人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书,5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒

吲哚乙酸氧化酶活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC4105规格：100T/48S产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前加入5mL蒸馏水备用。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前加入3mL蒸馏水备用。

试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存。

临用前加入5.71mL50%乙醇（乙醇（V）：HO（V）=1：1）溶解备用。

2可以分装后-20℃保存，避免反复冻融。

试剂四：液体30mL×1瓶，4℃保存。

试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前加入15mL试剂四溶解。

O（V）标准品：粉剂×1支，-20℃保存，10mg吲哚乙酸。

临用前加入1.14mL50%乙醇（乙醇（V）：H2=1：1）溶解制成50μmol/mL的标准溶液。

可分装后-20℃保存。

产品说明：吲哚乙酸（IAA）在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破坏失去活性。

IAA氧化酶能调节植物体内吲哚乙酸的的水平，从而影响植物的生长。

作用生成红色产物，在530nm下有最大吸收峰。

酶活力的大小可用破坏IAA IAA在无机酸条件下与FeCl3的速率表示。

自备实验用品及仪器：可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、乙醇、冰和蒸馏水。

测定操作：1、样本处理：第1页，共3页（1）组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。

12000g4℃离心15分钟，取上清，置冰上待测。

（2）细胞或微生物样品的制备：先收集细胞或微生物样品到离心管内，弃上清，按照每500万细胞或微生物加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）。

12000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。

2、操作步骤：（1）可见分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至530nm。

β-EP，骆驼β内啡肽(β-EP)ELISA检测试剂盒种属：人、大小鼠、豚鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊；标本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水等等；β-EP，骆驼β内啡肽(β-EP)ELISA检测试剂盒样本保存：保存的话看取样周期到检测有多长，如果在1个礼拜内，2-8摄氏度，如果在1个礼拜以上1个月以内-20保存，如果1个月以上-80保存；单纯的全血不能冻存。

操作程序总结：1、准备试剂，样品和标准品2、加入准备好的样品和标准品，37度反应30分钟3、洗板5次，加入酶标试剂，37度反应30分钟4、洗板5次，加入显色液AB，37度显色10分钟5、加入终止液6、15分钟内读OD值7、计算定量分析实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中β内啡肽(β-EP)水平。

用纯化的β内啡肽(β-EP)抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入β内啡肽(β-EP)，再与HRP标记的β内啡肽(β-EP)抗原结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的β内啡肽(β-EP)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中β内啡肽(β-EP)浓度。

β-EP，骆驼β内啡肽(β-EP)ELISA检测试剂盒研究范围涉及分子生物学、免疫学、生命科学基础研究等多个领域。

其规格：96T可用做84个标本，12个标准曲线或48T可用做42个标本，6个标准曲线。

可检测多做类型标本，如：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等（标本均为液体，固态标本应先转化成液态）。

骆驼β内啡肽试剂盒组成:1 20倍浓缩洗涤液30ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品（180 ng/L）0.5ml×1瓶3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个产品范围:人,小鼠,大鼠,猪,兔,其它动物细胞因子;细胞凋亡,活性多肽、自身抗体,血栓与止血, 骨代谢,肝纤维化,肿瘤,激素内分泌、自身抗体科研ELISA检测试剂盒。

产品说明书人血管内皮生长因子ELISA试剂盒（Human VEGF ELISA KIT）产品货号：H6139S, H6139M, H6139L产品规格：24T, 48T, 96T产品内容：注：终止液和显色剂具有腐蚀性，一旦接触到液体，请尽快用大量清水冲洗。

储存条件4℃避光保存，有效期见外包装。

开封后，保存温度详见说明书。

产品介绍Human VEGF ELISA Kit (Human Vascular Endothelial Cell Growth Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即人血管内皮生长因子ELISA试剂盒，可以定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组VEGF浓度。

人VEGF是由两个相同亚基以二硫键交联组成的二聚体糖蛋白，基因定位于第6号染色体长臂，由8个外显子和7个内含子交替构成，约14 kb。

由于mRNA剪接方式不同，产生了单链分别含121，145，165，183，189和206个氨基酸的不同变异体。

VEGF 121分子量约为34-46 kDa，是可溶性分泌型蛋白质，以游离状态存在，不能与肝素结合；VEGF 165分子量为45 kDa，30-50%以可溶性形式分泌于细胞外基质，其余部分与细胞膜、基底膜或细胞外基质含有肝素的糖蛋白结合。

VEGF 145存在于胎盘细胞和女性生殖道肿瘤细胞。

VEGF 189及VEGF 206分泌后完全结合于细胞膜或基底膜含有肝素的糖蛋白上。

骨骼肌，心肌，肝细胞，成骨细胞，中性粒细胞，巨噬细胞，角质形成细胞，血小板，褐色脂肪组织，CD34+细胞，星形细胞，神经元和内皮细胞等多种细胞和组织均可产生VEGF。

