液体菌种培训教材(四)液体菌种的制作过程及方法

液体菌种的制作及使用方法随着食用菌生产的发展,食用菌制种方法在传统固体制作的基础上在不断的改进和提高,其中液体菌种的制作便是其中之一。

液体发酵技术是现代生物技术之一，起源于美国。

它是指在生化反应器中，模仿自然界将食药用菌在生育过程中所必需的糖类、有机和无机含有氮素的化合物、无机盐等一些微量元素以及其它营养物质溶解在水中作为培养基，灭菌后接入菌种，通入无菌空气并加以搅拌，提供食用菌菌体呼吸代谢所需要的氧气，并控制适宜的外界条件，进行菌丝大量培养繁殖的过程。

工业化大规模的发酵培养即为发酵生产，亦称深层培养或沉没培养。

液体菌种的制作及使用方法液体菌种由于具有生产规模化、控制自动化、生长无菌化、发菌高速化的生产应用优势,为食用菌产业化的发展提供了良好的种源条件,是食用菌产业化发展的必然方向,已被业内人士所看好。

液体菌种是用液体培养基培养而成的菌种。

近年来，国内外正积极研究液体菌种的培养与利用。

与固体菌种相比，它具有菌种生产周期短、菌龄整齐一致、接种方便、接于固体菌料发酵快、适宜于工厂化生产等优点，因而受到了广大栽培者的欢迎。

目前我国已能进行深层发酵的食用菌有：香菇、平菇、凤尾菇、美味侧耳、鲍鱼菇、金针菇、黑木耳、猴头、草菇、蜜环菌、茯苓、滑菇和冬虫夏草等。

一、液体菌种的培养方法常见的有采用摇床来生产的摇瓶培养法和采用发酵罐来生产的深层培养法。

若少量生产，可以用摇瓶培养法。

深层培养需要一整套工业发酵设备，如锅炉、空气压缩机、空气净化系统、发酵罐等，故投资大，只适用于工厂化的大规模生产。

而摇瓶培养投资少，设备技术简单，适合一般菌种厂生产使用。

本节主要介绍摇瓶培养的技术方法。

1、食用菌液体发酵的培养基根据培养基中组成的不同，可分为天然培养基和合成培养基。

天然培养基的组成均为天然有机物。

合成培养基则是采用—些已知化学成分的营养物质作培养基。

在生产上，还根据工艺将培养基分为孢子培养基、种子培养基及发酵培养基。

但无论如何划分，每一种培养基的组成中都离不开碳、氮、无机盐、微量元素、维生素和生长素等。

食用菌液体菌种的制作
2009—5-5 8：23:26
在无菌的条件下把菌种投放到培养基里。

安装通气管后用输氧机给培养基输入氧气。

把培养基放置在摇床机上进行振荡培养.
食用菌液体菌种具有生产周期短、菌龄整齐一致、接种方便、发酵快、适宜于工厂化生产等优点。

食用菌液体菌种的生产方式一般可分为电磁搅拌法、摇瓶机法、简易深层发酵（吹氧)法、发酵罐法。

据省农科院食用菌站工作人员介绍，摇瓶机法不仅接种简单，管理方便，而且生产量根据机器的设定而不同，投资20 00～3000元即可。

配制液体培养基先把马铃薯煮到熟而不烂时提取上清液，然后配制3％葡萄糖、1%玉米粉、0。

05%硫酸镁、0。

1％磷酸二氢钾，最后将马铃薯上清液和上述溶液及水混合即可。

液体培养基适用于多种食用菌菌种的培养.
摇瓶振荡培养液体培养基配制好后,装入容量为500毫升的三角烧瓶中，每瓶装入100毫升，并加入1～15粒小玻璃珠，瓶口用棉塞、牛皮纸密封,在1.5千克/平方厘米压强下灭菌30分钟。

然后投入一块约2平方厘米的斜面菌种，于2 3℃～25℃下静置培养24小时。

待菌丝萌发时再放置在往复式摇床上振荡培养，振荡频率为每分钟80～100次，振幅为6～10厘米。

摇床室的温度控制在24℃～2 5℃,培养时间因菌类不同而异，一般是5天左右。

将振荡好的培养基倒入大容器里，经过扩容后，在无菌条件下安装通气管，用输氧机通入适量氧气后培养48小
时.培养结束的标准:培养液清澈透明,其中悬浮着大量小菌丝球，并伴有各种菇类特有的香味。

培养好的液体菌种应放入培养箱中保存。

北虫草液体菌种制作方法北虫草的菌种怎样制作培育？北虫草是一种富含虫草素、氧基酸等营养物质的虫、菌结合的食用菌类，因为营养物质种类多、含量高，是人们生活中的上等滋补佳品，在市场上销售情况一直较佳，人工种植前景看好。

