大鼠急性心肌缺血模型制备详细图解

补心软脉颗粒对大鼠急性心肌缺血损伤的保护作用赵林钢;钱玉良;许立;严冬【摘要】目的观察补心软脉颗粒对异丙肾上腺素(ISO)大鼠心肌缺血损伤的保护作用.方法采用四肢根部和背部皮下多点注射ISO制备大鼠急性心肌缺血模型,观察补心软脉颗粒对心电图ST段位移的影响,并测定血清LDH、CK活性及心肌病理学形态.结果补心软脉颗粒对ISO所致心肌缺血大鼠心电图ST段,心肌损伤酶学指标(LDH、CK)和组织病理学均有明显的改善作用.结论补心软脉颗粒通过增强机体对心肌缺血的耐受力,稳定细胞膜,减少心肌坏死范围起到保护心肌的作用.【期刊名称】《南京中医药大学学报》【年(卷),期】2014(030)005【总页数】3页(P468-470)【关键词】补心软脉颗粒;大鼠;急性心肌缺血损伤【作者】赵林钢;钱玉良;许立;严冬【作者单位】南京中医药大学附属医院,江苏南京210029;南京中医药大学药学院,江苏南京210023;南京中医药大学附属医院,江苏南京210029;南京中医药大学药学院,江苏南京210023;南京中医药大学附属医院,江苏南京210029【正文语种】中文【中图分类】R285.5目前，中药在冠心病心绞痛预防、改善症状、减少复发、提高生活质量等方面具有独到之处，其疗效已得到了广泛认可[1]。

补心软脉颗粒是由江苏省中医院名老中医根据数十年的临床经验，以心肾气阴两虚，瘀血内结的病机特点组方而成。

本文将以异丙肾上腺素(ISO)所致动物模型观察其对急性心肌缺血的保护作用。

1.1 药品及试剂补心软脉颗粒：由南京中医药大学附属医院制剂部提供，批号：20121106；心元胶囊：吉泰安(四川)药业有限公司，批号：1103086；异丙肾上腺素(ISO)：sigma 公司，批号：110401；水合氯醛：AR，国药集团化学试剂有限公司，批号：20130116；CK试剂盒：南京建成生物生物工程研究所，批号：20130514；LDH 试剂盒：南京建成生物生物工程研究所，批号：20131030。

亚低温对急性心肌梗死SD大鼠心肌保护的实验研究作者：高仁俊王显艳张鑫蕊肖章博张凤娇蔡彧赵红晔李懿桐宗浩王艳丽来源：《中国现代医生》2022年第09期[摘要] 目的实验观察诱导亚低温（32℃～36℃）治疗对SD大鼠急性心肌梗死后心肌的保护。

方法 40只健康SD大鼠随机分为两组，即常温对照组和诱导亚低温实验组，建立急性心肌梗死（AMI）实验模型，结扎左前降支近端，结扎后1 h后再解除结扎，4 h后分别测定两组大鼠的左心室射血分数（LVEF）、心率（HR）和左室舒张末期压（LVEDP）、心肌组织中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平及TUNEL法检测心肌细胞凋亡率。

结果亚低温组治疗后LVEF、SOD水平明显高于常温组，差异有统计学意义（P[关键词] 急性心肌梗死;亚低温;心功能;氧化应激损伤;细胞凋亡[中图分类号] R541.4 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2022）09-0030-04Experimental study on mild hypothermia on myocardial protection in SD rats with acute myocardial infarctionGAO Renjun1 WANG Xianyan2 ZHANG Xinrui1 XIAO Zhangbo3 ZHANG Fengjiao1 CAIYu1 ZHAO Hongye4 LI Yitong1 ZONG Hao1 WANG Yanli11.Sixth Department of Cardiology， Second Affiliated Hospital of Qiqihar Medical University，Qiqihar 161006，China;2.Department of Pathology， Qiqihar Medical University， Qiqihar 161006，China;3.Department of Scientific Research， Second Affiliated Hospital of Qiqihar Medical University， Qiqihar 161006，China;4. Department of Physiology， Qiqihar Medical University，Qiqihar 161006，China[Abstract] Objective To observe the myocardial protection of induced mild hypothermia （32℃～36℃） in SD rats with acute myocardial infarction through experiment. Methods A total of 40 healthy SD rats were randomly divided into two groups as the normal temperature control group and the induced mild hypothermia experimental group. An acute myocardial infarction （AMI）experimental model was established. The proximal left anterior descending artery was ligated and then released 1 hour after ligation. After 4 hours， the left ventricular ejection fraction （LVEF）， heart rate （HR）， left ventricular end diastolic pressure （LVEDP）， superoxide dismutase （SOD）level， and malondialdehyde （MDA） level were detected in the two groups. TUNEL method was used to detect myocardial cell apoptosis rate. Results After treatment， the levels of LVEF and SOD in the mild hypothermia group were significantly higher than those in the normal temperature group，with statistically significant differences （P[Key words] Acute myocardial infarction; Mild hypothermia; Cardiac function; Oxidative stress injury; Apoptosis目前，急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）致死、致残率仍排在心血管疾病的首位，尽最大可能快速开通闭塞冠脉是治疗的关键。

