用Elisa试剂盒检测人血清血浆中VEGF血管内皮生长因子的浓度

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。

人血管内皮细胞生长因子（VEGF）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书【试剂盒名称】人血管内皮细胞生长因子（VEGF）定量检测试剂盒（ELISA）【试剂盒用途】定量检测人子血清、血浆及相关液体样本中血管内皮细胞生长因子（VEGF）的含量。

【检测原理】本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。

将标准品、待测样本加入到预先包被人血管内皮细胞生长因子（VEGF））多克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。

依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人血管内皮细胞生长因子（VEGF））浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人血管内皮细胞生长因子（VEGF））含量。

【试剂盒组成】1 酶标包被板12孔×8条7 底物夜A6mL2 标准品：1600pg/ml0.6mL 8 底物夜B6mL3 20倍浓缩洗涤液20mL9 终止液6mL4 标准品稀释液6mL10 说明书1份5 样本稀释液6mL 11 封板膜1张6 酶标试剂6mL12 密封袋1个备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：1600、800、400、200、100、50pg/ml【需要而未提供的试剂和器材】1、37℃恒温箱2、标准规格酶标仪3、精密移液器及一次性吸头4、蒸馏水5、一次性试管6、吸水纸【操作步骤】1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。

2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。

人血管内皮生长因子受体(VEGFR)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中血管内皮生长因子受体(VEGFR)的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人血管内皮生长因子受体(VEGFR)水平。

用纯化的人血管内皮生长因子受体(VEGFR)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血管内皮生长因子受体(VEGFR)，再与HRP标记的血管内皮生长因子受体(VEGFR)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的血管内皮生长因子受体(VEGFR)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人血管内皮生长因子受体(VEGFR)浓度。

样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。

通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。

产品说明书人血管内皮生长因子ELISA试剂盒（Human VEGF ELISA KIT）产品货号：H6139S, H6139M, H6139L产品规格：24T, 48T, 96T产品内容：注：终止液和显色剂具有腐蚀性，一旦接触到液体，请尽快用大量清水冲洗。

储存条件4℃避光保存，有效期见外包装。

开封后，保存温度详见说明书。

产品介绍Human VEGF ELISA Kit (Human Vascular Endothelial Cell Growth Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即人血管内皮生长因子ELISA试剂盒，可以定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组VEGF浓度。

人VEGF是由两个相同亚基以二硫键交联组成的二聚体糖蛋白，基因定位于第6号染色体长臂，由8个外显子和7个内含子交替构成，约14 kb。

由于mRNA剪接方式不同，产生了单链分别含121，145，165，183，189和206个氨基酸的不同变异体。

VEGF 121分子量约为34-46 kDa，是可溶性分泌型蛋白质，以游离状态存在，不能与肝素结合；VEGF 165分子量为45 kDa，30-50%以可溶性形式分泌于细胞外基质，其余部分与细胞膜、基底膜或细胞外基质含有肝素的糖蛋白结合。

VEGF 145存在于胎盘细胞和女性生殖道肿瘤细胞。

VEGF 189及VEGF 206分泌后完全结合于细胞膜或基底膜含有肝素的糖蛋白上。

骨骼肌，心肌，肝细胞，成骨细胞，中性粒细胞，巨噬细胞，角质形成细胞，血小板，褐色脂肪组织，CD34+细胞，星形细胞，神经元和内皮细胞等多种细胞和组织均可产生VEGF。

血清和血浆样本均可检测到VEGF，由于血小板可释放VEGF，因此血清中VEGF含量较高。

VEGF是一种特异作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子，可增加血管通透性、促进血管形成、引起细胞外基质成分改变等。