血清和血浆样本均可检测到VEGF，由于血小板可释放VEGF，因此血清中VEGF含量较高。

VEGF是一种特异作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子，可增加血管通透性、促进血管形成、引起细胞外基质成分改变等。

人腺苷脱氨酶(ADA)elisa试剂盒使用说明书Elisa kit规格：48孔配置/96孔配置标准品稀释液：1.5ml×1瓶酶标试剂：3 ml×1瓶（48）/6 ml×1瓶（96）【人腺苷脱氨酶(ADA)elisa试剂盒】本试剂仅供研究使用计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

试剂盒组成：封板膜:2片（48）/2片（96）说明书:1份密封袋:1个标准品：2700ng/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存酶标包被板: 1×48 1×96 2-8℃保存样品稀释液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液: 3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液:（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人腺苷脱氨酶(ADA)水平。

用纯化的人腺苷脱氨酶(ADA)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入腺苷脱氨酶(ADA)，再与HRP标记的腺苷脱氨酶(ADA)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的腺苷脱氨酶(ADA)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人腺苷脱氨酶(ADA)浓度。

101422-186M5HiPer 丙二醛（MDA ）检测试剂盒使用说明书ProductUnit Cat.#M5HiPer 丙二醛（MDA ）检测试剂盒50T MF607-01【储存温度】：4℃保存。

【组分】：提取液：液体60mL ×1瓶，4℃保存；试剂一：液体30mL ×1瓶，4℃保存；临用前注意试剂一是否完全溶解，如未溶解，可以70℃加热，并振荡以促进溶解。

【产品介绍】：MDA 与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid ，TBA)缩合，生成红色产物，在532nm 有最大吸收峰，进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量；同时测定600nm 下的吸光度，利用532nm 与600nm 下的吸光度的差值计算MDA 的含量。

氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括MDA 。

通过检测MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平。

【注意事项】：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【所需仪器和试剂】：可见分光光度、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水【操作步骤】：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定一、MDA 提取：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL ）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W ，超声3s ，间隔10s ，重复30次）；8000g 4℃离心10min ，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g ）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。

8000g 4℃离心10min ，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

5-羟吲哚乙酸简介目录•1拼音•2英文参考•3概述•45羟吲哚乙酸的别名•55羟吲哚乙酸的医学检查o 5.1检查名称o 5.2分类o 5.35羟吲哚乙酸的测定原理o 5.4试剂o 5.5操作 ...o 5.6正常值o 5.7化验结果临床意义o 5.8附注1拼音5qiǎng yǐn duǒ yǐ suān2英文参考5 HIAA5 hydroxyindole acetic acid3概述5HT约2/3在肝脏与 ... 或葡萄糖醛酸结合后排出，或将吲哚断裂而分解；约1/3风景单氨氧化酶作用氧化脱氨形成5HIAA后从尿排出。

5HIAA是5羟色氨酸代谢的最终产物，不具有生物活性。

45羟吲哚乙酸的别名5HIAA55羟吲哚乙酸的医学检查5.1检查名称5羟吲哚乙酸激素类测定 > 肾上腺素测定5.35羟吲哚乙酸的测定原理采用5HIAA重氮反应原理。

5.4试剂（1）1亚硝基2萘酚乙醇溶液：取1亚硝基2萘酚0.1g，溶于95%乙醇并加至100ml。

（2）1mol/L ... 。

（3）25g/L亚硝酸钠，新鲜配制。

（4）亚硝酸试剂：25g/L亚硝酸钠0.2ml，加1mol/L ... 5ml，临用前混合。

（5）二氯乙烯或醋酸乙酯，或二氯乙烷。

5.5操作 ...（1）在试管中加新鲜尿0.2ml，加水0.8ml和1亚硝基2萘酚液0.5ml混匀。

（2）另取正常尿作阴性对照，所加试剂同上。

（3）每管加新配亚硝酸试剂0.5ml，混匀。

（4）各管在室温静置10min后，加入二氯乙烯（或醋酸乙酯）5ml，振摇，若混浊即离心沉淀。

（5）上层液紫色为阳性。

正常对照呈淡黄色（＜41.8μmol/d或＜8mg/d）。

高于正常人5HIAA5倍以上，紫色明显。

5.6正常值定性：（新鲜尿）阴性。

定量（尿）：10.5～42.0μmol/24h（2～8mg/24h）5.7化验结果临床意义阳性（或升高）：类癌瘤综合瘤综合征、食品和药物（香蕉、西红柿、杏、核桃、茄子、利血平、酚噻嗪衍生物、卢戈氏液）。

人透明质酸结合蛋白（HABP）分析检测ELISA试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆上海乔羽生物专业供应：使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本透明质酸结合蛋白（HABP）含量。

