多聚甲醛配制

多聚甲醛配制1. 引言多聚甲醛是一种常见的化学品，具有多种应用领域，如建筑材料、纺织品、塑料等。

多聚甲醛的制备过程中，配制是一个关键步骤，合理的配制可以提高产品的品质和性能。

本文将介绍多聚甲醛的配制方法和相关注意事项。

2. 多聚甲醛配制方法多聚甲醛的配制方法可以根据不同的需求进行调整，以下是一种常用的配制方法：2.1 原料准备多聚甲醛的主要原料为甲醛和催化剂。

在配制前需要准备好充足的原料并确保其纯度符合要求。

同时还需要准备一定量的溶剂和其他辅助剂。

2.2 配置反应体系将准备好的甲醛和催化剂溶解在溶剂中，按照一定比例混合。

同时，根据需要可以添加其他辅助剂。

2.3 调整反应条件根据具体情况，调整反应的温度、压力和反应时间等条件。

这些条件的调整需要基于试验和经验，以保证反应的顺利进行。

2.4 反应过程控制在反应过程中，需要控制反应的速率和均匀性。

可以通过搅拌、加热等方式来实现。

2.5 产物分离和纯化反应结束后，通过适当的分离和纯化步骤，将产物从溶剂和其他杂质中分离出来。

这一步骤可以采用过滤、蒸馏等方法实现。

3. 注意事项在多聚甲醛的配制过程中，还需要注意以下事项：3.1 安全防护由于甲醛对人体有刺激性和毒性，制备多聚甲醛时需要采取相应的安全防护措施，佩戴适当的防护服、手套和护目镜等。

3.2 反应条件控制反应条件的控制对多聚甲醛的品质和性能有重要影响，因此需要仔细调整各项反应条件，确保反应的有效进行。

3.3 催化剂选择催化剂的选择对多聚甲醛的成品质量也有一定的影响，需要根据需要选择合适的催化剂并确保其活性和稳定性。

3.4 设备清洁在配制过程中，需要注意保持设备的清洁和无尘状态，以防止杂质的混入。

4. 结论多聚甲醛的配制是一个关键的工艺步骤。

合理的配制方法和注意事项可以提高产品的品质和性能。

通过本文的介绍，读者可以了解多聚甲醛的配制方法以及相关注意事项，并在实践中应用这些知识。

希望本文能为相关从业人员提供一些参考和帮助。

4%多聚甲醛的配制:0.1M PBS配制80g NaCl2g KCl14.4g Na2HPO4KH2PO4溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至，最后加蒸馏水定容至1L即可。

在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4℃冰箱中，在放置磁力搅拌棒的容器中,将4克多聚甲醛(EM 级)溶解于100ml PBS,加入数滴NaOH,在通风厨中60℃加热(打开瓶盖)使溶解,冷却至室温, 用HCl调节溶液的pH值至,使用前新鲜配制.4%多聚甲醛固定液：用途：进行免疫组织化学方法研究时常选用该固定液。

动物灌注固定及后固定（动物器官经该液灌注后，然后取材，再用该液浸泡2-24小时）也常选该固定液固定。

试剂：多聚甲醛40gmol/L PH 500 ml混合后加热至60℃，搅拌并滴加1N NaOH 至清亮为止，冷却后加PBS 至总量1000 ml。

注固定时间24小时。

我们实验室一直沿用的4％多聚甲醛固定液（用于固定鼠或者兔的脑组织标本）的配方是：多聚甲醛（粉末状）：40g磷酸二氢钠：2.965g磷酸氢二钠：29g蒸馏水：1000ml然后一块放到三角烧瓶中，在磁力搅拌器上加热（60℃）振荡24小时。

原来一直用的挺好，配出来也很清亮。

但是这几次也是用同样的方法配出来后，在加热时是清亮的，但是瓶底有不少不溶的杂质。

等不再加热，室温后，溶液就混浊了。

再加热到60度又清亮了。

再冷却到室温后又混浊了。

不知道为啥请高手指点一二，不胜感激4％多聚甲醛固定液里头的陪法有点小技巧:多聚甲醛是教易溶于碱性条件下的,先加多聚甲醛和氢二钠,直接在通风情况下加热溶解,一般15到20分钟就可以,大概放置20分钟后再加二氢钠,溶解后,调PH直到左右即可,最后别忘记放DEPC.其实武汉博士德就有4％多聚甲醛固定液卖的,我们以前都是自己配,一是麻烦,二是要用到DEPC,有毒而且易挥发,还带香味,闻到后喉龙就不舒服.后来就直接找他们买了,方便便宜,省事,最主要的,他们专业点,东西好用!你要考虑以下几过因素:1.蒸馏水洁净.2.三角烧瓶洁净.3.试剂没问题.多聚甲醛就是很难溶解，你把它放在37度温箱里若干天再去看它会有惊喜。