改良血管阻塞方法建立大鼠全脑缺血模型目的：探讨改良椎动脉阻断法建立四血管阻塞全脑缺血模型的可行性。

方法：健康成年雄性Wistar大鼠68只，随机分为假手术组（S组）8只、传统模型组（T组）及改良模型组（I组）各30只。

传统组采用三步制模法：第1步暴露第1颈椎双翼孔，在显微镜下磨钻暴露椎动脉后用双极电凝器烧闭双侧椎动脉；第2步游离双侧颈总动脉，放入线扣；第3步24h后夹闭双侧颈总动脉，建立全脑缺血再灌注模型；改良组在第1步用自制改良电烙铁直接插入翼孔将椎动脉烧闭，其余步骤同传统组；假手术组不凝闭椎动脉和不夹闭颈总动脉。

观察改良组和传统组模型制作耗费时间、成功率、操作复杂度、设备费用。

比较改良组、传统组与假手术组在行为学和病理学上的差异。

结果：与传统组比较，改良组模型制作时间明显减少（P＜0.05），成功率明显提高，设备费用大幅减少。

HE 染色及Morris水迷宫显示模型组与假手术组在病理学和行为学比较差异有统计学意义（P＜0.01）。

结论：改良组与传统组均成功制模，改良后的制作方法成功率高，制模时间短，无需特殊设备，方法简便可靠。

标签：全脑缺血模型；四血管阻塞法；椎动脉缺血性脑损伤严重危害人类健康。

在缺血性脑血管病基础研究中，建立稳定、可靠及操作简便的动物模型是开展各项研究的基础。

目前公认的Pulsinelli[1]大鼠全脑缺血四血管模型是研究多种缺血性脑疾病经典模型之一。

由于该方法具有可较好地模拟临床上因低血压休克、心肺脑复苏等造成的全脑缺血性损伤过程及易于大宗实验等优点，因此近年来经典的Pulsinelli四动脉结扎法被许多学者所使用[2-3]。

但此模型也存在制备复杂，成功率低，仪器设备昂贵等缺点。

参考此法，在保证模型质量的前提下，通过反复实践和摸索，积累了一些经验。

本文旨在设计一种新型简捷的制作方法，可显著提高模型制作的成功率及缩短制作时间。

1材料与方法1.1材料健康成年雄性Wistar大鼠68只（省动物中心提供，许可证号：slxk20080002），体质量250～300g，随机分为假手术组8只，传统模型组及改良模型组各30只。

第咒卷第11期・1006・2021年11月新乡医学院学报Journal of Xinxiang Medical UniversityVol.38No.11Nov.2021|本文引用:王晓蕾，郭佳庆,常海宽，等•七氟烷后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响［J］•新乡医学院学报，；|2021,38(11):1006-1010.DOI：10.7683/xxyxyxb.2021.11.002.f【基础研究】♦oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo$七氟烷后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响王晓蕾，郭佳庆，常海宽，高宁宁，张杰，李晓芳，马闻苛，杨明月，徐璐丹，张红伟，樊腾，岳修勤(新乡医学院第一附属医院麻醉科，河南卫辉453100)摘要：目的探讨七氟烷后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。

方法采用随机数字表法将30只健康成年雄性Sprague Dawley大鼠分为对照组、缺血再灌注组和七氟烷组，每组10只。

缺血再灌注组和七氟烷组大鼠制备缺血再灌注损伤模型。

缺血再灌注组大鼠冠状动脉结扎30min后，拔出栓线再灌注120min；七氟烷组大鼠于再灌注前1min吸入体积分数2%七氟烷15min,其余同缺血再灌注组;对照组大鼠步骤同缺血再灌注组，但不结扎冠状动脉。

麻醉大鼠后，应用多功能生物信号采集系统监测并记录大鼠开胸前(T。

)、缺血10min(Tj、缺血30min(T2),再灌注30min(T3)、再灌注60minUJ、再灌注120min(T5)时的心率(HR)和平均动脉压(MAP)0采用酶联免疫吸附试验检测3组大鼠缺血再灌注120min后血清中心肌肌钙蛋白I(cTnl)、肌酸激酶同工酶(CK-MB),乳酸脱氢酶(LDH)水平。

结果T°、T］、T2时3组大鼠的HR和MAP比较差异无统计学意义(P>0.05)；T3.T4,T5时缺血再灌注组和七氟烷组大鼠的HR和MAP显著低于对照组(尸<0.05)；芯、丁4、丁5时七氟烷组大鼠的MAP显著高于缺血再灌注组(P<0.05)；T3>T4,T5时缺血再灌注组与七氟烷组大鼠的HR比较差异无统计学意义(P>0.05)o对照组大鼠T i、T2、T4时的HR显著低于T。

肾缺血再灌注损伤大鼠模型具体步骤及说明•原型物种人•来源缺血再灌注，双侧肾动脉夹闭法•模式动物品系SD大鼠，SPF级，雄性，体重220g~250g•实验分组随机分组：对照组，模型组，阳性药物组，受试药物组，15只每组•实验周期24h or 72h•建模方法1. 选取250g左右大鼠，术前禁食12h，自由饮水。

2. 15％水合氯醛(350mg／kg)腹腔注射麻醉,大鼠背部去毛，消毒备皮。

3. 在背部脊椎旁1cm、肋骨下缘1cm处剪开皮肤及肌肉，可见到肾脏,小心分离出两侧肾脏的肾动脉，迅速用动脉夹夹闭两侧肾动脉。

4. 缺血60min后松开动脉夹，恢复血流，观察肾脏恢复情况。

5. 分两层缝合开口，待大鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲养，定期观察大鼠状态及死亡情况并做好记录。

