疟原虫的形态鉴别厚薄

（吉氏染色剂染色）
（吉氏染色剂染色）
疟原虫在人体内的发育场所依次为肝细胞内及红细胞内，现以间日疟原虫为例，描述如下：1．早期滋养体（环状体）
胞质纤细呈环状，中间为一空泡，核位于一侧，形似戒指状，故称环状体。

红细胞为正常大小。

2．晚期滋养体（大滋养体）
虫体明显增大，胞质增多，并伸出不规则伪足。

虫体胞质中出现细小杆的疟色素。

被寄生的红细胞胀大，颜色变浅，开始出现被染成红色的小点-薛氏点。

3．裂殖体
（1）未成熟的裂殖体
虫体逐渐变圆，空泡消失，核开始分裂，细胞质未分裂，疟色素分散。

红细胞胀大色浅，有薛氏点。

（2）成熟裂殖体
核分裂到12～24个时，胞质也随之分裂，一团细胞质包绕一个核，形成12～24个椭圆形的裂殖子，疟色素集中成堆，虫体充满胀大的红细胞，胞浆出现红染的薛氏点。

4．配子体
配子体呈圆形或椭圆形，胞质无空泡，内有均匀散在的疟色素。

雌配子体：核小，较致密，深红色，常位于虫体的一侧，胞质深蓝色。

雄配子体：核大而疏松，淡红色，位于虫体中央，胞质浅蓝略带红色。

（吉氏染色剂染色）
（吉氏染色剂染色）
（吉氏染色剂染色）。

疟原虫检验技术梁平县疾病预防控制中心何曦血涂片检查疟原虫是诊断和鉴定疟原虫种别的主要方法，也是疟疾流行病学调查的重要部分，血涂片制作和染色的好坏足心影响检查的结果，必须把握好“三关”，即制片、染色和镜检。

一、玻片清洁玻片清洁。

清洁的玻片无油脂，无划痕，无灰尘，玻片上有油迹，使厚血膜容易脱落，薄血膜涂布不均匀。

在用手指持玻片时，只能夹持玻片的两侧边缘，不要接触玻片的表面，以避免手指上的油污染污玻片。

1.新的载玻片先用热肥皂水洗涤，再用清水冲洗，然后用软而洁净的毛巾擦干待用。

2.使用过的载玻片的清洁方法有两种：①5%的肥皂水煮沸法：将洗衣肥皂削成小片，加水配成约5%的肥皂水，煮沸后将玻片一张一张地平放进肥皂水内，微火煮约一刻钟，然后灭火待肥皂水稍冷后，用清洁干毛巾擦净后待用。

②清洁液浸泡法：清洁液配制如下：重铬酸钾 80g浓硫酸 100ml水(清净水)1000ml配制时须先将重铬酸钾研细放入水中，慢慢加温到全部溶解为止，然后缓缓加入浓硫酸，待溶液冷却后倒入有盖的大口玻璃缸内。

清洁玻片时，将待洗的玻片逐张放入清洁中浸泡一两天后，取出清水冲洗至完全没有黄色为止。

浸泡前最好用二甲笨除去镜油，清洁液颜色变为墨绿色后即失去清洁作用，不能再用。

二、制片1.薄血膜涂制：(1)先用75%酒精棉球将耳垂消毒，待酒精干后用采血针迅速刺入耳垂近下端边缘处。

(2)用左手的拇指与食指以及右手的中指向相对的方向将耳垂轻轻挤压出血。

(3)取一张洁净的载玻片，将它的左1/3的表面接触耳垂上的血滴（不要将玻片接触耳垂上的皮肤），使一小滴血在玻片上。

血量1-1.5mm3 .1/4.火柴头大小。

(4)将推片臵于血溶之前与血液相接触，待血液沿推片边缘展开后，将推片与载玻片保持30角度，用力均匀迅速将推片由右向左推出而制成薄血膜。

涂制得较好的薄血膜只有一层血球，血球的分布排列比较均匀，血膜的末端突出如舌状。

若取的血滴太大，则涂制的血膜太宽太厚；若推时用力不均匀，则易成梯田状，若用力太大，则血膜两端过厚，若涂片上有油污，则血膜成多孔状。

作为常规显微镜检查的厚薄血膜是涂在同一载波片上的。

薄片通常用作姓名、日期、编号等说明。

作得好的薄片还用于虫种的鉴别。

厚血膜用于检查。

血膜的制作步骤：
—清洁、包装载玻片
—无菌刺血针（没有注射针头或刺血针的用酒精浸泡）
—70%的酒精
—可吸水棉球—消毒干棉球
—使血片干燥的载玻片盒或覆盖物—铅笔
—登记表
—原珠笔
病人的情况记录在登记表上后，如下法制作血膜：
5、厚片。