而今天给大家介绍一下关于北虫草液体菌种制作方法，如下：一、培养基配方配方：玉米粉1%、葡萄糖2%、蛋白胨1%、酵母粉0.5%、磷酸二氢钾0.1%、水95.35%、硫酸镁0.05%、维生素B110mg、PH值调至6.5左右。

二、制作培养方法1.制作一级摇瓶种：将这些原料溶于水后装在500毫升三角瓶中，每个三角瓶装量200毫升，放入玻璃珠3粒左右，塞紧棉塞，然后用4层纱布罩住棉塞、瓶口扎紧，放在高压灭菌锅内进行消毒，待压力表上升至0.5kg/cm2压力时，即放净冷气待指针降至0后，再关掉放气阀门，待温度表指针逐渐上升至1.1kg/cm2后就开始保温30分钟后，慢慢下降指针至0，然后开盖冷却至常温，再移入接种箱或超净工作台等待接种。

2.接种方法：先把灭菌后的北虫草液体菌种培养基移放在超净工作台上，并把北虫草母种和接种勾、酒精灯、酒精棉球等接种物品也放在超净工作台上，工作服挂在接种室消毒。

然后在接种室点燃烟雾剂（用臭氧消毒器更好），立即关闭所有门窗密闭消毒同时打开紫外线灯。

待40min后，将烟雾放净，关闭紫外线灯，接种人员就可进行接种。

接种的方法是穿好工作服，打开超净工作台风机，点燃酒精灯，左手拿着母种试管对准火焰口，右手拿着铁勾在酒精灯火焰消毒3-5秒种后立即伸进母种试管内把菌种分成5-7段，再用左手迅速将纱布瓶盖打开，右手立即把一段菌块勾入瓶内（每瓶接入5-6片0.5平方厘米大小菌种）速将瓶盖按原样盖紧。

当北虫草菌种接好后，移入22-24℃恒温培养室，摇床震荡发菌培养。

摇床转速140r/min，经过4-6天的发菌培养，经检查北虫草菌液的颜色开始清亮、菌球密集，瓶口闻有很浓的北虫草气味，可判断为菌种优良。

液体菌种制作方法液体菌种的生产容器多种多样，制作方法法归纳起来主要有以下四种：1.电磁搅拌器法：此法比较简单，投资也比较少，200元左右就可进行生产。

从接种到菌丝长好要3-5天时间。

但也存在生产量小的缺点，一般只用于生产栽培种或生产发酵罐的专用母种。

生产过程：在无菌条件下将试管种接到三角瓶里，搅拌3-5天后得到大量的菌丝体。

2.摇瓶（床）震荡法：此法比较简单，接种简单，管理方便，生产量在几百毫升到几百升不等。

投资在几百至几千元钱之间。

但大型机噪音大，不能在有人居住的地方生产。

生产过程：在无菌条件下将试管种接到瓶内，摇动。

一般4-7天左右会出现大大量的菌球。

3.简易深层发酵（吹氧）法：此法分二种，一种是容器与过滤器一起灭菌的，容易些；另一种是容器与过滤器分开灭菌的，相对来说比较麻烦一些，主要是器材的联接要在无菌状态下进行，如果哪个环节出现问题，不能保证成功率。

投资也要3000多元。

生产过程：在无菌条件下将试管种接到容器内，通气培养4-7天，得到大量的菌球。

4.发酵罐法：是目前要求最高的一种，涉及到好多方面的知识，很难自学成才，而且投资也高，一般要10，000元以上。

如果生产规模大或是菌种场，建议用发酵罐比较好。

如果资金充足，生产小的也可以用发酵罐，因为省略了二级和三级种的制作过程，很快就会把投资收回来，而且可以减轻很多工作量。

生产过程：发酵罐注水、加料后，灭菌40-60分钟，冷却至28℃时，接入经过并瓶的专用母种，一般品种在3-5天内就可以完成培养。

时间的长短一是看罐的大小，二是看品种。

需要说明的是电磁搅拌器生产的液体菌种是菌丝团，而摇瓶机法、简易深层发酵（吹氧）法、发酵罐法生产出来的液体菌种一般是菌球。

液体菌种的的制作过程一、母种纯化1、配方：1000ml为例（1）小麦（麦夫或豆芽）50克，土豆200克，葡萄糖20克，蛋白胨2克，琼脂18-20克，KH2 PO4 1.5克，MgSO4 0.75克，PH自然（6左右）（2）蔗糖24g，蛋白胨2g，酵母膏1g，2、制作小麦煮开花，土豆煮酥而不烂；琼脂剪碎，放入溶解，加入其他配料，总体积称到标准量，装入试管，进行常规灭菌（121℃，40分钟）。