6. 对照组不做缺血处理，其他操作相同。

7. 分别取再灌注0h、3h、6h、12h、24h、72h六个时间点取材。

麻醉大鼠，下腔静脉取血，室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80冰箱冻存。

同时取左肾组织留作病理标本，右肾组织分生标本。

•应用疾病模型1. 血清生化指标检测：取各时间点（0h、1h、3h、6h、12h、24h、72h)血清，检测血清BUN（尿素氮）和Scr（血肌酐）水平,评估肾功能。

2. 肾系数检测摘取双侧肾脏后，生理盐水冲洗，称重计算肾系数。

肾系数=双侧肾重（mg）/体重（g）3. 肾小管坏死的评分每张切片×200 倍镜下取外髓质部10 个视野，按0 = 正常，1 = 轻微损伤(受损肾小管< 5%) ，2= 轻度损伤(受损肾小管5 %～25 %) ，3 = 中度损伤(受损肾小管25 %～75 %) ，4 = 重度损伤(受损肾小管> 75 %) 作半定量分析并计算其均值，作为肾小管坏死的评分指数4％多聚甲醛溶液固定48h。

常规组织脱水、透明、浸蜡、包埋。

石蜡切片进行HE染色和PAS染色。

心肌梗死的动物模型制作[ 08-10-02 17:11:00 ] 作者：靳激扬编辑：Studa_hasgo122【关键词】心肌梗死模型动物心肌梗死是严重危害人类健康的心血管疾病，也是主要致死因素之一。

在心血管疾病研究中，动物模型被广泛用于发病机制和药物治疗研究。

研究目的不同则所需的动物模型平台亦不同，心肌梗死动物模型的有效建立是完成相关实验的前提，对研究急、慢性心肌梗死的病理演变过程、诊断及治疗均有重要意义。

目前国内外常见的建立心肌梗死动物模型的方法主要有两大类：⑴采用各种方法直接造成冠状动脉狭窄或堵塞，其试验周期短，可以观察梗死后再灌注对心肌细胞的损伤。

⑵诱发冠状动脉粥样硬化形成狭窄与梗死，其试验周期长，死亡率较高。

通过开胸结扎不同部位冠状动脉建立急性心肌梗死模型已沿用多年[1～5]，结扎大鼠冠状动脉是医学实验中已得到公认、最常用的心肌梗死模型。

国外多采用Jons法[6]即在自主呼吸下，开胸迅速挤出心脏，结扎冠状动脉。

结扎时固定部位于左心耳下缘与肺动脉圆锥间，以左冠状静脉主干为标志，连同一小束心肌一同结扎，于左心耳根部下方2mm处进针，在肺动脉圆锥旁出针，深度为0.3mm～0.5mm，过浅缝线易于脱落、血管结扎不完全，过深易致传导阻滞。

由于大鼠冠状动脉发育变异较大，血管常显示不清，此时可固定部位盲扎，亦可达到结扎目的。

观察近心尖的左室前壁，是否失去原有光泽，而显暗灰色或青紫色；收缩力是否降低或消失。

观察心电图是否逐渐出现ST 段弓背向上抬高及Q波等，心电图变化才能说明冠脉结扎情况，只有看到上述肯定结果，才可关闭胸腔，否则需重新结扎冠脉。

此法结扎冠状动脉后心电图及病理表现相似，多为广泛前壁心肌梗死，稳定性较好。

在开胸状态下直接用缝合线结扎冠状动脉分支，造成该支配区域的永久性缺血。

此法动物创伤大、死亡率高，要求术者技术娴熟，动作快，难度大。

大鼠右肺四叶，左肺一叶，呈海绵状，有时左肺将心脏大部分覆盖，因此在开胸时最易伤及充气的肺组织。

缺血预处理大鼠心肌组织BDNF表达及其意义高致炳;徐清斌;徐文中;王云【摘要】Objective To observe BDNF mRNA and protein expression in the myocardial ischemic preconditioning and its significance. Methods 54 male SD rats were randomly divided into control group (Con group), ischemia- reperfusion group (L/R group) and ischemic preconditioning group (IPC group). After establishment of I/R group and IPC group model, all rats were divided into lb, 3h, 6h and 12h group after reperfusion. BDNF mRNA were detected by RT - PCR and the BDNF protein were detected by Western - blo.Results Compared with the Con group, the expression of BDNF mRNA and protein in I/R group and IPC group at each time in rats showed significant differences ( P ＜ 0.05 ); and compared I/R group with IPC group, the expression of BDNF mRNA and protein at same time in rats showed significant differences ( P ＜0. 05). Conclusion Ischemic preconditioning can increase the expression of BDNF mRNA and protein. BDNF after the ischemic preconditioning has a protective effect on myocardial ischemia- reperfusion.%目的观察缺血预处理大鼠心肌中脑源性神经生长因子(BDNF)的mRNA及蛋白表达情况,并探讨其意义.方法 54只雄性SD 大鼠随机分为空白对照组(Con组)、缺血再灌注组(I/R组)和缺血预处理组(IPC 组),I/R组及IPC组模型建立后,再分别分为再灌注后l、3、6h及12h各时间点亚组.RT-PCR检测心肌组织BDNF mRNA表达,Western-blot法检测心肌组织BDNF蛋白表达.结果 I/R组及IPC组各时间点大鼠心肌组织中BDNF mRNA及蛋白的表达与Con组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05);而I/R组与IPC组再灌注后同时间点比较大鼠心肌组织中BDNF mRNA及蛋白表达的差异也均有统计学意义(P＜0.05).结论缺血预处理可以上调BDNF的mRNA及蛋白表达,推测BDNF 在缺血预处理后对缺血再灌注大鼠心肌具有保护作用.【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2011(033)005【总页数】4页(P414-417)【关键词】脑源性神经生长因子;缺血再灌注;缺血预处理【作者】高致炳;徐清斌;徐文中;王云【作者单位】宁夏医科大学,银川,750004;宁夏医科大学总医院心脏中心内科二病区,银川,750004;宁夏医科大学,银川,750004;宁夏医科大学总医院心脏中心外科病区,银川,750004【正文语种】中文【中图分类】R541缺血预处理(ischemic preconditioning，IPC)是一种通过内源性保护机制保护缺血再灌注心肌的最有效的方式[1]，该方式的标志性作用就是可以有效地减少心肌细胞凋亡，缩小心肌梗死面积[2-3]，而其能降低恶性心律失常的发生率，明显增强心肌收缩、舒张功能，保护内皮细胞降低受损程度等作用已被众多学者证实，但机制尚不明确。