《医学统计学》期末模拟考试题（三）一．是非题（每题1分，共20分）1．评价某人的某项指标是否正常，所用的范围是。

（）2．配对资料若用成组t检验处理，就降低了统计效率。

（）3．因为两类错误的存在，所以不能凭假设检验的结果下结论。

（）4．随机区组设计的区组变异和误差两部分相当于完全随机设计方差分析的组内变异。

（）5．抗体滴度资料经对数转换后可做方差分析，若方差分析得P<0.05，则可认为实测数据的各总体算术均数不全相等。

（）6．五个百分率的差别的假设检验，＞，可认为各组总体率都不相同。

（）4．在两样本均数比较的Z检验中，若Z≥Z0.05，则在α=0.05水平上可认为两总体均数不等。

（）5．在t检验中，若拒绝H，P值越小，则说明两总体均数差别越大。

（）6．对三个地区血型构成（A、B、O、AB型），作抽样调查后比较，若有一个理论频数小于5大于1且n＞40，必须作校正检验。

（）7．如果两个变量的变动方向一致，同时呈上升或下降趋势，则二者是正相关关系。

（）8．Ⅱ期临床试验是指采用随机盲法对照实验，评价新药的有效性及安全性，推荐临床给药剂量。

（）9．临床试验中，为了避免人为主观因素的影响，保证结果的真实性，通常不让受试者及其家属知道他参与这项试验。

（）10．假定变量X与Y的相关系数r1是0.8，P1<0.05；变量M与N的相关系数r2为－0.9，P2<0.05，则X与Y的相关密切程度较高。

与Y的相关系数r1是0.8，P1<0.05；变量M与N的相关系数r2为－0.9，P2<0.05，则X与Y的相关密切程度较高。

（）11．临床试验必须符合《赫尔辛基宣言》和国际医学科学组织委员会颁布的《人体生物医学研究国际道德指南》的道德原则。

（）12．当直线相关系数r＝0时，说明变量之间不存在任何相关关系。

＝0时，说明变量之间不存在任何相关关系。

（）13．偏回归系数表示在除Xi 以外的自变量固定不变的条件下，Xi每改变一个单位的平均变化。

ELISA的标本准备在收集标本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。

对收集后当天就进行检测的标本，及时储存在4℃备用。

对于隔天再检测的标本，及时分装后冻存在-20℃备用，有条件的，最好-70℃冻存备用。

标本应避免反复冻融。

液体类标本包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

尿液：用无菌管收集。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照此实行。

细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

培养细胞检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。

通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

组织标本切割标本后，称取重量。

加入一定量的PBS，PH7.4。

用液氮迅速冷冻保存备用。

标本融化后仍然保持2-8℃的温度。

加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

分装后一份待检测，其余冷冻备用。

ELISA实验步骤工作原理（以VEGF ELISA Kit为例）血管内皮细胞生长因子（VEGF）是最重要的血管生长因子之一。

二个亚单位由二硫键连接，组成分子量46-48KDa的糖蛋白质。

血浆内皮素,血管内皮生长因子水平在糖尿病肾病患者治疗前后变化的意义【摘要】目的：探讨了糖尿病肾病患者治疗前后血浆内皮素和血管内皮生长因子水平的变化和意义。

方法：分别应用放免法和elisa 法对69例糖尿病患者进行了血浆 et和vegf水平测定，并与35名健康人作比较。

结果：在治疗前血浆et和vegf水平非常显著的的高于正常人组（p<0.01），经治疗后3个月，血et和vegf水平明显降低，但与正常人比较仍有显著性差异（p<0.05）。

结论：检测糖尿病肾病患者血浆et和vegf水平对了解病情，观察疗效，与病情的发生和发展密切相关。

【关键词】糖尿病肾病；血浆内皮素；血管内皮生长因子plasma endothelim,vascular endothelial growth factor levels before and after treatment in patient with diabetic nephropathywang xinjunthe people,s hospital of minquan county,henan 【abstract】objective：to explore the changes of plasma endothelim(et) and vascular endothelial growthfactor(vegf)levels before and after treatment in patients with diabetic nephropathy and their clinical signmificance.methods:blood was tested for levels of et(with ria)and vegf(with elisa)in all the patients both before andafter treatment in 69 patients as wellas normalcontrols.results: before of treatment in plasma et and vgef levels were significantly higher than those in normal controls（p<0.01）,after treatment in three months,plasma et and vegf levels weresignificantly( p<0.05）.conclusions:detection opf plasma et and vegf levels of ideal for evaluton of treatment effect and great clinical important values in patients with diabetic nephropathy.【key word】diabetic nephropathy,endothelim(et), vascular endothelial growth factor(vegf)糖尿病肾病为糖尿病微血管病变并发症，其发病机理目前尚无十分明确，许多因素参与了糖尿病肾病的发展过程。

