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![苯并[a]芘诱导肺癌的分子机制研究进展](https://img.taocdn.com/s1/m/e98c39c24bfe04a1b0717fd5360cba1aa8118cbe.png)
苯并[a]芘诱导肺癌的分子机制研究进展引言苯并[a]芘（benzo[a]pyrene, BaP）是环境中常见的多环芳烃类化合物，存在于空气、水、土壤和食品中，是大气污染和食品污染的主要来源。
BaP主要通过吸入和食入的途径进入人体，具有强烈的致癌作用，是人类肺癌的重要致癌物之一。
在肺部组织内，BaP可通过活性代谢物结合DNA形成致突变的加合物，进而诱导肺癌的发生。
近年来，相关研究深入探索BaP致癌机制的分子机理。
BaP的代谢途径BaP在体内主要通过细胞色素P450（CYP）酶的介导被代谢，形成反式-1,2-二氢基-1,2-环丙基-3,4-苯并[a]芘（BPDE），BPDE是BaP致癌作用发挥的主要中间体。
BPDE可与细胞DNA结合形成加合物，导致DNA突变和细胞基因失控，从而诱导癌细胞的形成。
一些转化酶如GST、UGT等将BPDE代谢成更稳定的物质，可减少BPDE致癌作用的发挥。
BaP致癌机制的研究进展1. 长链非编码RNA（lncRNA）在BaP致癌机制中的作用近年来，越来越多的研究表明，lncRNA参与了BaP引起肺癌的发生，并且可能成为潜在的治疗靶点。
例如，研究发现BaP处理后，长链非编码RNA HEIH的表达上调，并参与了肺癌细胞的增殖和迁移。
另外，lncRNA MALAT1也被证实与BaP引起的肺癌发生有关。
研究发现，BaP处理可显著上调细胞内MALAT1的表达，并促进肺癌细胞的迁移和侵袭。
2. DNA甲基化和酶介导乙酰化调节BaP的致癌作用DNA甲基化和乙酰化是细胞表观遗传调节的主要方式之一，它们具有上下调基因表达的重要作用。
研究发现，BaP能够诱导DNA甲基化水平的上升，从而导致肺癌细胞中调控癌基因和抑癌基因的表达改变。
此外，HDACs也被发现参与BaP致癌作用，HDACs通过下调肿瘤抑制基因的表达以及上调肿瘤相关基因的表达，从而诱导肺癌的发生。
3. 细胞周期调控在BaP诱导肺癌中的作用细胞周期调控与癌症发生和发展密切相关，异常细胞周期和增生往往是癌症的重要表现。
Circ_0001313靶向负调控miR-338-3p抑制结肠癌细胞的辐射敏感性摘要【目的】探究环状RNA_0001313 (Circular RNA_0001313,Circ_0001313) 对人结肠癌细胞辐射敏感性的作用及其机制研究，为临床上结肠癌的放射治疗提供新靶点及策略。
【方法】1. 对结肠癌细胞SW480和SW620进行不同剂量辐照，且分别在不同时间点检测结肠癌细胞中Circ_0001313及下游靶基因的表达量，评估辐照对Circ_0001313表达量的影响。
2. RNA干扰技术沉默结肠癌细胞的Circ_0001313基因，定量即时聚合酶链锁反应(Quantitative real time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测Circ_0001313及下游靶基因的表达量。
并探讨在沉默Circ_0001313基因时，辐照对结肠癌细胞中细胞活力、caspase-3表达及克隆集落的影响，评估Circ_0001313与辐射敏感性的关系。
3. 生物信息学技术预测Circ_0001313的下游靶基因。
4. 进行双荧光素酶报告基因检测Circ_0001313与下游靶基因微小RNA-338-3p (microRNA-338-3p,miR-338-3p) 的相互作用。
5. 进行RNA免疫共沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RIP)实验，探讨Circ_0001313及miR-338-3p能否相互作用。
6. 检测Circ_0001313不同表达时，miR-338-3p 的表达水平。
7. 使用miR-338-3p抑制剂，并利用RNA干扰技术沉默结肠癌细胞的Circ_0001313基因，运用RT-PCR技术检测miR-338-3p的表达量。
并探讨在沉默Circ_0001313基因时，miR-338-3p抑制剂对结肠癌细胞中细胞活力、caspase-3表达及克隆集落的影响，评估miR-338-3p抑制剂对结肠癌细胞辐射敏感性的影响。
专利名称：一种具有癌细胞选择性杀伤和迁移抑制作用的多肽分子及其设计方法与用途
专利类型：发明专利
发明人：茆灿泉,崔健,邬怡然,毕振飞,黄家明,郭泰林
申请号：CN201510783946.4