试验原理：HABP试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知HABP浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。

先将HABP和生物素标记的抗体同时温育。

洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。

再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。

产生颜色。

颜色的深浅和样品中HABP的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素标记的抗HABP抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀释底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自备材料1．蒸馏水。

2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3．振荡器及磁力搅拌器等。

安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。

一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作注意事项1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。

稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

REV20190716仅供研究，不用于临床诊断。

客服热线: 400-7060-959﹡技术支持邮箱: **************公司官网: 目录简介 ......................................................................................................................................................................... - 3 -检测原理 ................................................................................................................................................................. - 3 -试剂盒组分 ............................................................................................................................................................. - 4 -储存条件 ................................................................................................................................................................. - 5 -其他实验材料 ......................................................................................................................................................... - 5 -注意事项 ................................................................................................................................................................. - 5 -样本收集处理及保存方法 ..................................................................................................................................... - 6 -试剂准备 ................................................................................................................................................................. - 6 -操作步骤 ................................................................................................................................................................. - 8 -操作流程图 ............................................................................................................................................................. - 8 -操作要点提示 ......................................................................................................................................................... - 9 -结果判断 ................................................................................................................................................................. - 9 -结果重复性 ........................................................................................................................................................... - 10 -灵敏度 ................................................................................................................................................................... - 10 -特异性 ................................................................................................................................................................... - 10 -参考文献 ............................................................................................................................................................... - 10 -该产品由北京四正柏生物科技有限公司研制。

人5羟色胺（5-HT）酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中催乳素含量。

实验原理用纯化的催乳素抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的催乳素抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物（TMB）显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的催乳素呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1、酶标板：一块（96孔）2、标准品（冻干品）：2瓶，请临用前15分钟内配制。

每瓶以样品稀释液稀释至1ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为6,000pg/ml，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成6,000pg/ml，3,000pg/ml，1,500pg/ml，750pg/ml，375pg/ml，187.5pg/ml，93.75pg/ml，样品稀释液直接作为空白孔0pg/ml。

如配制3,000pg/ml标准品：取0.5ml （不要少于0.5ml）6,000pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3、样品稀释液：1×20ml。

4、检测稀释液A：1×10ml。

5、检测稀释液B：1×10ml。

6、检测溶液A：1×120/瓶（1:100）。

临用前以检测稀释液A1:100稀释（如：10检测溶液A/990检测稀释液A），充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。

7、检测溶液B：1×120/瓶（1:100）。

临用前以检测稀释液B1:100稀释。

稀释方法同检测溶液A。

8、底物溶液：1×10ml/瓶。

尿5-羟吲哚乙酸尿5-羟吲哚乙酸介绍：5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)是人体5-HT的代谢产物。

一般采用化学显色法测定尿液中5-HIAA含量用以诊断类癌瘤。

其基本原理是：5-HIAA与1-亚硝基-2-萘酚和亚硝酸偶联呈紫色，颜色的深浅与尿尿中5-HIAA含量呈正比，因正常人尿液一般不会显紫色，故定性试验可满足临床诊断需要。

尿5-羟吲哚乙酸正常值：定性试验：阴性(淡黄色)。

若呈紫色反应为阳性。

一般24h尿排出209μmol(40 mg)本法即可检出，若达到15699μmol(300mg)则几乎呈黑色。

定量试验：9.4～31.4μmol/24h(1.8～6.0mg/24h)。

尿5-羟吲哚乙酸临床意义：5-HIAA的过度分泌是类癌瘤的最为特异性的生化指征。

类癌瘤患者尿中排出的5-HIAA量一般为正常量的5～50倍，有的甚至增加百倍以上。

一般尿中超过25mg/24 h则可疑。

>50mg/24h则可诊断类癌。

尿中5-HIAA量与类癌综合征状出现的频率和严重程度有直接关系：尿中5-HIAA 10～49mg/24h存活29个月;50～149mg/24h，存活2 1个月;≥150mg/24h，存活13个月。

尿中5-HIAA轻度升高可发生在其他胃肠道疾病，如口炎性腹泻，热带性口炎性腹泻以及支气管燕麦细胞癌等;水平低下可在肾病患者中出现。

尿5-羟吲哚乙酸注意事项：随机取样的尿样本可做筛选试验。

作5-HIAA定量分析时，收集24h尿，盛于含1 2g硼酸或10ml 6mol/L HCL瓶中。

标本可在室温下保存一周，2～6℃保存一个月。

(1)鸭梨、香蕉、茄子、菠萝、李子和胡桃等富含5-HT，易至5-HIAA假性升高，检查前3～4天应禁食此类食物。

(2)乙酰苯胺及有关药物，止咳药，可至假性升高;酚噻嗪、异丙嗪等药物可至假性降低，因此在测定期间应停用上述药物。

(3)应用荧光分光光度法和HPIC法可提高测定的灵敏度，并可排除上述药物的干扰，提高特异性，有条件的实验室可采用。

吲哚乙酸氧化酶检测试剂盒(IAA比色法)简介：植物体内生长素的种类很多，其中吲哚乙酸(IAA)是植物体内普遍存在的一种生长素，植物体内IAA的含量，对于植物的生长、发育、衰老、脱落等均有重要意义。