4%多聚甲醛的配制:0.1M PBS配制80g NaCl2g KCl14.4g Na2HPO42.7g KH2PO4溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。

在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4℃冰箱中，在放置磁力搅拌棒的容器中,将4克多聚甲醛(EM级)溶解于100ml PBS,加入数滴NaOH,在通风厨中60℃加热(打开瓶盖)使溶解,冷却至室温, 用HCl调节溶液的pH值至7.4,使用前新鲜配制.4%多聚甲醛固定液：用途：进行免疫组织化学方法研究时常选用该固定液。

动物灌注固定及后固定（动物器官经该液灌注后，然后取材，再用该液浸泡2-24小时）也常选该固定液固定。

试剂：多聚甲醛40gPBS0.1 mol/L PH 7.4 500 ml混合后加热至60℃，搅拌并滴加1N NaOH 至清亮为止，冷却后加PBS 至总量1000 ml。

注固定时间24小时。

我们实验室一直沿用的4％多聚甲醛固定液（用于固定鼠或者兔的脑组织标本）的配方是：多聚甲醛（粉末状）：40g磷酸二氢钠：2.965g磷酸氢二钠：29g蒸馏水：1000ml然后一块放到三角烧瓶中，在磁力搅拌器上加热（60℃）振荡24小时。

原来一直用的挺好，配出来也很清亮。

但是这几次也是用同样的方法配出来后，在加热时是清亮的，但是瓶底有不少不溶的杂质。

等不再加热，室温后，溶液就混浊了。

再加热到60度又清亮了。

再冷却到室温后又混浊了。

不知道为啥？请高手指点一二，不胜感激4％多聚甲醛固定液里头的陪法有点小技巧:多聚甲醛是教易溶于碱性条件下的,先加多聚甲醛和氢二钠,直接在通风情况下加热溶解,一般15到20分钟就可以,大概放置20分钟后再加二氢钠,溶解后,调PH直到7.2左右即可,最后别忘记放DEPC.其实武汉博士德就有4％多聚甲醛固定液卖的,我们以前都是自己配,一是麻烦,二是要用到DEPC,有毒而且易挥发,还带香味,闻到后喉龙就不舒服.后来就直接找他们买了,方便便宜,省事,最主要的,他们专业点,东西好用!你要考虑以下几过因素:1.蒸馏水洁净.2.三角烧瓶洁净.3.试剂没问题.多聚甲醛就是很难溶解，你把它放在37度温箱里若干天再去看它会有惊喜。

4%多聚甲醛配置：（4%是指4g多聚甲醛固体溶于00mL PBS中）1.先配好PBS2.称取4g多聚甲醛固体3.将多聚甲醛放入PBS中水浴锅65℃加热3h注意：1.先配现用，多聚甲醛容易挥发。

上午使用，前一天下午配置；下午使用，当天上午配置。

2.多聚甲醛有毒，使用时要在通风橱中进行并配戴口罩40g多聚甲醛固体→1L PBS4%的多聚甲醛溶液从组织中提取总蛋白组织匀浆8mL裂解液8mL RIPA+80µL PMSF（100×）+190.5µLcocktail（100×）1mL RIPA+10µL PMSF（100×）+23.8µLcocktail（100×）1.裂解：取少量组织+600µL裂解液匀浆→4℃振荡裂解45min→4℃离心12000r/min，离心15min2.稀释：取3µL上清+27µL无菌水→BCA试剂盒以A液：B液=50：1的比例混合→样品25µL+混合液200µL（设置三组平行对照）温敷：37℃下温敷30min→570nm下检测OD1.0左右→测蛋白浓度，计算50µg/70µg对应体积和buffer体积→5×buffer，最大上样量÷4=buffer体积3.变性：100℃煮沸10min，-80℃保存组织总RNA提取取小鼠肝组织50~100mg,加人1mL Trizol TM试剂,置于碾钵中快速研磨,样品体积不超过Trizol TM的10%。

匀浆后的样本于室温孵育5min(使核蛋白复合物完全融解),再加人0.2mL氯仿,盖好样本管盖,用手剧烈振荡15s后室温静置3min；4℃下,12000r/min离心15min(离心后混合物分为下层红色的酚、氯仿相,中间相和无色的上层水相。