浙江中医杂志2021年4月第56卷第4期•255 •实验研究活络效灵丹对心肌缺血大鼠急性损伤的保护作用童静燕1张建斌1秦宇芬1兰溪市妇幼保健院浙江兰溪3211002湖州市中医院浙江湖州313000摘要目的：研究活络效灵丹对心肌缺血急性损伤的保护作用。

方法:取4 0只成年雄性S D大鼠，随机分为 4组，假手术组、模型组、活络效灵丹低、高剂量组(2.7g/kg_cT、5.4g/kg*d—1)，连续给药7d。

采用线栓法制备心肌缺血再灌注损伤（MIRI)模型，观察并对比分析活络效灵丹对MIRI大鼠心脏功能参数、血清心肌酶活性、心肌组织中髓过氧化物酶(M P0)、超氧化物歧化酶(S O D)活性、丙二醛(M D A)水平以及炎症因子水平的影响，TTC、HE染色分析计算心肌梗死面积、观察心肌组织形态学的变化。

结果：与模型组比较，给予活络效灵丹处理的大鼠，其心脏功能参数明显改善，心肌梗死面积减少，血清心肌酶包括肌酸激酶同工酶-MB (CK-M B)、乳酸脱氢酶(LD H)表达活性降低,M P0活性、M D A含量水平、白细胞介素-IP (IL-l P)、IL-6、肿瘤 坏死因子-a (TN F- a)水平降低，S0D活性水平、IL-10水平升高（P<0. 05) 3HE染色结果显示肌纤维排列整齐，且间质轻度肿胀,仅少量炎性细胞浸润，心肌受损程度较模型组明显改善。

结论：活络效灵丹对心肌缺血急性损伤具有一定保护作用，其作用机制可能与抑制血清心肌酶CK-M B、LDH活性表达，抗氧自由基损伤以及抑制炎症反应有关。

关键词活络效灵丹心肌缺血急性损伤心肌酶冠心病是临床上较为常见的疾病，发病率较高，急 性心肌梗死是其主要并发症之一,具有发病急骤、病情 严重、致死率高等特点。

目前，临床上的治疗方式以溶 栓术、经皮冠状动脉介人术、抗凝等为主，可恢复冠状 动脉血运，减少心肌梗死面积，恢复心脏结构与功能，但在恢复血运的同时，再灌注可损伤心肌组织，破坏 心脏结构与功能，且现有方法无法有效避免[1]。

第18卷 第7期 2016 年 7 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 18 No. 7 Jul .，2016瓜蒌皮对高血脂合并急性心肌缺血大鼠保护作用李航，李建峰，张宇，赵启韬（山东中医药大学，山东 济南 250355）摘 要：目的：系统评估瓜蒌皮对高血脂合并急性心肌缺血大鼠的干预效果，探究瓜蒌皮“祛痰散结、开胸除痹”的现代科学内涵。

方法：雄性Wistar 大鼠40只，随机分为对照组，模型组，丹参片组，瓜蒌皮大、小剂量组。

先采用高脂乳剂灌胃法制造高血脂模型，再结扎冠状动脉制备高血脂合并急性心肌缺血模型，对照组实行假手术。

瓜蒌皮水煎液灌胃给药，丹参片作为阳性对照药。

对照组及模型组灌胃生理盐水。

生化试剂盒检测血浆总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）含量，研究瓜蒌皮降血脂效果；生理记录仪记录心电图变化，评价心脏功能；心肌切片氯化三苯四氮唑（TTC）染色，测定心肌梗死面积及梗死率；试剂盒检测血浆肌酸激酶及其同工酶（CK、CK-MB）、谷草转氨酶（AST）、α-羟基丁酸脱氢酶（α-HBDH）和乳酸脱氢酶（LDH）活性，确定心肌细胞坏死程度。