血管内表皮生长因子检测原理英文回答：The detection principle of vascular endothelial growth factor (VEGF) involves measuring the levels of this important growth factor in the blood. VEGF is a proteinthat plays a crucial role in the formation of new blood vessels, a process known as angiogenesis.There are several methods for detecting VEGF in the blood, with the most common being enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). In ELISA, a specific antibody that binds to VEGF is coated onto a plate. Then, the blood sample is added, and if VEGF is present, it will bind to the antibody. A second antibody linked to an enzyme is then added, and a substrate for the enzyme is added, resultingin a color change that indicates the presence and amount of VEGF in the sample.Another method for detecting VEGF is through the use ofa protein microarray. This technique involves spotting tiny amounts of VEGF-specific antibodies onto a chip, which can then be exposed to the blood sample. If VEGF is present, it will bind to the antibodies on the chip, and this binding can be detected using fluorescent or chemiluminescent signals.In summary, the detection of VEGF in the blood involves using specific antibodies to capture and measure the levels of this important growth factor. These methods are crucial for understanding the role of VEGF in various diseases and for monitoring the response to VEGF-targeted therapies.中文回答：血管内皮生长因子（VEGF）的检测原理涉及测量血液中这一重要生长因子的水平。

vegf检测评价指标Vascular Endothelial Growth Factor（血管内皮生长因子）简称VEGF，是一种在血管形成和维护过程中起主要作用的分子。

VEGF通过在血管内皮细胞上结合VEGF受体来促进新血管形成，并且参与多种疾病的发生和进展。

为了评估VEGF的作用和相关疾病的发生风险，VEGF检测成为研究人员广泛使用的评价指标。

目前，VEGF检测技术已经得到了不断的改进，主要包括ELISA法、荧光定量PCR法、免疫组织化学法以及免疫荧光法等多种方法。

其中，ELISA法具有灵敏而高效的特点，被广泛用于定量分析疾病患者血浆和组织中的VEGF水平。

荧光定量PCR法因其准确和快速，成为了常用的测定VEGF mRNA表达水平的方法。

免疫组织化学和免疫荧光法可用于检测VEGF蛋白的表达，同时也能够确定蛋白在哪些组织和细胞类型中表达。

此外，研究人员还采用荧光分析技术、生物传感器技术等先进技术，不断推进VEGF检测技术的研究与应用。

在疾病的诊断和治疗中，VEGF成为了一个重要的生物标志物。

例如，在肿瘤学上，目前许多疗法已经将VEGF作为肿瘤治疗的关键目标，如抑制VEGF等有望成为治疗肿瘤的一种新途径。

在人类的动脉粥样硬化中，VEGF也被证明对新血管形成和斑块稳定起重要作用。

研究表明，通过VEGF检测技术可以提高对此类疾病的诊断和治疗的准确性和效果。

总之，VEGF检测技术已成为检测疾病和评估治疗效果的重要手段，它在目前的实际应用中已经得到了证实。

最新研究也为我们提供了更好的VEGF检测方法和途径，愿将来的VEGF检测技术在更多的疾病中为人类的健康保驾护航。

人胎盘生长因子（PLGF）ELISA试剂盒操作步骤试剂盒本试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。

先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。

洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。

再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。

产生颜色。

颜色的深浅和样品中指标的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制：试剂盒成份96孔配置48孔配置96/48人份酶标板1块板（96T）半块（48T）塑料膜板盖1块半块标准品1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）空白对比1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）标准品稀释缓冲液1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）生物素标记抗体1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）亲和链酶素HRP 1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）停止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）自备料子：1．蒸馏水。

2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3．振荡器及磁力搅拌器等。

样品收集、处置及保管方法：1、血清操作过程中躲避任何细胞刺激。

使用不含热原和内毒素的试管。

收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞快速当心地分别。

2、血浆EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。

1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、细胞上清液1000×g离心10分钟除颗粒和聚合物。

4、组织匀浆将组织加入适量生理盐水捣碎。

1000×g离心10分钟，取上清液5、保管假如样品不立刻使用，应将其分成小部分70 ℃保管，躲避反复冷冻。

尽可能的不要使用溶血或高血脂血。

假如血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。

不要在37℃或更高的温度加热解冻。

人血管内皮细胞生长因子A（VEGF-A）酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中VEGF-A含量。

实验原理用纯化的VEGF-A抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的VEGF-A抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物（TMB）显色。

TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的VEGF-A呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1、酶标板：一块（96孔）2、标准品（冻干品）：2瓶，请临用前15分钟内配制。

每瓶以样品稀释液稀释至1ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为2,000pg/ml，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成2,000pg/ml，1,000pg/ml，500 pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.2pg/ml，样品稀释液直接作为空白孔0pg/ml。

如配制1,000pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）2,000pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3、样品稀释液：1×20ml。

4、检测稀释液A：1×10ml。

5、检测稀释液B：1×10ml。

6、检测溶液A：1×120/瓶（1:100）。

临用前以检测稀释液A1:100稀释（如：10检测溶液A/990检测稀释液A），充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。

