食品中细菌总数的测定自主实验设计方案(修改版)

食品中菌落总数的测定一、实验目的（1）学习和掌握测定食品中菌落总数的基本方法（2）学会菌落总数的报告方式二、实验材料1、仪器与设备：恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。

2、培养基和试剂：75%乙醇、0.85%生理盐水、琼脂培养基：胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000mL、pH 7.0±0.23、检样：利乐包装鲜牛奶250ml三、实验方法与步骤1、检验程序菌落总数检验程序：检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入46℃15-20ml营养琼脂→置36±1℃恒温箱内培养（48±2）h取出→菌落数→报告2、检样稀释及培养（1）以无菌操作，将检样包装打开，用吸管取25ml鲜牛奶，放于含有225ml灭菌生理盐水的500ml灭菌玻璃三角瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠），经充分振摇做成1：10的均匀稀释液。

（2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。

（3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。

（4）根据食品卫生检验标准要求和检样的菌落数量，选择3个连续适宜稀释度即10、10－1、10－2，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。

（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿15ml~20mL，并转动平皿使与稀释检样混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。

（6）等琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃恒温箱内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1mL样品所含菌落总数。

食品中菌落总数测定方案菌落总数测试片1.操作步骤1.1 样品的稀释1.1.1 称取25g样品（剪碎）置盛有225ml无菌生理盐水的三角瓶中，充分振摇混匀，制成1:10的样品匀液。

1.1.2 用1ml微量移液器吸取1:10的样品匀液1ml，沿管壁缓慢注入盛有9ml无菌生理盐水的无菌试管中（注意吸头尖端不要触及稀释液面），充分振摇混匀，制成1:100的样品匀液。

1.1.3 用1ml微量移液器吸取1:100的样品匀液1ml，沿管壁缓慢注入盛有9ml无菌生理盐水的无菌试管中（注意吸头尖端不要触及稀释液面），充分振摇混匀，制成1:1000的样品匀液。

1.2 样品的接种揭开菌落总数测试片上层膜，用1ml微量移液器分别吸取1:10、1:100、1:1000的样品匀液1ml慢慢均匀地滴加到纸片上，然后将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固（每个样品匀液做2个纸片）。

同时做一片空白阴性对照。

1.3 培养将测试片叠在一起放回原自封袋中，并封口，透明面朝上水平置于36℃±1℃培养箱内培养15～24h，堆叠片数不超过12片。

1.4 菌落计数1.3.1 细菌在测试片上生长后会显示红色斑点，可用肉眼观察,必要时用放大镜,记录稀释倍数和相应的菌落数量。

菌落计数以菌落形成单位(CFU)表示。

1.3.2 选取菌落数在30CFU—300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。

低于30CFU的纸片记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计。

每个稀释度的菌落数应采用两个纸片的平均数。

1.3.3 其中一个纸片有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的纸片作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到纸片的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个纸片后乘以2,代表一个纸片菌落数。

1.3.4 当纸片上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。

—1 —— 2 —1.5 结果与报告1.5.1 菌落总数的计算方法1.5.1.1 若只有一个稀释度纸片上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个纸片菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每g 样品中菌落总数结果。

第1篇一、实验目的1. 掌握细菌总数检查的基本原理和方法。

2. 了解细菌总数在食品、水质等领域的应用。

3. 培养实验操作技能，提高对微生物检测工作的认识。

二、实验原理细菌总数是指在一定条件下，每克（或每毫升）样品中所含有的细菌总数。

细菌总数是衡量样品微生物污染程度的重要指标。

本实验采用平板计数法测定细菌总数。

三、实验材料与仪器1. 材料：牛奶、自来水、土壤等样品。

2. 仪器：恒温培养箱、天平、无菌试管、无菌棉签、无菌操作台、无菌水、营养琼脂平板、计数器等。

四、实验方法1. 样品处理：将样品按照一定比例加入无菌水中，充分振荡，制成均匀的样品悬液。

2. 制备菌悬液：取适量样品悬液，用无菌吸管加入无菌试管中，依次稀释10倍、100倍、1000倍，备用。

3. 制备平板：将营养琼脂平板在恒温培养箱中培养至凝固。

4. 接种：用无菌棉签蘸取适量菌悬液，均匀涂布于平板表面。

5. 培养与计数：将接种好的平板放入恒温培养箱中，培养24小时后，观察菌落生长情况。

按照菌落数在30～300之间的平板进行计数。

6. 计算细菌总数：根据菌悬液稀释倍数，计算每克（或每毫升）样品中的细菌总数。

五、实验结果与分析1. 实验结果：样品A（牛奶）细菌总数：3.2×10^7 CFU/g样品B（自来水）细菌总数：2.1×10^5 CFU/mL样品C（土壤）细菌总数：5.8×10^7 CFU/g2. 结果分析：样品A（牛奶）的细菌总数较高，可能是因为牛奶在储存、运输过程中受到污染。

