大鼠心肌缺血再灌注模型构建的改良_陈冰心

大鼠心肌缺血再灌注实验技巧的经验总结黄婷;李绍旦;杨明会;刘毅【摘要】大鼠心肌缺血再灌注造模是一个极其精细的实验过程,在动物实验中,初学者难免会遇到阻碍,笔者有幸进行了整个实验的操作,现就本类实验的经验及遇到的一些挫折进行分享.%The establishment of rat model of myocardial ischemia and reperfusion is a very sophisticated experi?mental process. During animal experiments, beginners always meet with troubles inevitably. The authors of this paper have conducted a great deal of this type of experiments for years, and intend to share some experience and lessons with col?leagues.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2017(027)009【总页数】3页(P80-82)【关键词】大鼠;实验经验;心肌缺血再灌注【作者】黄婷;李绍旦;杨明会;刘毅【作者单位】北京中医药大学,北京 100029;中国人民解放军总医院,北京 100853;中国人民解放军总医院,北京 100853;中国人民解放军总医院,北京 100853;中国人民解放军总医院,北京 100853【正文语种】中文【中图分类】R-33《中国心血管病报告2016》指出，心血管病占居民疾病死亡构成的40%以上，为我国居民的首位死因。

心血管病发病因素日益增多，已成为重大的公共卫生问题，防治心血管病刻不容缓[1]。

有统计表明，在现在的医学研究中，动物实验占有重要的地位。

心血管疾病的防治研究中，大鼠缺血再灌注的模型较常见，笔者有幸进行了此类实验，并在其造模过程中有着长时间的摸索。

第6卷　第4期解剖科学进展V o l16　N o14 2000年PRO GR ESS O F ANA TOM I CAL SC IEN CES2000大鼠心肌缺血 再灌注损伤模型的改进与评价王淑侠　兰小莉1　王吉文2　裴著果(中国医科大学第二临床学院核医学科　沈阳110003) 摘要　大鼠心肌缺血 再灌注损伤是模拟人类心梗及溶栓再通治疗,研究缺血预适应机制,评价抗心律失常药物疗效常用的动物模型。

本文在传统造模方法的基础上进行了一定的改进,采用在压管下加一小垫片的方法,减少了传统推管法对心表面的机械损伤,方法简便,冠脉阻断确实。

结果:大鼠左冠状动脉主干缺血30′,再灌120′,危险区 左室重量比为55%±5%,坏死区 危险区为58%±6%(N=10)。

心肌酶谱结果:CK4301±251u l,CK2M B2288±328u l,LDH2329±216u l,A ST371±57u l(N=5)。

关键词　心肌再灌注损伤;大鼠;模型,T TC染色法 阻断冠状动脉造成急性心肌梗塞并在预定时间内恢复血供予以再灌注是模拟人类心梗及溶栓再通治疗常用的实验研究方法。

大鼠以其冠脉侧支循环缺乏、心肌坏死出现早、心律失常发生率高、重复性、稳定性好、费用低廉而成为制作该疾病模型[1],特别是硕、博士研究生进行课题实验首选的实验动物。

笔者在进行心肌缺血预适应机制的研究中,参照以往文献记载的方法[2～4],并根据本实验室条件,对该模型的制作方法进行了一定的改进,现报告如下:1　材料与方法111　材料健康雄性W istar大鼠,体重240～350g(由中国医科大学实验动物部提供);N i Hon Konden型心电图机(上海KOND EN医用电子仪器厂);小动物呼吸机(浙江医科大学医学仪器实验厂);自制简易血压计(由24号套管针、三通开关、U形管内装水银,管旁边附有直尺做刻度组成);红四氮唑(T TC)由上海第三试剂厂生产;批号970924用前以011M1PH714的磷酸缓冲液配成1%溶液;伊文斯兰(Evan s B lue)瑞士F luka公司出品。