一直保持载玻片的边缘或一个角按如下步骤制作厚片：把推片的一个角迅速放在血滴中并扩展它们以制成扁平的厚血膜。

不要过多地搅动血液，但可在3到6次的移动过程中制成圆形或方形的厚血膜。

7、用病人的记录表包好干燥的血片并可能快地送往实验室。

8、用作推片的这些载片可用来作下一个病人的载片。

另一清洁载片将被用作推片。

4、薄血膜。

用另一清洁载玻片作推片，沿血滴表面停住，固定其表面位置，让血液沿推片边缘扩散。

使推片与载玻片保持45度角推出。

在推片过程中要确保推片与载玻片表面均匀地接触。

1、用软铅笔在干燥的薄血膜上相对较
厚的部份写上病人名字或日期编号
说明。

不要用原珠笔在载片上写此
说明。

让厚片在平放状态下干燥，
防止苍蝇、灰尘和过热。

正确制作厚薄血膜说明的例子。

目录第一章疟原虫生活史一、概述二、人体内发育三、蚊体内的发育第二章疟原虫镜下形态一、薄血膜中疟原虫形态二、厚血膜中疟原虫形态第三章显微镜使用及维护一、显微镜的构造二、显微镜使用三、使用注意事项四、显微镜的维护保养第四章血片制作与染色一、血片制作二、血膜的染色第五章疟原虫镜检技术一、血液二、血液中各种正常细胞形态三、薄血膜镜检四、厚血膜镜检五、杂质与疟原虫的鉴别六、疟原虫计数附录：疟原虫图谱第一章疟原虫生活史一、概述疟原虫是疟疾的病原体。

疟原虫为单细胞真核生物，属原生动物亚界顶端复合物门、孢子纲、真球虫目、疟原虫科、疟原虫属。

人体疟原虫有4种：间日疟原虫（Plasmodium vivax）、恶性疟原虫(P.falciparum)、三日疟原虫(P.malariae)和卵形疟原虫(P.ovale)，依次引起间日疟、恶性疟、三日疟和卵形疟。

在我国间日疟较常见，恶性疟次之，但对人体危害较间日疟严重，三日疟偶尔发现，卵形疟已无病例报告。

4种人体疟原虫的生物学特征见表1-1。

疟原虫的发育和繁殖，必须通过脊椎动物与昆虫媒介两个宿主，人体疟原虫的宿主是人和按蚊。

疟原虫在人体分别寄生于肝实质细胞和血液中的红细胞内，在蚊体内则寄生于蚊胃，最后积聚于唾腺。

4种人体疟原虫的生活史基本相同，包括在人体内的红细胞外期和红细胞内期以及在蚊体内的配子生殖和孢子增殖两个阶段。

二、人体内发育疟原虫在人体内的发育分成肝细胞内的发育和红细胞内的发育两个阶段。

（一）红细胞外期按蚊吸人血时，按蚊唾腺中的子孢子随唾液进入人体的末梢血液中，在30分钟内，随血流进入肝脏，在肝实质细胞内发育，进行裂体增殖，此时期称红细胞外期（简称红外期）或肝细胞期（简称肝期），此时期的疟原虫称肝期裂殖体。

成熟肝期裂殖体直径为45～60 m，内含数以万计的肝期裂殖子。

肝期裂殖体成熟致使肝细胞破裂，肝期裂殖子释入血液。

不同种疟原虫的此期所需时间不同，从6～12天不等。

厚、薄血膜法查疟原虫基本原理：疟原虫寄生于红细胞，经制片、染色后，显微镜下可以鉴别疟原虫的虫种和虫期。

试剂器材：75%酒精棉球、采血针、载玻片、甲醇、pH7.0~7.2 PBS缓冲液、姬氏染液（或瑞氏染液）、显微镜等。

操作方法：(1)采血：①采血时间在普查时，一般无法考虑采血时间。

在临床上，对现症病人一般可随时采血，但为了提高检出率，就应当考虑采血的适当时间。

对典型发作的间日疟及三日疟患者，应选择发作后数小时至10余小时采血为好。

此时疟原虫发育至环状体乃至大滋养体，虫体大，疟色素已形成，受染红细胞也出现变化，有利于疟原虫的检出。

恶性疟原虫大滋养体和裂殖体是在皮下、脂肪和内脏微血管中发育的，通常在外周血液中不易查到，配子体在环状体出现1周后方能见于外周血液，故在发作时采血。

②采血部位从患者耳垂或指尖（以左手无名指为宜）取血，婴儿通常从大姆趾第二趾骨腹面针刺采血。

③采血方法用75%乙醇棉球消毒取血部位皮肤，待干后用左手拇指和食指捏住采血部位，右手持针迅速刺入皮肤，待血液流出或轻轻挤出血滴，供制作涂片用，采血完毕用干棉球轻压伤口止血。

(2)制片：①薄血膜的制作取1滴血于1张洁净的载玻片上，选1张边缘平整、光滑的载玻片作推片，用左手拇指和中指夹持其两端，将推片的边缘中点与血滴接触，并与载玻片呈30o~45o夹角，待血滴沿推片边缘向两侧展开后，立即由右向左迅速推成薄血膜。

理想的薄血膜要求红细胞均匀地铺成一层，无裂痕，其末端凸出呈舌尖形。

注意：推片时用力和速度要均匀，不能中途停顿或重复推片，以免造成血膜断裂或厚薄不匀。

如取血量多，夹角宜小；取血量小，则夹角可大些。

②厚血膜的制作用推片的一角接触刺血点上的血滴，取血2滴，置载玻片上，并从里向外作旋转涂布，使成直径为0.8cm大小的圆形血膜，厚薄要均匀，然后平置桌上，待自然干燥。

③厚薄血膜同片制作用目测法将载玻片从右到左等分成6格，厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部，第1、2格可用于贴标签，制作厚、薄血膜方法同上。