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《DNA 的粗提取及鉴定》讲义一、引言DNA 作为生命的遗传物质，承载着生物体的遗传信息。
对 DNA 的研究有助于我们深入了解生命的奥秘、疾病的发生机制以及进行法医学鉴定等。
DNA 的粗提取及鉴定是分子生物学中的基础实验技术，下面我们就来详细了解一下。
二、实验目的1、了解 DNA 粗提取的原理和方法。
2、学习 DNA 的鉴定方法。
三、实验原理1、 DNA 在不同浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同在014mol/L 的氯化钠溶液中，DNA 的溶解度最低。
利用这一特点，可以使 DNA 从细胞中析出。
2、 DNA 不溶于酒精溶液但细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，从而可以将 DNA 与蛋白质进一步分离。
3、 DNA 遇二苯胺会呈现蓝色这一特性可用于鉴定 DNA。
四、实验材料和用具1、材料新鲜的鸡血细胞液（也可以使用菜花、洋葱等材料）2、用具研钵、烧杯、玻璃棒、漏斗、纱布、试管、量筒、体积分数为 95%的酒精溶液、2mol/L 的氯化钠溶液、0015mol/L 的氯化钠溶液、二苯胺试剂等。
五、实验步骤1、制备鸡血细胞液将新鲜的鸡血加入抗凝剂，离心或静置沉淀，除去上清液，得到鸡血细胞液。
2、破碎细胞，释放 DNA取 20mL 鸡血细胞液倒入烧杯中，加蒸馏水到 100mL，搅拌均匀。
然后向鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使鸡血细胞破裂，释放出 DNA。
3、去除杂质（1）过滤用纱布过滤含 DNA 的溶液，取滤液。
（2）去除核蛋白向滤液中加入 2mol/L 的氯化钠溶液 40mL，搅拌 1min，使核蛋白充分溶解。
然后缓慢加入蒸馏水，同时轻轻搅拌，直至溶液中氯化钠浓度达到 014mol/L，此时 DNA 会析出，用多层纱布过滤，取纱布上的黏稠物。
4、 DNA 的进一步提纯将上述黏稠物放入 20mL 体积分数为 95%的酒精溶液中，搅拌，使DNA 沉淀。
然后用玻璃棒卷起沉淀，放入试管中。
5、 DNA 的鉴定（1）向两支试管中分别加入 2mol/L 的氯化钠溶液 5mL。
高考第一轮复习讲学稿二二
DNA的粗提取与鉴定（选修IP54）
一、实验目的：初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法。
二、实验原理：
1．DNA的溶解性：
思考题1：DNA在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点？对此有什么应用？
思考题2：利用什么原理来将DNA与蛋白质分离开？
2．DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性：蛋白酶能水解蛋白质，但对DNA没有影响。
大多数蛋白质不能忍受60~80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。
洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。
3．细胞在蒸馏水中易吸水而导致细胞膜和细胞核膜的破裂，据此可得到含有核DNA的溶液。
4．DNA的鉴定：
思考题3：依据什么原理来鉴定DNA？
三、实验材料：鸡血细胞液
思考题4：生活在牧区的人们，采集牛、羊和马血比较方便，他们能否选用牛、羊、马血做实验材料？为什么？
四、实验步骤：
1．制备鸡血细胞液：在鸡血中加入质量浓度为0．1g/mL的柠檬酸钠溶液，离心处理；2．提取鸡血细胞的细胞核物质：向鸡血细胞液中加入蒸馏水，搅拌、过滤；
思考题5：加入蒸馏水的目的是什么？为什么能达到此目的？
3．溶解细胞核内的DNA：加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态；
4．析出含DNA的黏稠物：加入蒸馏水，用玻璃棒搅拌；
思考题6：此时加入蒸馏水的目的是什么？
5．滤取含DNA的黏稠物：过滤；
思考题7：这次过滤与上次过滤的目的一样吗？为什么？
6．将DNA的黏稠物再溶解：加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态；7．过滤含有DNA的氯化钠溶液：过滤；
思考题8：这一步骤的目的是什么？
思考题9：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？
8．提取含杂质较少的DNA：加入冷却的95%的酒精，搅拌；
思考题10：这一步骤的目的是什么？
思考题11：为什么加入的酒精需要冷却的？
9．DNA的鉴定：取两支试管，各加入0．015mol/L的氯化钠溶液5mL，一支加入提取的DNA，两支各加入4mL的二苯胺试剂。
混合均匀后置于沸水中加热。
思考题12：为什么要设置对照组？实验中能观察到什么现象？
五、课堂练习：
1．为了便于提取鸡血细胞中的DNA，下列所采取的措施中，最恰当的是：向经抗凝剂处理的鸡血液加入（）A．蒸馏水B．ATP C．0.3g/mL的蔗糖溶液D．二氧化碳2．下列不适宜作为DNA提取的实验材料是（） A．鸡血细胞 B．蛙的红细胞 C．人的成熟红细胞 D．菜花
3．用过滤的方法得到细胞中的氯化钠溶液后，还要用酒精处理，可以得到较纯化的DNA．这是因为：（）A．DNA易溶于酒精，而滤液中某些杂质不易溶于酒精
B．DNA不易溶于酒精，而滤液中某些杂质易溶于酒精
C．DNA和滤液中其他成分更易溶于酒精
D．DNA和滤液中其他成分都不溶于酒精
4．（多选）下表是关于DNA粗提取与鉴定实验中所使用的材料、操作及其作用的表述．正确
，，。
(2)要进一步提取DNA时，需加入冷却的酒精，其作用是和。
(3)能否用牛血或牛肝代替鸡血做实验？为什么？
6．在DNA粗提取与鉴定的实验中，选择适当浓度
的NaCl溶液就能充分溶解DNA而使杂质沉淀，
或析出DNA过滤去除溶液中的可溶性杂质。
请
在右图中作出DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线。
DNA的粗提取与鉴定参考答案
思考题：
思考题1、DNA在氯化钠溶液中的溶解度，随着氯化钠的浓度的变化而改变的。
当氯化钠的物质的量浓度为0．14mol/L时，DNA的溶解度最低。
利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出；
思考题2、DNA不溶于酒精，但细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步地分离。
思考题3、DNA遇二苯胺（沸水浴）被染成蓝色，所以可用二苯胺作鉴定。
思考题4、不能。
因为哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核，仅靠白细胞和淋巴细胞中的少数DNA，在实验中很难提取到。
思考题5、加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA；蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂。
思考题6、使氯化钠溶液浓度接近0．14mol/L，使DNA最大限度地析出。
思考题7、不一样；这次过滤是为了去除不溶于氯化钠溶液的杂质，而上次过滤是为了去除破裂的细胞膜等物质。
思考题8、除去含有DNA滤液中的杂质；
思考题9、用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA 析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。
因此，通过反复溶解与析出DNA，就能
够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。
思考题10、去除溶于酒精的杂质；
思考题11、可抑制核酸水解酶的活性，防止降解DNA；降低分子的运动，易于形成沉淀析出；
低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂。
思考题12、确定二苯胺不与氯化钠发生颜色反应；实验组试管中可看到溶液变蓝色。
课堂练习：
1．A
2．C
3．B
4．AC
5．（1）②中“20ml 0.015mol／L的氯化钠溶液”错误，应改为“20ml蒸馏水”
②中“经滤纸过滤”错误，应改为“经纱布过滤”
④中“直到溶液中出现丝状物为止”错误，应改为“直到溶液中丝状物不再增加时为止”（2）凝集DNA 溶解其他细胞物质（3）不能哺乳动物的红细胞无DNA
6．。