申请日：20151116
公开号：CN105524159A
公开日：
20160427
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种具有癌细胞选择性杀伤作用的多肽分子及其设计方法与用途。
属于生物制药应用技术领域。
包括多肽氨基酸序列与组成(SEQ？ID：No.1)，共含12个氨基酸。
经9R或8R偶联改造和设计，该多肽分子具有对人肝癌、前列腺癌、乳腺癌等恶性肿瘤细胞强的杀伤作用，而对正常人肝细胞、胚肾细胞、脐静脉内皮细胞则显示较低的杀伤作用，尤其是与对照正常人肝细胞相比，对肝癌细胞具有强的选择性杀伤作用，同时具有对人肝癌、脐静脉内皮细胞迁移的抑制作用。
主要用于制备肝癌等恶性肿瘤细胞的选择性杀伤和迁移抑制方面的药物。
申请人：西南交通大学
地址：610031 四川省成都市二环路北一段111号
国籍：CN
代理机构：成都点睛专利代理事务所(普通合伙)
代理人：葛启函
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与正常二倍体的人皮肤纤维母细胞ＡＧ０１５２２的研究发现，一氧化氮（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ，ＮＯ）和活性氧簇（ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ）参与了ＲＩＢＥ的发生。
Ｉｙｅｒ等【９ｌ】对正常的人肺成纤维细胞的研究发现，转化生长因子一１３（ＴＧＦ—Ｂ）参与了ＲＩＢＥ的发生，而且ＴＧＦ．Ｂ能够降低细胞中抑癌基因ＴＰ５３（Ｐ５３）和细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂ｌＡ（ｃｙｃｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒ１Ａ，ＣＤＫＮｌＡ）的水平，而增加ＣＤＣ２蛋白激酶的含量。
此外，Ｚｈｏｕ掣”】最近研究发现，环氧化酶．２（ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ．２，ＣＯＸ－２）信号通路在ＲＩＢＥ的发生中起着非常重要的作用。
他们应用一种ＣＯＸ．２抑制剂ＮＳ．３９８作用于未接受照射的旁观者细胞，结果发现ＣＯＸ．２抑制剂ＮＳ．３９８可以显著降低ＲＩＢＥ的发生。
图２辐射诱导旁观者效应的发生机制‘９３】４．２乏氧条件下辐射诱导的旁观者效应上述有关辐射诱导旁观者效应（ＲＪＢＥ）的研究都是在有氧的条件下进行的，而有关乏氧条件下辐射诱导旁观者效应（ＲＪＢＥ）的研究目前尚未见到有公开的报道，而细胞内的氧含量与电离辐射所致损伤的发生有着十分重要的关系，那么在氧含量很低的乏氧条件下是否也存在着辐射诱导的旁观者效应（ＲＪＢＥ）？如果存在的话，其发生的机制是怎样的呢？正是基于以上考虑，作者于２００５年下半年在英国牛津大学Ｇｒａｙ癌症研究所ＫｅｖｉｎＭＰｒｉｓｅ教授和复旦大学放射医学研究所邵春林教授及金一尊教授的共同指导下从事乏氧肿瘤细胞ｘ．射线诱导旁观者效应的研究。
实验中将人的恶性神经胶质瘤Ｔ９８Ｇ细胞培养在０．１％的氧浓度条件下，通过对乏氧Ｔ９８Ｇ细胞的研究发现，在乏氧Ｔ９８Ｇ细胞中确实存在着辐射诱导的旁观者效应（ⅪＢＥ）。
通过对其发生机制的初步研究，结果表明一氧化氮（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ，ＮＯ）和活性氧簇（ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ）参与了乏氧Ｔ９８Ｇ细胞第一二部分Ｊ顶铂诱导人肺腺癌多药耐药单克隆细胞株ＳＰＣ－Ａ－１／ＣＤＤＰ．４的建证及其生物学特性结果一、顺铂诱导人肺腺癌多药耐药单克隆细胞株ＳＰＣ．Ａ．Ｉ／ＣＤＤＰ．４的建立经４Ｉｊｔｇ／ｍｌ的大剂量ＣＤＤＰ间歇诱导８次，得到了具有较高耐药性的多克隆细胞株，然后再通过有限稀释法挑选得到６个单克隆细胞株，经多药耐药性检测（结果见表１），将其中耐药性最高的一株命名为ＳＰＣ—Ａ一１／ＣＤＤＰ一４，期间历时１０月余。
•综述•靶向PARP-1调控肿瘤细胞放射敏感性的研究进展余晓军1左代英2侯文彬I李祎亮''中国医学科学院北京协和医学院放射医学研究所，天津市放射医学与分子核医学重点实验室300192；2沈阳药科大学121000通信作者：李祎亮，Email：*********************.cn【摘要】放疗是晚期肿瘤的主要治疗手段，然而，由于肿瘤耐受和抵抗的出现，其治疗效果不佳。
因此.纠正肿瘤放疗抵抗或提高其放疗敏感性成为迫切需要解决的问题。