样品B（自来水）的细菌总数较低，符合我国饮用水标准。

样品C（土壤）的细菌总数较高，可能与土壤环境有关。

六、实验结论1. 本实验成功掌握了细菌总数检查的基本原理和方法。

2. 通过对样品的细菌总数检测，可以了解样品的微生物污染程度，为食品、水质等领域的质量控制提供依据。

3. 在实验过程中，需要注意无菌操作，避免污染样品。

七、实验反思1. 实验过程中，操作要规范，避免人为因素对实验结果的影响。

食品中菌落总数的测定实验报告一、实验目的1、学习并掌握食品中菌落总数测定的基本原理和方法。

2、熟练使用无菌操作技术和相关仪器设备。

3、了解食品卫生质量的重要性，以及菌落总数在评价食品卫生状况中的意义。

二、实验原理菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度和时间、pH 值、需氧性质等），所得 1g 或 1ml 检样中所含细菌菌落的总数。

菌落总数主要作为判定食品被细菌污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。

三、实验材料和设备1、实验材料各种待检食品样品（如牛奶、面包、水果等）营养琼脂培养基无菌生理盐水2、实验设备恒温培养箱高压蒸汽灭菌锅超净工作台无菌吸管（1ml、10ml）无菌培养皿电子天平均质器四、实验步骤1、样品的采集和处理以无菌操作采集具有代表性的食品样品，放入无菌容器中。

