钒酸盐氧化法测定血清胆红素的方法学评价_王滨2008
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成都中医药大学2011年秋季学期期末考试立题格式论据行文结论总分得分姓名:学号:班级:胆红素检测的前景概况摘要:近年来,健康问题逐渐成为人们最关注的问题之一。
健康保健,健康体检逐渐成为人们生活中不可缺少的一部分。
在这些检查中,也不断地反映出一些情况来。
为了方便找出更有效的各种疾病的诊断、治疗方法,了解胆红素与人体各种疾病的关系便变得势在必行。
而血清胆红素在各种疾病诊断、治疗、及预后工作中的就显得尤为重要了。
血清胆红素浓度的测定在疾病诊断中也扮演着极其重要的角色,无论是肝功检测还是心血管疾病的诊断检测,血清胆红素都可作为一个很有力的参考依据。
于是,提高检测的灵敏度和特异度便可通过分析比较各种检测方法,找出精准度相对较高的检测方法或者寻找到更好的检测方法。
关键字:胆红素;重氮法;化学氧化法;KHC3法正文:胆红素(英文:Bilirubin)是胆色素的一种,它是人胆汁中的主要色素,呈橙黄色,同时也是内源性抗氧化活性的生物还原剂,它是血红蛋白分解代谢的一种产物[1],即它是体内铁卟啉化合物的主要代谢产物,有毒性,可对大脑和神经系统引起不可逆的损害,但也有抗氧化剂功能,可以抑制亚油酸和磷脂的氧化。
胆红素是临床上判定黄疸的重要依据,也是肝功能的重要指标。
胆红素有游离胆红素和结合胆红素两种形式,结合胆红素不存在分子内氢键,可以直接与重氮试剂结合,生成紫红色偶氮化合物,因此又称直接胆红素,游离胆红素存在分子内氢键[2],不能直接与重氮试剂结合,必须先用乙醇或尿素破坏氢键,才能与重氮试剂反应,因此又称间接胆红素。
正常人每天产生250-350mg的胆红素,其中70%是衰老红细胞血红蛋白血红素的降解产物,即衰老细胞被单核吞噬细胞系统破坏,释放出血红蛋白,再被分解成珠蛋白和血红素。
胆红素裂解成胆绿素,胆绿素还原成胆红素,即游离胆红素。
肝脏可以有效地摄取血浆游离胆红素,并将其转化成结合胆红素,提高其极性和水溶性,使其易于随胆汁排入肠道。
科学研究创新血清总胆红素重氮盐法和钒酸盐氧化法测定方法的比较郭晶晶孟超刘茜(江苏省医疗器械检验所江苏南京210019)摘要:胆红素是血红蛋白的代谢产物,主要涉及肝脏代谢,血清胆红素水平是肝胆疾病的重要诊断指标。
体内的胆红素包括直接胆红素、间接胆红素,二者之和称为总胆红素,临床对胆红素的生化检测有多种方法。
本文使用重氮盐法和钒酸盐法对血清总胆红素进行测定,比较两种方法检测结果的差异。
实验结果发现,两种方法的重复性和准确度均能满足临床要求,钒酸盐法的准确度高于重氮盐法。
关键词:胆红素代谢胆红素测定方法重氮盐法钒酸盐法方法比较中图分类号:R446.1文献标识码:A文章编号:1674-098X(2022)02(a)-0004-03肝脏是人体最大的实质性器官,具有复杂而重要的生理功能,参与代谢是肝脏最主要的功能。
肝脏参与三大营养物质的代谢过程:肝脏可以合成蛋白质,亦可以分解蛋白质。
人体有超过40%的蛋白质是在肝脏合成的,血浆白蛋白则完全由肝脏合成。
肝脏细胞含有蛋白质脱氨酶和转氨酶,从而分解蛋白质,氨进一步转变成尿素排泄。
人体摄入的糖类在肝脏转变为葡萄糖,当血糖浓度升高时,血糖可转变成葡萄糖聚合物以糖原的形式贮存于肝脏;当血糖浓度降低时,肝糖原可以迅速分解成葡萄糖,向人体供能,从而保持血糖的稳定。
当人体摄入的糖类物质较少时,肝脏可以将氨基酸、丙酮酸等非糖类物质转变成肝糖原,以满足机体对葡萄糖的消耗。
肝脏可以合成胆固醇,胆固醇转变成胆汁酸盐,胆汁酸盐使脂肪乳化成微粒,脂肪微粒可被身体吸收。
脂类物质可直接与肝脏中的蛋白质结合成脂蛋白。
肝脏参与维生素的代谢。
一些脂溶性维生素可长期大量储存于肝脏中,如维生素A、维生素D、维生素B12的储存量可满足几个月甚至是一两年的使用。
