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放射免疫学分析法：检测的是游离降钙素原、结合型降钙素原和降钙素基因相关肽前体的混合物，而不能区分上述3 种物质。
其检测灵敏度为4 ng／L ，线性范围为lO 77 ng／L 。
该法检测耗时长(19～22 h)，而且有放射性元素的污染，使用受到限制。
1．2双抗夹心法：使用2 个单克隆体：一个为单克隆抗降钙素抗体，另一个为单克隆抗降钙素抗体，分别结合到降钙素原分子的2 个部位，这样可排除交叉反应。
其检测低限值为0．1 g／L。
该法操作简便、特异性强、敏感性高， 2 h 可以出结果。
1．3胶体金比色法：一种半定量检测降钙素原的方法，是专门制备好的PCT．Q 检测卡，简便快捷，整个检测过程不超过30 m i n ，结果分为4 级：正常(0．5 ng／m L ；轻度升高>0．5 ng／m L ；明显升高>2 ng／m L ；显著升高> 10 ng／m L。
此法不依赖仪器、操作简便、快速，适合床旁监测。
1．4透射免疫浊度法：该测定方法简便、快速，可自动化，适合于批量检测。
虽然免疫透射比浊的方法学及临床应用尚需做进一步的验证，但其应用前景非常看好。
2降钙素原的临床应用2．1降钙素原与感染性疾病2．1．1降钙素原与血行感染、菌血症、败血症：研究发现降钙素原是诊断血行感染、菌血症、败血症的一个较好指标陆3 1 。
在感染发生后3~6 h ，即可检测到降钙素原水平升高。
降钙素原水平可以用来对败血症的预后进行预测，若降钙素原水平持续升高或一直维持在比较高的水平，常常提示预后不良；若降钙素原水平快速降低至正常水平，常提示预后良好。
还可用降钙素原预测社区获得性肺炎和尿路感染后菌血症的发生t 41 。
降钙素原<0．25L 可排除菌血症的发生。
2．1．2降钙素原与泌尿系感染：Peei le等阁发现肾盂肾炎患儿血清降钙素原与c 反应蛋白相比敏感性相同，但特异性前者明显高于后者，且与肾脏受累程度呈正相关，并随治疗后的恢复而下降，血清降钙素原水平可作为泌尿系感染患儿上下尿路定位及疗效观察的指标。
放射免疫分析（radioimmunoassay，RIA）是以放射性核素为标记物的标记免疫分析法。
于1960年由美国学者Yalow和Berson创立，并首先用于糖尿病患者血浆胰岛素含量的测定。
这是医学和生物学领域中方法学的一项重大突破，开辟了医学检测史上的一个新纪元。
它使得那些原先认为是无法测定的极微量而又具有重要生物学意义的物质得以精确定量，从而为进一步揭开生命奥秘打开了一条新的道路，使人们有可能在分子水平上重新认识某些生命现象的生化生理基础。
此后30年，内分泌学科的飞速进展充分证明了这一超微量分析技术的巨大推动力。
1977年，这项技术的发明者荣获诺贝尔生物医学奖。
随后这一崭新的技术迅速渗透到医学科学的其他领域，如病毒学、药理学、血液学、免疫学、法医学、肿瘤学等，以及与医学生物学相关的学科，如农业科学、生态学及环境科学等。
放射免疫分析的物质，由激素扩大到几乎一切生物活性物质。
我国放射免疫分析研究起步于1962年，并迅速发展与普及，对我国生物医学的进展起了很大的促进作用。
放射免疫分析由于敏感度高、特异性强、精密度高、并可测定小分子量和大分子量物质，所以在检验医学中应用极为广泛，常用于测定各种激素（如甲状腺激素、性激素、胰岛素等）、微量蛋白质、肿瘤标志物（如AFP、CEA、CA—125、CA—199等）和药物（如苯巴比妥、氯丙嗪、庆大霉素等）等。
各种检测项目均有试剂盒供应，而且仪器设备并不昂贵，所以在国内被广泛采用。
但由于核素的放射性对人体有一定的危害性，必须加以防护，核素实验室的建设须经防疫部门的监督，操作人员须经过特殊训练。
另外，由于核素有半衰期，试剂盒的货存期较短，因而放射免疫分析在应用中有诸多不便之处。
特别是近年来其他标记免疫分析技术如酶免疫分析、发光免疫分析等在技术上有飞跃的进展，高级仪器的自动化程度已可与生化自动分析仪相媲美，因此从长远前景看，放射免疫分析有被取代的趋势。