RNA分布于上层水相,水相占总体积60%。

4％多聚甲醛配制方法1) 900 ml dd H20 + 500 ul 1N NaOH2) Heat to 65-70℃3) While stirring, add 40 g paraformaldehyde4) Continue heating and stirring until paraformaldehyde is dissolved5) Let cool to room temperature6) Add 100 ml of 10X PBS7) pH to 7.3 with HCl8) Sterile with filter9) Store at 4℃, protected from light称量2g，放置与50ml pbs中，37度孵箱2天后，4%的多聚甲醛就配好了。

配制0.1M的PBS，PH=7.2-7.4,100mlPBS+4g多聚甲醛，放入65℃水浴，一般半天左右就可以溶好因为需要现用现配所以我一般就配10毫升。

用一个带盖的玻璃离心管加0.4克多聚甲醛，加8毫升PBS，加1毫升2N的NAOH，放到60度的水浴里，10分钟，拿出来用手颠倒几次，基本上就都溶了，再用HCL调ph到7.2，最后定容就行了，我最快10分钟搞定。

取4g 多聚甲醛溶到100 PBS缓冲液，加2滴1N的NaOH（pH7.4）,60度水浴磁力搅拌，大约1-2小时可以溶解。

4%多聚甲醛的配制:在放置磁力搅拌棒的容器中,将4克多聚甲醛(EM级)溶解于100ml PBS,加入数滴NaOH,在通风厨中60℃加热(打开瓶盖)使溶解,冷却至室温,调整PH值为7.4,使用前新鲜配制.常用的固定剂种类很多,固定剂的正确选择取决于被研究抗原的性质及所用抗体的特性.固定剂可分为两类:有机溶剂和交联剂.有机溶剂如乙醇和丙酮能够去处脂类物质使细胞脱水,把蛋白质沉淀在细胞结构上.交联剂如多聚甲醛一般通过自由氨基基团把生物分子桥连起来,形成一个相互交联的抗原网.许多人发现用交联剂固定细胞效果较好,尤其是做免疫荧光的时候,当然没有固定的规则可言.不过,单独用多聚甲醛固定的细胞不能使抗体进入细胞内,因此,标本固定后必须用非离子去污剂(triton-x 100)透化标本.4％多聚甲醛（PFA）配制称取40gPFA溶于装有500mlDEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60－65℃,使成乳白色悬液。

聚甲醛（也称为福尔马林）是一种用于固定组织样本的常见方法，以便后续的组织学研究。

以下是一种使用4%多聚甲醛进行组织固定的常规方法：准备4%多聚甲醛溶液：将100 mL的PBS（磷酸缓冲盐溶液）加入4 g多聚甲醛中，并搅拌混合，直到多聚甲醛完全溶解。

获取待固定的组织样本：准备好需要固定的组织样本，例如动物组织或细胞。

固定组织样本：将组织样本置于4%多聚甲醛溶液中，确保样本完全浸泡在溶液中。

通常，至少需要10倍于样本体积的溶液来确保充分固定。

固定时间：根据需要固定的样本的大小和特性，将其浸泡在4%多聚甲醛溶液中的时间可在30分钟至24小时之间。

冲洗样本：固定时间过后，将固定的组织样本取出并用PBS缓冲液进行冲洗，以去除多余的多聚甲醛。

后续处理：完成固定和冲洗后，可以将组织样本进行进一步的处理，如去水化、脱脂、包埋等，以便进行切片和染色等组织学研究。

请注意，这只是一种常用的方法，具体的固定条件可能因实验目的和样本特性而有所不同。

因此，在进行固定实验之前，建议参考相关文献或向专业人士寻求建议，以获得最佳的实验方案。

4%多聚甲醛的配制:欧阳光明（2021.03.07）0.1M PBS配制80g NaCl2g KCl14.4g Na2HPO42.7g KH2PO4溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。

在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4℃冰箱中，在放置磁力搅拌棒的容器中,将4克多聚甲醛(EM级)溶解于100ml PBS,加入数滴NaOH,在通风厨中60℃加热(打开瓶盖)使溶解,冷却至室温, 用HCl调节溶液的pH值至7.4,使用前新鲜配制.4%多聚甲醛固定液：用途：进行免疫组织化学方法研究时常选用该固定液。

动物灌注固定及后固定（动物器官经该液灌注后，然后取材，再用该液浸泡2-24小时）也常选该固定液固定。

试剂：多聚甲醛 40gPBS0.1 mol/L PH 7.4 500 ml 混合后加热至60℃，搅拌并滴加1N NaOH 至清亮为止，冷却后加PBS 至总量1000 ml。