结果：与对照组比较，模型组大鼠血浆TC、TG、LDL 显著升高，HDL 降低；心电图阳性率、心肌梗死率及5项心肌酶活性均显著性升高。

与模型组比较，瓜蒌皮小、大剂量组TC、TG、LDL 水平均降低，HDL 升高，心电图阳性率、心肌梗死率及5项心肌酶活性均显著性降低，且大剂量组效果优于小剂量组。

结论：对高血脂合并急性心肌缺血大鼠，瓜蒌皮水煎液能显著降低其血脂含量，抑制缺血心肌细胞坏死，维持心脏功能。

关键词：瓜蒌皮；高血脂；心肌缺血；祛痰散结药；冠心病中图分类号：R541.4 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2016) 07- 0022- 04收稿日期：2015-10-22基金项目：国家自然科学基金项目（81173164）作者简介：李航（1990-），男，湖北武汉人，硕士，研究方向：中医药防治心脑血管疾病的机制研究。

麝香通心滴丸预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用机制李蒙1,刘用2,张健真2,郝学增1,张立晶1摘要目的:观察麝香通心滴丸预处理对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤后心肌细胞和血管的保护作用及潜在机制㊂方法:将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)㊁I/R组㊁麝香通心滴丸组(SXTX组)和阳性组,每组15只㊂SXTX组以18.90mg/(kg㊃d)的浓度灌胃;阳性组以尼可地尔1.35mg/(kg㊃d)的浓度灌胃;Sham组和I/R组给予等体积去离子水灌胃㊂各组均灌胃1周后,行冠状动脉前降支结扎-松解手术,除Sham组外其余各组大鼠结扎左冠状动脉前降支30min后,再灌注120min,构建心肌I/R模型㊂通过心肌苏木精-伊红(HE)染色㊁心肌Masson染色观察大鼠心肌组织及血管改变;电镜观察心肌细胞和血管的超微结构改变;免疫组织化学法观察血管相关蛋白低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)表达情况㊂结果:与Sham组比较,I/R组大鼠心肌细胞坏死和血管损伤明显,心肌组织中HIF-1α表达增加;与I/R组相比,SXTX组心肌细胞和血管病理结构损伤减轻,缺血区心肌组织VEGF含量明显增加㊂结论:麝香通心滴丸预处理可保护大鼠心肌细胞和血管I/R损伤,可能与上调VEGF蛋白表达㊁促进缺血区微血管新生有关㊂关键词缺血/再灌注损伤;麝香通心滴丸;保护作用;低氧诱导因子-1α;血管内皮生长因子;实验研究d o i:10.12102/j.i s s n.1672-1349.2024.02.008Protective Effect of Shexiang Tongxin Dropping Pill Pretreatment on Myocardial Ischemia-reperfusion Injury in RatsLI Meng,LIU Yong,ZHANG Jianzhen,HAO Xuezeng,ZHANG LijingDongzhimen Hospital,Beijing University of Chinese Medicine,Beijing100700,ChinaCorresponding Author ZHANG Lijing,E-mail:****************Abstract Objective:To observe the protective effect of Shexiang Tongxin Dropping Pills on myocardial cells and blood vessels after myocardial ischemia-reperfusion(I/R)injury in rats.Methods:Sixty male SD rats were randomly divided into sham operation group (Sham group),I/R group,Shexiang Tongxin Dropping Pills group(SXTX group),and positive control group,with15rats in each group.The rats in SXTX group were given SXTX18.90mg/(kg㊃d)by gavage,and the rats in positive control group were given nicorandil1.35 mg/(kg㊃d)by gavage.The rat in Sham group and I/R group were given the same volume of deionized water by gavage.After one week of gavage,the rats left anterior descending coronary artery was ligated for30min and then reperfused for120min to build the myocardial I/R model except for the Sham group.The changes of myocardial tissue and blood vessels in rats were observed by myocardial hematoxylin-eosin(HE)staining and myocardial Masson staining.The ultrastructural changes of cardiomyocytes and blood vessels were observed by electron microscope.The expressions of hypoxia-inducible factor-1α(HIF-1α)and vascular endothelial growth factor (VEGF)were observed by immunohistochemistry.Results:Compared with Sham group,the myocardial cell necrosis and vascular injury of the rats in I/R group were obvious,and the expression of HIF-1αin the myocardial tissue pared with I/R group,the myocardial cell and vascular pathological structural damage in SXTX group alleviated,and the protein expressions of VEGF in the ischemic area significantly increased.Conclusion:Shexiang Tongxin Dropping Pills pretreatment can protect myocardial cells and vascular I/R injury in rats,which may be related to the up-regulation expression of VEGF protein