植物体内存在吲哚乙酸氧化酶(Indoleacetic acid oxida-se)，该酶是植物体内一种氧化分解吲哚乙酸的酶，吲哚乙酸氧化酶能够氧化IAA使其失去活性，从而调节体内IAA的水平，影响植物的生长。

Leagene吲哚乙酸氧化酶检测试剂盒(IAA比色法)检测原理是吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶作用下形成吲哚醛，使体系中吲哚乙酸含量减少，剩余的吲哚乙酸在无机酸存在下与FeCl3作用生成红色螯合物，吲哚乙酸氧化酶活性的大小可以用其破坏吲哚乙酸的速度表示。

通过比色法(分光光度计)测定吸光度，根据对照与待测样品中吲哚乙酸含量的差值，计算出吲哚乙酸氧化酶活性水平。

该试剂盒主要用于检测植物样本、血清等中吲哚乙酸氧化酶活性，尤其适用于定量测定植物样本吲哚乙酸氧化酶活性。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、恒温箱或水浴锅2、研钵或匀浆器3、离心管或试管4、低温离心机5、浓硫酸6、比色杯7、分光光度计操作步骤(仅供参考)：编号名称TE051350TStorage试剂(A):IAA标准(200μg/ml)25ml4℃避光试剂(B):IAA Lysis buffer250ml RT试剂(C):IAA Assay buffer60ml4℃避光使用说明书1份1、准备样品：①植物样品：将大豆或绿豆等种子置于30℃中避光萌发3-4天，选取生长一致的幼苗，除去子叶和根，留下胚轴作为材料。