但在目前，从所需的设备和检测的费用上，放射免疫分析还有一定的优越性，还将在一定时期内被医学检验实验室所采用。
放射免疫测定法放射免疫测定法(radiation immune assay, RIA)的技术类型很多，如再结合免疫技术，可用它作标本的定性、定量及定位分析等。
另外，由于它是以最敏感的同位素作标记，所以本法的高敏感性是最重要的特点，测定结果可达ng～pg水平，这是现用一切检测微量抗原和抗体法所不可比拟的。
(一) 放射免疫超微量分析法用其检测血清抗体时，用同位素如3H、14C、32P、131I或125I标记的病毒抗原与被检血清在37℃条件下一起孵育2小时，使二者相遇结合后，再加入抗γ球蛋白时，便与上述的抗原抗体复合物联结在一起，离心后，形成大的复合物沉淀下来，此时可用闪烁探测仪分别测量上清液和沉淀物的脉冲数，并计算出沉淀物放射性占总放射性的百分率，以此为指标，判定被检血清中有无相应抗体及其含量。
另外，也可用本法测抗原，依据的原理与上述测抗体的方法大致相同。
区别是将已知抗血清和可能含有相应病毒抗原的被检标本一起孵育，如被检标本中含有相应的病毒抗原，则二者充分结合，再引入标记的已知病毒抗原时，由于已知抗体已与标本中的抗原结合，则不能再与引入的标记病毒结合，只能呈游离状态存在于上清液中，加入抗γ球蛋白时，则与已知抗体和被检病毒抗原的复合物相结合，离心后，这种大分子的结合物即被沉淀下来，应用闪烁探测仪分别测定上清液和沉淀物的放射性时，结果沉淀物的放射性明显低于上清液的放射性，如果被检标本中不含相应的病毒抗原时，则沉淀物的放射性明显高于上清液的放射性。
(二) 放射火箭电泳测定法这种方法实际上是放射自显影与单向定量免疫电泳(即火箭电泳)相结合的一种测定技术。
它的分辨力很高，有的能精确地测出细胞内分子水平的放射性物质的分布。
检测时，可先将被检抗原用3H、131I标记，滴加于含一定量的抗血清琼脂凝胶板孔中，电泳时，抗原在移动过程中，与琼脂板中的抗体在比例适当处，即形成抗原-抗体复合物，未结合的抗原继续向阳极移动，直至全部抗原与抗体结合完为止，这样就形成一个形似火箭的锥形沉淀峰。
放射免疫分析临床应用刘冬放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）是一种以放射性示踪剂和免疫反应结合技术来测定生物标志物的一种方法。
该技术已广泛应用于临床医学中用于检测和测量患者体内的一些特定物质含量，如激素、抗体、肿瘤标志物等。
本文将重点介绍放射免疫分析在临床应用中的一些例子。
一、激素测定激素是机体内起调控作用的重要化学物质。
通过测定患者体内激素的水平，可以评估一些疾病的发生和发展，以及患者对治疗的反应。
常见的激素测定项目包括甲状腺激素、生长激素、性激素等。
放射免疫分析可以通过测定血液或尿液中激素的浓度，来帮助医生进行确诊和治疗方案的制定。
例如，对于甲状腺功能亢进患者，可以通过测定血液中的甲状腺素水平来确定是否需要进行手术或药物治疗。
二、肿瘤标志物测定肿瘤标志物是一种可以在肿瘤患者体内检测到的特殊物质。
通过测定血液中的肿瘤标志物的水平，可以帮助医生进行肿瘤的筛查、诊断和监测治疗效果。
放射免疫分析可以对常见的肿瘤标志物，如癌胚抗原（CEA）、前列腺特异性抗原（PSA）等进行快速、准确的检测。
例如，在临床上，对于可能患有肺癌的患者，测定血液中的CEA水平可以帮助医生进行早期诊断和有效治疗。
三、感染性疾病诊断感染性疾病的早期诊断对于患者的治疗和康复至关重要。
通过测定患者体液中的抗体水平，可以判断患者是否被特定的病原体感染。
放射免疫分析可以用来检测和诊断一些常见的感染性疾病，如乙肝、艾滋病等。
例如，对于可能患有乙型肝炎的患者，可以通过测定血液中的乙肝病毒表面抗原（HBsAg）和乙肝病毒表面抗体（HBsAb）来判断患者的感染状态和治疗效果。
综上所述，放射免疫分析技术在医学临床应用中发挥着重要的作用。
通过对患者体内特定物质含量的测定，可以帮助医生进行疾病的早期诊断、有效治疗和预后评估。
随着医学技术的不断发展，放射免疫分析技术在临床应用中的前景将会更加广阔。