注固定时间24小时。

我们实验室一直沿用的4％多聚甲醛固定液（用于固定鼠或者兔的脑组织标本）的配方是：多聚甲醛（粉末状）：40g磷酸二氢钠：2.965g磷酸氢二钠：29g蒸馏水：1000ml然后一块放到三角烧瓶中，在磁力搅拌器上加热（60℃）振荡24小时。

原来一直用的挺好，配出来也很清亮。

但是这几次也是用同样的方法配出来后，在加热时是清亮的，但是瓶底有不少不溶的杂质。

等不再加热，室温后，溶液就混浊了。

再加热到60度又清亮了。

再冷却到室温后又混浊了。

不知道为啥？请高手指点一二，不胜感激4％多聚甲醛固定液里头的陪法有点小技巧:多聚甲醛是教易溶于碱性条件下的,先加多聚甲醛和氢二钠,直接在通风情况下加热溶解,一般15到20分钟就可以,大概放置20分钟后再加二氢钠,溶解后,调PH直到7.2左右即可,最后别忘记放DEPC.其实武汉博士德就有4％多聚甲醛固定液卖的,我们以前都是自己配,一是麻烦,二是要用到DEPC,有毒而且易挥发,还带香味,闻到后喉龙就不舒服.后来就直接找他们买了,方便便宜,省事,最主要的,他们专业点,东西好用!你要考虑以下几过因素:1.蒸馏水洁净.2.三角烧瓶洁净.3.试剂没问题.多聚甲醛就是很难溶解，你把它放在37度温箱里若干天再去看它会有惊喜。

4%（一）多聚甲醛的配制:0.1M PBS配制80g NaCl2g KCl14.4g Na2HPO42.7g KH2PO4溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。

在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4℃冰箱中，在放置磁力搅拌棒的容器中,将4克多聚甲醛(EM级)溶解于100ml PBS,加入数滴NaOH,在通风厨中60℃加热(打开瓶盖)使溶解,冷却至室温, 用HCl调节溶液的pH值至7.4,使用前新鲜配制.4%多聚甲醛固定液：用途：进行免疫组织化学方法研究时常选用该固定液。

动物灌注固定及后固定（动物器官经该液灌注后，然后取材，再用该液浸泡2-24小时）也常选该固定液固定。

试剂：多聚甲醛 40gPBS0.1 mol/L PH 7.4 500 ml 混合后加热至60℃，搅拌并滴加1N NaOH 至清亮为止，冷却后加PBS 至总量1000 ml。

注固定时间24小时。

我们实验室一直沿用的4％多聚甲醛固定液（用于固定鼠或者兔的脑组织标本）的配方是：多聚甲醛（粉末状）：40g磷酸二氢钠：2.965g磷酸氢二钠：29g蒸馏水：1000ml然后一块放到三角烧瓶中，在磁力搅拌器上加热（60℃）振荡24小时。

原来一直用的挺好，配出来也很清亮。

但是这几次也是用同样的方法配出来后，在加热时是清亮的，但是瓶底有不少不溶的杂质。

等不再加热，室温后，溶液就混浊了。

再加热到60度又清亮了。

再冷却到室温后又混浊了。

不知道为啥？请高手指点一二，不胜感激4％多聚甲醛固定液里头的陪法有点小技巧:多聚甲醛是教易溶于碱性条件下的,先加多聚甲醛和氢二钠,直接在通风情况下加热溶解,一般15到20分钟就可以,大概放置20分钟后再加二氢钠,溶解后,调PH直到7.2左右即可,最后别忘记放DEPC.其实武汉博士德就有4％多聚甲醛固定液卖的,我们以前都是自己配,一是麻烦,二是要用到DEPC,有毒而且易挥发,还带香味,闻到后喉龙就不舒服.后来就直接找他们买了,方便便宜,省事,最主要的,他们专业点,东西好用!你要考虑以下几过因素:1.蒸馏水洁净.2.三角烧瓶洁净.3.试剂没问题.多聚甲醛就是很难溶解，你把它放在37度温箱里若干天再去看它会有惊喜。

4%多聚甲醛固定液：用途：进行免疫组织化学方法研究时常选用该固定液。

动物灌注固定及后固定（动物器官经该液灌注后，然后取材，再用该液浸泡2-24小时）也常选该固定液固定。

试剂：多聚甲醛40gPBS0.1 mol/L PH 7.4 500 ml混合后加热至60℃，搅拌并滴加1N NaOH 至清亮为止，冷却后加PBS 至总量1000 ml。

注固定时间24小时。

我们实验室一直沿用的4％多聚甲醛固定液（用于固定鼠或者兔的脑组织标本）的配方是：多聚甲醛（粉末状）：40g磷酸二氢钠：2.965g磷酸氢二钠：29g蒸馏水：1000ml然后一块放到三角烧瓶中，在磁力搅拌器上加热（60℃）振荡24小时。