聚腺甘二磷酸核糖聚合酶(PARP)1是一种功能丰富的核蛋白，鉴于其在染色质结构调节和DNA损伤修复等细胞过程中的重要作用，PARP-1被认为是最具有潜力的一种放射增敏靶点。
笔者就靶向PARP-1调控肿瘤细胞放射敏感性的研究进展作一综述【关键词】辐射增敏药；聚ADP核糖聚合酶类；肿瘤基金项目：天津市自然科学基金(18JCQNJC09500)；天津市科技计划项目(18ZXXYSY00110);中国医学科学院医学与健康科技创新工程项目(2016-I2M-3-022、2017-I2M-3-019)；中央高校基本科研业务费专项资金(3332018117)DOI：10.3760/l21381-201910019-00009Research progress of targeting PARP-1to regulate radiosensitivity of tumor cellsYu Xiaojun',Zuo Daiying2,Hou Wenbin,Li Yiliang1'Tianjin Key Laboratory of R adiation Medicine and Molecular Nuclear Medicine,Institute of R adiationMedicine,Chinese Academy of Medical Sciences,Peking Union Medical College,Tianjin300192,China;2Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang121000,ChinaCorresponding author:Li Yiliang.Email:liyiliang@irm・c [Abstract]Radiotherapy is the main treatment for advanced tumor.However,due to theemergence of tumor tolerance and resistance,the treatment effect is not ideal.Therefore,it is urgent tocorrect the resistance or improve the sensitivity of radiotherapy.Poly(adenosine diphosphate-ribose)polymerase(PARP)l is a member of a functionally rich nuclear protein.In view of its important role incellular processes such as regulation of chromatin structure and repair of DNA damage,PARP-1isconsidered to be the most potential target for radiosensitization.In this paper,the author reviews theresearch progress of targeting PARP-1to regulate radiosensitization of tumor cells.[Key words]Radiation-sensitizing agents;Poly(ADP-ribose)polymerases;NeoplasmsFund programs:Natural Science Foundation of Tianjin(18JCQNJC09500)；Science andTechnology Project of Tianjin(18ZXXYSY00110);Chinese Academy of Medical Sciences InnovationFund for Medical Sciences(2016-I2M-3-022,2017-I2M-3-019);Fundamental Research Funds for theCentral Universities(3332018117)DOI:10.3760/121381-201910019-00009聚腺昔二磷酸核糖聚合酶[poly(adenosine diphosphate-ribose)polymerases,PARP]是一种能够催化二磷酸腺昔(adenosine diphosphate,ADP)核糖向靶蛋白转移的酶家族。
康力欣胶囊放射增敏作用在食管癌放化疗中的临床应用效果分析1. 引言1.1 背景目前，关于康力欣胶囊在食管癌放化疗中的临床应用效果还存在一定争议，有一些研究显示其在提高放射治疗效果方面表现出色，但也有一些研究认为其效果有限。