and the promotion of microangiogenesis in ischemic areas.Keywords ischemia/reperfusion injury;Shexiang Tongxin Dropping Pills;protective effect;hypoxia-inducible factor-1α;vascular endothelial growth factor;experimental study急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)是心血管疾病的最危重类型之一,其发病急㊁预后差㊁病死率高,是急性心源性致死性疾病的主因㊂无论是药物溶栓㊁冠状动脉支架植入,还是冠状动脉旁路移植术,再灌注治疗都是其必然过程[1]㊂然而,心肌再灌注基金项目2021年度北京中医药大学新教师启动基金项目(No.2021-JYB-XJSJJ057);中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(No. 2020-YJB-ZDGG-116)作者单位 1.北京中医药大学东直门医院(北京100700);2.北京中医药大学通讯作者张立晶,E-mail:****************引用信息李蒙,刘用,张健真,等.麝香通心滴丸预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用机制[J].中西医结合心脑血管病杂志,2024, 22(2):250-253.过程本身可诱导心肌细胞损伤㊁坏死进一步加重,这一过程即为缺血再灌注(ischemia reperfusion,I/R)损伤[2]㊂因此,预防和治疗再灌注损伤尤为关键㊂麝香通心滴丸由‘太平惠民和剂局方“中至宝丹衍生而来,具有芳香益气通脉㊁活血化瘀止痛的功效㊂前期研究发现麝香通心滴丸对经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后慢血流病人的有效性及安全性较好[3]㊂关于麝香通心滴丸对I/R后心肌细胞和血管的保护作用及作用机制尚未明确㊂本研究通过构建I/R损伤大鼠模型,观察麝香通心滴丸预处理对大鼠心肌I/R损伤后心肌细胞和血管的保护作用,以及对低氧诱导因子-1α(HIF-1α)㊁血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,进而探讨其保护I/R的潜在作用机制,为麝香通心滴丸防治I/R的临床应用提供实验依据㊂1材料与方法1.1实验材料1.1.1实验动物无特定病原体(SPF)级雄性SD大鼠60只,9~ 10周龄,体质量(250ʃ10)g,购自北京华阜康生物科技股份有限公司㊂实验操作通过北京中医药大学东直门医院动物伦理的要求,伦理号(No):21-49㊂1.1.2实验药物麝香通心滴丸,规格:35mg,批准文号:国药准字Z20080018,由内蒙古康恩贝药业有限公司提供,以去离子水配成[18.90mg/(kg㊃d)]溶液,超声溶解,高压灭菌后于-20ħ贮存备用㊂尼可地尔片,规格:每片5 mg,批准文号:国药准字H20160540,由Nipro Pharma Corporation Kagamiishi Plant生产,使用去离子水配制成1.35mg/(kg㊃d)的混悬液保存备用㊂1.1.3实验试剂及仪器实验试剂:苏木素染液(武汉市皮诺飞生物科技有限公司生产),HIF-1α抗体(28b)(Santa,sc-13515-200μg/mL),VEGF Rabbit Polyclonal Antibody(proteintech, 19003-1-AP-150μL),过氧化氢溶液(国药集团化学试剂有限公司生产,10011218),牛血清白蛋白(BSA) (Solarbio,A8020),包埋液(环氧树脂Epon812),二抗[辣根过氧化物酶(HRP)标记山羊抗兔/鼠通用二抗] (DAKO,K5007),组化试剂盒二氨基联苯胺(DAB)显色剂(DAKO,K5007)㊂实验仪器:超薄切片机(徕卡ULTRACUT R),光学显微镜(CIC,XSP-C204),透射电镜(日本日立H-7650),正置光学显微镜(日本尼康),成像系统(日本尼康)㊂1.2实验方法1.2.1动物造模对SD大鼠进行冠状动脉前降支结扎松解手术构建心肌I/R模型㊂将SD大鼠以4%戊巴比妥钠(0.4mL/100g)腹腔麻醉注射,之后气管插管,接动物呼吸机和心电图机,于左侧第三肋与第四肋间切开皮肤,钝性分离肌层,打开胸腔,充分暴露心脏,用带线缝合针在左心耳与肺动脉圆锥之间,于左心耳根部下方约2mm处进针,将左前降支连同少量的心肌组织一起结扎,先缺血30min㊁再灌注120min制备大鼠心肌I/R模型㊂抬高的ST段下降1/2以上为大鼠心肌I/R 模型造模成功㊂1.2.2分组及给药适应性喂养1周,采用随机数字表法将60只SD 大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)㊁I/R组㊁麝香通心滴丸组(SXTX组)和阳性组,每组15只㊂所有用药剂量按照人与大鼠体表面积换算,SXTX组按成人用量的2倍,给予麝香通心滴丸18.90mg/(kg㊃d)灌胃,阳性组以尼可地尔1.35mg/(kg㊃d)灌胃,Sham 组和I/R组给予等体积去离子水灌胃㊂每日1次,连续灌胃1周,末次灌胃1h后构建大鼠I/R模型㊂1.3观察指标1.3.1心肌苏木精-伊红(HE)染色实验结束后取出心脏,立即将10%多聚甲醛溶液50mL注入离体心脏主动脉内,5min后将左心室前壁心肌组织中间层切成条状,放在上述固定液中固定48h 后,蒸馏水清洗㊁梯度乙醇脱水,后制作病理切片,切片厚度为4μm,脱蜡㊁复水后行HE染色,封固,光镜下观察大鼠心肌组织及血管改变㊂1.3.2心肌Masson染色取出甲醛中固定24h后的心肌组织,按乙醇浓度由低至高脱水,石蜡包埋,切片,脱蜡后蒸馏水水洗㊂Weiger氏铁苏木素染色5~10min后流水充分水洗,再用1%的盐酸乙醇分化,再用丽春红酸性品红染液染色5~10min后用蒸馏水水洗,加1%磷钼酸水溶液5min,后苯胺蓝液复染5min,随后1%冰醋酸即刻洗涤后用95%乙醇多次脱水,后置于二甲苯透明,中性树胶封片,光镜下观察心脏组织纤维化情况㊂1.3.3电镜观察心肌血管内皮细胞超微结构留取再灌注末左心室梗死周边缺血区心肌体积约1mm3的标本,放置于4%戊二醛内固定,0.1mol/L二甲膦酸钠缓冲液漂洗,1%四氧化锇固定,然后梯度丙酮脱水,使用环氧树脂进行包埋㊁聚合,制作超薄切片,最后用醋酸双氧铀㊁柠檬酸铅染色,在透射电镜下观察并拍照㊂1.3.4免疫组织化学法检测血管相关蛋白HIF-1α㊁VEGF的表达情况取10%甲醛固定梗死周边缺血区心肌组织,并进行常规石蜡包埋及心肌切片(5μm),石蜡切片脱蜡至水,抗原修复,阻断内源性过氧化物酶,3%牛血清白蛋白室温封闭30min,加一抗(HIF-1α1ʒ50稀释,VEGF 1ʒ200稀释),4ħ孵育过夜,加HRP标记山羊抗兔二抗孵育30min,DAB显色,复染细胞核,脱水封片,光镜下分别观察HIF-1α㊁VEGF蛋白的表达情况㊂1.4统计学处理采用SPSS20.0统计软件进行数据分析㊂正态分布的定量资料以均数ʃ标准差(xʃs)表示,组间比较采用单因素方差分析,方差齐性采用Student-Newman-Keuls检验,方差不齐用Tamhane's