原来一直用的挺好，配出来也很清亮。

但是这几次也是用同样的方法配出来后，在加热时是清亮的，但是瓶底有不少不溶的杂质。

等不再加热，室温后，溶液就混浊了。

再加热到60度又清亮了。

再冷却到室温后又混浊了。

不知道为啥？请高手指点一二，不胜感激4％多聚甲醛固定液里头的陪法有点小技巧:多聚甲醛是教易溶于碱性条件下的,先加多聚甲醛和氢二钠,直接在通风情况下加热溶解,一般15到20分钟就可以,大概放置20分钟后再加二氢钠,溶解后,调PH直到7.2左右即可,最后别忘记放DEPC.其实武汉博士德就有4％多聚甲醛固定液卖的,我们以前都是自己配,一是麻烦,二是要用到DEPC,有毒而且易挥发,还带香味,闻到后喉龙就不舒服.后来就直接找他们买了,方便便宜,省事,最主要的,他们专业点,东西好用!你要考虑以下几过因素:1.蒸馏水洁净.2.三角烧瓶洁净.3.试剂没问题.多聚甲醛就是很难溶解，你把它放在37度温箱里若干天再去看它会有惊喜。

以前用过磁力搅拌棒转一上午都不行，放在一边过几天再看就溶解了。

如果要求中性多聚甲醛就用pbs或者用磷酸氢二钠+二氢钠，如果不要求中性用水就可以啦我要做免疫组化实验。

用ABC法，DAB显色。

组织的固定液，查外文资料用的都是4％多聚甲醛／0.1M PBS。

4％的多聚甲醛溶液通常是作为流式标本的储存液，保存在2－8℃。

要使用时，可用PBS稀释至工作液（应用液）。

因为甲醛有毒，所以在配置4％的多聚甲醛固定液时要做好防护措施。

下面详细介绍4%多聚甲醛固定液配制步骤和方法。

4%多聚甲醛固定液配制需材料和设备：
去离子水、HCl (稀)、NaOH (1 N)、多聚甲醛粉末、1X PBS（0.137 M NaCl, 0.05 M NaH2PO4, pH 7.4）、0.22μm滤膜、玻璃器皿、手套和保护眼镜、磁力搅拌器、温度计、通风柜
步骤：
要配制1 L的4%多聚甲醛，在通风柜中，将800 mL的1X PBS加入玻璃烧杯，边搅拌边加热至约60℃，注意不能让溶液沸腾。

往热PBS溶液中加入40g多聚甲醛粉末。

多聚甲醛粉末可能不会立即溶解，可通过滴入1N NaOH搅拌逐步提高pH值，直至多聚甲醛粉末完全溶解。

待溶液冷却，过滤溶液，用PBS调节溶液体积至1L。

检查pH值，用稀盐酸调节pH值至6.9左右。

保存：
4％的多聚甲醛溶液可分装成多管冻存，或者保存在2－8℃大约1个月。

多聚甲醛配制简介多聚甲醛，又称尿素甲醛树脂，是一种常用的合成树脂。

它具有优异的耐磨性、耐热性、抗渗透性等特点，被广泛应用于木材制造、涂料工业、纺织业等领域。

本文将介绍多聚甲醛的配制过程和注意事项。

配置材料要配制多聚甲醛，通常需要以下材料：1.尿素：作为主要原料，可以在化工原料市场或实验室供应商处获得；2.甲醛溶液：通常以37%的甲醛溶液（甲醛浓度37%）作为原料，可以在化工原料市场或实验室供应商处获得；3.催化剂：多聚甲醛的反应需要催化剂加速，常用的催化剂有氯化钠、氯化胺等。

配制步骤下面是多聚甲醛的配制步骤：1.将一定质量的尿素粉末放入配制容器中，并加入适量的去离子水，使尿素完全溶解，得到尿素溶液；2.向尿素溶液中加入适量的甲醛溶液，注意甲醛溶液要慢慢滴入，并不断搅拌，直至反应液体成为混浊状；3.添加适当的催化剂，催化剂的种类和用量根据具体需求而定，一般需要进行实验验证；4.搅拌反应液体，并保持一定的反应温度，一般在50-70摄氏度之间，根据具体反应情况调整；5.反应一定时间后，将反应液体静置冷却，使其冷却至室温；6.过滤反应液体，去除沉淀，可采用滤纸或其他过滤器进行过滤；7.将过滤后的液体进行干燥处理，可采用真空干燥或自然干燥的方式；8.最后获得多聚甲醛制品。