有必要对康力欣胶囊在食管癌放化疗中的临床应用效果进行进一步的分析和探讨。
本研究旨在通过临床试验设计及结果分析，探讨康力欣胶囊在食管癌放化疗中的实际应用效果，为临床治疗提供科学依据。
1.2 研究目的本研究旨在探究康力欣胶囊在食管癌放化疗中的放射增敏作用及临床应用效果，为临床医生提供更有效的治疗方案。
具体目的包括：1.评估康力欣胶囊在食管癌患者放化疗中的放射增敏作用，探讨其对放疗疗效和生存率的影响；2.分析康力欣胶囊在减轻放化疗引起的副作用方面的效果，比较其与传统治疗方法的差异；3.总结康力欣胶囊在食管癌治疗中的应用效果，为进一步的临床应用提供依据；4.探讨康力欣胶囊在治疗食管癌中的作用机制，为相关研究提供新思路和研究方向。
通过以上研究目的的实现，期望为食管癌患者的治疗提供更多选择，提升治疗效果，提高生存率，改善生活质量。
1.3 研究对象研究对象是患有食管癌的患者，年龄范围在18岁以上，无论性别、种族、病程及分期均可纳入本研究。
患者需符合入组标准，并签署知情同意书。
排除标准包括孕妇、哺乳期妇女、有严重心脏病、肝肾功能不全、有严重感染等其他疾病的患者。
患者将会被随机分配到实验组和对照组，实验组接受康力欣胶囊辅助放化疗，对照组仅接受放化疗。
收集的临床资料将包括患者的基本情况、疾病特征、治疗方案及治疗效果等。
通过临床试验的数据结果分析，可以评估康力欣胶囊在食管癌放化疗中的临床应用效果，为未来的临床实践提供参考依据。
2. 正文2.1 康力欣胶囊的放射增敏作用康力欣胶囊是一种常用的放射增敏剂，其主要作用是通过增强肿瘤细胞对放射治疗的敏感性，从而提高放疗的疗效。
康力欣胶囊可以通过干扰肿瘤细胞的DNA修复机制、促进细胞凋亡以及抑制肿瘤细胞的增殖来实现其放射增敏的作用。
环香多胺在癌症发生和进展中的作用和治疗策略引言：癌症是一种具有高度复杂性和异质性的疾病，对世界范围内的人类健康造成了巨大的威胁。
许多研究表明，环香多胺在癌症发生和进展中具有重要作用且具有治疗潜力。
本文将探讨环香多胺在癌症中的作用机制，并介绍相关的治疗策略。
作用机制：环香多胺是一种重要的生物胺类化合物，具有丰富的药理活性。
研究发现，环香多胺参与了癌症发生和进展的多个方面。
首先，环香多胺通过抑制癌细胞的生长和增殖起到抗肿瘤作用。
其抑制作用可能与调节细胞周期、抑制DNA合成以及诱导细胞凋亡等多种机制有关。
其次，环香多胺还具有抗血管生成作用，可以阻断癌肿瘤对于血液供应的依赖，通过抑制新血管的形成来抑制肿瘤生长和扩散。
此外，环香多胺还能够抑制癌细胞的侵袭和转移能力，减少癌症的转移风险。
治疗策略：基于环香多胺的作用机制，可以提出以下几种治疗策略以应用于癌症治疗。
1. 单药治疗：环香多胺作为一种多功能抗癌物质，可以作为单药进行治疗。
临床研究表明，环香多胺单药治疗在某些癌症类型中具有良好的疗效。
例如，环香多胺在治疗乳腺癌、肺癌、胃癌等方面显示出了显著的抗肿瘤活性。
其治疗作用可能与其对癌细胞增殖、凋亡和血管生成的抑制有关。
2. 结合化疗：环香多胺可以与其他化疗药物联合应用，以增强疗效和减少毒副作用。
一项临床研究表明，将环香多胺与顺铂联合应用于治疗卵巢癌患者，能够显著改善患者的生存率和疗效。
这种联合用药的策略可以通过多个途径增强药物的抗肿瘤作用，提高治疗效果。
3. 靶向治疗：基于环香多胺在癌症发生和进展中的重要作用，可以设计靶向环香多胺的治疗策略。
例如，研究人员可以利用纳米技术，将环香多胺包裹在纳米粒子中，通过靶向递送的方式将其带入肿瘤组织，提高药物的疗效和减少毒副作用。
此外，结合环香多胺的特殊化学结构，研发具有环香多胺类似结构的新型抗癌药物，也是一个潜在的治疗策略。
4. 免疫治疗：癌细胞的免疫逃逸是目前肿瘤治疗的一个重要难题。
环巴胺选择性增加肺癌细胞放射增敏的研究杜函洋1，孟庆慧1，车俊2，徐加英1，张福正2，樊赛军1（1.苏州大学医学部放射医学与防护学院放射生物实验室，江苏苏州215123；2.苏州大学附属第四医院放疗科，江苏无锡214062）摘要目的研究环巴胺对肺癌细胞和正常肺上皮细胞的放射敏感性的影响。
方法采用MTT 测定细胞的生长和存活率；采用克隆形成实验观察环巴胺对肺癌细胞放射敏感性的影响；蛋白免疫印迹法检测Shh 蛋白的表达；siRNA 转染NIH ⁃H226细胞观察降低Shh 的表达对放射敏感性的影响。
结果MTT 结果显示2.5μmol/L 环巴胺24h 处理对本实验研究的所有肺癌细胞系和正常肺上皮细胞系的生长和增殖未见明显的影响。
采用2.5μmol/L 剂量的环巴胺预处理明显增加了NIH ⁃H520、NIH ⁃H1437、NIH ⁃H1975、A549和NIH ⁃H2265种人肺癌细胞的放射敏感性，而并不影响IMR90、CCD ⁃16Lu 和BEAS ⁃2B 3种正常肺上皮细胞的放射敏感性。