取胚轴，称重，按每100mg加入适量预冷的IAA Lysis buffer的比例，冰浴情况下充分匀浆或研磨。

离心,留取上清液即为吲哚乙酸氧化酶粗提液。

短期4℃保存待用。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，保存，用于吲哚乙酸氧化酶的检测。

ELISA kitInstruction Manual5-plate formatJuly, 2006For research use only.Not for use in diagnostic or therapeutic procedures.ContentsAbbreviations 2 Introduction 3 Contents of the kit 4 Hazard information 4 Materials and reagents required but not provided 4 Working solutions 4 General procedure 5 Coating antibodies 5 Blocking 5 Test samples and standards 5 Biotinylated detector antibodies 5 SPP conjugate 5 Substrate 5 Cytokine standards 6 Storage kit reagents 6 Directions for washing 7 Trouble shooting 7 References 8AbbreviationsAPC Antigen presenting cellsBSA Bovine serum albuminCD Cluster of differentiationCSB Cytokine stabilization bufferDMSO Dimethyl sulfoxideELISA Enzyme linked immunosorbent assayGM-CSF Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor IFN InterferonIL InterleukinMHC Major histocompatibility complexOD Optical densityPB Phosphate bufferPBS Phosphate buffered salinePBST PBS containing 0.05% Tween-20PBST-B PBST containing 0.5% bovine serum albuminSPP Streptavidin-HRP polymerT h T helper subsetTMB TetramethylbenzidineTNF Tumor necrosis factorIntroductionCytokines are a group of regulatory proteins critically involved in many physiological processes such as immune recognition, cell differentiation and cell proliferation. They have been identified in many vertebrate species and are produced by a variety of different cell types. Cytokines are usually produced transiently and locally, acting in a paracrine or autocrine manner. They interact with high affinity cell surface receptors specific for each cytokine or cytokine group and are active at very low concentrations mostly in the picogram range.It is well known now that the type of an antigen-specific immune response largely depends on the selection or preferential activation of defined CD4+T cell subsets (i.e. T h1 and T h2). Activation of these subsets is characterized by the secretion of distinct patterns of cytokines. T h1, but not T h2 cells, primarily secrete IL-2 and IFN-γ while T h2, but not T h1 cells, produceIL-4, IL-5, IL-6, IL-10 and IL-13. Other cytokines, such as TNF-α and GM-CSF are produced by both T h subsets. In addition, the production of IL-12 and IL-10, produced by antigen presenting cells (APC) such as macrophages and dendritic cells, critically contributes to the preferential expansion of T h1- or T h2-type of cells. For instance, early production of IL-12 is considered essential for the development of T h1 cells. On the other hand, the absence or low concentrations of IL-12 and IFN-γ in the early phase of an immune response and concomitant production of IL-4 by cells of the mastcell/basophil lineage or T cells themselves is known to favor the development of T h2 cells. In addition to their regulatory effects on T h subset differentiation, the cytokines released by the two types of T h cells also produce distinct effector functions. For instance, IL-4 and IFN-γhave differential or antagonistic activities on immunoglobulin isotype selection or MHC class II expression. Therefore, the properties of an immune response can be best studied by determining the amounts of cytokines produced by the responding T cells and APC.Contents of the kitItemsQuantity(5-plate format)StorageconditionsCoating antibodies 1 vial 4ºC (39ºF)Cytokine standard 5 vials 4ºC (39ºF)Biotinylated detector antibodies 1 vial 4ºC (39ºF)SPP conjugate (Streptavidin-HRP polymer) 1 vial ≤ -20ºC (-4°F)TMB substrate tablets 5 4ºC (39ºF)Substrate buffer capsules 5 Rt*BSA stock solution (10%) 2 vials (24 ml) 4ºC (39ºF)Cytokine stabilization buffer (CSB)** 1 vial (5 ml) 4ºC (39ºF)Tween-20 1 vial (5 ml) Rt*ELISA plates8 Rt*Adhesive cover slips 10 Rt** Room temperature** For serum and plasma samples only; see under “Test samples and standards”Materials and reagents required but not provided•PB stock: dissolve 96.0 g Na2HPO4.2H2O plus 17.5 g KH2PO4in 1.0 L distilled water and adjust pH to 7.4•Sterile distilled water•H2SO4•Dimethyl sulfoxide (DMSO)•Pipetting devices for the accurate delivery of volume required for the assay performance •Plate washer: automated or manual (squirt bottle, manifold dispenser, etc)•Reading device for microtiter-plate set to 370, 450 and/or 655 nmWorking solutions•PBS: add 10 ml PB stock and 8.8 g NaCl to 1 L distilled water. Adjust pH to 7.4.Alternatively, use commercially available liquid PBS from Invitrogen or other suppliers.Do not use commercially available PBS tablets for the preparation of the coating solution (the filler in the tablets interferes with the coating process).•PBST: 0.5 ml Tween-20 dissolved in 1 L PBS.•PBST-B: 2 ml BSA stock solution (10%) added to 38 ml PBST.•Blocking buffer: 2 ml BSA stock solution (10%) added to 18 ml PBS (for 1 ELISA plate). •Substrate buffer: the contents of one capsule is dissolved in 100 ml distilled water (takes approximately 5 minutes). For optimal performance, the buffer solution should be used within60 minutes.•Stopping solution: 2 M H2SO4TMB (tetramethylbenzidine) and sodium perborate (in substrate buffer)General procedureCoating antibodies•Reconstitute the lyophilized antibodies by injecting 250 µl of sterile distilled water into the vial. Mix the solution gently for approximately 15 seconds and allow it to stand for 2 minutes at room temperature. Avoid vigorous shaking. To coat 96 wells of an ELISA plate 50 µl is pipetted out of the vial (or use a frozen aliquot of 50 µl; see "Storage kit reagents") and added to 5 ml PBS. Mix gently.•Add 50 µl of diluted antibody solution to each well of the ELISA plate and fill up to 100 µl with PBS.•Seal the plate to prevent evaporation.Incubate overnight at 4ºC or alternatively 1 to 2 hours at 37ºC.Blocking•Remove the coating antibody solution and wash the wells at least six times with PBST. •Add 200 µl of blocking buffer.•Seal the plate and incubate at 37ºC for 1 hour.Test samples and standards•Remove the blocking buffer but do not wash.•Add 1/20 volume of CSB to serum or plasma samples but not to other samples such as cell culture supernatants; CSB inhibits the degradation of cytokines in pure serum or plasma. •Dilute standards and test samples in an appropriate diluent (see “Cytokine standards”). •Add 100 µl to each well.•Seal the plate and incubate at 37ºC for 2 hours or overnight at 4ºC.Biotinylated detector antibodies•Remove test samples/standards and wash the wells at least six times with PBST. •Reconstitute the lyophilized antibodies by injecting 0.5 ml of sterile distilled water into the vial. Mix the solution gently for approximately 15 seconds and allow it to stand for 2 minutes at room temperature. Avoid vigorous shaking. Hundred microliter is pipetted out of the vial (or use a frozen aliquot of 100 µl; see "Storage kit reagents") and added to 10 ml PBST-B.Mix gently.•Add 100 µl of diluted antibody solution to each well.•Seal the plate and incubate at 37ºC for 1 hour.SPP conjugate•Remove detector antibody solution and wash the wells at least six times with PBST. •Reconstitute the contents of the vial by injecting 0.5 ml of sterile distilled water into the vial.Mix the solution gently for approximately 15 seconds and allow it to stand for 1 minute at room temperature. Avoid vigorous shaking. Hundred microliter is pipetted out of the vial (or use a frozen aliquot of 100 µl; see "Storage kit reagents") and added to 10 ml PBST-B. Mix gently.