肝脏中可形成有多种凝血因子,如凝血因子I,同时,肝脏可形成抗凝血因子,如肝素。
由于肝脏的体积大,可以贮存的血量多,因此肝脏也是主要的贮血器官[1]。
综合氧化法与钒酸盐氧化法测定血清胆红素的比较作者:杨洁来源:《健康必读·下旬刊》2012年第06期【中图分类号】R446.11 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783(2012)06-0286-01【摘要】目的对综合氧化法与钒酸盐氧化法测定血清胆红素进行比较分析。
方法采用综合氧化法和钒酸盐氧化法对血清胆红素进行测定,而后比较两种方法的精密度、准确度,并对相关性和影响因素进行分析。
结果综合氧化法的精密度实验结果为:TBIL的CV%为1.42%,DBIL的CV%为1.58%;钒酸盐氧化法的精密度实验结果为:TBIL的CV%值为1.63%,DBIL 的CV%值为1.51%。
结论两种方法对血清胆红素进行测定时的精密度、准确度等方面均良好,而在抗干扰以及线性范围方面综合氧化法具有一定的优势,因此,在应用过程中,应注意选择。
【关键词】血清胆红素综合氧化法钒酸盐氧化法相关性目前在临床上对于血清胆红素的测定一般有氧化酶法与化学氧化法这两种方法,而对于化学氧化法而言则包括有亚硝酸盐氧化法、钒酸盐氧化法、过硫酸盐氧化法以及综合氧化法等几种方法[1]。
本次研究中出于对综合氧化法与钒酸盐氧化法测定血清胆红素进行比较分析的目的,对这两种方法对血清胆红素进行测定时的精密度、准确度、相关性、影响因素等进行了分析探讨,现汇报结果如下。
1 材料与方法1.1 试剂与仪器试剂:综合氧化法中的试剂包括有:总胆红素试剂盒、直接胆红素试剂盒;钒酸盐氧化法中的试剂包括有:总胆红素试剂盒、直接胆红素试剂盒。
仪器:本次研究中所采用的仪器包括有OLYMPUS AU600 全自动生化分析仪以及XT -2000血球分析仪。
1.2 方法1.2.1 精密度实验两种方法分别对TBIL和DBIL进行重复测定20次,而后对CV值进行计算。
1.2.2 回收实验取0.9ml标本并加入1ml的标准品上机,对TBIL和DBIL进行测定。
TBIL标本的浓度为24.1umol/L,DBIL标本的浓度为8.2 umol/L。
钒酸氧化法和重氮法检测胆红素的方法学评价作者:李小梅来源:《中国医药导报》2009年第20期[摘要] 目的:寻找一种精密、准确、使用方便且特异的检测血清总(直接)胆红素的方法。
方法:对钒酸氧化法和重氮法进行方法学评价,包括精密度、线性范围、准确度、方法比较和干扰因素。
结果:两种方法检测总(直接)胆红素的精密度和准确度均符合要求,两种方法检测结果有良好的相关性(TBIL:r=0.997,DBIL:r=0.987,均符合r≥0.975)同时有极显著性差异(P[关键词] 钒酸氧化法;重氮法;胆红素;方法学评价[中图分类号]R446.11 [文献标识码] B[文章编号] 1673-7210(2009)07(b)-072-02血清胆红素作为肝胆疾患等诊断的重要指标已广泛应用于临床[1-3],但长期以来,标本溶血对测定的干扰影响一直未能得到很好解决[4]。
目前,测定血清总胆红素(TBIL)和直接胆红素(DBIL)的方法包括重氮试剂法(如改良J-G法和M-E法等),胆红素氧化酶法和化学氧化法(如钒酸氧化法)。
重氮试剂法存在反应不专一、易受溶血和脂血干扰的弊端,使检测结果出现偏差,有时甚至出现直接胆红素高于总胆红素的错误结果,而且这种方法存在工作液不够稳定的缺点[5]。
胆红素氧化酶法由于酶试剂成本昂贵,需要有高效热稳定的酶及其促进剂﹑抑制剂,影响了其在实际工作中的应用[6]。
1993年日本学者Tokuda[7]建立了钒酸氧化法测定血清胆红素。
建立一个新的分析方法,或引进新的方法、试剂和仪器,都应对它们的技术性能如精密度、方法比较、线性范围,以及干扰等作出评价[8]。