２０１８年６月第２６卷㊀第３期中国实验动物学报ＡＣＴＡＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＵＭＡＮＩＭＡＬＩＳＳＣＩＥＮＴＩＡＳＩＮＩＣＡＪｕｎｅ２０１８Ｖｏｌ．２６㊀Ｎｏ．３［基金项目］国家自然科学基金项目资助（Ｎｏ．８１６６０７３０）㊂ＦｕｎｄｅｄｂｙＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ（Ｎｏ．８１６６０７３０）．［作者简介］张卫强（１９９１ ），在读硕士，研究方向：中医药防治内科疾病（急诊方向）的研究㊂Ｅ⁃ｍａｉｌ：２８６３５４６４５４＠ｑｑ．ｃｏｍ［通信作者］张志明（１９６４ ），主任医师㊁博士生导师，研究方向：中医药防治内科疾病（急诊方向）㊂Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｚｈｉｍｉｎｇｙｓ＠１６３．ｃｏｍ研究报告大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的改进与评判张卫强１，王涛１，张志明２∗，雍文兴２，刘永琦１，李娟２，梁艳１（１．甘肃中医药大学，兰州㊀７３００００；２．甘肃中医药大学附属医院，兰州㊀７３００００）㊀㊀ʌ摘要ɔ㊀目的㊀改进大鼠急性心肌缺血再灌注损伤（ＭＩ／ＲＩ）模型的制备方法，并进行综合评判，为后续开展ＭＩ／ＲＩ研究奠定良好的模型基础㊂方法㊀将３６只清洁级Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为３组：正常组（Ｎｏｒｍａｌ组），不干预左冠状动脉前降支（ＬＡＤ）；假手术组（Ｓｈａｍ组），仅穿线，不结扎ＬＡＤ；缺血再灌注组（ＭＩ／ＲＩ组），结扎ＬＡＤ３０ｍｉｎ，再灌注１２０ｍｉｎ㊂大鼠于麻醉后连续记录心电图，气管切开行呼吸机辅助通气，开胸对大鼠ＬＡＤ分别进行干预后从心电图㊁心肌酶含量测定㊁心梗面积及心肌病理组织学检查等方面对改进后的模型进行综合评判㊂结果㊀ＭＩ／ＲＩ组心电图有明显ＳＴ－Ｔ动态变化；ＭＩ／ＲＩ组肌酸激酶同工酶（ＣＫ⁃ＭＢ）水平于２ｈ后显著升高；与Ｓｈａｍ组比较，ＭＩ／ＲＩ组梗死面积明显增大；ＭＩ／ＲＩ组心肌细胞变性坏死明显，炎性细胞广泛浸润㊂结论㊀改进后的造模方法不但降低了手术难度，而且成功建立了大鼠ＭＩ／ＲＩ模型，为后续开展ＭＩ／ＲＩ研究奠定了良好的模型基础㊂ʌ关键词ɔ㊀大鼠；心肌缺血再灌注损伤；动物模型ʌ中图分类号ɔＱ９５⁃３３㊀㊀ʌ文献标识码ɔＡ㊀㊀ʌ文章编号ɔ１００５⁃４８４７（２０１８）０３⁃０３１１⁃０６Ｄｏｉ：１０ ３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００５－４８４７ ２０１８ ０３ ００７ＩｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｒａｔｍｏｄｅｌｏｆｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙＺＨＡＮＧＷｅｉｑｉａｎｇ１，ＷＡＮＧＴａｏ１，ＺＨＡＮＧＺｈｉｍｉｎｇ２∗，ＹＯＮＧＷｅｎｘｉｎｇ２，ＬＩＵＹｏｎｇｑｉ１，ＬＩＪｕａｎ２，ＬＩＡＮＧＹａｎ１（１．ＧａｎｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００００，Ｃｈｉｎａ．２．ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＧａｎｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００００）Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＺＨＡＮＧＺｈｉｍｉｎｇ．Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｚｈｉｍｉｎｇｙｓ＠１６３．ｃｏｍʌＡｂｓｔｒａｃｔɔ㊀Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀Ｔｏｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｏｆｒａｔｍｏｄｅｌｏｆａｃｕｔｅｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ（ＭＩ／ＲＩ），ｔｏｍａｋｅａｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅｅｖａｌｕａｔｉｏｎａｎｄｔｏｌａｙａｇｏｏｄｍｏｄｅｌｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｆｏｌｌｏｗｉｎｇＭＩ／ＲＩｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀Ｔｈｉｒｔｙ⁃ｓｉｘｃｌｅａｎｇｒａｄｅＷｉｓｔａｒｒａｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ３ｇｒｏｕｐｓ：ｎｏｒｍａｌｇｒｏｕｐｗｉｔｈｏｕｔｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｏｆｔｈｅｌｅｆｔａｎｔｅｒｉｏｒｄｅｓｃｅｎｄｉｎｇｃｏｒｏｎａｒｙａｒｔｅｒｙ（ＬＡＤ），ｓｈａｍｏｐｅｒａｔｉｏｎｇｒｏｕｐｗｉｔｈｏｎｌｙｗｅａｒｉｎｇｔｈｒｅａｄｂｕｔｎｏｌｉｇａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｃｏｒｏｎａｒｙａｒｔｅｒｙ，ａｎｄｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｇｒｏｕｐ，ｗｉｔｈｌｉｇａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＬＡＤｆｏｒ３０ｍｉｎａｎｄｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｆｏｒ１２０ｍｉｎ．ＲａｔｓａｆｔｅｒａｎｅｓｔｈｅｓｉａｈａｄｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓＥＣＧｒｅｃｏｒｄｉｎｇ，ａｎｄｔｒａｃｈｅｏｓｔｏｍｙｆｏｒｍｅｃｈａｎｉｃａｌａｕｘｉｌｉａｒｙｖｅｎｔｉｌａｔｉｏｎ．ＴｈｏｒａｃｏｔｏｍｙａｎｄＬＡＤｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｗｅｒｅｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｏｎｔｈｅｒａｔｓ，ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｒａｔｍｏｄｅｌｓｗｅｒｅｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅｌｙｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙｅｌｅｃｔｒｏｃａｒｄｉｏｇｒａｐｈｙ，ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｍｙｏｃａｒｄｉａｌｅｎｚｙｍｅｃｏｎｔｅｎｔ，ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｎｆａｒｃｔｓｉｚｅ，ａｎｄｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀ＴｈｅｅｌｅｃｔｒｏｃａｒｄｉｏｇｒａｍｏｆｔｈｅＭＩ／ＲＩｇｒｏｕｐｓｈｏｗｅｄｏｂｖｉｏｕｓＳＴ⁃Ｔｄｙｎａｍｉｃｃｈａｎｇｅｓ．ＴｈｅｌｅｖｅｌｏｆＣＫ⁃ＭＢｉｎｔｈｅＭＩ／ＲＩｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄａｔ２ｈａｆｔｅｒｓｕｒｇｅｒｙ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｓｈａｍｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｉｎｆａｒｃｔｓｉｚｅｏｆｔｈｅＭＩ／ＲＩｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｗｉｔｈｅｖｉｄｅｎｔｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｎｄｎｅｃｒｏｓｉｓｏｆｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓａｎｄｅｘｔｅｎｓｉｖｅｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｅｌｌｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ㊀Ｔｈｅｉｍｐｒｏｖｅｄｍｏｄｅｌｉｎｇｍｅｔｈｏｄｎｏｔｏｎｌｙｒｅｄｕｃｅｄｔｈｅｄｉｆｆｉｃｕｌｔｉｅｓｏｆｏｐｅｒａｔｉｏｎ，ｂｕｔｈａｓａｌｓｏｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｔｈｅｒａｔｍｏｄｅｌｏｆＭＩ／ＲＩ，ｐｒｏｖｉｄｉｎｇａｇｏｏｄｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｆｕｒｔｈｅｒＭＩ／ＲＩｒｅｓｅａｒｃｈ．ʌＫｅｙｗｏｒｄｓɔ㊀ｒａｔｓ；ｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａ⁃ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ；ａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓＣｏｎｆｌｉｃｔｏｆｉｎｔｅｒｅｓｔｓｔａｔｅｍｅｎｔ：Ｗｅｄｅｃｌａｒｅｔｈａｔｗｅｈａｖｅｎｏｃｏｎｆｌｉｃｔｏｆｉｎｔｅｒｅｓｔｓｔａｔｅｍｅｎｔ．