对于固体食品，使用均质器将其均质成匀浆；液体食品则直接吸取进行稀释。

2、稀释样品用 1ml 无菌吸管吸取 1ml 样品匀浆或液体样品，注入盛有 9ml 无菌生理盐水的试管中，制成 1:10 的样品稀释液。

用 1ml 无菌吸管吸取 1:10 稀释液 1ml，沿管壁缓慢注入盛有 9ml 无菌生理盐水的试管中，振摇试管混合均匀，制成 1:100 的稀释液。

以此类推，进行适当的梯度稀释。

3、接种选择 2-3 个适宜稀释度的样品稀释液，每个稀释度分别吸取 1ml 注入无菌培养皿中。

及时将 15-20ml 冷却至 46℃左右的营养琼脂培养基倾注于培养皿中，并转动培养皿使其混合均匀。

4、培养待琼脂凝固后，将培养皿翻转，放入 36±1℃的恒温培养箱中培养48±2h。

5、菌落计数培养结束后，取出培养皿，计数每个平板上的菌落数。

菌落计数时，应选取菌落数在 30-300 之间的平板进行计数。

若有两个稀释度的平板菌落数在 30-300 之间，应按两者菌落总数之比值来决定。

细菌总数测定策划书3篇篇一细菌总数测定策划书一、背景细菌总数测定是评估环境、食品、水源等样品中微生物污染程度的重要指标之一。

通过测定细菌总数，可以了解样品中细菌的数量和种类，为评估样品的卫生质量和安全性提供依据。

二、目的本策划书旨在制定一套详细的细菌总数测定方案，以确保测定结果的准确性和可靠性。

三、测定方法本次测定采用平板计数法，该方法是一种常用的细菌总数测定方法，具有操作简单、结果准确等优点。

四、实验材料和设备1. 实验材料：营养琼脂培养基、生理盐水、无菌移液管、无菌培养皿、无菌棉签等。

2. 实验设备：高压灭菌锅、恒温培养箱、移液器、显微镜等。

五、实验步骤1. 样品采集：根据不同的样品类型，采用相应的采集方法。

例如，对于食品样品，可以采用无菌采样器采集；对于水源样品，可以采用无菌瓶采集。

2. 样品稀释：将采集的样品进行适当的稀释，以保证平板上的菌落数在 30-300 之间。

3. 平板制备：将营养琼脂培养基加热融化，冷却至45℃左右，倒入无菌培养皿中，待培养基凝固后备用。

4. 接种：用无菌移液管吸取适量的稀释液，接种到平板上，然后用无菌棉签将稀释液均匀地涂抹在平板表面。

5. 培养：将接种后的平板放入恒温培养箱中，在37℃下培养 24-48 小时。

6. 计数：培养结束后，取出平板，用肉眼观察平板上的菌落数，并记录下来。

如果平板上的菌落数过多，可以采用显微镜进行计数。

六、结果计算细菌总数（CFU/mL）= 平板上的菌落数× 稀释倍数七、质量控制1. 培养基质量控制：定期对培养基进行质量检查，确保培养基的营养成分和 pH 值符合要求。

2. 无菌操作控制：在实验过程中，严格遵守无菌操作规范，避免样品受到污染。

3. 平行样控制：在测定过程中，设置平行样，以减少实验误差。

4. 人员培训控制：对实验人员进行培训，提高实验人员的操作技能和质量意识。

八、注意事项1. 在采集样品时，应注意避免样品受到污染。

微生物课程实习方案一、样品的采集处理方法1.遵循的原则：第一，采集的样品要均匀一致、有代表性，能够反映被分析食品的整体组成、质量和卫生状况；第二，在采样过程中，要设法保持原有的理化指标，防止成分逸散或带入杂质。

2.采样的方法因为本组所进行实验的材料是腐竹，属于无包装的散装样品，对于无包装的散堆样品，其取样方法如下：一般按三层五点法进行代表性取样。

首先根据一个检验单位的物料面积大小先划分若干个方块，每块为一区，每区面积不超过50cm2 。

每区按上、中、下分三层，每层设中心、四角共五个点。

按区按点，先上后下用取样器各取少量样品；再按四分法处理取得平均样品。

二、预计时间安排1.2011/12/16——12/18:查阅资料，写好实验方案2.2011/12/19：给老师检查实验方案，并进行修改。

领取实验器材，并清洗实验器材，做好准备工作。

3.2011/12/20——12/25：进行腐竹中酵母菌和霉菌的数目检测实验。

4.2011/12/26——12/30：进行腐竹中细菌的检测实验和大肠杆菌的定性实验5：预计酵母菌和霉菌大概培养5天，预计细菌大概培养3天，在这期间每天上、下午定时进行观察，并记录菌落的生长状况。

三、注意事项1.细菌的培养在三栋1052.酵母菌的培养在三栋1083.每次使用完高压灭菌锅和超净工作台后写明时间，组别（写组长的名字）。

4.称量样品时必须在108，即无菌室那边。

5.每个实验前应该把移液管，试管，三角瓶，以及培养皿洗好并灭菌。

腐竹中酵母菌数目检测一.实验目的采取分离培养方法检测腐竹中细菌数目。

二.实验器材研钵一个，500mL量筒1个，滴定管1根，1 mL吸管4根，试管4根，玻璃棒2根，培养皿12个，500mL烧杯一个，涂抹棒1根，洗耳球1个，牛角匙2个，瓷杯1个，漏斗，橡皮管，铁夹1套，铁架台1个，电磁炉1个，天平1台，pH试纸，250mL三角烧瓶3个，标签纸2张，纱布，棉花，棉线若干，高压蒸汽灭菌锅一台，恒温培养一台，超净工作台。

实验二-食品中细菌总数的测定实验目的：1. 学习测定食品中细菌总数的方法及原理。

2. 掌握样品制备、培养基配置、培养条件和结果判定等技术操作步骤。

3. 了解食品中细菌数量的重要性及危害。

4. 提高操作技能和实验室安全意识。

实验原理：细菌总数包括空气中的细菌、物体表面的细菌、食品中的细菌等。

细菌总数的高低能够判断食品是否受到污染，同时也能为保健品、药品的质量控制提供参考依据。

在实验中，利用营养琼脂培养基对食品中的细菌进行恰当的培养，根据菌落数测定样品中细菌的数量。

细菌总数检测的实验步骤如下：实验材料：1. 细菌培养基（营养琼脂）2. 生物安全柜3. 试管、移液管、枪头4. 稀释液5. 干燥消毒容器6. 计时器7. 烧杯、锅钳、电热板8. 抽气泵、乙醇灯9. 干净的接种环、透明胶带实验步骤：1. 样品的制备样品的种类很多，可以是食品、环境污染物、医疗器械、淤泥、药品等。