为了寻找一种精密、准确、使用方便且特异的检测血清总(直接)胆红素的方法,本文对钒酸氧化法和重氮法进行了方法学评价,现总结如下:1 材料与方法1.1 仪器日本日立公司HITACHI 7060型全自动生化分析仪,日本东亚公司Sysmex KX-21型全自动血细胞分析仪。
检测血清结合胆红素两种不同方法的比较作者:胡智辉来源:《健康必读·下半月》2010年第06期【中图分类号】R722.19 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783(2010)06-0105-01作者简介:胡智辉(1976.8-),女,检验师。
【摘要】目的:比较2,4-二氯苯胺重氮法(DCA)和钒酸盐氧化检测血清结合胆红素的结果。
方法:根据NCCLS(EP6-P)评价方案,评估两种方法的相关和偏倚。
结果:两种方法的检测结果相关性良好(r=0.9985),Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组检测结果无差异,Ⅳ组结果有差异。
结论:应建立与方法学相对应的血清结合胆红素参考值范围。
【关键词】结合胆红素; 2,4-二氯苯胺重氮法;钒酸盐氧化法重氮法和氧化法是临床上血清结合胆红素(CB)测定较常用的方法。
为了解两种方法检测结果的差异及性能指标,本研究对重氮法(2,4-二氯苯胺重氮法)和(钒酸盐氧化法)进行了解平行对比和偏倚评估。
1 材料与方法1.1 仪器与试剂:HITACHI7080全自动生化分析仪(日本株式会社)。
重氮法(2,4-二苯胺重氮法)试剂为德赛诊断系统(上海)有限公司提供;氧化法(钒酸盐氧化法)为上海荣盛生物药业有限公司。
质控血清和重氮法标准品(英国RANDOX公司);氧化法标准品(湖南永和阳光科技有限责任公司)。
1.2 患者标本来源:选取本门诊不同疾病患者98例(其中肝病患者58例)男64例,女34例,年龄18~64岁。
采集患者空腹静脉血,3000r/min离心10min及时分离血清,标本需无溶血和脂血,-70℃冰冻保存集中测定。
1.3 试验方法:测定过程及参设置按试剂盒说明书及标准操作规程(sop)执行,全部数据用spss12统计软件分析。
2 结果2.1 线性范围:取1份结合胆红素浓度最高值的患者血清,其值为302.2umol/L(钒酸盐氧化法测定值),按NCCLS(EP6-P)评价方案[1]用生理盐水稀释成5个不同梯度值,以低值到高值分别测定两次,以X为理论值,Y为测定均值进行回归分析。
重氮法与钒酸盐氧化法测定新生儿血清胆红素的比较分析目的:对血清总胆红素重氮法和钒酸盐氧化法的测定结果进行方法比对和偏倚评估,探讨两种方法之间检测结果是否具有可比性。
方法:按照有关文件的要求,以重氮法为比较方法,钒酸盐氧化法为实验方法,分别检测50例患者新鲜血清,记录检验结果,去除离群值,计算回归方程,评估两种方法的CV值。
结果:血清总胆红素重氮法和钒酸盐氧化法测定结果的相关回归方程为Y=1.092X+4.815,相关系数r为0.9958。
新生儿的直接胆红素测定差异较大,重氮法和钒酸盐氧化法测定结果的相关回归方程为Y=0.1372X+1.8,相关系数r为0.5831,成年人及大于30 d儿童直接胆红素测定结果相关回归方程为Y=1.1368X—3.818,相关系数r为0.9997。
结论:血清总胆红素重氮法和钒酸盐氧化法测定结果的预期偏倚在可接受范围内,新生儿直接胆红素测定偏倚不可接受。
标签:重氮法;钒酸盐氧化法;新生儿直接胆红素;总胆红素测定胆红素是血红素代谢的产物,临床上多用于黄疸的诊断和性质鉴别,亦是重要的肝功能试验指标,准确测定具有重要的意义。
目前,我国临床实验室测定血清总胆红素(total TB)的方法主要有3种:重氮法、胆红素氧化酶法和化学氧化法(如钒酸盐氧化法)[1]。