放射免疫分析测定方法用放射免疫分析进行测定时分三个步骤，即抗原抗体的竞争抑制反应、B和F的分离及放射性的测量。
（一）抗原抗体反应将抗原（标准品和受检标本）、标记抗原和抗血清按顺序定量加入小试管中，在一定的温度下进行反应一定时间，使竞争抑制反应达到平衡。
不同质量的抗体和不同含量的抗原对温育的温度和时间有不同的要求。
如受检标本抗原含量较高，抗血清的亲和常数较大，可选择较高的温度（15～37℃）进行较短时间的温育，反之应在低温（4℃）作较长时间的温育，形成的抗原抗体复合物较为牢固。
（二）B、F分离技术在RIA反应中，标记抗原和特异性抗体的含量极微，形成的标记抗原抗体复合物（B）不能自行沉淀，因此需用一种合适的沉淀剂使它彻底沉淀，以完成与游离标记抗原（F）的分离。
另外对小分子量的抗原也可采取吸附法使B与F分离。
1．第二抗体沉淀法这是RIA中最常用的一种沉淀方法。
将产生特异性抗体（第一抗体）的动物（例如兔）的IgG免疫另一种动物（例如羊），制得羊抗兔IgG血清（第二抗体）。
由于在本反应系统中采用第一、第二两种抗体，故称为双抗体法。
在抗原与特异性抗体反应后加入第二抗体，形成由抗原－第一抗体－第二抗体组成的双抗体复合物。
但因第一抗体浓度甚低，其复合物亦极少，无法进行离心分离，为此在分离时加入一定量的与一抗同种动物的血清或IgG，使之与第二抗体形成可见的沉淀物，与上述抗原的双抗体复合物形成共沉淀。
经离心即可使含有结合态抗原（B）的沉淀物沉淀，与上清液中的游离标记抗原（F）分离。
将第二抗体结合在颗粒状的固相载体之上即成为固相第二抗体。
利用固相第二抗体分离B、F，操作简便、快速。
2．聚乙二醇（PEG）沉淀法最近各种RIA反应系统逐渐采用了PEG 溶液代替第二抗体作沉淀剂。
PEG沉淀剂的主要优点是制备方便，沉淀完全。
缺点是非常特异性结合率比用第二抗体为高，且温度高于30℃时沉淀物容易复溶。
3．PR试剂法是一种将双抗体与PEG二法相结合的方法。
放射免疫分析名词解释放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）是一种用于检测和定量分析生物样品中特定抗原或抗体浓度的方法。
它是将放射性同位素标记于抗原或抗体上，在放射性同位素发出的放射线与样品中的抗原或抗体发生特异性结合后进行测定，从而得出相应物质的浓度。
放射免疫分析的基本原理是免疫反应，即抗原与抗体之间的特异性结合。
在RIA中，通常选择具有放射性的同位素标记物作为追踪试剂。
标记物可以是同位素标记的抗原或抗体，其中最常用的是放射性同位素碘-125（^125I）或碘-131（^131I）。
这些放射性同位素会发出特定能量的射线，可以通过辐射探测器测量。
RIA的步骤包括样品预处理、标记物制备、抗体反应和分离、洗涤、放射测定等。
首先，需要将待测物标记为放射性同位素，常见的方法是用碘-125标记。
然后，将标记物与样品中的抗原或抗体进行相互反应，形成抗原-抗体复合物。
接着，通过分离和洗涤步骤，去除未结合的放射性同位素。
最后，使用辐射探测器测量放射性同位素发出的射线，由此可以得到样品中特定抗原或抗体的浓度。
放射免疫分析的优势在于其高灵敏度和高特异性，可以检测到极低浓度的物质。
它广泛应用于医学、生物学、生物化学等领域，用于检测和量化各种生物分子，如荷尔蒙、抗体、蛋白质、癌标志物等。
RIA还可以用于研究免疫反应、疾病诊断、药物筛选和治疗监测等方面。
然而，放射免疫分析也存在一些问题。
首先，使用放射性同位素会造成辐射危害，对实验操作人员和环境有一定风险。
其次，放射性同位素的半衰期较短，需要定期更换，增加了实验的复杂性和成本。
此外，由于放射性同位素的使用受到严格的监管和限制，一些实验室可能无法获得所需的放射性同位素。
总体而言，放射免疫分析是一种广泛应用的生物分析技术，具有高灵敏度和高特异性。
随着科技的进步，更多无放射同位素的免疫分析方法被开发出来，如酶免疫分析、荧光免疫分析等，逐渐取代了放射免疫分析的应用。
分析放射免疫常用的方法
放射免疫分析法(radioimmunoassay RIA)应用竞争性结合的原理，