为保证实验精度，样品采集要在清洁、无菌的生物安全柜下进行。

2. 取样在样品制备前，首先要准备好玻璃管、移液管、枪头等实验用具。

从样品中取1g，用称量仪器称取固态样品或用移液管取液态样品。

根据要求的稀释倍数，将稀释液(通常使用生理盐水或蒸馏水)与样品混合，摇匀制备样品稀释液。

取少量的稀释液进行翻倒，覆盖在盖子里面，盖上后轻轻摇晃，将悬浮液均匀混合。

5. 涂布培养基将制备好的样品稀释液倒入无菌洗涤的烧杯中,加入相应的营养琼脂，用稀释液逐步稀释，按要求的量逐层涂覆在培养基板上。

培养后，将培养基盘盖上胶带，放置在恰当的温度和湿度下进行培养。

通常在符合条件下，一般需要36-48小时的培养时间。

7. 结果判定观察培养出来的菌落，根据菌落形态，确定细菌的种类，可通过颜色、形状、大小、质地、表面等参数对细菌进行分类。

8. 分析对于食品来说，每克细菌总数尽量控制在1000CFU以下，大于此数量就有可能造成人身体健康的危害。

实验注意事项：1. 实验中禁止口舌操作，禁止带手套和大腰围操作。

实验九食品中细菌菌落总数及大肠菌群的检测[实验目的]1、了解国家规定的食品质量与细菌菌落总数和大肠菌群数量的重要关系。

2、掌握食品细中细菌菌落总数及大肠菌群的检测方法。

[实验原理]菌落总数根据稀释平板技术法检测每mL/g检样在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上,经37℃、24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。

它所反映的是检样中的活菌数，细菌数越多，说明污染程度越大，这项指标可作为判定待测样品被污染的程度。

大肠菌群数是在100mL(g)食品中（或1000 mL水中）大肠菌群最近似值。

它是指肠杆菌科中的４个属，即埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。

这一菌群致病力不强，具有共同特点：好氧和兼性厌氧、革兰氏染色阴性反应、无芽孢杆菌、37℃培养24-48h能发酵乳糖产酸产气。

大肠菌群在人畜肠道内含量最多，可随排泄物进入水源或污染食品。

国际公认以大肠菌群的存在作为粪便污染指标。

这项指标可判定待测样品有无被粪便污染及污染的程度。

[实验材料]1、检样牛乳（饮料、酱油）2、培养基普通营养琼脂平板、单料乳糖胆盐发酵培养基、乳糖发酵培养基、EMB平板3、仪器和其他物品恒温箱、水浴锅、无菌培养皿、无菌吸管、无菌盐水瓶（内装225 mL无菌生理盐水）、无菌试管（内装9 mL无菌生理盐水）、灭菌剪刀、镊子等[实验内容]1、细菌菌落总数的测定(1)制备样品及样品稀释取待测样品（牛乳、酱油）一瓶，用点燃的酒精棉球烧灼瓶口，若是塑料瓶则用75%的酒精棉球擦拭灭菌。

在无菌条件下取样25 mL放入内装225 mL生理盐水的瓶中，充分混匀，制成10-1的稀释液。

用1 mL无菌吸管吸取10-1稀释液1mL，沿管壁徐徐注入装有9mL无菌生理盐水的试管中（注意，吸管尖端不要触及管内稀释液），振荡试管，混合均匀，制成10-2的稀释液。

另取1mL无菌吸管，按上述操作方法做成10-3稀释液。

每次稀释，换用一支无菌吸管，共做10-1、10-2、10-3三个稀释度，分别含样品0.1mL，0.01mL，0.001mL。

食品中菌落总数的测定一、实验目的（1）学习和掌握测定食品中菌落总数的基本方法（2）学会菌落总数的报告方式二、实验材料1、仪器与设备：恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。

2、培养基和试剂：75%乙醇、0.85%生理盐水、琼脂培养基：胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000mL、pH 7.0±0.23、检样：利乐包装鲜牛奶250ml三、实验方法与步骤1、检验程序菌落总数检验程序：检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入46℃15-20ml营养琼脂→置36±1℃恒温箱内培养（48±2）h取出→菌落数→报告2、检样稀释及培养（1）以无菌操作，将检样包装打开，用吸管取25ml鲜牛奶，放于含有225ml灭菌生理盐水的500ml灭菌玻璃三角瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠），经充分振摇做成1：10的均匀稀释液。