酶法测定胆红素具有准确性高、稳定性好等优势,但由于试剂昂贵,仅为少数临床实验室所接受。
重氮法和钒酸盐氧化法是多数临床实验室首选的检测方法。
目前仍广泛使用的方法是重氮法,而钒酸盐氧化法因其稳定性、精密度、准确度均能满足实验室要求,且试剂简单,能在全自动生化分析仪上面使用,被越来越多的实验室所采用,在使用过程中,本实验室发现重氮法胆红素测定结果稍高于钒酸盐氧化法测定结果,但两者的系统误差均属临床可接受水平[2],与大量的文献报道一致,但新生儿直接胆红素两种方法的测定结果差异较大。
1 资料与方法1.1 试剂和仪器重氮法和钒酸盐氧化法测定结果的相关回归方程为Y=1.092X+4.815,相关系数r为0.9958,T.bil试剂盒(批号:Z109218)、D.bil 试剂盒(批号:Z109218)均为美国贝克曼公司提供的配套试剂;钒酸盐氧化法T.bil试剂盒、D.bil试剂盒均为北京利德曼公司提供,总胆红素试剂盒批号为111011J,直接胆红素试剂批号为111011J。
钒酸盐氧化法测定血清胆红素的方法学评价王滨(辽宁省普兰店市中心医院,辽宁普兰店116200)摘要目的为了解钒酸盐氧化法测定血清胆红素的可行性,进行方法学评价。
方法钒酸盐氧化法与重氮法测定胆红素的方法进行了比较,并对钒酸盐氧化法的重复性试验、线性试验、干扰试验、回收试验进行了评价。
结果总胆红素测定批内CV%为0.8%,批间C V%为1.3%,平均回收率为101.1%,线性达581.2L m o l/L,与重氮法比较,Y(本法)=0.935X(重氮法)+1.335,t=0.02,P>0.5,r=0.998,血红蛋白浓度和甘油三酯分别高达3.4g/L和7.3mm o l/L不干扰。
结论结果表明钒酸盐氧化法测定血清胆红素具有简单、快速、稳定、灵敏、准确、重复性好。
溶血、乳糜对测定表现为较微的干扰。
可作为常规法使用。
关键词胆红素;钒酸盐氧化法;重氮法[中图分类号]R446.12+9[文献标识码]A学科分类代码:320.1160文章编码:1001-8131(2008)01-0005-02Abstract Objective W e i n tr oduce Ox i d ati o n m ethod ofm easuri n g bilirubin i n serum by V anadic acid.M et h-ods W e use t h e vanadate ox i d ation reagent of b ilirub i n to deter m ina te serum tota l bilirubin si m u ltaneously,take a co m parison w ith the m ethod of i m proved D i a zo m et h ods and also take run-in-run tes,t li n ear tes,t i n terfere tes,t recover y test of vanadate ox i d ation.R esults The CVs o f deter m ina ti o n to ta l bilirubin w ere0.8%for i n tra-r un and 1.3%for m id-run.The average recovery rate w as101.1%for tota l b ilirub i n.L i n ear range of total bilirubin can attach to581.2L m o l/L.The resu lt o f the Vanadate ox i d ation(Y)has a good correlation w it h D iazo m ethod. Their.s regressi o n equation and