7、检测溶液B：1×120/瓶（1:100）。

临用前以检测稀释液B1:100稀释。

人内分泌腺来源的血管内皮生长因子（EG-VEGF）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T20pg/ml-550pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中内分泌腺来源的血管内皮生长因子（EG-VEGF）含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人内分泌腺来源的血管内皮生长因子（EG-VEGF）水平。

用纯化的人内分泌腺来源的血管内皮生长因子（EG-VEGF）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入内分泌腺来源的血管内皮生长因子（EG-VEGF），再与HRP标记的内分泌腺来源的血管内皮生长因子（EG-VEGF）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的内分泌腺来源的血管内皮生长因子（EG-VEGF）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人内分泌腺来源的血管内皮生长因子（EG-VEGF）浓度。

标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

人肿瘤血管生长因子（TAF）分析检测ELISA试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆上海乔羽生物专业供应：使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本肿瘤血管生长因子（TAF）含量。

试验原理：TAF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知TAF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。

先将TAF和生物素标记的抗体同时温育。

洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。

再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。

产生颜色。

颜色的深浅和样品中TAF的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素标记的抗TAF抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀释底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自备材料1．蒸馏水。

2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3．振荡器及磁力搅拌器等。

安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。

一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作注意事项1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。

稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

原发性肝癌患者用血清、血浆标本测定循环VEGF浓度的差别[摘要] 目的探索分析循环中vegf浓度在血清和血浆中的差别，及其与血小板计数的关系。

方法从20例未曾接受过治疗的原发性肝癌患者分别采取血清和血浆标本使用酶联免疫吸附法测定vegf浓度做自身对照比较。

同时分析血小板计数与血清vegf和血浆vegf的相关性。

结果血清vegf浓度显著高于血浆vegf（p=0.000，z=-3.920），血清和血浆vegf浓度显著正相关（r=0.883，p=0.000）。

血清、血浆vegf浓度均与血小板计数正相关（r=0.652，p=0.002；r=0.487，p=0.029），血浆vegf浓度与血小板计数相关性较弱。

结论由于受外周血血小板计数的影响较小，血浆vegf可能更适于监测原发性肝癌患者的血管生成状态。

[关键词] 癌；肝细胞；血管内皮生长因子；血清；血浆；酶联免疫吸附测定[中图分类号] r735.7???[文献标识码] b???[文章编号]2095-0616（2012）21-108-02difference between using serum and plasma samples in measuring circulating vegf concentration of patients with primary liver cancercheng?hongtao??guo?chenyang??li?hailiang??xiao?jinchen g??hu?hongtao??zheng?linzong?dengwei??yu?pudepartment of radiology， affiliated cancer hospital of zhengzhou university，zhengzhou 450008，china[abstract] objective to explore and analyze the difference between serum and plasma in the circulating vegf concentration and its relationship with platelet count. methods serum and plasma samples were collected from 20 untreated patients with primary liver cancer and the enzyme-linked immunosorbent assay was used to measure the vegf concentration for self control comparison. meanwhile the correlation between the platelet count and the serum vegf and plasma vegf was analyzed. results the serum vegf concentration was significantly higher than the plasma vegf concentration（p=0.000， z=-3.920）， with positive correlation between them （r=0.883，p=0.000）. both serum and plasma vegf concentrations were positively correlated to the platelet count（r=0.652，p=0.002；r=0.487，p=0.029）， but the correlation between the serum vegf concentration and the platelet count was weak. conclusion due to the small influence from peripheral blood platelet count， plasma vegf may be more suitable for the monitoring of angiogenesis state of patientswith primary liver cancer.[key words] cancer； liver cells； vascular endothelial growth factor； serum； plasma； enzyme-linked immunosorbent assay血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，vegf）在肝细胞肝癌的新血管形成过程中具有重要作用，对肝癌患者的预后有重要影响。

人血管内皮生长因子（VEGF)酶联免疫检测试剂盒使用说明书AE98006Hu使用前仔细阅读本说明书。

本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测人血管内皮生长因子（VEGF)，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。

用途：用于人血清、血浆及相关液体样本中血管内皮生长因子（VEGF)测定。

工作原理本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人血管内皮生长因子（VEGF)水平。

向预先包被了人血管内皮生长因子（VEGF)单克隆抗体的酶标孔中加入人血管内皮生长因子（VEGF)，温育；温育后，加入生物素标记的抗VEGF抗体。

再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅与样品中人血管内皮生长因子（VEGF)的浓度呈正相关。