•Add 100 µl to each well.•Seal the plate and incubate at 37ºC for 1 hour.Substrate•Remove SPP conjugate and wash the wells at least six times with PBST.•Dissolve one TMB tablet in 1.0 ml DMSO (vortex at high speed for 5 minutes for complete dissolution)and than add 10 ml substrate buffer.•Mix thoroughly and immediately dispense 100 µl into each well. Leave the plate on the laboratory bench at room temperature (color development between 10 and 30 minutes).The substrate produces a soluble end-product that is blue in color and can be read spectrophotometrically at 370 or 655 nm. The reaction can be stopped by adding 50 µl of2 M H2SO4 (resulting in a yellow solution which can be read at 450 nm).Cytokine standardsFor maximum recovery, the vial with lyophilized cytokine standard should be reconstituted in 0.5 ml distilled water and allowed to stand for 1 minute at room temperature. Thereafter, the reconstituted cytokine standard (stock solution) is placed on melting ice and is immediately diluted as indicated below (preferentially within one hour). Use vials with cytokine standards only once.Please note that temperature of buffers and standard solution(s) should now be kept at 0-4ºC until use in the ELISA.The total amount of cytokine standard is indicated on the label of the vial (ng/vial). After reconstitution in 0.5 ml water, the concentration (ng/ml) will become twice the amount on the label [e.g. amount on label is 4.8 ng/vial; after reconstitution, the concentration becomes9.6 ng/ml = 9600 pg/ml].The standard stock solution is diluted to 320 pg/ml in PBST-B (highest concentration cytokine to be used in the standard range).The linear region of the cytokine standard curve is now obtainable in a series of two-fold dilutions in PBST-B ranging from 320 to 5 pg/ml. Always include a blank control (PBST-B only) in the standard range.Before establishing the standard curve, the OD value of the blank control (OD.bl) is subtracted from the measured OD values of the different standard solutions. The standard curve is now plotted as the standard cytokine concentration versus the corresponding (measured) OD value minus OD.bl. In addition, the actual OD values of the test samples are determined by subtracting OD.bl from the measured OD values.The concentration of the cytokine in the test sample can then be interpolated from the standard curve. It is useful to prepare a series of dilutions of the unknown test sample to assure that the OD will fall in the linear portion of the standard curve.Note 1: The OD value measured for the blank control (OD.bl) must be below 0.2.Note 2: for measuring cytokines in cell culture supernatant, samples should be diluted inPBST-B. However, when measuring cytokines in pure serum or plasma, the diluent for the standard and blank control should preferentially be control serum or plasma originating from the same species.Storage kit reagentsThe vials with lyophilized coating antibodies and biotinylated detector antibodies can be safely stored in a refrigerator for a defined length of time (expiry date indicated on the vial). After reconstitution, the antibodies remain fully active for minimal 6 months at 4ºC (39ºF) when kept sterile. However, it is strongly recommended to divide the reconstituted antibody solutions into small aliquots for single use. These aliquots should be stored at ≤-20ºC. Under these conditions the antibodies are stable for at least one year.Upon arrival, the vial with lyophilized SPP conjugate should be stored at ≤ -20°C. Storage of the vial at room temperature or at 4ºC for several months may lead to lower OD readings in the ELISA. After reconstitution, the SPP solution is stable for 2 months at 4°C but rapidly looses activity when stored at room temperature. It is strongly recommended that after reconstitution, the solution is immediately divided into small aliquots for single use and stored at ≤-20°C. Under these conditions SPP is stable for minimal 12 months.Directions for washing•Incomplete washing will adversely affect the assay. All washing must be performed with wash buffer (PBST).•Washing can be performed manually as follows: completely aspirate the liquid from all wells by gently lowering an aspiration tip (aspiration device) into each well. After aspiration, fill the wells with at least 300 µl wash buffer. Let soak for 10 to 20 seconds, then aspirate the liquid. Repeat as directed under "General procedure". After washing, the plate is inverted and tapped dry on absorbent paper.•Alternatively, the wash buffer may be put into a squirt bottle. If a squirt bottle is used, flood the plate with wash buffer, completely filling all wells. After washing, the plate is inverted and tapped dry on absorbent paper.•If using an automated washing device, the operating instructions should carefully be followed.Trouble shooting•Poor consistency of replicates can be overcome by increasing the stringency of washes particularly after the incubation step with detector antibody.•High values of the blank control (optical density > 0.2) can be overcome by shortening the incubation time with the substrate solution or is caused by improper washing procedures. •Inconsistent replicates may be due to cross-contamination of wells by improper pipetting procedures.•If no signal is observed in the wells with the standards•try a new vial with cytokine standard•check the pH of the substrate solution (between 5.0 and 5.5)•verify whether the antibody, SPP conjugate and standardpreparations were properly diluted•Avoid sodium azide in wash buffers and diluents, as this is an inhibitor of peroxidase activity.•Storage of reconstituted SPP at room temperature for several days can lead to a significant loss of SPP activity and consequently low OD readings.ReferencesBooks:•Practice and theory of enzyme immunoassays 1985In: Laboratory techniques in biochemistry and molecular biology, Vol.15 (eds R.H.Burdon and P.H. van Knippenberg)Science Publishers bv, Amsterdam, The Netherlands•ELISA and other Solid Phase Immunoassays.Theoretical and Practical Aspects 1988(eds D.M.Kemeny and S.J.Challacombe)John Wiley & Sons Ltd, Chichester, UK• A practical guide to ELISA 1991(ed D.M.Kemeny) Pergamon Press, Oxford, UKReview of U-CyTech ELISA references:Human cytokines:•Arend, S.M. et al. 2000 J. Infect. Diseases 181: 1850-1854 •Demirkiran, A. et al. 2006 Liver Transpl. 12: 277-284 •Hoogendoorn, M. et al. 2005 Clin. Cancer Res. 11: 5310-5318 •Tang, Y-M. et al. 2006 World J. Gastroenterol. 11: 4575-4578•de Waal, L. et al. 2004 J. Virol. 78: 1775-1781Monkey cytokines:•Fallon, P.G. et al. 2003 J. Infect. Dis. 187: 939-945•Hartman, G. et al. 2005 Vaccine 23: 3310-3317•Kornfeld, C. et al. 2005 J. Clin. Invest. 115: 1082-1091 •Mascarell, L. et al. 2006 Vaccine 24: 3490-3499•Polakos, N.K. et al. 2001 J. Immunol. 166: 3589-3598•de Swart, R.L. et al. 2002 J. Virol. 76: 11561-11569Mouse cytokines:•Eijkelkamp, N. et al. 2004 J. Neuroimmun. 150: 3-9•Kavelaars, A. et al. 2005 J. Neuroimmun. 161: 162-168•Vroon, A. et al. 2005 J. Immunol. 174: 4400-4406Rat cytokines:•Dieleman, J.M. et al. 2006 Life Sci. 79: 551-558•Pacheco-López, G. et al. 2005 J. Neurosci. 25: 2330-2337•Sajti, E. et al. 2004 Brain Behav. Immun. 18: 505-514•Teunis, M.A.T. et al. 2002 J. Neuroimmun. 13: 30-38。

