得红细胞发生凝集现象,从而形成一种网状结构。
这种凝集反应可以帮助医生确定病毒感染的类型和程度。
2. 血凝抑制试验(Hemagglutination Inhibition Assay):血凝抑制试验是一种用于确定病毒感染的抗体的存在与否以及抗体的效力的方法。
在这个试验中,医生将不同浓度的病毒抗原加入患者血浆样本中,观察其中是否出现了病毒凝集反应。
如果患者的血浆中存在与病毒抗原相结合的特异性抗体,那么这些抗体会与病毒抗原结合,并阻止病毒与红细胞产生凝集反应。
通过检测凝集反应的程度,可以评估患者血浆中的抗体效力及抗体的浓度。
3. 血凝试验凝集效价(Hemagglutination Titer):血凝试验凝集效价是用来表示血浆中抗体浓度的方法。
凝集效价通常以最高稀释度的倒数来表示,也就是需要将血浆稀释到什么程度才能抑制病毒凝集。
凝集效价越高,表示血浆中的抗体浓度越高,对病毒的抵抗能力也就越强。
4. 血凝图谱(Hemagglutination Curve):血凝图谱是在血凝试验中绘制的一种图形,用于表示血浆稀释度与血凝反应之间的关系。
血凝图谱的横轴通常表示血浆的稀释度,纵轴表示血浆与病毒的凝集反应的程度。
通过绘制血凝图谱,可以评估不同血浆样本的抗体效力以及浓度的分布情况。
这样的图形有助于医生判断病毒感染的程度,病程的演变以及抗体的持续时间等信息。
血凝试验作为病毒感染的常用检测方法,在临床医学中扮演着重要的角色。
通过观察红细胞的凝集反应,医生可以准确判断患者是否感染了病毒,并进一步确定病毒的类型。
血凝抑制实验报告三篇(经典版)编制人:__________________审核人:__________________审批人:__________________编制单位:__________________编制时间:____年____月____日序言下载提示:该文档是本店铺精心编制而成的,希望大家下载后,能够帮助大家解决实际问题。
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血凝抑制(HI)试验简介(以禽流感病毒为例)一、原理流感病毒颗粒表面的血凝素(HA)蛋白,具有识别并吸附于红细胞表面受体的结构,HA试验由此得名。
HA蛋白的抗体与受体的特异性结合能够干扰HA 蛋白与红细胞受体的结合从而出现抑制现象。
二、应用该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。
可用于流感病毒分离株HA亚型的鉴定,也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型一致的感染或免疫抗体。
三、缺点只有当抗原和抗体HA亚型相一致时才能出现HI现象,各亚型间无明显交叉反应;除鸡血清以外,用鸡红细胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非特异凝集素;需要在每次试验时进行抗原标准化;需要正确判读的技能。
四、试验步骤1 阿氏(Alsevers)液配制称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g,加蒸馏水至100mL,散热溶解后调pH值至6.1,69kPa 15min高压灭菌,4℃保存备用。
(3.8%枸橼酸钠(3.8g 枸橼酸钠,100ml超纯水),101kPa,20min高压灭菌,4℃保存备用,保存期1个月)。
2 10%和1%鸡红细胞液的制备2.1采血用注射器吸取阿氏液约1mL(3.8%枸橼酸钠),取至少2只SPF鸡(如果没有SPF鸡,可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡),采血约2~4mL,与阿氏液混合(3.8%枸橼酸钠),放入装10mL阿氏液(生理盐水)的离心管中混匀。
2.2 洗涤鸡红细胞将离心管中的血液经1500~1800 r/min 离心8分钟,弃上清液,沉淀物加入阿氏液(生理盐水),轻轻混合,再经1500~1800 r/min离心8分钟,用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜,再重复2次以上过程后,加入阿氏液20 mL(生理盐水),轻轻混合成红细胞悬液,4℃保存备用,不超过5天。
2.3 10%鸡红细胞悬液取阿氏液保存不超过5天的红细胞,在锥形刻度离心管中离心1500~1800 r/min 8分钟,弃去上清液,准确观察刻度离心管中红细胞体积(mL),加入9倍体积(mL)的生理盐水,用吸管反复吹吸使生理盐水与红细胞混合均匀。