应作放射性同素标记抗原(或抗体)与相应抗体(或抗原)结合，通过测
定抗原抗体结合物的放射活性判断结果，本方法可进行超微量分析，
敏感性高，可用于测定抗原、抗体、抗原抗体复合物。
本法常用的同
位素有125Ⅰ和131Ⅰ。
放射免疫分析常用的有液相法和固相法两种：
(1)液相法：将待检标本(例如含胰岛素抗原)与定时的同位素标记
的胰岛素(抗原)和定时的抗胰岛素抗体混合，经一定作用时间后，分
离收集抗原抗体复合物及游离的抗原，测定这两部分的放射活性，计
算结合率。
在反应系统中，待检标本的胰岛素抗原与同位素标记的胰
岛素竞争夺战性与胰岛素抗体结合。
非标记的抗原越多，标记抗原与
抗体形成的复合物越少。
非标记抗原含量与标记抗原抗体复合物的量
呈一定的函数关系。
预先用标准的非标记抗原作成标准曲线后，即可
查出待检标本中胰岛素的含量
(2)固相法：将抗原或抗体吸附到固相载体表面，然后加待检标本，最后加标记抗体。
测定固相载体的放射活性，常用的固相载体有溴化
氰(CNBr)海豹化的纸片或聚苯乙烯小管。
放射免疫分析法应用范围广泛，包括多种激素(胰岛素、生长激素、甲状腺素等)维生素、药物、IgE等。
免疫放射分析法一、原理免疫放射分析法 (Immunoradiometric assay, IRMA) 是用过量的放射核素标记抗体(*Ab) 和限量的抗原或半抗原(Ag) 结合，形成 Ag*Ab，其放射性和所加 Ag 的量呈正相关。
如以不同量的Ag标准品求出与Ag*Ab放射性的量效关系，即可从待测样品在相同条件下测得的Ag*Ab放射性求出待测样品的量。
[Ag] + [*Ab] [Ag*Ab]抗原过量抗体复合物1.从原理的角度讲，IRMA的主要特点包括以下几方面。
2.属于非竞争性抗原抗体结合反应。
3.抗原抗体复合物的量与所加非标记抗原的量呈正相关。
4.因为不存在竞争结合反应，低剂量区没有不确定因素，因此灵敏度较高。
5.分离步骤的主要目的是把 *Ab和Ag*Ab分开。
由于 *Ab和Ag*Ab都含球蛋白，分子量也比较接近，很多在RIA中常用的分离方法都不能用，需要用特异抗体作分离剂。
这在很大程度上造成了IRMA在方法学上的特殊性，即几乎全部是夹心法，也就是一个IRMA系统中需要两个抗体，都是针对同一个抗原的，但是抗原决定簇不同，一个抗体标记后作为探测抗体，一个抗体用作分离剂。
正是这一特点，使IRMA的测定对象主要限于有两个以上抗原决定簇的肽类或蛋白质。
6.由于Ag越小Ag*Ab放射性越低，所以在IRMA中NSB的高低对低剂量Ag测量的准确性影响大，如何降低NSB对灵敏度很重要。
二、试剂盒基本试剂试剂盒的基本要求和RIA试剂盒相同，由国家批准的生产单位提供，使用者应按说明书的要求合理使用。
如果临床工作需要，使用者可以对试剂稀释度、操作步骤等进行适当改动，但对改变了的方案应作精密度、准确度、灵敏度等考核，并作详细记录。
一般试剂盒都包括三种主要试剂：标记抗体、非标记标准抗原 (标准品)、分离试剂或材料，很多试剂盒还提供缓冲液及质量控制用的样品。
7.标记抗体标记抗体必须亲和力高、特异性高。
通常都由生产厂家精选后用125I标记，可以是多克隆(polyclonal)，也可以是单克隆(monoclonal)抗体。
放射免疫分析放射免疫分析放射免疫分析是利用放射性核素可探测的灵敏性、精确性和抗原抗体反应特异性相结合的一种免疫技术。
放射免疫技术放射免疫分析免疫放射分析放射免疫分析技术的应用放射免疫技术具有灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化等优点，广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域中各种微量蛋白质、激素、小分子药物和肿瘤标志物的定量分析，对相关学科的发展起到了极大的推动作用。
基本类型及原理1.放射免疫分析（RIA）2.免疫放射分析（IRMA）常用的放射性核素放射免疫技术常用的放射性核素有125Ⅰ、131Ⅰ、3H、14C等。