r,,t p va l u e w ere,TB I L Y(V anadate)=0.935X(D iazo)+1.335,t=0.02,P> 0.5,r=0.998.H e m og lobin and chy lo m icrone m ia have rarely i n terfere.C oncl u sion The m ethod is si n g le,rapid, stable,sensiti v e and accura te.It has the ability to anti-interference o f he m og lob i n and chy lo m icrone m ia.It can be used i n the routi n e deter m i n ation o f b ilir ubin.K ey w ords B ilirubin;V anada te ox ida tion m ethod;D iazo m e t hod血清胆红素测定是临床医学中的一项重要常规检测项目,是黄疸性疾病诊断与鉴别诊断的重要指标,它的升高或降低对了解多种疾病的诊断及病程观察有一定意义。
适量的胆红素在心、脑、肝脏和血管等多种组织与器官内具有保护作用。
因此,准确地测定胆红素,是临床和药品检验工作者追求的目标。
目前测定胆红素的方法主要有两种:一种为传统偶氮法[1],此法操作简便,是现今大多实验室采用的常规方法,但特异性低,干扰因素多,尤其是总胆红素因使用不同加速剂而方法间结果有较大差异。
另一方法为酶法[2],准确、特异性高,但价格昂贵,目前难于普及。
因此,寻找简便准确的测定方法仍是检验界关心的问题。
我们对日本和光纯药工业株式会社推出的钒酸盐氧化法测定血清胆红素试剂盒的性能进行了实验评价,认为该双试剂法适宜于自动生化分析。
1材料与方法1.1反应原理:胆红素在酸性环境下(P H3.0)被钒酸氧化成胆绿素,使胆红素所特有的黄色减少,这样在450n m波长处测得钒酸加入前后的吸光度,由两吸光度的差值即可得出胆红素的含量(直接胆红素试剂缓冲液中含有阻止间接胆红素被钒酸氧化的成份)。
即将标本加入缓冲液中,等吸光度稳定后,读取吸光度A1,加入钒酸溶液,吸光度立即下降,经一段时间(约5分钟)趋于稳定,读取吸光度A2,将A2-A1与标准品的A2-A1比较,即可测出胆红素的含量[3]。
1.2材料1.2.1试剂:¹钒酸盐氧化法测定总胆红素试剂盒,日本和光纯药工业株式会社产品。
º重氮法测定血清总胆红素试[3]H oz um iT,Yosh i da K,Ogata Y,et a.l Non i nvas i ve assess m en t of sig-n ifican t left an teri or descend i ng coronary artery stenosis by coronary flo w vel ocit y reserve w i th transthoracic co l or Dopp ler echocardio-graphy.C i rcu l ation[J],1998,97:1557-1562.[4]陈孝良,陈士良,韩大笑,等.犬冠状动脉狭窄程度与血液动力学的相关分析[J].中国病理生理杂志,1991:622-625.[5]夏红梅,高云华,杨成业.彩色室壁运动技术评价冠心病阶段性室壁运动的临床研究[J].中国超声医学杂志,2000,16:420-422.[6]Ji n-W on J,M yung H J,Kyeong H Y,et a.l E chocard i ograph icEp i card ialFat Th i ckness and C oronary A rtery D i sease[J].C irc J 2007,71:536-539.[7]S c h i nk elA F,Bax J J,G eleij n s e M L,et a1.Non i nvasi ve eval uationof i schae m i c heart d is ease m yocard i al perf us i on i m ag i ng or stress echocard i ography[J].EuroH eart J.2003,24:789-800.收稿日期:2007-11-28剂盒,上海复星长征医学科学有限公司产品。