T2检验㊂以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1HE染色结果Sham组心肌组织结构正常㊁完整,心肌细胞分布均匀㊁有序,轮廓清晰可见,胞核与胞质边缘分明,血管管腔完整㊂I/R组心肌组织染色着色较浅,有细胞轮廓不清及破碎现象,组织排列异常紊乱㊁呈无序状,并伴有炎性细胞浸润,坏死区充血出血㊂阳性组心肌细胞部分相互连接,排列整齐,心肌细胞形态正常,心肌纤维中少量心肌纤维变性坏死及脂肪变性,伴少量炎性细胞浸润㊂与I/R组比较,SXTX组心肌组织排列较为整齐,着色相对更均匀,有炎性细胞浸润,血管管腔完整度较好㊂详见图1㊂图1各组大鼠心肌组织病理变化比较(HE染色,ˑ400)2.2Masson染色结果Sham组Masson染色心肌纤维无纤维化,仅在血管壁周边有着色㊂I/R组显示紫红色的心肌组织明显减少,存在大量呈蓝色的胶原纤维,血管破碎,部分血管呈管腔狭窄和闭合㊂与I/R组相比,阳性组㊁SXTX 组Masson染色显示以紫红色心肌组织为主,蓝色胶原纤维增生沉积现象显著减轻㊂详见图2㊂图2各组大鼠心肌组织病理变化比较(Masson染色,ˑ400)2.3透射电镜观察心肌血管内皮细胞超微结构Sham组微血管基底膜未见增厚,内弹性膜未见变窄,管腔规整,内皮细胞排列整齐,内皮细胞胞质和核仁结构清楚,周围心肌细胞形态完整,未见脂质沉积;I/R组内膜下结缔组织肿胀,内弹性膜局部变窄,管腔严重变形,内皮细胞胞质肿胀,可见胞质碎片,核膜部分缺失,周围心肌细胞出现明显损伤,细胞破碎严重,大量的脂质沉积;与I/R组相比,SXTX组微血管基底膜轻度增厚,内弹性膜局部变窄,管腔稍有变形,内皮细胞排列较整齐,可见内皮细胞质和核仁结构,周围心肌细胞形态基本完整,少量脂质沉积㊂详见图3㊂2.4免疫组织化学法检测心肌中HIF-1α㊁VEGF的蛋白表达与Sham组比较,I/R组心肌组织中HIF-1α表达增加,提示在缺血㊁缺氧状态下HIF-1α蛋白反应性增加㊂与I/R组比较,SXTX组心肌组织HIF-1α表达下降,VEGF蛋白表达增加,提示麝香通心滴丸可促进VEGF蛋白的生成,进而促进缺血区血管形成,改善心肌组织乏氧环境㊂详见图4㊁图5㊂图3各组大鼠心肌细胞及血管超微结构变化比较图4麝香通心滴丸对HIF-1α蛋白表达的影响(ˑ100)图5麝香通心滴丸对VEGF蛋白表达的影响(ˑ100)3讨论时间就是心肌 ,由于心肌组织细胞对缺氧㊁缺血的敏感性高,尤其是其具有不可再生的特性,因此,在AMI的救治过程中,及时再灌注治疗是挽救濒死心肌细胞的关键㊂然而缺血再灌注治疗必然会造成再灌注损伤,是AMI不可避免的风险事件㊂保护心肌I/R损伤可防止心肌梗死后不良重塑和更差的临床结果㊂研究发现持续的心肌I/R可诱导各种形式的心肌细胞死亡和冠状动脉微血管损伤[4]㊂麝香通心滴丸由人工麝香㊁蟾酥㊁人工牛黄㊁冰片㊁人参茎叶㊁丹参㊁熊胆粉组成,具有芳香益气通脉㊁活血化瘀止痛之功效㊂多项研究表明麝香通心滴丸可减轻心肌缺血损伤,可能通过升高内源性一氧化氮水平,抑制炎症反应,改善冠状动脉微循环等[5-7]㊂本研究亦发现麝香通心滴丸可保护心肌I/R引起的心肌细胞和血管损伤㊂王伟等[8]对麝香通心滴丸组方入血成分进行网络药理学研究,发现VEGF/血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路可能为麝香通心滴丸治疗冠心病的信号通路㊂本研究结果同样发现麝香通心滴丸可促进缺血区心肌组织VEGF蛋白的生成,并提示可能与HIF-1α介导的信号通路有关㊂HIF-1α是一种关键的氧敏感转录因子,心肌组织细胞缺血缺氧时,诱导HIF-1α表达增加,进而调控多种基因表达,发挥机体对低氧或缺血的保护性适应[9]㊂VEGF与血管生成密切相关㊂在心肌I/R损伤中,增加血管生成可有效改善病灶缺氧状态,从而保护心脏[10]㊂本研究发现心肌I/R损伤时HIF-1α的表达增加以适应乏氧环境,麝香通心滴丸可能通过促进VEGF蛋白的生成,促进缺血心肌血管新生,改善乏氧环境,参与大鼠心肌I/R心肌保护的过程㊂综上所述,麝香通心滴丸可有效保护大鼠心肌I/R 的细胞和血管损伤,减轻心肌组织病理损伤,其作用机制可能与上调心肌组织VEGF蛋白的表达及促进缺血区微血管新生有关,从而达到保护心脏㊁抗心肌I/R损伤的作用㊂参考文献:[1]ZHU S S,XU T D,LUO Y Y,et al.Luteolin enhances sarcoplasmicreticulum Ca2+-ATPase activity through p38MAPK signalingthus improving rat cardiac function after ischemia/reperfusion[J].Cellular Physiology and Biochemistry,2017,41(3):999-1010.[2]LAHNWONG S,PALEE S,APAIJAI N,et al.Acute dapagliflozinadministration exerts cardioprotective effects in rats with cardiacischemia/reperfusion injury[J].Cardiovascular Diabetology,2020,19(1):91.[3]韩松洁,张晓雨,张立晶,等.麝香通心滴丸对PCI术后患者慢血流的临床证据评价[J].世界科学技术-中医药现代化,2018,20(10):1772-1777.[4]HEUSCH G.Myocardial ischaemia-reperfusion injury and cardioprotectionin perspective[J].Nature Reviews Cardiology,2020,17(12):773-789.[5]张艳达,施珊岚,厉娜,等.麝香通心滴丸改善心肌梗死小鼠微循环障碍的作用机制[J].中西医结合心脑血管病杂志,2017,15(23):2969-2972.[6]LIU H H,ZHAO J J,PAN S L,et al.Shexiang Tongxin Dropping Pill(麝香通心滴丸)protects against sodium laurate-inducedcoronary microcirculatory dysfunction in rats[J].J Tradit ChinMed,2021,41(1):89-97.[7]王华伟,金丹丹,潘海华.麝香通心滴丸通过p-Akt/p-GSK3β/GSK3β通路对心肌梗死小鼠的心肌保护作用研究[J].中国中医药科技,2020,27(3):352-355.[8]王伟,刘星雨,尚云龙,等.基于血清药物化学与网络药理学探究麝香通心滴丸治疗冠心病的机制[J].中成药,2020,42(10):2768-2777.[9]ZHENG J,CHEN P E,ZHONG J F,et al.HIF-1αin myocardialischemia-reperfusion injury(review)[J].Molecular MedicineReports,2021,23(5):352.[10]LI J,ZHOU W J,CHEN W,et al.Mechanism of the hypoxiainducible factor1/hypoxic response element pathway in ratmyocardial ischemia/diazoxide post conditioning[J].MolecularMedicine Reports,2020,21(3):1527-1536.(收稿日期:2022-03-31)(本文编辑王丽)。