（2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。

（3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。

（4）根据食品卫生检验标准要求和检样的菌落数量，选择3个连续适宜稀释度即10、10－1、10－2，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。

（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿15ml~20mL，并转动平皿使与稀释检样混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。

（6）等琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃恒温箱内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1mL样品所含菌落总数。

食品中菌落总数的测定一、实验目的（1）学习与掌握测定食品中菌落总数的基本方法（2）学会菌落总数的报告方式二、实验材料1、仪器与设备:恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。

2、培养基与试剂:75%乙醇、0、85%生理盐水、琼脂培养基:胰蛋白胨5、0g、酵母浸膏2、5g、葡萄糖1、0g、琼脂15、0g、蒸馏水1000mL、pH 7、0±0、23、检样:利乐包装鲜牛奶250ml三、实验方法与步骤1、检验程序菌落总数检验程序:检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入46℃15-20ml营养琼脂→置36±1℃恒温箱内培养(48±2)h取出→菌落数→报告2、检样稀释及培养(1)以无菌操作,将检样包装打开,用吸管取25ml鲜牛奶,放于含有225ml灭菌生理盐水的500ml灭菌玻璃三角瓶内(瓶内预先置适当数量的玻璃珠),经充分振摇做成1:10的均匀稀释液。

(2)用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液,下同),振摇试管混合均匀,做成1:100的稀释液。

(3)另取1ml的灭菌吸管,按上项操作顺序作10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,即换用1支1ml灭菌吸管。

(4)根据食品卫生检验标准要求与检样的菌落数量,选择3个连续适宜稀释度即10、10－1、10－2,分别在作10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度作两个平皿。

(5)稀释液移入平皿后,应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿15ml~20mL,并转动平皿使与稀释检样混合均匀,同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液(不含样品)的灭菌平皿内作空白对照。