人5羟色胺(5-HT)试剂盒使用方法检测范围：96T80ng/L -2400 ng/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中5羟色胺(5-HT)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人5羟色胺(5-HT)水平。

用纯化的人5羟色胺(5-HT)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入5羟色胺(5-HT)，再与HRP标记的5羟色胺(5-HT)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的5羟色胺(5-HT)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人5羟色胺(5-HT)浓度。

试剂盒组成1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

2022年修订第一版（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断!）产品货号：E-EL-0075c产品规格：96T/48T/24T/96T*5Elabscience 5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书5-HIAA(5-Hydroxyindoleacetic Acid) ELISA Kit使用前请仔细阅读说明书。

如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话技术部电话************电子邮箱（销售）********************电子邮箱（技术）**************************网址：具体保质期请见试剂盒外包装标签。

请在保质期内使用试剂盒。

联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。

Copyright ©2021-2022 Elabscience Biotechnology Co.,Ltd. All Rights Reserved目录用途 (3)基本性能 (3)检测原理 (3)试剂盒组成及保存 (4)试验所需自备物品 (5)样品收集方法 (5)注意事项 (6)■ 试剂盒注意事项 (6)■ 样品注意事项 (6)样本稀释方案 (6)检测前准备工作 (7)操作步骤 (8)结果判断 (10)技术资源 (10)典型数据 (10)性能 (11)■ 精密度 (11)■ 回收率 (11)■ 线性 (11)声明 (12)Intended use (13)Character (13)Test principle (13)Kit components & Storage (14)Other supplies required (15)Sample collection (15)Note (16)■ Note for kit (16)■ Note for sample (16)Dilution Method (17)Reagent preparation (17)Assay procedure (18)Calculation of results (20)Technical resources (20)Typical data (20)Performance (21)■ Precision (21)■ Recovery (21)■ Linearity (21)Declaration (22)用途该试剂盒用于体外定量检测 血清、血浆或其他相关生物液体中5-HIAA浓度。