㊀㊀急性心肌梗死（ａｃｕｔｅｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ，ＡＭＩ）是危害人类健康的重大疾病，是全球的主要死亡原因之一㊂经马尔科夫模型预测，未来２０年间中国将新增２１００万例急性冠脉事件，发生７００万例心源性死亡［１］㊂当前以溶栓治疗或急诊经皮冠状动脉介入治疗（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓｃｏｒｏｎａｒｙｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ，ＰＣＩ）为代表的方法，虽能开通闭塞血管，挽救濒死心肌，但在减少急性心肌梗死面积的同时，由于冠状动脉的骤然开通与血流恢复引发心肌缺血再灌注损伤（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａ⁃ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ，ＭＩ／ＲＩ），诱发病死率依然居高不下㊂因此，模拟人类ＭＩ／ＲＩ模型并探索新的防治方法成为基础研究迫切需要解决的课题㊂大鼠一方面在进化关系上比较接近人类，另一方面便于饲养繁殖且造模成本低廉，从而成为制备ＭＩ／ＲＩ模型的首选㊂传统制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型方法主要有两种，即：使用人工辅助通气的心脏原位结扎和不使用人工辅助通气的胸腔外结扎［２］㊂本实验在前人原位结扎法的基础上进行了改进，不但降低了手术难度，而且成功建立了ＭＩ／ＲＩ模型㊂１㊀材料与方法１ １㊀材料１ １ １㊀实验动物与分组㊀７ ８周龄清洁级成年Ｗｉｓｔａｒ大鼠３６只，雌雄比为１ʒ１，体重２３０ ２６０ｇ，购自甘肃中医药大学实验动物中心ʌＳＣＸＫ（甘）２０１５－０００２ɔ，饲养于甘肃中医药大学实验动物中心屏障环境中ʌＳＹＸＫ（甘）２０１５－０００２ɔ㊂饲养期间给予大鼠标准饲料及洁净饮用水（均由甘肃中医药大学实验动物中心提供）㊂饲养环境：昼夜各半交替，湿度恒定，温度２０ ２５ħ㊂所有操作均符合实验动物伦理学要求（伦理审批号：ＩＡＣＵＣ２０１６－０３９）㊂将大鼠随机分为３组：正常组（Ｎｏｒｍａｌ组）；假手术组（Ｓｈａｍ组），仅穿线，不结扎左冠状动脉前降支（ＬＡＤ）；缺血再灌注组（ＭＩ／ＲＩ组），结扎ＬＡＤ３０ｍｉｎ，再灌注１２０ｍｉｎ㊂１ １ ２㊀试剂与仪器小动物呼吸机ＨＸ⁃１００Ｅ（成都泰盟科技有限公司），Ｐｏｗｅｒｌａｂ数据采集分析系统（埃德仪器国际贸易有限公司），结扎材料及各种手术器械，如手术刀㊁止血钳㊁持针器㊁小镊子㊁眼科剪㊁缝合针，医用缝合线等㊂水合氯醛㊁注射用青霉素钠㊁无菌生理盐水注射液㊁碘伏等㊂１ ２㊀方法１ ２ １㊀ＭＩ／ＲＩ模型的建立根据参考文献［３］的方法进行改进，大鼠术前禁食㊁不禁水１２ｈ，称重标记㊂１０％的水合氯醛（０ ３ｍＬ／１００ｇ）ｉｐ麻醉后，仰卧位固定于手术台上，颈部㊁胸前手术野备皮，碘伏消毒，铺无菌孔巾㊂连接Ｐｏｗｅｒｌａｂ数据采集分析系统，记录标准Ⅱ导联心电图，有异常者剔除㊂切开颈部气管接人工呼吸机进行辅助呼吸（潮气量５ｍＬ／１００ｇ，频率６０ ８０次／ｍｉｎ，呼吸比为２ʒ１，予呼气末持续正压呼吸）㊂胸骨左侧０ ５ｃｍ处以第３㊁４肋骨作为上下边界纵行剪开皮肤约３ｃｍ，用镊子及手术刀钝性分离皮下组织㊁胸大肌直至肋间肌，用弯止血钳将皮肤和肌肉夹起固定于两侧，于心肌搏动明显处纵行剪开３㊁４肋骨，用撑开器撑开胸腔，用眼科镊夹破心包膜，暴露心脏，在左心耳下缘与肺动脉圆锥间找到左冠状静脉主干，ＬＡＤ与之伴行，在棉签的协助下挤出心脏，用眼科缝合线在左心耳下缘与肺动脉圆锥间距主动脉根部约２ｍｍ处进针，进针宽度及深度均在２ｍｍ左右，穿线后于左冠状静脉主干上置一自制小塑料管（管中间剪一小孔，方便固定）结扎㊂结扎成功后肉眼见左心室前壁变青紫或苍白，搏动减弱，心电图呈示ＳＴ段抬高（ȡ０ ２５ｍＶ）为心肌缺血标志㊂结扎３０ｍｉｎ后用剪刀将结扎线剪断形成再灌注，心电图显示ＳＴ段逐渐下降５０％左右㊂造模结束后，按层次依次缝合胸腔㊁肌肉㊁皮肤，再次碘伏消毒，术后腹腔注射少量青霉素注射液预防感染㊂１ ２ ２㊀外周血中心梗三项的含量测定再灌注２ｈ后右心房取血４ｍＬ，离心，取血清，以全自动生化分析仪检测天门冬氨酸氨基转移酶（ＡＳＴ）㊁乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）㊁肌酸激酶同工酶（ＣＫ⁃ＭＢ）的含量㊂１ ２ ３㊀心梗面积测定抽血完毕后取出心脏，去除非心脏组织，用生理盐水把残血洗净，用滤纸吸去水分后置于－２０ħ冷冻２５ｍｉｎ㊂然后沿着垂直于心脏长轴将其切成２ ０ｍｍ厚的薄片，立即转到预温３７ħ的１％ＴＴＣ磷酸盐缓冲液中染１５ｍｉｎ，肉眼可观察到：梗死区心肌为白色，非缺血区为红色，然后将切片置于４％多聚甲醛溶液固定２４ｈ，拍照，通过计算机图像分析软件（Ｉｍａｇｅ⁃ＰｒｏＰｌｕｓ）计算梗死区面积（ＩＡ）占左心室面积（ＬＶ）百分比（ＩＡ／ＬＶ％）㊂１ ２ ４㊀心肌病理组织学检查㊀每组取３只大鼠开胸切取心脏，生理盐水漂洗，滤纸吸干，取结扎线以下心肌组织置于４％多聚甲醛溶液中进行固定，酒精梯度脱水，石蜡包埋，切片，进行苏木素一伊红（ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ⁃ｅｏｓｉｎ，ＨＥ）染色，光学显微镜下观察心肌组织形态学变化㊂１ ３㊀统计学方法应用ＳＰＳＳ２０ ０统计软件，计量资料以均数ʃ标准差（ ｘʃｓ）表示㊂成组资料比较采用ｔ检验，多组间比较采用单因素方差分析㊂Ｐ＜０ ０５为差异有统计学意义㊂２㊀结果２ １㊀大鼠成活情况采用ＬＡＤ上垫一带凹槽塑料管的方法，一方面方便结扎时把握力度和充分固定，另一方面方便再灌注时剪短缝线而不造成撕裂伤，成功地建立了大鼠缺血再灌注模型（如图１）㊂Ｓｈａｍ组㊁ＭＩ／ＲＩ组造模成功数分别为１１只㊁１１只㊂各组间大鼠成活率的比较差异无显著性（Ｐ＞０ ０５）㊂２ ２㊀大鼠心电图的表现同Ｎｏｒｍａｌ组和ｓｈａｍ组比较，ＭＩ／ＲＩ组心电图有明显ＳＴ⁃Ｔ动态改变，ＭＩ／ＲＩ组结扎后ＳＴ段显著抬高伴或不伴有Ｔ波低平或倒置，再灌注后ＳＴ段逐渐回落５０％左右伴Ｔ波高耸，这是建立模型成功的标志（如图２－４）㊂２ ３㊀心肌酶含量变化（如表１）２ ４㊀心肌梗死面积如图所示，ＴＴＣ染色将心肌非缺血区染成红色，梗死区染成苍白色㊂用ＩＡ／ＬＶ评价心肌梗死面积㊂本实验心肌梗死面积（ＩＡ／ＬＶ％）：Ｓｈａｍ组为（０ ００ʃ０ ００）％；ＭＩ／ＲＩ组为（２６ ８０ʃ１ ６０）％㊂与Ｓｈａｍ组比较，ＭＩ／ＲＩ组差异有显著性（Ｐ＜０ ０５）（如图５）㊂图１㊀大鼠在体心肌缺血再灌注损伤模型的手术方法及结扎后表现Ｆｉｇ．１㊀Ｓｕｒｇｉｃａｌｏｐｅｒａｔｉｏｎｔｏｇｅｎｅｒａｔｅｔｈｅｒａｔｍｏｄｅｌｏｆｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙａｎｄｔｈｅｖｉｅｗａｆｔｅｒｌｉｇａｔｉｏｎ注：Ａ．正常心电图；Ｂ．开胸穿线未结扎；Ｃ．ＬＡＤ结扎后；Ｄ．再灌注㊂图２㊀大鼠心电图表现Ｎｏｔｅ．Ａ．ＮｏｒｍａｌＥＣＧ．Ｂ．Ｏｐｅｎｃｈｅｓｔａｎｄｐｕｔｔｉｎｇｔｈｒｅａｄｗｉｔｈｏｕｔｌｉｇａｔｉｏｎ．Ｃ．ＡｆｔｅｒｌｉｇａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＬＡＤ．Ｄ．Ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ．Ｆｉｇ．２㊀ＥＣＧｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅｒａｔｓ注：Ａ．正常波形；Ｂ．开胸穿线后ＳＴ段轻度抬高；Ｃ．ＬＡＤ结扎后ＳＴ段显著抬高（ȡ０ ２５ｍＶ）；Ｄ．再灌注后ＳＴ段回落，Ｔ波高耸㊂图３㊀大鼠心电图分析Ｎｏｔｅ．Ａ．Ｎｏｒｍａｌｗａｖｅｆｏｒｍ．Ｂ．ＳｌｉｇｈｔｅｌｅｖａｔｉｏｎｏｆＳＴｓｅｇｍｅｎｔａｆｔｅｒｔｈｏｒａｃｏｔｏｍｙ．Ｃ．ＳｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｅｌｅｖａｔｉｏｎｏｆＳＴｓｅｇｍｅｎｔａｆｔｅｒｌｉｇａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＬＡＤ（ȡ０ ２５ｍＶ）．Ｄ．ＳＴｓｅｇｍｅｎｔｆａｌｌａｆｔｅｒｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎａｎｄａｈｉｇｈｅｒＴｗａｖｅ．Ｆｉｇ．３㊀ＥＣＧａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｒａｔｓ注：Ａ．正常波形；Ｂ．开胸穿线后ＳＴ段轻度抬高；Ｃ．ＬＡＤ结扎后ＳＴ段显著抬高；Ｄ．再灌注后ＳＴ段回落，高耸Ｔ波㊂图４㊀大鼠心电图动态演变情况Ｎｏｔｅ．Ａ．Ｎｏｒｍａｌｗａｖｅｆｏｒｍ．Ｂ．ＳｌｉｇｈｔｅｌｅｖａｔｉｏｎｏｆＳＴｓｅｇｍｅｎｔａｆｔｅｒｔｈｏｒａｃｏｔｏｍｙ．Ｃ．ＳｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｅｌｅｖａｔｉｏｎｏｆＳＴｓｅｇｍｅｎｔａｆｔｅｒｌｉｇａｔｉｏｎｏｆＬＡＤ．Ｄ．ＳＴｓｅｇｍｅｎｔｆａｌｌｓａｆｔｅｒｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ，ａｎｄａｈｉｇｈｅｒＴｗａｖｅ．Ｆｉｇ．４㊀ＤｙｎａｍｉｃｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆＥＣＧｉｎｔｈｅｒａｔｓ表１㊀血浆指标检测结果（ ｘʃｓ，ｎ＝８）Ｔａｂ．１㊀Ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｐｌａｓｍａｉｎｄｅｘｅｓ（ ｘʃｓ，ｎ＝８）组别Ｇｒｏｕｐｓ㊀ＬＤＨ（Ｕ／Ｌ）ＣＫ⁃ＭＢ（Ｕ／Ｌ）ＡＳＴ（Ｕ／Ｌ）正常组Ｎｏｒｍａｌｇｒｏｕｐ４７６ʃ２６２㊀４３７ʃ２１７㊀９１ʃ３０㊀假手术组Ｓｈａｍｇｒｏｕｐ２４２１ʃ１３０７∗１０５９ʃ５９５∗㊀７４９ʃ５１２∗缺血再灌注组ＭＩ／ＲＩｇｒｏｕｐ３０２１ʃ１２３８∗∗１８８７ʃ４４９∗∗Δ７８２ʃ５２２∗注：与Ｎｏｒｍａｌ组比较∗Ｐ＜０ ０５，∗∗Ｐ＜０ ０１；与Ｓｈａｍ组比较ΔＰ＜０ ０１㊂Ｎｏｔｅ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｎｏｒｍａｌｇｒｏｕｐ，∗Ｐ＜０ ０５，∗∗Ｐ＜０ ０１；ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅＳｈａｍｏｐｅｒａｔｉｏｎｇｒｏｕｐ，ΔＰ＜０ ０１．