在5种肺癌细胞系中可以检测到Shh 蛋白不同程度的表达，而3种正常肺上皮细胞无Shh 蛋白表达。
Shh ⁃siRNA 转染的NIH ⁃H226细胞的放射敏感性明显提高。
结论环巴胺可以降低肺癌细胞中的Shh 蛋白表达水平。
采用Shh ⁃siRNA 明显降低肺癌细胞中Shh 蛋白表达，增加了细胞的放射敏感性，但抑制了环巴胺的放射增敏疗效。
本实验结果证实环巴胺可以选择性提高肺癌细胞的放射治疗敏感性，调节Shh 表达可能是其重要的机制之一。
关键词环巴胺；肺癌；放射敏感性；hedgehog 信号通路中图分类号R816.4文献标志码A文章编号0258-4646（2012）09-0780-05doi网络出版地址Cyclopamine Selectivity Enhances Radiosensitivity of Lung Cancer Cells在世界范围内，肺癌的发病率和死亡率在男女肿瘤中排在第一和第二位［1］，严重威胁着人类的健康。
根据肺癌细胞来源和细胞形态不同可将肺癌分为鳞状细胞癌（约占肺癌的40%）、小细胞癌（15%~20%）、腺癌（约20%）、大细胞癌（15%~20%）、腺鳞癌（<10%）等［2］。
虽然手术是肺癌首选治疗方法，但采用电离辐射的放射治疗是肺癌的主要辅助治疗方法之一。
然而，放射治疗在杀伤肿瘤细胞的同时难免会损伤正常细胞，因此，研发既能提高肺癌放射治疗疗效，但又不明显增加正常细胞在放射治疗过程中所产生辐射损伤的放射治疗增敏药物是肺癌放射治疗中的重要课题。
本实验采用MTT 、细胞克隆形成实验、siRNA 转染和蛋白免疫印迹检测等方法，研究DU Han ⁃yang 1，MENG Qing ⁃hui 1，CHE Jun 2，XU Jia ⁃ying 1，ZHANG Fu ⁃zheng 2，FAN Sai ⁃jun 1（boratory of Radiation Biology ，School of Radiation Medicine and Protection ，Medical College of Soochow University ，Suzhou 215123，China ；2.Depart -ment of Radiation Oncology ，The Fourth Hospital Affiliated to Soochow University ，Wuxi 214062，China ）Abstract Objective To study the impact of cyclopamine on radiosensitivity in lung cancer cell lines and normal lung epithelial cells.MethodsMTT assay was used to determine cell growth and survival ；clonogenic assay was employed to detect the impact of cyclopamineon the radiosensitivity of lung cancer cells ；Western blot assay was employed to measure protein expression ；Shh ⁃siRNA was transfected into NIH ⁃H226cells to observe the influence of the Shh expression decrease on the radiosensitivity.Results2.5μmol/L of cyclopamine showedno significant influence on the growth and proliferation of both lung cancer cells and normal lung epithelial cells.However ，the dose of 2.5μmol/L significantly increased radiosensitivity of five human lung cancer cell lines ，including NIH ⁃H520，NIH ⁃H1437，NIH ⁃H1975，A549and NIH ⁃H226，but failed to affect radiosenstivity of three normal lung epithelial cell lines ，including IMR90，CCD ⁃16Lu and BEAS ⁃2B.After the transfection