使用最广泛的是125Ⅰ，可采用探测γ射线的晶体闪烁计数器测量。
标志物制备及鉴定125Ⅰ以放射性碘原子通过置换被标志物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。
（1）氯胺T（ch-T）法。
（2）乳过氧化物酶标记法。
（3）间接标记法。
放射性标志物的纯化（1）凝胶过滤法：分子筛。
（2）离子交换层析法：极性差异。
（3）聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）：电荷和直径。
（4）高效液相色谱法。
放射性标志物的鉴定1.放射化学纯度：大于95%。
2.免疫活性：标志物与抗体结合的能力。
3.比放射性：标志物中所含的放射性强度。
方法学评价除常规的灵敏度、精密度、准确性、特异性和稳定性等指标外，还应注意以下指标：（1）可靠性。
（2）剂量-反应曲线。
（3）高剂量钩状效应。
放射免疫分析放射免疫分析（radioimmunoassay，RIA）是以放射性核素标记的抗原与反应系统中未标记抗原竞争结合有限的特异性抗体为基本原理来测定待检样品中抗原量的一种分析法。
Ag*+Ag+Ab Ag*-Ab+Ag-Ab+Ag*+Ag分离结合与游离标志物1.第二抗体沉淀法。
2.聚乙二醇（PEG）沉淀法。
3.PR试剂法：先将二抗与PEG按一定比例混合成悬液后进行试验。
4.活性炭吸附法。
放射性测量及数据处理可对标记抗原抗体复合物（B）或游离标记抗原（F）进行放射性测量，绘制标准曲线，查出相应的待检抗原浓度。
放射免疫分析法原理及操作注意事项放射免疫分析的原理：就是利用放射性核素标记抗原或抗体，然后与被测的抗体或抗原结合，形成抗原抗体复合物的原理来进行分析的。
它又分为两种方法。
一、竞争性RIA，又称传统RIA主要特点：标记的是抗原。
其原理：未知抗原Ag+标记抗原Ag +已知定量抗体Ab标记抗原与抗体复合物AgAb+未知抗原与抗体复合物Ag Ab+游离标记抗原Ag （去除）（未知抗原多，标记抗原与定量抗体结合的复合物就少，表现为负相关）。
临床上甲胎蛋白（AFP），癌胚抗原（CEA），8 一微球蛋白（pz—MG ），铁蛋白（Fer），人绒毛膜促性腺激素p亚单位（HCG-13）等的检测都是竞争性RIA法原理。
竞争性RIA法，根据加样顺序与温育次数的区别，反应方式分三种：平衡法，将非标记抗原（被测物与标准品）、抗体、标记抗原依次加入反应管，混匀后一次性温育至反应达到动态平衡，再加分离剂分离B（复合物）与F（游离物）如：AFP，8一MG，Fer；顺序加样法，先将非标记抗原（被测物与标准品），与抗体在反应管内作第一次温育，待反应达到动态平衡后。
加入标记抗原，再作第二次温育后，分离B与F如：CEA；急诊检测法：为临床急需检测结果而提出的反应方式，不等RIA 反应达到动态平衡就终止反应；分离剂的选择有，PEG（聚乙二醇），第二抗体等。
现在一般采用的是：第二抗体与PEG合用的方法，称为双抗体一PEG法。
PEG原理：PEG浓度达到7 一9 时能使抗原一抗体复合物沉淀。
优点：经济，简便，通用。
缺点：重复性差，非特异性结合率高。
第二抗体：第一抗体是可与被测抗原进行特异结合的抗体，来自家兔或豚鼠。
用第一抗体为抗原，作用到羊，马身上，产生的抗第一抗体的抗体称第二抗体。
第二抗体与第一抗体在适当条件下发生特异性结合，生成分子量很大的免疫复合物（AgAb ×Ab ），能自然沉淀。
优点：分离效果好。
非特异性结合率低。
缺点：增加经费投入。
第七章放射免疫分析第一节放射免疫技术一、基本类型及原理（一）放射免疫分析（RIA）以放射性核素标记抗原与未标记抗原竞争结合特异性抗体，测定样品中抗原量的一种分析法。
（二）免疫放射分析（IRMA）用放射性核素标记的过量抗体与待测抗原直接结合，固相免疫吸附载体分离结合与游离标记抗体的非竞争放射免疫分析法。
二、常用的放射性核素125I、131I、3H、14C等，使用最广泛的是125I。
三、放射性标记物制备及鉴定（一）原理：以放射性碘原子置换被标记物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。