２ ５㊀心肌病理组织学检查Ｓｈａｍ组：心肌细胞排列整齐，间质无水肿，未见明显心肌结构破坏；ＭＩ／ＲＩ组：部分肌纤维溶解液化，心外膜下见带状梗死灶，广泛炎性细胞浸润（如图６）㊂３㊀讨论急性心肌梗死（ａｃｕｔｅｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ，ＡＭＩ）在欧美发达国家有 头号杀手 之称㊂在我国随着人民生活水平的提高，ＡＭＩ的发病率和死亡率逐年上升［１］㊂当前通过溶栓㊁介入及搭桥术虽然能够挽救濒死的心肌细胞，改善心功能，但恢复血供后往往出现 再灌注损伤 ，诱发病死率居高不下㊂由此ＭＩ／ＲＩ成为当前医学研究的热点㊂目前国内外基础研究中模拟人类ＭＩ／ＲＩ模型应用最广泛的方法是结扎大鼠左冠状动脉前降支使其供应区血流阻断，造成心肌缺血㊂心肌因缺血㊁缺氧而发生代谢紊乱以致发生凝固性坏死㊂然而在大鼠ＭＩ／ＲＩ图５㊀ＴＴＣ染色结果Ｆｉｇ．５㊀Ａｐｐｅａｒａｎｃｅｏｆｔｈｅｒａｔｈｅａｒｔｃｕｔｓｕｒｆａｃｅｓ（ＴＴＣｓｔａｉｎｉｎｇ）注．Ａ．为假手术组；Ｂ．为ＭＩ／ＲＩ组㊂（从左到右放大倍数依次为ˑ１００，ˑ２００，ˑ４００）图６㊀心肌病理组织学检查（ＨＥ染色）Ｎｏｔｅ．Ａ．Ｓｈａｍｏｐｅｒａｔｉｏｎｇｒｏｕｐ．Ｂ．ＭＩ／ＲＩｇｒｏｕｐ．Ｆｒｏｍｌｅｆｔｔｏｒｉｇｈｔ，ˑ１００，ˑ２００，ˑ４００，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｆｉｇ．６㊀Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｔｈｅｒａｔｍｙｏｃａｒｄｉａｌｔｉｓｓｕｅｓ模型制造中所采用人工辅助呼吸的心脏原位结扎法存在诸多问题：如邓宇珺等［４］认为既往利用垫片法实施缺血再灌注实验时，结扎线有可能划破垫片表面陷入垫片，加之实验过程中血液沾染垫片导致松解活结时出现松解障碍而影响再灌注的顺利开始㊂成玲俐等［５］则认为传统方法在阻断冠状动脉造成缺血后实现再通时，结扎线不易剪断，常导致左心耳破裂，引起心脏撕脱伤，造成大出血；冠状动脉定位不一，会造成模型缺血损伤部位及损伤程度不一致等㊂我们在前人造模的基础上，利用大鼠撑开器扩大胸腔术野，然后在肺动脉圆锥与左心耳之间下２ｍｍ处在结扎线下垫一凹槽型塑料软圆管，不但避免了垫片较软且容易沾染血液的弊端，且可以利用凹槽形成的高度有效控制结扎的力度，防止结扎太紧或太松导致模型失败，再灌注时，利用凹槽释放的空间易于剪短结扎线而不造成牵拉，避免了结扎线不易剪断的问题，很好地实现了再灌注㊂造模成功率达９０％以上，较好满足了实验需要㊂在模型鉴定过程中大鼠的心电图显示ＬＡＤ在结扎后ＳＴ段显著抬高伴或不伴有Ｔ波低平或倒置，再灌注后ＳＴ段逐渐回落５０％左右并伴有Ｔ波高耸，符合目前大多数学者主张的缺血再灌注的心电图表现形式，由此说明此改进方法是成功的㊂另外，心肌酶是衡量大鼠心肌损伤的敏感性指标㊂心肌细胞坏死时可引起细胞膜完整性破坏和心肌标志酶的外漏，ＣＫ⁃ＭＢ具有心肌组织特异性而被认为是诊断心肌坏死的 金标准 之一，再灌注后ＣＫ⁃ＭＢ释放增多与心肌组织微灌注不良有关；ＬＤＨ增加的程度可间接反映心肌细胞膜的损伤程度，对ＭＩ／ＲＩ具有诊断价值［６］；ＡＳＴ则主要分布在心肌，在细胞受损时大量溢出㊂我们在再灌注后检测了ＡＳＴ㊁ＬＤＨ㊁ＣＫ⁃ＭＢ变化，与Ｎｏｒｍａｌ组和Ｓｈａｍ组比较，ＭＩ／ＲＩ组指标ＣＫ⁃ＭＢ变化最为显著［（１８８７ʃ４４９）ｖｓ（４３７ʃ２１７）Ｕ／Ｌ㊁（１８８７ʃ４４９）ｖｓ（１０５９ʃ５９５）Ｕ／Ｌ］，差异有显著性㊂与Ｎｏｒｍａｌ组比较，ＭＩ／ＲＩ组ＬＤＨ差异有显著性［（３０２１ʃ１２３８）ｖｓ（４７６ʃ２６２）Ｕ／Ｌ］，由此可见ＭＩ／ＲＩ组心肌细胞损伤明显㊂尽管有报道［４］认为Ｓｈａｍ组较Ｎｏｒｍａｌ组心肌损伤标准物无差异，但我们发现，差异是存在的，由于ＬＡＤ存在于心脏内，穿线及结扎过程必然会对心肌造成机械损伤，造成心肌标志酶的外漏㊂实验动物心肌梗死面积最常见的检测方法是氯化三苯基四氮唑（ＴＴＣ）染色［７］㊂本实验用ＴＴＣ染色显示ＭＩ／ＲＩ组梗死面积明显大于Ｓｈａｍ组，说明血流再通可以加剧心肌损伤，另外我们从病理形态学上观察到Ｓｈａｍ组心肌细胞排列整齐，未见细胞结构明显破坏；而ＭＩ／ＲＩ组肌纤维溶解液化，心外膜下可见一条很明显的带状梗死灶，说明血流再通后明显加剧了心肌坏死程度和范围㊂综上所述，改进的造模方法成功提高了造模的成功率，降低了手术难度，准确地复制心肌ＭＩ／ＲＩ的实验模型，为后续开展ＭＩ／ＲＩ研究奠定良好的模型基础㊂参㊀考㊀文㊀献（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）［１］㊀中国医师协会中西医结合医师分会，中国中西医结合学会心血管病专业委员会，中国中西医结合重症医学专业委员会，等．急性心肌梗死中西医结合诊疗专家共识［Ｊ］．中国中西医结合杂志，２０１４，３４（４）：３８９－３９５．ＥｘｐｅｒｔｃｏｎｓｅｎｓｕｓｏｎｔｈｅｄｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆａｃｕｔｅｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｎｆａｒｃｔｉｏｎｂｙｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆＴＣＭａｎｄＷｅｓｔｅｒｎＭｅｄｉｃｉｎｅ［Ｊ］．ＣｈｉｎＪＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＴｒａｄＷｅｓｔｅｒｎＭｅｄ，２０１４，３４（４）：３８９－３９５．（ＮｏａｕｔｈｏｒｓｉｓｌｉｓｔｅｄａｎｄｎｏＥｎｇｌｉｓｈａｂｓｔｒａｃｔｉｓｉｎｃｌｕｄｅｄ）［２］㊀李晶，邹小华，徐向辉，等．大鼠心肌缺血后处理模型的改良及评价［Ｊ］．医学临床研究，２００８，２５（１２）：２１５５．ＬｉＪ，ＺｈｏｕＸＨ，ＸｕＸＨ，ｅｔａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｍｅｔｈｏｄｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｒａｔｍｏｄｅｌｓｏｆｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａｐｏｓｔｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇａｎｄｉｔｓｅｖａｌｕａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＪＣｌｉｎＲｅｓ，２００８，２５（１２）：２１５５－２１５８．［３］㊀唐丹丽，崔海峰，隋宇，等．痰瘀同治方对心肌缺血再灌注损伤大鼠核因⁃ＫＢ通路及心肌自噬㊁凋亡的影响［Ｊ］．中国中医药信息杂志，２０１５，２２（１２）：３８－４２．ＴａｎｇＤＬ，ＣｕｉＨＦ，ＳｕｉＹ，ｅｔａｌ．ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＴａｎｙｕＴｏｎｇｚｈｉＦｏｒｍｕｌａｏｎＮＦ－κＢｐａｔｈｗａｙ，ａｕｔｏｐｈａｇｅａｎｄａｎｔｉａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｒａｔｓｗｉｔｈｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａ⁃ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．ＣｈｉｎＪＩｎｆｏｒｍａｔＴＣＭ，２０１５，２２（１２）：３８－４２．［４］㊀邓宇珺，符永恒，谭宁，等．大鼠活体心肌缺血再灌注损伤模型的建立与综合评估［Ｊ］．中国病理生理杂志，２０１１，２７（２）：４１２－４１６．ＤｅｎｇＹＪ，ＦｕＹＨ，ＴａｎＮ，ｅｔａｌ．Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｒａｔｈｅａｒｔｉｓｃｈｅｍｉａ⁃ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙｍｏｄｅｌｉｎｖｉｖｏ［Ｊ］．ＣｈｉｎＪＰａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌ，２０１１，２７（２）：４１２－４１６．［５］㊀成玲俐，吴素华，李志梁，等．大鼠心肌缺血再灌注损伤动物模型的建立与评估［Ｊ］．中国实验诊断学，２０１０，１４（８）：１１６３－１１６５．ＣｈｅｎｇＬＬ，ＷｕＳＨ，ＬｉＺＬ，ｅｔａｌ．Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｎｇｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇｒａｔｍｏｄｅｌｓｏｆａｃｕｔｅｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ［Ｊ］．ＣｈｉｎＪＬａｂＤｉａｇｎ，２０１０，１４（８）：１１６３－１１６５．［６］㊀崔新明，曹霞，谷欣权，等．在体大鼠心肌缺血时间对再灌注损伤形成的影响［Ｊ］．中国实验诊断学，２０１０，１４（３）：３４０－３４２．ＣｕｉＸＭ，ＣａｏＸ，ＧｕＸＱ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｉｓｃｈｅｍｉａｔｉｍｅｏｎｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｍｙｏｃａｒｄｉａｌｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙｉｎｒａｔｓｉｎｖｉｖｏ［Ｊ］．ＣｈｉｎＪＬａｂＤｉａｇｎ，２０１０，１４（３）：３４０－３４２．［７］㊀ＫａｋｉｍｏｔｏＹ，ＴｓｕｒｕｙａｍａＴ，ＭｉｙａｏＭ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓａｎｄｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓｏｆｔｒｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｃｈｌｏｒｉｄｅｔｏｄｅｔｅｃｔａｃｕｔｅｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｎｆａｒｃｔｉｏｎａｔｆｏｒｅｎｓｉｃａｕｔｏｐｓｙ［Ｊ］．ＡｍＪＦｏｒｅｎｓｉｃＭｅｄＰａｔｈｏｌ，２０１３，３４（３）：２４２－２４７．［收稿日期］㊀２０１８－０１－０９。