of Shh ⁃siRNA ，the radiosensitivity of NIH ⁃H226cells was enhanced obviously.ConclusionCyclopamine significantly reducedShh protein expression in five lung cancer cell lines.A significant reducation of Shh protein by Shh ⁃siRNA increased susceptibility of lungcancer cells to radiation and disrupted cyclopamine ⁃mediated radiosenstivity.The present findings demonstrated for the first time that cy -clopamine selectively increases radiosenstivity of lung cancer cells ，the alteration of Shh expression could be one of the mechanisms involvedin cyclopamine ⁃mediated radiosenstivity.Key wordscyclopamine ；lung cancer ；radiosensitivity ；hedgehog signal pathway基金项目：国家自然科学基金资助项目（81071906；81172127）作者简介：杜函洋，（1987-），女，7年制学生.通讯作者：樊赛军，E-mail ：sjfan@ 收稿日期：2012-03-26网络出版时间：中国医科大学学报第41卷第9期2012年9月Journal of China Medical University Vol.41No.9Sep.2012780··2012-09-20 16:25/kcms/detail/21.1227.R.20120920.1625.006.html一种从藜芦属植物山藜芦中分离得到的异甾体类生物碱———环巴胺对肺癌细胞和正常肺上皮细胞放射敏感性的影响。
1材料与方法1.1材料及细胞培养本实验所采用的5种肺癌细胞系为人肺腺癌H1975细胞、人肺鳞癌H226细胞、人肺鳞癌NIH⁃H520细胞、人肺腺癌H1437细胞和人肺腺上皮癌A549细胞，而正常肺上皮细胞系为IMR90、CCD⁃16Lu和BEAS⁃2B。
所有细胞都购置于美国ATCC公司。
所有肺癌细胞系的培养基均为含10%小牛血清和100U/mL青霉素以及100μg/mL链霉素的D⁃MEM。
正常肺上皮细胞培养基为10%小牛血清的RPMI1640，并加有10nmol/L氢羟肾上腺皮质素、5.0μg/mL胰岛素、2.5μg/mL铁传递蛋白、10nmol/L 雌激素、30nmol/L亚硒酸钠、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素。
环巴胺（产品号C4116）购置于美国Sigma⁃Aldrich公司，并溶解在纯度>99%的二甲基亚砜（DMSO），配制成20mmol/L的储存液存于-20℃备用。
1.2细胞照射把指数生长期的肺癌细胞分为环巴胺+γ⁃射线照射组和DMSO+γ⁃射线照射组。
前者为2μmol/L环巴胺作用24h后，后者为肺癌细胞在同量的DMSO （作为对照）作用24h后，在室温下进行2Gyγ⁃射线单次照射。
照射均用137Csγ⁃射线照射源进行，剂量率为0.85Gy/min。
1.3MTT方法检测取对数生长期的细胞，酶消化，接种于96孔培养皿中，24h培养后，加入了2.5μmol/L环巴胺的培养液并继续培养24h。
然后加入MTT（5g/L）20μL/孔，培育4h，弃液后加入DMSO100μL/孔，振荡。
最后采用酶标仪在570nm波长检测每孔细胞OD值，计算细胞存活率=加药组吸光度值/对照组吸光度值×100%。
所有实验均重复3次，取平均值。
1.4克隆形成实验取指数生长期的肺癌细胞，经酶消化，计数后在60mm直径的培养皿中接种不同数量的细胞数。
培养贴壁8h后，实验组加含2.5μmol/L环巴胺至相应的培养孔，对照组换含有D⁃MEM培养液，等药物处理24h后进行2Gyγ⁃射线照射，照射完后重新换培养基继续培养大约2周至克隆形成。
然后结晶紫染液染色，冲洗和晾干，显微镜下观察并计数细胞数>50的细胞克隆数。
所有实验均重复3次，取平均值。
另外，我们还采用细胞克隆形成实验比较了环巴胺对未转染的NIH⁃H226母细胞、Control⁃siRNA 和Shh⁃siRNA转染的NIH⁃H226细胞放射敏感性的影响。