试剂盒组成试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品1200ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存链霉亲和素-HRP3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存生物素标记的抗0.5ml×1瓶1ml×1瓶2-8℃保存VEGF抗体显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存需要而未提供的试剂和器材1．37℃恒温箱。

2．标准规格酶标仪。

3．精密移液器及一次性吸头4．蒸馏水，5．一次性试管6．吸水纸注意事项1．从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。

人血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T10ng/L-800ng/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)水平。

用纯化的人血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)，再与HRP标记的血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)浓度。

试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品（1600ng/L）0.5ml×1瓶3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

800ng/L 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液400ng/L 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液200ng/L 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液100ng/L 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液50ng/L 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

人血管内皮细胞生长因子D(VEGF-D)酶联免疫试剂盒使用说明书【产品编号】CSB-E04760h【预期应用】ELISA法定量测定人血清、血浆、组织裂解液中VEGF-D含量。

【产品性能指标】1、检测范围：31.25 pg/ml-2000 pg/ml2、灵敏度：7.81 pg/ml3、精密度：批内差CV%<8%，批间差CV%<10%4、特异性：本试剂盒特异性检测人VEGF-D，且与其他相关蛋白无交叉反应。

【实验原理】用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗VEGF-D抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗VEGF-D抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样本中的VEGF-D呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样本浓度。

【试剂盒组成成分】【存储条件及有效期】【所需试剂和器材】标准规格酶标仪；高速离心机；电热恒温培养箱；干净的试管和离心管；容量瓶；系列可调节移液器及吸头；多通道移液器；蒸馏水等【样本采集及保存】1、血清：全血标本请于室温放置2小时或4°C过夜后于2 - 8°C 1000 x g离心15分钟，取上清即可立即检测；或进行分装，并将标本放于-20°C或-80°C保存，但应避免反复冻融。

解冻后的样品应再次离心，然后检测。

2、血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000 x g离心15分钟，取上清即可立即检测；或进行分装，并将标本放于-20°C或-80°C保存，但应避免反复冻融。

解冻后的样品应再次离心，然后检测。

3、组织裂解液：取100mg组织，用1X PBS洗去血污。

剪成小块放入组织研磨器（匀浆管）中，加入1 ml 1X PBS，制成匀浆，然后置于-20°C过夜。

双抗体夹心ELISA法检测样本中VEGF的浓度VEGF简介：VEGF属于PDGF因子家族，是A、B、C、D四种亚类的一类因子的总称，它们在血管发生过程中起重要作用。

其中在血管再生和内皮细胞的再生过程中，VEGF-A扮演重要的角色。

现已发现VEGF-A有许多种因切割后氨基酸数不同的亚型，其中含有的肝磷脂接合区域，能与胞外基质内的肝磷脂结合，以VEGF165量最多。

VEGF-A可由多种细胞分泌的分子量为45kDa的糖蛋白。

VEGF的功能主要表现在伤口的愈合和女性生殖周期循环上。

在病理组织中，VEGF能提升血管通透性。

这就是肿瘤的转移和肿瘤复发的基础。

在胚胎期，VEGF的作用表现为调控胚胎细胞的增殖、转移和提高内皮细胞的存活力上，通过成骨细胞和成软骨细胞的蓦集作用提升骨形成的效率。

VEGF-A的功能还表现在一些如血管再生和血管通透相关联的生理过程中。

肿瘤释放的细胞因子和生长因子能刺激骨髓中的巨核细胞分裂为血小板，这样就间接增加了VEGF-A 向肿瘤的迁移。

骨组织、心肌、肝实质、成骨细胞、中性粒细胞、巨噬细胞、角化细胞、棕色脂肪组织、CD34+干细胞、内皮细胞、成纤维细胞和血管平滑肌细胞等细胞和组织均可表达 VEGF。

检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中VEGF 的浓度。

VEGF 捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的VEGF 会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。

当加入生物素化的抗人VEGF 抗体后，抗人VEGF 抗体与VEGF 接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。

随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。

生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。

最后加入显色剂，若样本中存在VEGF 将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。

兔血管内皮细胞生长因子(VEGF)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用兔血清，血浆及相关液体样本中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的含量。

试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。

2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围：请来电咨询保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。

一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。

如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平。

用纯化的兔血管内皮细胞生长因子(VEGF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血管内皮细胞生长因子(VEGF)，再与HRP标记的血管内皮细胞生长因子(VEGF)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的血管内皮细胞生长因子(VEGF)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中兔血管内皮细胞生长因子(VEGF)浓度。