练字首先要安心调气，气调则脉络自通［17］。

浙江中医学院何任教授在“中医与古诗词漫谈”一文中，以亲身的实践与体会阐述了诗词对健康的作用，何教授认为：“吟诵诗词可以排烦，可以宽胸，可以开怀，可以欣赏，从医学角度来说，可使体内情绪机能活跃，大有益于身心健康［18］”。

《内经》认为音乐是“和合之气”、“音者，天地之和气”、“律乃天地之正气，人之中声也”，音乐可和合人体阴阳，达“阴平阳秘”。

何任教授专门撰文，阐述音乐确实有益身心健康［19］。

乐观愉悦者长寿，古代儒家提倡“仁智者寿”，主张修养德性以延年；古代医家提倡“乐观者寿”，主张修养情志以延年。

《内经》可见，上古之人之所以“度百岁而动作不衰”，是因为“外不劳形于事，内无思想之患，以恬愉为务，以自得为功，形体不敝，精神不散”，外无形体疲劳，内没思想负担，都有乐观愉悦的精神状态。

祖国医学历史悠久，名医辈出，当代名老中医有关精神养生的典范事例不胜枚举，由此可见一斑。

参考文献［1］张学梓，钱秋海，郑翠娥．中医养生学［M］．北京：中国医药科技出版社，2002：145．［2］蒋应时．中医养生理论的核心与道家养生思想［J］．中医研究，1994，7（4）：3－4．收稿日期：2010－01－15基金项目：国家自然基金课题（30572461）作者简介：李明（1979－），男，河南郑州人，主治医师，博士，研究方向：中西医结合防治心血管病。

［3］李小嘉，刁本恕，周家骧，等．王静安养生学术思想探析［J］．辽宁中医杂志，2008，35（1）：49－52．［4］王庆其，李孝刚．裘沛然先生谈中华文化与养生之道［J］．上海中医药杂志，2007，41（9）：1－3．［5］何炎燊，马凤彬．何炎燊医著选集［M］．广州：广东高等教育出版社，2002：2．［6］白永波，孙光荣．中医养生大全［M］．北京：北京科学技术出版社，香港雪谷出版社，1990：14．［7］杨朝霞．修禅养生［M］．北京：大众文艺出版社，2005：3．［8］邵建民．童心，蚁食，龟欲，猴行—养生八字诀［J］．大众医学，2007（5）：62．［9］邱志济，邱江东，邱江峰．朱春良防病保健延缓衰老的养生观点发挥［J］．辽宁中医杂志，2004，31（3）：179－180．［10］颜德馨．天气渐暖，性事当敛［J］．养生大世界，2005（3）：51．［11］徐志伟，李俊德．邓铁涛学术思想研究［M］．2版．北京：华夏出版社，2003：24．［12］张建中．泽惠神州亿万人增寿［J］．上海中医药杂志，2006，40（6）：3－4．［13］蔡巧玉．融汇东西扬传统，心怀璞玉拓新知［J］．科学中国人，2007（9）：72－77．［14］钱伯文．预防为主，是防病治病的精华［J］．上海中医药杂志，2008，42（5）：1－2．［15］邓铁涛，白家祯，曾一玲．八段锦［M］．广州：广东科技出版社，2006：3．［16］毛嘉陵．朱春良健康长寿5秘诀［J］．健康生活，2008（8）：66．［17］颜德馨．生命在于流动［J］．中外健康文摘，2008（9）：51．［18］何任．中医与古诗词漫谈［J］．医古文知识，2003，20（1）：8－9．［19］何任．养生和民族音乐［J］．浙江中医学院学报，1995，19（2）：10－11．提高大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型成功率的方法探讨李明1，鲁卫星2，崔现军3，王婷4（1．河南中医学院第一附属医院心内科，河南郑州450000；2．北京中医药大学东直门医院，北京100700；3．北京地坛医院，北京100015；4．北京水利医院，北京100036）摘要：大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型是研究冠心病缺血再灌注及抗心律失常药物最常用的灌注损伤模型。