注意事项在配制多聚甲醛的过程中，需要注意以下事项：1.安全操作：甲醛是一种有毒物质，操作时需佩戴防护手套、口罩和护目镜等个人防护装备，避免吸入或接触甲醛溶液；2.通风环境：多聚甲醛的配制过程会释放甲醛气体，需要在通风良好的实验室或生产环境中进行，避免气体积聚；3.温度控制：反应温度对多聚甲醛的质量有一定的影响，应根据具体要求合理控制反应温度；4.催化剂选择：催化剂的种类和用量会影响多聚甲醛的性能，需要根据具体需求选择合适的催化剂；5.搅拌均匀：在加入甲醛溶液时，需进行充分的搅拌，以确保反应液体的均匀混合；6.实验验证：多聚甲醛的配制过程中，可进行小规模的实验验证，以确定最佳的配方和工艺参数。

4%多聚甲醛的配制:之巴公井开创作0.1M PBS配制80g NaCl2g KCl14.4g Na2HPO42.7g KH2PO4溶于800ml蒸馏水中，用，最后加蒸馏水定容至1L即可。

在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保管存于室温或4℃冰箱中，在放置磁力搅拌棒的容器中,将4克多聚甲醛(EM级)溶解于100ml PBS,加入数滴NaOH,在通风厨中60℃加热(打开瓶盖)使溶解,冷却至室温, 用,使用前新鲜配制. 4%多聚甲醛固定液：用途：进行免疫组织化学方法研究时常选用该固定液。

动物灌注固定及后固定（动物器官经该液灌注后，然后取材，再用该液浸泡2-24小时）也常选该固定液固定。

试剂：多聚甲醛40gPBS0.1 mol/L PH 7.4 500 ml 混合后加热至60℃，搅拌并滴加1N NaOH 至清亮为止，冷却后加PBS 至总量1000 ml。

注固定时间24小时。

我们实验室一直沿用的4％多聚甲醛固定液（用于固定鼠或者兔的脑组织标本）的配方是：多聚甲醛（粉末状）：40g磷酸二氢钠：2.965g磷酸氢二钠：29g蒸馏水：1000ml然后一块放到三角烧瓶中，在磁力搅拌器上加热（60℃）振荡24小时。

原来一直用的挺好，配出来也很清亮。

但是这几次也是用同样的方法配出来后，在加热时是清亮的，但是瓶底有很多不溶的杂质。

等不再加热，室温后，溶液就混浊了。

再加热到60度又清亮了。

再冷却到室温后又混浊了。

不知道为啥？请高手指点一二，不堪感激4％多聚甲醛固定液里头的陪法有点小技巧:多聚甲醛是教易溶于碱性条件下的,先加多聚甲醛和氢二钠,直接在通风情况下加热溶解,一般15到20分钟就可以,大概放置20分钟后再加二氢钠,溶解后,调PH直到7.2左右即可,最后别忘记放DEPC.其实武汉博士德就有4％多聚甲醛固定液卖的,我们以前都是自己配,一是麻烦,二是要用到DEPC,有毒而且易挥发,还带香味,闻到后喉龙就不舒服.后来就直接找他们买了,方便廉价,省事,最主要的,他们专业点,东西好用!你要考虑以下几过因素:1.蒸馏水洁净.2.三角烧瓶洁净.3.试剂没问题.多聚甲醛就是很难溶解，你把它放在37度温箱里若干天再去看它会有惊喜。

4%多聚甲醛配置：（4%是指4g多聚甲醛固体溶于00mL PBS中）1.先配好PBS2.称取4g多聚甲醛固体3.将多聚甲醛放入PBS中水浴锅65℃加热3h注意：1.先配现用，多聚甲醛容易挥发。

上午使用，前一天下午配置；下午使用，当天上午配置。

2.多聚甲醛有毒，使用时要在通风橱中进行并配戴口罩40g多聚甲醛固体→1L PBS120g多聚甲醛固体→3L PBS取50只小鼠，1只小鼠注射20mL 4%的多聚甲醛溶液，共需1000mL≈，故要配置1、5L的4%的多聚甲醛溶液从组织中提取总蛋白组织匀浆8mL裂解液8mL RIPA+80µL PMSF（100×）+190.5µLcocktail（100×）1mL RIPA+10µL PMSF（100×）+23.8µLcocktail（100×）1.裂解：取少量组织+600µL裂解液匀浆→4℃振荡裂解45min→4℃离心12000r/min，离心15min2.稀释：取3µL上清+27µL无菌水→BCA试剂盒以A液：B液=50：1的比例混合→样品25µL+混合液200µL（设置三组平行对照）温敷：37℃下温敷30min→570nm下检测OD1.0左右→测蛋白浓度，计算50µg/70µg对应体积和buffer体积→5×buffer，最大上样量÷4=buffer体积3.变性：100℃煮沸10min，-80℃保存组织总RNA提取取小鼠肝组织50~100mg,加人1mL Trizol TM试剂,置于碾钵中快速研磨,样品体积不超过Trizol TM的10%。