蛋白质、肽类等含有上述基团，可用125Ⅰ直接标记，不含上述基团的甾体激素或药物分子，须连接相应基团才能用于放射性碘标记。
（二）标记及类型1.直接标记法：肽类、蛋白质和酶的碘化标记。
常用的方法为：①氯胺 T（ch-T）法；②乳过氧化物酶标记法。
2.间接标记法：也称连接标记法，是最常用的间接碘标记方法。
该法主用于甾体类化合物、环核苷酸、前列腺素等缺乏碘标记基团的小分子化合物的标记。
（三）放射标记物的纯化1.凝胶过滤法：分子筛机制。
2.离子交换层析法：游离125Ⅰ与标记物分子极性差异进行吸附解离。
3.聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）：按分子所带电荷和直径不同在电场作用下分子迁移速率不同。
4.高效液相色谱法。
（四）放射标记的鉴定1.放射化学纯度：单位标记物中结合于被标记物上的放射性占总放射性的百分率，要求＞95%。
该参数还是观察在贮存期内标记物脱碘程度的重要指标。
2.免疫活性：制备的标记物与抗体结合的能力。
3.比放射活性：单位化学量标记物中所含的放射性强度，即每分子被标记物平均所结合放射性原子数目。
四、方法学评价除常规的灵敏度、精密度、准确性、特异性和稳定性等指标外，还应注意以下指标：（一）可靠性：又称健全性，是评价被测物与标准品的免疫活性是否相同。
借助标准曲线与样品稀释曲线的平行性分析来判断。
平行性好者可靠。
（二）剂量-反应曲线：通过已知浓度的标准品和相应的反应参数绘制成剂量-反应曲线，待测物定量是通过计算其反应参数在剂量-反应曲线上对应的标准品浓度值而确定。
放射免疫分析（radioimmunoassay，RIA）是以放射性核素为标记物的标记免疫分析法。
于1960年由美国学者Yalow和Berson创立，并首先用于糖尿病患者血浆胰岛素含量的测定。
这是医学和生物学领域中方法学的一项重大突破，开辟了医学检测史上的一个新纪元。
它使得那些原先认为是无法测定的极微量而又具有重要生物学意义的物质得以精确定量，从而为进一步揭开生命奥秘打开了一条新的道路，使人们有可能在分子水平上重新认识某些生命现象的生化生理基础。
此后30年，内分泌学科的飞速进展充分证明了这一超微量分析技术的巨大推动力。
1977年，这项技术的发明者荣获诺贝尔生物医学奖。
随后这一崭新的技术迅速渗透到医学科学的其他领域，如病毒学、药理学、血液学、免疫学、法医学、肿瘤学等，以及与医学生物学相关的学科，如农业科学、生态学及环境科学等。
放射免疫分析的物质，由激素扩大到几乎一切生物活性物质。
我国放射免疫分析研究起步于1962年，并迅速发展与普及，对我国生物医学的进展起了很大的促进作用。
放射免疫分析由于敏感度高、特异性强、精密度高、并可测定小分子量和大分子量物质，所以在检验医学中应用极为广泛，常用于测定各种激素（如甲状腺激素、性激素、胰岛素等）、微量蛋白质、肿瘤标志物（如AFP、CEA、CA—125、CA—199等）和药物（如苯巴比妥、氯丙嗪、庆大霉素等）等。
各种检测项目均有试剂盒供应，而且仪器设备并不昂贵，所以在国内被广泛采用。
但由于核素的放射性对人体有一定的危害性，必须加以防护，核素实验室的建设须经防疫部门的监督，操作人员须经过特殊训练。
另外，由于核素有半衰期，试剂盒的货存期较短，因而放射免疫分析在应用中有诸多不便之处。
特别是近年来其他标记免疫分析技术如酶免疫分析、发光免疫分析等在技术上有飞跃的进展，高级仪器的自动化程度已可与生化自动分析仪相媲美，因此从长远前景看，放射免疫分析有被取代的趋势。
但在目前，从所需的设备和检测的费用上，放射免疫分析还有一定的优越性，还将在一定时期内被医学检验实验室所采用。
一、放射免疫分析的基本试剂（一）标准品标准品是放射免疫分析法定量的依据，由于以标准品的量用来表示被涮物质的量，故标准品与被测物质应当化学结构一致并具有相同免疫活性。
标准品作为定量的基准。
应要求高度纯化。
标准品除含量应具有准确性外，还应具备稳定性，即在合理的贮存条件下保持原来的特性。