急性心肌缺血再灌注大鼠早期心脏舒张功能降低及心肌纤维化的研究邵靓;张萍;张勇;马爱群【摘要】目的：探讨急性心肌缺血再灌注大鼠心功能的改变及心肌纤维化对其影响。

方法：建立大鼠急性心肌缺血再灌注模型，利用心脏超声和血流动力学检测其心功能状态。

用水解法检测心肌羟脯氨酸含量。

分别用免疫印迹和酶联免疫吸附剂测定法检测心肌和血清中 TNF-α的表达。

结果：急性心肌缺血再灌注大鼠早期出现心脏舒张功能降低，在灌注第3天时尤为显著。

心肌纤维化发生在缺血再灌注区，且该部位胶原容积分数显著增高，与心肌TNF-α表达规律相同。

同时心肌羟脯氨酸含量和血清TNF-α在急性缺血再灌注时也显著增加。

结论：急性心肌缺血再灌注大鼠心肌纤维化降低早期心脏舒张功能，而炎症因子TNF-α的异常增高是急性心肌缺血再灌注心肌纤维化的可能因素之一。

%Objective:To discuss the cardiac function changes and the myocardial fibrosis effects in acute myocardial ischemia/reperfusion rats .Methods :Acute myocardial ischemia/reperfusion rats models were estab-lished for detecting their heart function by echocardiography and hemodynamic .Water solution method was used to detect expression of myocardial hydroxyproline .And the expression of TNF-αin the myocardial and serum was de-tected by western blot and enzyme-linked immunosorbent method .Results :Early heart diastolic function was lower in acute myocardialischemia/reperfusion rat ,significantly in the third day afterperfusion .Myocardial fibrosis oc-curred in ischemia/reperfusion areas ,and the collagen volume fraction was significantly increased in this area .It wasidentical to expression of TNF-αin myocardial .Meanwh ile ,myocardial hydroxyproline content and TNF-αin serum also significantly increased in acute ischemia/reperfusion .Conclusion:Myocardial fibrosis results to deterioration of early heart diastolic functionin in rats with acute myocardial ischemia/reperfusion .And the expression of inflamma-tory cytokine TNF-αis one of the possible factors of myocardial fibrosis in acute myocardial ischemia/reperfusion .【期刊名称】《陕西医学杂志》【年(卷),期】2014(000)005【总页数】5页(P518-521,525)【关键词】心肌缺血/病理生理学;心肌再灌注损伤/病理生理学;羟脯氨酸/代谢;肿瘤坏死因子/代谢;酶联免疫吸附测定;模型,动物;大鼠【作者】邵靓;张萍;张勇;马爱群【作者单位】西安交通大学医学院第一附属医院心内科西安710061;湖北省武汉市华中科技大学附属协和医院神经内科;西安交通大学医学院第一附属医院心内科西安710061;西安交通大学医学院第一附属医院心内科西安710061【正文语种】中文【中图分类】R542.23急性心肌缺血再灌注损伤是急性心肌梗死患者接受再灌注治疗后的严重不良后果，直接导致患者心功能降低和预后不良。

大鼠心肌缺血-再灌注损伤模型的改良及实验观察杨简;杨俊;丁家望;李松;席祖洋;李稳慧【期刊名称】《中国老年学杂志》【年(卷),期】2008(28)10【摘要】目的改良大鼠在体心肌缺血/再灌注(I/R)损伤模型,探讨I/R对大鼠心肌的影响.方法 45只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血组和I/R组,对传统造模方法进行改进,建立MI/RI模型.记录手术过程心电图改变;术后左心室心肌TTC 染色,分析心肌梗死面积;所有心肌标本均HE染色行组织学检查.结果缺血组及IR 组结扎左冠状动脉前降支后心电图ST段显著抬高(≥0.1 mV),IR组恢复血液灌注后ST段回落并可伴有各种心律失常表现,Sham组手术前后无变化;IR组心肌梗死面积高于Sham组(P＜0.01)及缺血组(P＜0.05);IR组病理改变明显,成功改进了心肌MI/RI动物模型.结论制备大鼠MI/RI模型简便易行,结果稳定,为研究I/R机制提供了理想的造模方式.【总页数】3页(P961-963)【作者】杨简;杨俊;丁家望;李松;席祖洋;李稳慧【作者单位】三峡大学第一临床医学院宜昌市中心人民医院心内科,湖北,宜昌,443003;三峡大学第一临床医学院宜昌市中心人民医院心内科,湖北,宜昌,443003;三峡大学第一临床医学院宜昌市中心人民医院心内科,湖北,宜昌,443003;三峡大学第一临床医学院宜昌市中心人民医院心内科,湖北,宜昌,443003;三峡大学第一临床医学院宜昌市中心人民医院心内科,湖北,宜昌,443003;三峡大学第一临床医学院宜昌市中心人民医院心内科,湖北,宜昌,443003【正文语种】中文【中图分类】R543.3【相关文献】1.IMM-9126改良剂型对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 [J], 徐少锋;何令帅;王晓良2.大鼠心肌缺血再灌注损伤模型建立的改良方法 [J], 王平安; 杨珂伟; 王静; 焦成3.葱白提取物对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠心肌细胞凋亡的作用及机制研究 [J], 杨剑锋;柯于鹤;雷杰;田立群4.浅低温对心肌缺血-再灌注损伤合并脓毒症大鼠模型的心肌保护作用 [J], 秦竹韵;申世轩;曲开勇;曹芳芳;张海涛5.异丙酚对心肌缺血再灌注损伤大鼠模型Toll样受体4及高迁移率族蛋白1表达的影响 [J], 黎真真;陈飞任;吴红发;钟有清因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠在体心肌缺血-再灌注早期应用L-精氨酸对心功能的保护作用王晓;梁峰;马文良;田珏;王亮;李晓宇;刘慧荣【期刊名称】《中国预防医学杂志》【年(卷),期】2008(9)2【摘要】目的心肌缺血/再灌注早期给予L-精氨酸,观察其对心脏的保护作用。

方法雄性Wistar大鼠45只,随机分为3组(n=15):伪手术组(Sham组),缺血/再灌注+生理盐水组(Vehicle组),L-精氨酸早期处理组(L-Arg组)。

结扎大鼠心脏左冠脉前降支,建立在体心肌缺血/再灌注模型,缺血30 min、再灌注5 h,分别在缺血/再灌注早期和晚期给予L-精氨酸。

动态监测大鼠左心室功能;再灌注结束后,以Evan′s蓝和TTC双染法检测心梗面积,化学发光法检测总NO(NOx)含量,以ELISA法检测心肌组织过氧亚硝基(ONOO-)标志物硝基酪氨酸含量。

结果再灌注早期给予L-精氨酸显著减轻了缺血/再灌注诱导的大鼠心功能降低(LVSP和dp/dtmax)、减少了心肌梗死面积、减少了心肌组织细胞毒性物质ONOO-的生成。