3、接种将所用母种及新制的试管放入接种箱，灭菌20分钟后将手用75%的医用酒精擦洗（消毒），伸入接种箱等待5-10分钟再开始接种（接种前所有接种工具都要在酒精灯火焰上匀烧灭菌），在酒精灯火上方切取0.3cm²一小块菌丝，放入新培养基上，塞好试管口；放在该菌最适合的温度下培养。

4、培养在培养过程中，每天都要仔细逆光观察，发现有任何疑常现象都要淘汰不要。

二、摇瓶种子制作1、配方：1000ml为例a.可以用母种纯化配方（不加琼脂）b.土豆200克，黄豆8克（需打凝浆）或脱脂豆奶8克，葡萄糖30克，蛋白胨2克，KH2PO41.5克，MgSO4 0.75克。

c.玉米小麦各50克，蔗糖20克，葡萄糖10克，蛋白胨2克，酵母膏2克，KH2PO41克，MgSO4 0. 5克。

d．蔗糖24g，蛋白胨2g，酵母膏1g，KH2PO42g,MgSO4 1g, 豆浆50ml.2、制作将以上配方任选一种用类似母种的方法制成液体培养基，装入摇瓶，塞好瓶口，包上放潮纸，放入灭菌锅，封好锅口，打开放气阀，当有大量蒸气排出时关闭放气阀，温度升至121℃后，计时40分钟，让其自然冷却，压力归零时，打开灭菌锅盖，将一边掀起3-5cm，利用余热将棉塞烘干。

3、接种将摇瓶及纯化好的母种一起放入接种箱，灭菌后，去掉防潮纸，扭松棉塞，在酒精灯火焰上方，挑取0.3cm²的菌丝皮左手拿起棉塞,右手迅速将菌丝接入,然后立刻盖上棉塞,用同样的方法一个摇瓶接入15-20块,让其均匀地分布在液体表面。

阿魏菇液体菌种培育的设计报告技术路线及实施方案阿魏菇(pleurotus ferulae lanzi)又名阿魏蘑、阿魏侧耳、白灵菇等，是一种食药两用大型真菌，它因寄生或腐生在一种药用植物阿魏上而得名。

以前报道阿魏菇的栽培是固体菌种栽培，未见有液体菌种栽培的报道。

与固体菌种相比，液体菌种具有生产周期短、菌丝发育点多、接种后菌丝集中快速、菌龄整齐等优点。

在肯定条件下，用于菌种袋、栽培袋的接种及多糖的提取可以明显缩短生产周期，因此液体菌种的培育具有宽阔的进展前景。

本争辩拟对阿魏菇液体菌种培育进展试验，具体试验方案如下：一、设计报告：承受不同的液体培育基配方来观看菌丝体的生长状况、菌球消灭的时间以及多糖的得率。

其中培育基的配方主要通过供给不同的原料来做碳源，氮源以及不同的 ph 值。

筛选出最正确培育基并对发酵工艺条件优化，并且将液体菌种应用于栽培试验，观看出菇状况。

二、技术路线：获得菌种〔单孢分别，组织分别〕→扩大培育成斜面菌种→摇瓶培育〔筛选培育基〕→发酵罐深层培育〔发酵工艺条件优化〕→一局部接种于菌袋进展出菇试验，另一局部菌丝体和发酵液分别多糖的提取分别。

三、实施方案：试验时间安排在 2023.11——2023.12。

1．斜面菌种：pda 培育基，用于保藏菌种。

2.一级种子培育：用摇瓶培育。

确定不同的碳源、氮源和ph 等，通过正交试验筛选出最正确培育基3.二级种子培育：在一级种子根底上进一步扩大培育，用发酵罐培育。

确定培育基的配方，以及发酵参数如温度、转速、ph 值等及接种量、培育时间等对种子质量的影响，完成发酵工艺条件优化，确定放罐标准。

4.栽培出菇试验：用所得二级液体菌种接种到栽培袋上，与固体菌种相比较进展出菇试验，观看出菇时间、产量等因素。

5.一局部液体菌种用来分别提取多糖。

篇二：液体菌种制备流程及进呈现状液体菌种进呈现状食用菌菌种液体发酵技术从60 年月开头便有人开头探究，至80 年月开头用于生产实践，到目前为止，国内主要还是使用的在位灭菌气升式发酵罐，我们称之为第一代食用菌液体菌种发酵设备。