大鼠急性肾缺血再灌注损伤模型的构建及分析摘要】目的：对腹部切口构建急性肾缺血再灌注损伤动物模型予以优化，构建急性肾缺血再灌注损伤模型的新途径。

方法：大鼠取俯卧位予以固定，将腹部垫起，在背部正中偏右一厘米处切开皮肤，开口为三厘米，切开腰背筋膜肾周脂肪组织暴漏在外，因此已进入腹膜后间隙。

通过拉钩支撑切口，通过钝性游离脂肪组织右肾与肾蒂漏出，在此基础上分离右肾动脉直到腹主动脉，通过棉签向腹主动脉底端游离，方可发现左肾动脉。

隔绝举措：无损伤动脉夹隔绝双肾动脉，滞留四十五min，松开无损伤动脉夹，查看肾灌注无异常后缝合切口。

结果：实验组一只Sprague-Dawley由于术中出血而死亡，其他十五只术后存活，实验组的手术成功率超过九十三个百分点，伪手术组及对照组Sprague-Dawley术后均存活。

实验组serum creatinine 与BUN显著超过伪手术组及对照组，检测结果表明实验组Sprague-Dawley第一天、第四天与第七天的serum creatinine与BUN逐渐降低，且P＜0.05，即术后肾功能慢慢得到恢复。

结论：此次研究我们所构建的大鼠急性肾缺血再灌注模型具有较强的稳定性，可以很好的匹配于急性肾缺血再灌注损伤研究。

【关键词】大鼠；急性肾缺血；再灌注损伤模型；构建；分析【中图分类号】R3 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）25-0349-02分析细胞及其因子在急性肾损伤中的功能，同时分析药物对急性肾损伤的治疗过程所需构建急性肾缺血再灌注损伤动物模型。

目前的建模模式包括腹部切口与侧腹部切口。

腹部切口对胃肠道功能具有一定的影响，同时也可能造成腹腔感染；侧腹部切口要破坏侧腹部肌群，同时肾蒂的暴漏不完全。

此次研究通过背部切口，切开腰背筋膜进入腹膜后间隙，隔绝双侧肾动脉，成功构建大鼠急性肾缺血再灌注损伤模型。

此举措相对便捷，其特点为手术创伤小、不会对胃肠道造成较大的影响同时不易出现并发症。