结论心肌缺血/再灌注早期给予L-精氨酸可以通过增加NO的生成,减轻再灌注诱导的心肌损伤,进而加快心肌缺血/再灌注后心功能的恢复。

【总页数】5页(P86-90)【关键词】再灌注;L-精氨酸;心脏功能;过氧亚硝基【作者】王晓;梁峰;马文良;田珏;王亮;李晓宇;刘慧荣【作者单位】山西医科大学基础医学院生理学教研室;山西医科大学附属太钢总医院胸心外科【正文语种】中文【中图分类】R282.71;R-332【相关文献】1.L-精氨酸对大鼠局灶性脑缺血再灌注早期炎症损伤研究 [J], 丁俊丽;贺婕;缴克华;穆斌;肖丽萍;银广悦2.L-精氨酸——一氧化氮代谢通路对在体心肌缺血/再灌注大鼠心功能的影响 [J], 梁峰;王晓樑;马文良;田珏;王瑾;李晓宇;郝一勇;刘慧荣3.L-精氨酸和SOD在心肌缺血再灌注损伤中的协同保护作用 [J], 蔡建志;王永武4.L-精氨酸对大鼠心肌缺血再灌注内皮细胞功能的影响 [J], 贾俊海;陈素仙;陈永昌5.未成熟心肌缺血再灌注损伤后L-精氨酸的保护作用 [J], 薛涛;张宜乾因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠活体心肌缺血再灌注损伤模型的建立与综合评估邓宇珺;杨敏;谭卫萍;苏健;符永恒;谭宁;曾红科;单志新;林秋雄;李晓红;董小莉;余细勇【摘要】AIM: To estahlish and evaluate a rat model of heart ischemia - reperfusion injury in vivo.METHODS : Seventy - two male Sprague - Dawley rats weighing( 250 ±50 )g were randomly divided into sham operation group( sham ), ischemia - reperfusion group( I/R ) and normal group.The animals were anesthetized and heparinized.Myocardial ischemia - reperfusion was induced by ligating the left anterior descending coronary artery with " U - shape tube" for 35 min followed hy 120 min or 240 min reperfusion in vivo.The heart infarct size was measured by triphenyltetrazolium chloride( TTC ) staining.The myocardial cell apoptotic index was determined by the method of terminal deoxynucleotidyl transferase - mediated dUTP - biotin nick - endlabeling( TUNEL ).Immunohistochemical method was used to detect the expression of Bcl - 2 and Bax in rat ischemia myocardium.The blood level of MB isoenzyme of creatine kinase ( CK - MB ), cardiac troponin Ⅰ( cT nI ), nitric oxide( NO ), malondialdehyde( MDA ), total superoxide dismutase( T SOD )and glutathione peroxidase( GSH - Px ) were detected after reperfusion for 2 h and 4 h.RESULTS : Compared with normal group and sham group, there were obvious changes of ST - T segment and Q wave in the electrocardiogram of I/R group.The blood level of CK - MB, cTnI, NO, MDA and GSH - Px in I/R group increased( P ＜0.05 ,P ＜0.01 ) after reperfusion for 2 h and 4 h, and the hlood level of T - SOD in I/R groupafter reperfusion for 2 h and 4 h also increased ( P ＜0.05 ).The heart infarct size in I/R group was the largest as compared to other groups.Among these groups, the apoptotic index of I/R group was the highest and the Bcl - 2/Bax ratio in I/R group decreased( P ＜ 0.01 ).CONCLUSION : The rat model of heart ischemia - reperfusion injury in vivo can be successfully established with the " U - shape tube" .There are obviously changes of heart infarct size. blood level of CK - MB, cTnI, NO, MDA, T - SOD and GSH - Px, myocardial apoptotic index and Bcl - 2/Bax ratio hetween I/R rats and control animals.%目的:构建并评估大鼠活体心肌缺血再灌注损伤(I/R)的实验动物模型. 方法:将清洁级成年SD雄性大鼠72只,随机分为正常组、假结扎组和I/R模型组, 手术的两组全麻下开胸暴露心脏,假结扎组只过线不结扎,模型组使用"U形金属管"进行冠状动脉左前降支结扎,持续心电图监测,并于再灌注2 h与4 h后进行血浆生化﹑心肌组织学的检测.结果:与正常组和假结扎组比较,I/R模型组心电图有明显ST-T改变和再灌注后病理性Q波,再灌注2 h和4 h时存在比较明显的ST-T改变;血标本检测示心肌型肌酸激酶同功酶(CK-MB)、心肌钙蛋白I(cTnI)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平显著升高(P＜0.05或P＜0.01),T-SOD水平在2 h和4 h也应激性升高(P＜0.05);心肌组织病理学检测显示模型组左心室心肌损伤疤痕明显,且2 h模型组左室心肌存在间隔性梗死区域,4 h模型组心肌组织区域性梗死和梗死面积明显增加;TUNEL法与Bcl-2﹑Bax蛋白实验显示2 h和4 h心肌细胞凋亡数量明显增加;Bcl-2/Bax蛋白表达阳性细胞比值下降显著(P＜0.01). 结论:成功建立大鼠活体心肌I/R模型,模型大鼠的心电图、血清学、心梗面积﹑心肌细胞凋亡和心肌组织病理学等发生显著改变.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2011(027)002【总页数】5页(P412-416)【关键词】大鼠;再灌注损伤;细胞凋亡【作者】邓宇珺;杨敏;谭卫萍;苏健;符永恒;谭宁;曾红科;单志新;林秋雄;李晓红;董小莉;余细勇【作者单位】广东省人民医院,广东省医学科学院急危重症医学部,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院医学研究中心,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院图书馆,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院医学研究中心,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院医学研究中心,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院广东省心血管病研究所心内科,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院急危重症医学部,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院医学研究中心,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院医学研究中心,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院医学研究中心,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院广东省心血管病研究所心内科,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院医学研究中心,广东,广州,510080【正文语种】中文【中图分类】R542.2随着老龄化人口的增多，临床上由于心肌缺血引起的一系列心血管病越来越常见，且治疗效果欠佳。

大鼠心肌缺血再灌注损伤模型建立的改良方法
改良心肌缺血再灌注损伤模型的方法有：
一、动物模型选择。

常见的小鼠建立心肌缺血再灌注损伤模型，可以使用C57BL/6小鼠，且模型建立的技术操作较为容易、易于统一高效掌控；
二、药物抗凝选择。

心肌缺血再灌注损伤过程中选择抗凝制剂中断血流影响的药物时，应根据药物的作用特点、安全性进行合理的选择；
三、再灌注时期选择。

再灌注时期要合理设定，及早再灌注可降低复构细胞损伤，缩短实验时间；
四、体外复构条件优化。

心肌缺血再灌注模型建立过程中，可以考虑优化营养液培养基、调节室温、控制光照等复构外界因素；
五、增加轮灌周期。

为了提高模型的正确性，建议增加多次模型轮灌来获取更准确的实验结果。

六、评价指标的选择。

在心肌缺血再灌注损伤模型的实验中，可以选择评价指标，如肌细胞再分化程度、心绞痛及心电图等指标，监测模型效果和安全性；
七、细胞检测技术改进。

心肌缺血缺血再灌注损伤模型中，可以使用小鼠心肌细胞形态学检测、检测细胞增殖、检测炎症性因子以及蛋白质水平等技术，以考察细胞受缺血再灌注影响程度。

当归多糖改善大鼠心肌缺血再灌注损伤的体内外观察及其机制探讨叶建华1，沈盛晖1，张田杰1，冯频频21 浙江省立同德医院心血管科，杭州310012；2 浙江省立同德医院药剂科摘要：目的　建立大鼠心肌缺血再灌注损伤（MIRI ）的体内、体外模型，观察当归多糖（ASP ）对大鼠MIRI 的改善作用并探讨其机制。

方法　在体内研究，成年SD 大鼠随机分为假手术组、MIRI 组、ASP 低剂量组、ASP 高剂量组，除假手术组外，均采用冠状动脉左前降支结扎再灌注的方法建立MIRI 模型，ASP 低、高剂量组在建模后分别给予50、100 mg /kg 的ASP 灌胃，假手术组及MIRI 组给予等量生理盐水灌胃，持续4周；采用ELISA 法检测各组血清心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶（CK -MB ）、乳酸脱氢酶（LDH ）及炎症因子肿瘤坏死因子α（TNF -α）、白细胞介素6（IL -6）、IL -1β；Western blotting 法检测各组心肌组织凋亡蛋白B 淋巴细胞瘤2（Bcl -2）、Bcl -2关联X 蛋白（Bax ）、裂解的半胱胺酸蛋白酶（cleaved Caspase -3）及toll 样受体4（TLR4）/核因子κB （NF -κB ）通路相关蛋白TLR4、磷酸化核蛋白（p -p65）、磷酸化NF -κB 抑制蛋白α（p -IκBα）表达。

在体外研究，将大鼠心肌细胞分为对照组、H /R 组、H /R+ASP 低剂量组、H /R+ASP 高剂量组，对照组正常培养不做处理，其他3组均建立体外心肌细胞缺氧复氧（H /R ）模型，建模后H /R+ASP 低、高剂量组分别加入浓度为5、10 µg /mL 的ASP ，H /R 组不做处理；采用MTT 比色法检测各组心肌细胞活性，ELI⁃SA 法检测各组心肌细胞炎症因子TNF -α、IL -6、IL -1β，Western blotting 法检测各组心肌细胞凋亡蛋白Bax 、Bcl -2、cleaved Caspase -3及TLR4/NF -κB 通路蛋白TLR4、p -p65、p -IκBα表达。