血清素与自倾向心理健康危机的指标心理健康在现代社会中备受重视，而自杀问题也成为心理健康领域中的一大关注点。

长期以来，学者们试图寻找与自杀倾向相关的指标，以提早预防和干预心理危机。

近年来，研究发现，血清素这一神经递质在自倾向心理健康危机的指标中具有重要作用。

一、血清素的功能和作用血清素是一种神经递质，主要存在于中枢神经系统中，对情绪、睡眠、食欲等方面的调节具有重要作用。

血清素通过在神经元之间传递信息，参与了多种生理和心理过程，包括心情的抑制和情绪的稳定等。

因此，血清素的水平与个体的心理健康密切相关。

二、血清素与自倾向心理健康危机的关系研究表明，血清素水平与自杀倾向呈现一定的相关性。

一方面，血清素水平较低的人群更容易出现自杀倾向。

血清素水平的下降会导致心情低落，情绪不稳定，进而增加自杀风险。

另一方面，血清素水平的提高可以帮助缓解焦虑、抑郁等不良情绪，并且对个体的心理稳定起到积极的作用。

因此，通过检测血清素水平，可以对患者的自我评价和危机判断提供重要的参考依据。

三、血清素水平的影响因素1. 遗传因素：研究表明，血清素水平的变异性在一定程度上受遗传因素的影响。

某些基因的突变可能导致血清素合成、转运和降解功能的改变，从而影响个体的血清素水平。

2. 环境因素：个体的生活环境、社会支持、工作压力等因素也会对血清素水平产生影响。

例如，长期处于压力大、孤独无助的环境下，个体的血清素水平往往会下降，增加心理危机的风险。

3. 生活方式：不良的生活习惯，如饮食不均衡、缺乏运动、长时间熬夜等，也会对血清素水平产生负面影响。

因此，合理的生活方式对于维持正常的血清素水平和心理健康非常重要。

四、血清素水平的检测方法目前，血清素水平的检测主要依赖于血清素代谢物的测定。

常用的检测指标包括5-羟色胺（5-HT）、5-羟基吲哚乙酸（5-HIAA）等。

这些代谢产物的测定可以通过血液、尿液等样本进行，为研究者和医生提供了客观的指标来评价个体的心理健康状况和自倾向心理健康危机。

5-羟基吲哚-3-乙酸的基本信息中文名称：5-羟基吲哚-3-乙酸英文名称：5-Hydroxyindole-3-acetic Acid别名名称：5-HIAA物竞编号：0168分子式：C10H9NO3分子量：191.185-羟基吲哚-3-乙酸的性质与稳定性5-羟基吲哚-3-乙酸对光和空气敏感，最大吸收波长(甲醇中)277、300nm(ε 5200、7200)5-羟基吲哚-3-乙酸的毒理学数据1、急性毒性：小鼠腹腔LD50：1125 mg/kg2、致癌性：小鼠皮下TDLo：2000mg/kg/20W-I5-羟基吲哚-3-乙酸的生态学数据5-羟基吲哚-3-乙酸对环境可能有危害，对水体应给予特别注意。

5-羟基吲哚-3-乙酸的急救措施食入：给予牛奶或水(如果神志清醒的话)。

催吐。

就医。

眼睛：用流动清水冲洗(15 分钟)。

就医。

皮肤：脱去被污染的衣服。

用水和肥皂冲洗。

吸入：转移至空气新鲜处。

休息, 保暖。

5-羟基吲哚-3-乙酸的泄漏应急处理泄漏处理与废弃:去除着火源。

污染物。

防止进入排水沟。

用任何可能的方法收容泄漏物。

用干燥的介质吸收。

在安全的情况下, 堵漏。

5-羟基吲哚-3-乙酸及其容器必须用安全的方法销毁。

用水和洗涤剂清洁地板以及所有被5-羟基吲哚-3-乙酸污染的东西。

5-羟基吲哚-3-乙酸的物性数据1. 性状：浅黄色结晶。

对光和空气敏感。

2. 密度(g/mL,25/4℃)：未确定3. 相对蒸汽密度(g/mL,空气=1)：未确定4. 熔点(ºC)：160～1665. 沸点(ºC,常压)：未确定6. 沸点(ºC,5.2kPa)：未确定7. 折射率：未确定8. 闪点(ºC)：未确定9. 比旋光度(º)：未确定10. 自燃点或引燃温度(ºC)：未确定11. 蒸气压(kPa,25ºC)：未确定12. 饱和蒸气压(kPa,60ºC)：未确定13. 燃烧热(KJ/mol)：未确定14. 临界温度(ºC)：未确定15. 临界压力(KPa)：未确定16. 油水(辛醇/水)分配系数的对数值：未确定17. 爆炸上限(%,V/V)：未确定18. 爆炸下限(%,V/V)：未确定19. 溶解性：溶于水、乙醇和乙酸乙酯，微溶于**。