按实验要求，将标准品用缓冲液配成含不同剂量的标准溶液，用于制作标准曲线。
（二）标记物标记抗原应具备：①比放射性高，以保证方法的灵敏度；②免疫活性好；③所用的核素的半衰期尽可能长，标记一次可较长时间使用，这对来之不易的抗原尤其重要；④标记简便、易防护。
要准确测量B与F的放射性，必须有足够的放射性强度。
所选用的标记抗原的量，在使用125I时达5000～15000cpm。
（三）抗体应选择特异性高、亲和力强及滴度好的抗体，用于放射免疫测定。
根据稀释曲线，选择适当的稀释度，一般以结合率为50%作为抗血清的稀释度。
（四）B与F分离剂以2%加膜活性炭溶液为例，2%加膜活性炭溶液的配制：活性炭2g（杭州木材厂生产，森工牌732型）右旋糖酐T200.2g加0.1mol/L PB 至100ml电磁搅拌1h，然后置于变通冰箱冰箱待用。
（五）缓冲液放射免疫分析技术所用的缓冲液有多种，要通过实验选用抗体和抗原结合最高的缓冲液。
目前最常用的缓冲液有下列几种：①磷酸盐缓冲液；②醋酸盐缓冲液；③巴比妥缓冲液；④Tris –HCl缓冲液；⑤硼酸缓冲淮。
其中以磷酸盐缓冲液应用最多。
在缓冲液中，除必须有弱酸及弱酸的盐成分外，还应根据不同检测项目加入下列物质：（１）保护蛋白：常用的有牛血清白蛋白或白明胶，浓度为0.1%～0.2%，用以降低试管对抗原的非特异性吸附。
（２）防腐剂：多采用0.1%叠氮钠、0.01%柳硫汞、溶菌酶或抗菌素。
（３）酶抑制剂：如测定心钠素等肽类激素时，要加入适量的抑肽酶，用以抑制血浆内源性水解酶对待测物的降解；又如测定cAMP、cGMP时，需加入EDTA·2Na，抑制磷酸二酯酶的活性。
（４）阻断剂：在测定甲状腺激素或测定某些甾体激素时，必须加阻断剂，使和蛋白质相结合的激素，变为游离型。
常用的阻断剂有8—苯胺—1—萘磺酸、柳硫汞、水杨酸钠、三氯醋酸钠等。
（５）载体蛋白：采用二抗作B与F分离剂时，要向反应液中加入适量与第一抗体同种动物的正常血清。
在测定不含有血浆蛋白的样品时，用PEG沉淀剂分离B、F，必须加适量γ球蛋白或正常人混合血清。
在神经肽的RIA时，常用PELH缓冲液，（按1000ml,pH7.6）：0．1mol/l PB980.0ml0.3mol/L EDTA·2Na10.0ml0.2%洗必泰溶液10.0ml溶菌酶 1.0g二、加样程序由于抗原、标记抗原和抗体三者加样次序不同，而出现两种加样程序，分述如下：（一）平衡饱和加样程序1、基本原理所谓平衡饱和，是指抗原和抗体反应达到再不结合，也不解离的平衡状态，称为饱和状态，即平衡饱和。
所以，有人称此为饱和分析法。
这意味着抗原或被测抗原、标记抗原、抗体三者一起温育。
2、加样程序一般先加标准物或被测样品，再加抗血清，最后加标记物。
这样的顺序是让标准物或被测物与抗体有短暂的结合，提高抗原的竞争抑制能力。
在小分子半抗原的放射免疫分析中，标记抗原和未标记抗原与抗体结合的亲合力常常是不相同的，前者比后者的亲合力高。
因此，上述加样程序就更有必要，所以一般都采用先加标准物或样品和抗血清，后加标记物。
这样测定也比较稳定。
在大分子蛋白质抗原的放射免疫分析中，如果是双抗体分离法，抗原和标记抗原与抗体三者加样，可不分先后，有的是标准物、标记物、抗血清的加样顺序，但一般习惯还是标准物或血样、抗血清、标记物、然后混匀温育24～48h，再加双抗体，继续温育24h，使免疫反应达到平衡。
对一些多肽激素的放射免疫分析，应用双抗体分离法，其流程比较长，这样的顺序同样可不分先后。
以大鼠垂体、下丘脑β-内啡肽RIA测定程序为例：（１）加样（单位μl；总反应体积500μl）标准曲线样品TNSBBo5Pg10Pg50Pg100Pg500Pg1ng垂体下丘脑管号1234567891011β-EP标准液///100100100100100100//样品/////////1100β-EP抗血清//100100100100100100100100100125-β-EP溶液100100100100100100100100100100100缓冲液/400300200200200200200200299200（２）孵育：4℃，24h（３）分离B与F：每管加入2%加膜活性炭溶液300μl，摇匀，立即离心，去上清，测沉淀（F）的CPM数。