(6)等琼脂凝固后,翻转平板,置36±1℃恒温箱内培养(48±2)h取出,计算平板内菌落数目乘以倍数,即得1mL样品所含菌落总数。

细菌总数测定策划书3篇篇一细菌总数测定策划书一、背景随着人们对健康和食品安全的关注度不断提高，细菌总数测定成为了一项重要的检测指标。

本策划书旨在制定一份详细的细菌总数测定方案，以确保检测结果的准确性和可靠性。

二、目的本策划书的目的是规范细菌总数测定的操作流程，确保检测结果的准确性和可靠性。

三、适用范围本策划书适用于食品、环境等领域中细菌总数的测定。

四、测定原理将一定量的样品经过适当的处理后，接种到培养基上，在一定的温度和时间条件下培养，使细菌生长繁殖，然后通过计数平板上的菌落数来计算样品中的细菌总数。

五、仪器和试剂1. 仪器：培养箱、水浴锅、振荡器、电子天平、移液器、无菌吸管、无菌培养皿等。

2. 试剂：营养琼脂培养基、生理盐水等。

六、操作步骤1. 样品采集：按照相关标准采集样品，并尽快进行检测，以避免细菌的生长和死亡。

2. 样品稀释：用无菌生理盐水将样品稀释适当的倍数，通常采用 10-1、10-2、10-3、10-4、10-5 等稀释度。

3. 接种培养：用无菌吸管吸取一定体积的稀释液，接种到相应的培养皿中。

每个稀释度接种两个平行样，同时设置空白对照。

将培养皿置于适宜的温度下培养，一般为37℃培养 24-48 小时。

4. 菌落计数：培养结束后，计数平板上的菌落数。

如果平板上的菌落分布比较均匀，可以采用逐个计数的方法；如果菌落分布不均匀，可以采用稀释平板计数法或涂布平板计数法。

5. 结果计算：根据菌落计数结果和稀释倍数计算样品中的细菌总数。

七、质量控制1. 空白对照：每批样品都应设置空白对照，以检查培养基和操作过程中是否存在污染。

2. 平行样：每个稀释度至少设置两个平行样，以确保结果的准确性。

3. 标准菌株：定期使用标准菌株进行验证实验，以确保检测方法的准确性。

八、注意事项1. 操作过程中应严格遵守无菌操作技术，避免样品和环境中的细菌污染。

2. 稀释液和培养基应在使用前进行预热，以减少温度对细菌生长的影响。

细菌总数测定策划书3篇篇一细菌总数测定策划书一、前言细菌总数是指在一定条件下（如需氧情况、培养温度和时间等），每克（或每毫升）样品中所含的细菌菌落总数。

它是衡量食品、水、环境等中细菌污染程度的重要指标。

本策划书旨在规范细菌总数测定的操作步骤和方法，确保测定结果的准确性和可靠性。

二、测定原理将待检样品经过适当的稀释后，倾注到琼脂培养基上，在一定温度下培养一段时间后，平板上会生长出肉眼可见的菌落。

通过计数菌落的数量，即可计算出样品中的细菌总数。

三、测定范围本方法适用于各类食品、水、环境等样品中细菌总数的测定。

四、测定步骤1. 样品的采集和处理采集具有代表性的样品，根据不同的检测目的选择合适的采样方法和采样量。

对采集的样品进行适当的处理，如均质、稀释等，以确保样品中的细菌能够均匀分布。

2. 培养基的制备按照规定的配方制备培养基，常用的培养基有营养琼脂、平板计数琼脂等。

培养基应在有效期内使用，使用前需进行灭菌处理。

3. 倾注平板每个稀释度至少倾注两个平板，以确保结果的可靠性。

4. 培养条件将平板培养基置于规定的培养温度和时间下培养，一般细菌总数的培养温度为37℃，培养时间为 24-48 小时。

5. 菌落计数培养结束后，取出平板，计数平板上的菌落数量。

菌落计数应遵循一定的原则，如选择合适的计数区域、避免重复计数等。

6. 结果计算根据菌落计数结果，按照相应的计算公式计算出样品中的细菌总数。

7. 注意事项操作过程应严格遵守无菌操作要求，避免样品污染。

培养基的质量和质量控制对测定结果至关重要。

培养条件应严格控制，确保培养效果的一致性。

对结果的准确性进行评估，如重复性、再现性等。

五、质量控制1. 每批样品测定时，应同时进行空白对照和阳性对照，以验证测定过程的准确性和可靠性。

2. 定期对培养基、移液器等实验器具进行校准和维护，确保其性能良好。

3. 对操作人员进行培训和考核，确保其熟练掌握测定方法和操作技能。

六、数据处理和报告1. 记录测定过程中的数据，包括样品信息、稀释倍数、菌落计数等。

食品中菌落总数的测定自主实验设计方案实验目的1、学习并掌握细菌的分离和活菌计数的基本方法与原理。

2、了解菌落总数测定在对被样品进行卫生学评价中的意义。

实验原理菌落总数是指食品经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所含细菌菌落总数。

菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。

菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。

实验材料营养琼脂培养基（10 g蛋白胨、3g牛肉膏、5gNaCl、琼脂15g）、无菌生理盐水、酒精灯、电炉、灭菌箱、无菌培养皿、移液枪、牛肉丸、火腿肠、灭菌玻璃瓶、恒温培养箱等等。

实验步骤1．营养琼脂培养基配制1.1称量按培养基配方比例（配制1000ml培养基，需加蒸馏水补足）依次用称量纸准确地称取10 g蛋白胨、3g牛肉膏、5gNaCl、琼脂15g。

1.2溶解用量筒量取一定量（约1/2）的蒸馏水倒入烧杯，在石棉网上加热并用玻棒搅匀，按配方顺序依次把药品加入（琼脂不要加）。

待药品完全溶解后，补充水到所需的总体积（1000ml）。

1.3调pH用5mol/L NaoH或5mol/L HCl溶液进行调节。

调节pH时，应逐滴加入NaOH 或HCI溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。

边加边搅拌，并不时用pH试纸测试，直至pH达7.2-7.4。

反之，用1mol／LHCl进行调节。

1.4融化琼脂调好pH后，煮沸加入琼脂后，置电炉一面加热一面搅拌至琼脂完全融化才停止搅拌，用先预热的蒸馏水补足水分到1000ml。

1.5分装、包扎、标记稍冷却后分装到锥形瓶，培养基体积约为锥形瓶体积的1/3。

加塞棉塞，再包报纸。

最后用标签纸标明培养基名称、组别等等。

1.6灭菌121℃灭菌箱灭菌20min。

2 取样、稀释和培养2.1 以无菌操作取检样25g（或ml），放于225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适量的玻璃珠），经充分振荡或研磨制成1:10的均匀稀释液。