(10)申请公布号 (43)申请公布日 2014.04.30C N 103756953A (21)申请号 201410022374.3(22)申请日 2014.01.20C12N 5/071(2010.01)(71)申请人四川大学地址610065 四川省成都市武侯区一环路南一段24号(72)发明人杨春蕾 邵鑫(54)发明名称SD 大鼠体外心肌细胞缺血再灌注损伤模型的建立(57)摘要SD 大鼠体外心肌细胞缺血再灌注损伤模型的建立，是将SD 大鼠心肌细胞原代培养后，将其放在正常培养环境中培养。

之后，放在缺氧环境中培养一段时间，再放在正常培养环境中培养。

之后，通过电镜、MTT 实验、相关基因表达、WesternBlot和流式细胞术等方法对心肌细胞缺血再灌注后损伤情况进行观察和统计。

与以往常用的缺血再灌注损伤模型制备方法比较，本发明最突出的特点是实现了实验方法的标准化，可通过调整培养时间使损伤程度可调控，有很好的重复性。

(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书2页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书2页(10)申请公布号CN 103756953 A1/1页1.SD大鼠体外心肌细胞缺血再灌注损伤模型的建立，包括以下步骤：将SD大鼠的乳鼠处死后取心脏,对心肌细胞进行原代培养，将细胞放入培养箱中培养在培养一段时间之后更换培养液在培养几天之后，将细胞用缓冲液洗涤几次加入模拟缺血液，将细胞置于缺氧装置中，通入混合气体一段时间后停止通入气体并密封继续培养缺血缺氧24小时之后，更换等体积的含5%血清的模拟再灌注液，培养1小时将培养后细胞进行检测。

2.根据权利要求1所述的SD大鼠体外心肌细胞缺血再灌注损伤模型的建立，其特征是细胞置于缺氧装置中的时间为60分钟。

3.根据权利要求1所述的SD大鼠体外心肌细胞缺血再灌注损伤模型的建立，其特征是缺血缺氧条件为98%N2、2%CO2。

基金项目:广东省自然科学基金(06021338);广东省科技计划项目(2007B031508003);佛山科技局(200808109)*通讯作者,Wushuhua168@文章编号:1007-4287(2010)08-1163-03大鼠心肌缺血再灌注损伤动物模型的建立与评估成玲俐1,吴素华2*,李志梁1,唐2,张 瑞1(1.南海盐步医院,广东佛山528247;2.中山大学附属第一医院;3 南方医科大学珠江医院)摘要:目的 改进和完善大鼠急性心肌缺血再灌注损伤动物模型的制备及评估。

方法 健康SD 大鼠随机分为3组:假手术组(Sham 组),仅穿线,不结扎LAD;缺血组(Ischemia 组),单纯结扎LAD30min;缺血再灌注组(IR 组),结扎LAD30min,再灌注120min 。

每组20只。

并从造模成功率、心电图、外周血中LDH 、CK MB 的含量测定、心肌病理组织学检查等方面对改进后的模型进行评估。

结果 改进后的造模成功率达到90%以上,血液动力学、心电图、外周血中LD H 、C K MB 的含量测定、心肌病理组织学检查等方式均证实改良后的动物模型成功。

结论 改进后的方法能大大降低手术难度,提高模型成功率和动物成活率,准确地复制心肌缺血再灌注损伤的实验模型,简化实验操作步骤。

关键词:大鼠;心肌缺血再灌注;动物实验模型中图分类号:R541 4文献标识码:AIm proving and Evaluating the Method of Establishing Rat Models of Acute Myocardial Eschem ia Reperfusion C HE NG Ling li ,WU Su hua,LI Zhi lian g ,et a l.(De p a rtment of Ca rdiovascula r ,Yanbu H osp ital o f Nanhai District ,Foshan 528247,China)Abstract:Objective To i mprove and evaluate the method of establishing rat models of acu te myocardial ischemiareperfusion,which had high rate of success and survive.Methods 60Sprague Dawley rats were divided into three groups at random:con trol group,Sham group and improved myocardial ischemia/reperfusi on group.The successful rate and the effectiveness of each group were observed.The hemodynamics,eletrocardiogram,Evans blue and TTC staining,myocardial enzyme spectrum and histology resul ts were used for evaluating the modified model.Results The successful rate of three groups were 90%,100%and 100%,respectively.The hemodynamics,eletrocardiogram,Evans blue and TTC staini ng ,myocardial enzyme spectru m and histology all tes tified that the models of modified method were results were successful.Conclusion The method of establish rat models of acu te myocardial ischemia reper fusion is simpleand convenient,with high successful rate and survival rate.Key words:Rats;Myocardial ischemia reperfusion;E xperimental animal models(Chin J Lab Diagn,2010,14:1163)在动物体内阻断左冠状动脉前降支(LAD)造成急性心肌缺血,并在预定时间内恢复血供予以再灌注,是模拟人类缺血性心脏病恢复血供治疗必需的实验方法。

大鼠心肌缺血再灌注模型建立方法的改进作者：张新宁， 吕琪， 张永亮， 唐存贵， 李灵芝， ZHANG Xin-ning， LV Qi， ZHANG Yong-liang， TANG Cun-gui， LI Ling-zhi作者单位：张新宁,吕琪,唐存贵,李灵芝,ZHANG Xin-ning,LV Qi,TANG Cun-gui,LI Ling-zhi(武警医学院,药物化学教研室,天津300162)， 张永亮,ZHANG Yong-liang(武警医学院,科研部,天津300162)刊名：武警医学院学报英文刊名：ACTA ACADEMIAE MEDICINAE CPAF年，卷(期)：2008，17(11)被引用次数：2次1.徐叔云.卞如濂.陈修药理实验方法学 20022.郭瑶人类疾病的动物模型 19823.Huang SS.IAu SM.Lin SM Antiarrhythmic effect of caffeic acid phenethyl ester (CAPE) on myocardial ischemia/reperfusion injury in rats 20054.Allison Hanley.Mary Gavin.Cindy Curry Synergistic effect of bone marrow mobilization and vascular endothelial growth factor-2 gene therapy in myocardial ischemia 20045.Allison Hanley.Mary Gavin.CAndy Curry Efferent vagal nerve stimulation protects heart against ischemia-induced arrhythmias by preserving connexin 43 protein 20046.曾玉杰.傅丽英.彭享胜卡维地洛对大鼠缺血再灌注心肌超微结构的影响[期刊论文]-医药导报 2002(08)7.赵学.富维骏.袁文俊清醒大鼠冠状动脉阻断再通技术及其应用[期刊论文]-第二军医大学学报 1996(05)8.刘元生.陈运贞慢性心肌梗塞大鼠实验模型[期刊论文]-重庆医科大学学报 2002(02)1.期刊论文刘勇.殷桂林.朱水波.孙宗全胸骨下段切口制备大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型的评价-华南国防医学杂志2010,24(2)目的 通过胸骨下段切口制备大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型,观察心电图、血流动力学变化及心肌损伤标志物,探讨此径路制备动物模型的可行性.方法 16只成年Wistar大鼠随机分为心肌缺血/再灌注组和假手术组.经胸骨下段切口暴露心脏,打活结的方式结扎或旷置左冠状动脉(left coronary artery,LCA)后,经心尖置测压管于左心室.动态监测心电、左心室压力,记录左心室压变化率、左心室压峰值(left ventricular systolic peak pressure,LVSP)等.实验终点采血检测血清磷酸肌酸激酶(creatine phosphokinase,CPK)和心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,c-TNT).结果 全部大鼠均顺利完成实验,无意外死亡.缺血/再灌注组较假手术组心电图ST段明显抬高,左心室压变化率降低,左心室压峰值下降,血清c-TNT显著升高.结论 经胸骨下段切口建立大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型简便易行,监测结果稳定可靠.2.学位论文王可成年大鼠心肌缺血/再灌注后心肌组织中XIAP的动态表达及可能的意义2010研究背景：世界卫生组织预测，到2030年缺血性心脏病将成为威胁人类健康的第二大疾病，其中冠状动脉梗塞引起的心肌缺血是缺血性心脏病中最重要的致死原因。