匀浆后的样本于室温孵育5min(使核蛋白复合物完全融解),再加人0.2mL氯仿,盖好样本管盖,用手剧烈振荡15s后室温静置3min；4℃下,12000r/min离心15min(离心后混合物分为下层红色的酚、氯仿相,中间相和无色的上层水相。

4%多聚甲醛的配制:之吉白夕凡创作0.1M PBS配制80g NaCl2g KCl14.4g Na2HPO42.7g KH2PO4溶于800ml蒸馏水中，用，最后加蒸馏水定容至1L即可。

在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保管存于室温或4℃冰箱中，在放置磁力搅拌棒的容器中,将4克多聚甲醛(EM级)溶解于100ml PBS,加入数滴NaOH,在通风厨中60℃加热(打开瓶盖)使溶解,冷却至室温, 用,使用前新鲜配制. 4%多聚甲醛固定液：用途：进行免疫组织化学方法研究时常选用该固定液。

动物灌注固定及后固定（动物器官经该液灌注后，然后取材，再用该液浸泡2-24小时）也常选该固定液固定。

试剂：多聚甲醛40gPBS0.1 mol/L PH 7.4 500 ml 混合后加热至60℃，搅拌并滴加1N NaOH 至清亮为止，冷却后加PBS 至总量1000 ml。

注固定时间24小时。

我们实验室一直沿用的4％多聚甲醛固定液（用于固定鼠或者兔的脑组织标本）的配方是：多聚甲醛（粉末状）：40g磷酸二氢钠：2.965g磷酸氢二钠：29g蒸馏水：1000ml然后一块放到三角烧瓶中，在磁力搅拌器上加热（60℃）振荡24小时。

原来一直用的挺好，配出来也很清亮。

但是这几次也是用同样的方法配出来后，在加热时是清亮的，但是瓶底有很多不溶的杂质。

等不再加热，室温后，溶液就混浊了。

再加热到60度又清亮了。

再冷却到室温后又混浊了。

不知道为啥？请高手指点一二，不堪感激4％多聚甲醛固定液里头的陪法有点小技巧:多聚甲醛是教易溶于碱性条件下的,先加多聚甲醛和氢二钠,直接在通风情况下加热溶解,一般15到20分钟就可以,大概放置20分钟后再加二氢钠,溶解后,调PH直到7.2左右即可,最后别忘记放DEPC.其实武汉博士德就有4％多聚甲醛固定液卖的,我们以前都是自己配,一是麻烦,二是要用到DEPC,有毒而且易挥发,还带香味,闻到后喉龙就不舒服.后来就直接找他们买了,方便廉价,省事,最主要的,他们专业点,东西好用!你要考虑以下几过因素:1.蒸馏水洁净.2.三角烧瓶洁净.3.试剂没问题.多聚甲醛就是很难溶解，你把它放在37度温箱里若干天再去看它会有惊喜。

1, 10%EDTA（乙二胺四乙酸(HO2CCH2)2NCH2CH2N(CH2CO2H)2）我们用的乙二胺四乙酸，而没选用乙二胺四乙酸钠，大家要是配的话可以再咨询一下两者的区别）配制方法：
1，调水浴温度68度（60-70度）
2，称EDTA100g(备用，先不要倒入烧杯中)；NaOH 25g（大约1:4的关系溶解）(倒入烧杯中)
3，量取80ml 蒸馏水或者PBS倒入烧杯中
4，将带有NaOH烧杯放入水浴箱中，将EDTA 分几次倒入烧杯中，搅拌，试情况多次少量NaOH放入烧杯中（助溶）至完全溶解
5，倒入量筒加PBS 至97ml 左右，调PH至7.0-7.2（上步1:4时需用NaOH调至ph中性；如果用NaOH过量了，这恤盐酸（用滴管加））（同样少量多次）
6，倒入量筒，定容至100ml
7，过滤，分装，4度保存（温度没查到相关文献要求？）
2,4%多聚甲醛配制方法：
1, 调水浴温度58度
2，称多聚甲醛4g,
3，PBS 液50ml
4，上述2，3混合，放水浴箱里，同时搅拌，一粒一粒放NaOH(促溶)（少量多次放，前后搅拌后迟一下再放,感觉需要量很少）
5，完全溶解后，加45ml PBS, 调PH到7.0-7.2（用NaOH或盐酸）（同样少量多次）
6，倒入量筒，定容至100ml
7，过滤，分装，避光(采用棕色瓶或者避光纸包裹)保存-20°C。