食品中菌落总数的测定实验一、实验目的:了解稀释平板计数的原理,掌握涂抹平板培养法与混合平板培养法,认识细菌、放射菌、霉菌、的菌落特征。

二、原理平板菌落计数法就是将等测样品经适当稀释后,其中的微生物充分分散为单个细胞,取一定量的稀释液接种到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。

统计菌落数,根据其稀释倍数与取样接种量即可换算出样品中的含菌数。

但就是,由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞,所以,长成的一个单菌落也可能来自样品中的多个细胞。

因此平板菌落计数的结果往往偏低。

为了清楚地阐述平板菌落计数的结果,现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units,cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。

该计数法的缺点就是操作较繁,结果需要培养一段时间才能取得,而且测定结果易受多种因素的影响,但就是这种计数方法最大的优点就是可以获得活菌的信息,所以被广泛用于生物制品检验,以及食品、饮料与水等含菌指数或污染度的检测三、试剂与材料1、仪器恒温培养箱:(36 ℃±1 ℃,30 ℃±1 ℃。

)均质器或振荡器无菌吸管:1 ml(0、01 ml 刻度)、10 ml(0、1 ml 刻度)或微量移液器及吸头无菌锥形瓶:容量250 ml、500 ml、无菌培养皿:直径90 mm菌落计数器2、样品1)平板计数琼脂(plate count agar,PCA)培养基:蛋白胨5、0g 、酵母浸膏2、5 g 、葡萄糖1、0 g 、琼脂15、0 g、蒸馏水1 000ml、pH 7、0±0、2。

将所有成分加于蒸馏水中,煮沸溶解,调节pH。

分装试管或锥形瓶,121 ℃高压灭菌15 min。

注:用平板计数琼脂,称取23、5 g于1 000 ml蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解,121 ℃高压灭菌20min,冷却至45~47℃左右备用。

食品中菌落总数的测定一、实验目的（1）学习和掌握测定食品中菌落总数的基本方法（2）学会菌落总数的报告方式二、实验材料1、仪器与设备：恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。

2、培养基和试剂：75%乙醇、0.85%生理盐水、琼脂培养基：胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000mL、pH 7.0±0.23、检样：利乐包装鲜牛奶250ml三、实验方法与步骤1、检验程序菌落总数检验程序：检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入46℃15-20ml营养琼脂→置36±1℃恒温箱内培养（48±2）h取出→菌落数→报告2、检样稀释及培养（1）以无菌操作，将检样包装打开，用吸管取25ml鲜牛奶，放于含有225ml灭菌生理盐水的500ml灭菌玻璃三角瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠），经充分振摇做成1：10的均匀稀释液。

（2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。

（3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。

（4）根据食品卫生检验标准要求和检样的菌落数量，选择3个连续适宜稀释度即10、10－1、10－2，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。

（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿15ml~20mL，并转动平皿使与稀释检样混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。

（6）等琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃恒温箱内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1mL样品所含菌落总数。

食品中菌落总数的测定欧阳家百（2021.03.07）一、实验目的（1）学习和掌握测定食品中菌落总数的基本方法（2）学会菌落总数的报告方式二、实验材料1、仪器与设备：恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。

2、培养基和试剂：75%乙醇、0.85%生理盐水、琼脂培养基：胰蛋白胨 5.0g、酵母浸膏 2.5g、葡萄糖 1.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000mL、pH 7.0±0.23、检样：利乐包装鲜牛奶250ml三、实验方法与步骤1、检验程序菌落总数检验程序：检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入46℃15-20ml营养琼脂→置36±1℃恒温箱内培养（48±2）h取出→菌落数→报告2、检样稀释及培养（1）以无菌操作，将检样包装打开，用吸管取25ml鲜牛奶，放于含有225ml灭菌生理盐水的500ml灭菌玻璃三角瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠），经充分振摇做成1：10的均匀稀释液。

（2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。

（3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。

（4）根据食品卫生检验标准要求和检样的菌落数量，选择3个连续适宜稀释度即10、10－1、10－2，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。

（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿15ml~20mL，并转动平皿使与稀释检样混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。