（二）顺序饱和加样程序1、基本原理先将标准物或血样品与抗血清混匀，免疫反应6～24h，使抗原与抗体充分结合，甚至达到平衡，然后再加入标记抗原，与抗体反应12～24h，最后分离B与F，这称为顺序饱和分析法。
应用顺序饱和加样，可以提高测定方法的灵敏度。
Utiger在做人促甲状腺激素（TSH）放射免疫分析时，将标记物延至第2天加入，发现其灵敏度增加两倍。
如果缩短最后的温育时间，仍可取得满意的结果。
所以一般认为，在顺序饱和加样中，第1次温育时间可以长，而第2次温育时间要短，这样可以提高灵敏度。
但也有相反的意见，认为顺序饱和加样，是使用过量抗体，会使灵敏度受到一定影响。
如果使用抗体不过量，温育时间缩短，在抗原和抗体结合未达到平衡饱和时就加入标记物，这样既不影响加灵敏度，反而比较稳定，甚至可提高灵敏度。
2、加样程序以人血浆精氨酸加压素RIA测定程序为例（直接测定）。
（１）加样（单位μl；总反应体积600μl）标准曲线血浆T NSB Bo1Pg5Pg10Pg50Pg100Pg500Pg管号12345678910A VP标准液///100100100100100100/样品/////////300无肽血浆/300300300300300300300300/A VP抗血清//100100100100100100100100缓冲液/200100//////100在4。
C下孵育12～24h125I-A VP100100100100100100100100100100（２）孵育：4℃，24h。
（３）分离B与F。
无肽血浆，用于血浆的直接测定。
其制备方法为：在电磁搅拌下，抽取2%加膜活性炭溶液5ml，共两管，离心、去上清。
血浆5ml，倒入上述活性炭管中，加盖，充分振荡10min，离心，上清倒入上述另一活性炭管中，振荡10min，再离心，取上清，即无肽血浆。
血浆中的生物活性物质被活性炭吸附而去除。
（三）计数、绘制标准曲线与测定样品含量以活性炭分离B与F，沉淀计数是F的cpm。
T—F—NSB，得B的cpm数。
计算标准管与样品管结合（B）的cpm数及与零标准管结合（B0）的比（B/B0×100%）。
用半对数纸，以标准管的B/B0为纵座标，以各标准管含量为横座标，绘制标准曲线。
根据样品的结合率（B/B0×100%），从标准曲线中找出被测样品抗原的含量，再换算成每毫升血浆含某抗原的量，或每毫克（组织湿重）含某抗原的量。
三、放射免疫分析的质量控制（一）质量控制的目的和内容放射免疫分析的质量控制实际上就是控制测定误差，监督测定结果。
它包括两方面的内容：一方面对测定结果做精确分析；另一方面鉴定常规测定方法，对那些测定结果不好的方法加以改进，并建立新的测定方法。
质量控制分四个方面：1、在一个测定方法内产生的误差。
2、在同一实验室内不同方法之间产生的误差。
3、用同一测定方法，在各实验室之间产生的误差。
4、采用不同方法，在各实验室之间产生的误差。
后两种情况属于外部质量控制。
（二）放射免疫分析中造成测量误差的因素误差包括系统误差和随机误差。
系统误差发生在测量过程中由于仪器不准、试剂不纯、标准品不稳定等原因，使测定结果呈倾向性偏大或偏小，这种误差应力求避免。
随机误差是测量过程中各种偶然因素造成的，没有固定的倾向性，这类误差是不可避免的，必要时做统计学处理。
造成误差的可能来源有以下几个方面：1、各种仪器：设备的准确性、稳定性、效率以及被污染等情况带来的误差。
如：①由于放射性测量仪器的稳定性、效率、样品试管的材料和均匀性及被测物的放射性强度等原因。
②由于样品的自吸收，本底校正，测定时间，可能的污染等原因。
③在试验室中所有的移液管、微量取样器以及天平的刻度、校准和使用方法等原因。
④由于反应试管、移液管以及测定用试管等表面清洁度和所引起的不同吸附等原因都可以对测定结果带来误差。
2、试剂的纯度、质量和稳定性的影响也是造成误差的重要因素。