多聚甲醛固定组织使用量多聚甲醛是一种常用的固定组织的化学试剂，被广泛应用于生物学、医学和科研领域。

它具有很强的固定性能，能够稳定细胞和组织结构，使其能够长时间保存并便于观察和研究。

多聚甲醛的使用量与固定组织的大小、数量及处理方法有关。

一般来说，对于小型的生物样本，如细胞或小动物组织，一般使用1%至4%的多聚甲醛进行固定。

对于大型组织样本，如器官或整个动物的组织，需要使用更高浓度的多聚甲醛，通常为6%至10%。

在使用多聚甲醛固定组织时，需要注意以下几点。

首先，应将多聚甲醛溶液调至适当浓度，并将样本完全浸泡在溶液中，确保每个细胞和组织都得到充分固定。

其次，在固定过程中应控制固定时间，通常为几小时至几天不等，时间过长或过短都会影响固定效果。

此外，固定过程中温度的控制也非常重要，一般在室温或低温下进行固定，避免多聚甲醛的挥发和蒸发。

多聚甲醛固定后，还需要进行后续处理，如洗涤、脱水和包埋等步骤，以便于进一步的观察和实验。

洗涤的目的是去除多聚甲醛残留物，通常使用缓冲液进行多次洗涤。

脱水的目的是将组织中的水分逐渐置换为有机溶剂，常用的有乙醇和二甲苯等。

最后，组织需要进行包埋处理，即将其嵌入到固体的支持材料中，如蜡块，以便于切片和染色。

多聚甲醛固定组织的使用量除了与样本的大小有关外，还与固定时间、温度和处理方法等因素有关。

一般来说，对于小型样本，每毫升多聚甲醛的使用量在1毫升至10毫升之间。

对于大型样本，每克组织的使用量在10毫升至100毫升之间。

多聚甲醛作为一种常用的固定剂，具有固定效果好、保存时间长、操作简便等优点。

但同时也存在一些缺点，如容易产生毒性气体、对蛋白质和核酸的影响等。

因此，在使用多聚甲醛固定组织时，需要注意安全操作，并在后续实验中进行相应的补偿和修复。

多聚甲醛作为一种常用的固定组织试剂，在生物学和医学研究中发挥着重要作用。

合理使用多聚甲醛固定组织，能够保持细胞和组织的完整性，为后续的观察和实验提供可靠的基础。

4%多聚甲醛配置：（一）（4%是指4g多聚甲醛固体溶于00mL PBS中）1.先配好PBS2.称取4g多聚甲醛固体3.将多聚甲醛放入PBS中水浴锅65℃加热3h注意：1.先配现用，多聚甲醛容易挥发。

上午使用，前一天下午配置；下午使用，当天上午配置。

2.多聚甲醛有毒，使用时要在通风橱中进行并配戴口罩40g多聚甲醛固体→1L PBS120g多聚甲醛固体→3L PBS取50只小鼠，1只小鼠注射20mL 4%的多聚甲醛溶液，共需1000mL≈，故要配置1、5L的4%的多聚甲醛溶液从组织中提取总蛋白组织匀浆8mL裂解液8mL RIPA+80µL PMSF（100×）+190.5µLcocktail（100×）1mL RIPA+10µL PMSF（100×）+23.8µLcocktail（100×）1.裂解：取少量组织+600µL裂解液匀浆→4℃振荡裂解45min→4℃离心12000r/min，离心15min2.稀释：取3µL上清+27µL无菌水→BCA试剂盒以A液：B液=50：1的比例混合→样品25µL+混合液200µL（设置三组平行对照）温敷：37℃下温敷30min→570nm下检测OD1.0左右→测蛋白浓度，计算50µg/70µg对应体积和buffer体积→5×buffer，最大上样量÷4=buffer体积3.变性：100℃煮沸10min，-80℃保存组织总RNA提取取小鼠肝组织50~100mg,加人1mL TrizolTM试剂,置于碾钵中快速研磨,样品体积不超过TrizolTM的10%。

匀浆后的样本于室温孵育5min(使核蛋白复合物完全融解),再加人0.2mL 氯仿,盖好样本管盖,用手剧烈振荡15s后室温静置3min；4℃下,12000r/min离心15min(离心后混合物分为下层红色的酚、氯仿相,中间相和无色的上层水相。