»总胆红素标准液,宝灵曼中国有限公司产品,总胆红素含量为82.4L mo l/ L。
1.2.2仪器:日立7060型全自动生化分析仪。
1.2.3实验参数:在日立7060型全自动生化分析仪上用钒酸盐氧化法测定血清总胆红素主要参数如下:¹双波长450/ 546n m,温度37e。
º终点法2,吸光度下降法。
»方法第一试剂200L m与标本10L,l孵育5分钟,读取一次吸光度,这时加入第二试剂50L l孵育5分钟,第二次读取吸光度,前后两次吸光度之差与标准吸光度之差比较,可得样品胆红素量。
光径:0.5cm。
重氮法参数按上海复星长征医学科学有限公司总胆红素测定试剂的说明书编制实验参数。
定标统一采用宝灵曼中国有限公司提供的总胆红素标准液。
2实验结果2.1重复性试验:一份质控血清用钒酸盐氧化法测定20次,批内结果(x)?s):T BIL92.75L m o l/L?0.76,C V%为0.8%。
用此血清,每天测定1次,连续测定20天,批间结果(x)?s):T BIL91.02L m ol/L?1.23,CV%为1.3%。
2.2线性试验:取病人胆红素高值标本(581.2L m o l/L),用生理盐水进行倍比稀释,并同原液一起用钒酸盐氧化法测定总胆红素含量,结果见表2-1。
将测得值与计算值的回归方程与r算出:Y(计)=0.808+0.999X(测)r=0.99998。
表2-1线性试验项目原液1:21:41:81:161:32总胆红素581.2290.9142.470.836.119.2注:以上血清胆红素单位为L mo l/L以上表明总胆红素在581.2L m o l/L以下线性良好,完全满足临床的需求。
2.3回收试验:取一份血清标本0.9m,l加入蒸馏水0.1m,l 作为基础样品,用钒酸盐氧化法测定其浓度为13.4L m o l/L。
再取原血清标本0.9m l加入高值胆红素血清(53.4L m ol/L) 0.1m,l混匀,作为分析样品,而后用钒酸盐氧化法测定其总胆红素浓度,所得结果为18.8L m o l/L,回收率为101.1%。
2.4比较试验:用钒酸盐氧化法测定血清总胆红素与重氮法比较,同时测定临床标本50份。
结果(x)?s):重氮法21. 8L m o l/L?25.1,钒酸盐氧化法21.9L m o l/L?26.8,Y(钒酸盐氧化法)=0.935X(重氮法)+1.335,t=0.02,P>0.5,r= 0.998。
2.5干扰试验2.5.1溶血干扰:将血红蛋白液(80g/L)用生理盐水作不同比例稀释,并分别取此血红蛋白稀释液0.1m l与血清标本0. 9m l混匀,使标本中血红蛋白浓度分别为2.7g/L、3.4g/L、4. 6g/L、5.7g/L、6.9g/L、8g/L。
基础管取血清标本0.9m l加入生理盐水0.1m l。
然后用钒酸盐氧化法对上述标本进行测定。
结果,见表2-2。
结果表明H b在3.4g/L以内时对总胆红素测定不产生干扰。
2.5.2乳糜干扰:将甘油三酯定值液(102mm ol/L)用生理盐水作不同比例稀释,并分别取此甘油三酯稀释液0.1m l与血清标本0.9m l混匀,使标本中甘油三酯浓度分别为2.9mmo l/L、4.4mmo l/L、5.8mm ol/L、7.3mm o l/L、8.7mmo l/ L、10.2mm o l/L。