线粒体异柠檬酸脱氢酶(ICDHm)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法

细菌异柠檬酸脱氢酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途细菌异柠檬酸脱氢酶（ISOCITRATE DEHYDROGENASE）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过反应系统中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸酸（NADP）还原后峰值的变化，即采用比色法来测定细菌裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

其适合于各种细菌细胞裂解悬液样品异柠檬酸脱氢酶的活性检测。

产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景异柠檬酸脱氢酶（isocitrate dehydrogenase；IDH；EC1.1.1.42）是三羧酸循环（citric acid cycle）或克雷布斯循环（Krehes cycle）中的酶之一，存在于所有生物体内。

细菌异柠檬酸脱氢酶有2种同工酶：同源双体，40至45Kd分子量；单体，80至100Kd分子量。

在细菌体内，氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸（oxidizedβ-Nicotinamide adenine dinucleotide –phosphate；NADP）依赖性异柠檬酸脱氢酶获得辅酶NADP和辅助因子锰或镁离子（Mn）的推动，脱去底物异柠檬酸的氢和二氧化碳（氧化性脱羧基作用），转化为α-酮戊二酸（α-ketoglutarate），同时生成还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸（reduced β-Nicotinamide adenine dinucleotide –phosphate；NADPH）。

一旦磷酸化或在乙酸环境中，以及有限的葡萄糖条件下，异柠檬酸脱氢酶则失活，从而控制三羧酸循环和乙醛酸旁路（glyoxylate bypass）之间碳的流动。

基于异柠檬酸脱氢酶的NADP依赖性，和作用后所产生的NADPH，通过分光光度仪的峰值变化（340nm 波长），来定量分析异柠檬酸脱氢酶的活性。

异柠檬酸脱氢酶反应系统为：产品内容裂解液（Reagent A）毫升活性液（Reagent B）微升缓冲液（Reagent C）毫升反应液（Reagent D）毫升底物液（Reagent E）毫升阴性液（Reagent F）毫升产品说明书1份保存方式保存活性液（Reagent B）、缓冲液（Reagent C）、反应液（Reagent D）和底物液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；反应液（Reagent D）和底物液（Reagent E）避免光照；有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于样品保存的容器15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器超声仪：用于裂解细菌细胞（微型）台式离心机：用于样品制备比色皿或96孔板：用于比色的容器分光光度仪或酶标仪：用于比色分析实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的活性液（Reagent B）置入冰槽里融化。

线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途线粒体呼吸链复合物I（NADH－辅酶Q还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶Q同功类似物和特异性抑制剂，通过反应系统测定样品中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后峰值的降低，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）－辅酶Q还原酶的特异性活性检测。

其用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。

产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。

技术背景线粒体呼吸链复合物I，通常称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶Q还原酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide coenzyme Q reductase；NADH-CoQ reductase），又称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase；NADH dehydrogenase），是线粒体电子传递链中最大的结构成分：含有30至40多个多肽结构。

其特征性的酶活性是鱼藤酮敏感的NADH－辅酶Q还原酶（NADH:Q Reductase）。

复合物I催化线粒体内电子由供体NADH传递到内膜上辅酶Q受体（泛醌；ubiquinone）的能量转移反应，为整个呼吸链反应系统的第一步。

基于辅酶Q底物，在鱼藤酮存在与否的情况下，通过NADH－辅酶Q还原酶的催化，转化成还原型泛醌（CoQH2），同时还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），在分光光度仪下产生吸收峰值的变化（340nm 波长），由此定量测定NADH －辅酶Q还原酶的特异活性。

线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途线粒体呼吸链复合物I（NADH－辅酶Q还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶Q同功类似物和特异性抑制剂，通过反应系统测定样品中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后峰值的降低，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）－辅酶Q还原酶的特异性活性检测。

其用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。

产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。

技术背景线粒体呼吸链复合物I，通常称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶Q还原酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide coenzyme Q reductase；NADH-CoQ reductase），又称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase；NADH dehydrogenase），是线粒体电子传递链中最大的结构成分：含有30至40多个多肽结构。

其特征性的酶活性是鱼藤酮敏感的NADH－辅酶Q还原酶（NADH:Q Reductase）。

复合物I催化线粒体内电子由供体NADH传递到内膜上辅酶Q受体（泛醌；ubiquinone）的能量转移反应，为整个呼吸链反应系统的第一步。

基于辅酶Q底物，在鱼藤酮存在与否的情况下，通过NADH－辅酶Q还原酶的催化，转化成还原型泛醌（CoQH2），同时还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），在分光光度仪下产生吸收峰值的变化（340nm 波长），由此定量测定NADH －辅酶Q还原酶的特异活性。

线粒体异柠檬酸脱氢酶（ICDHm ）活性检测试剂盒说明书微量法货号: BC2165规格: 100T/48S 产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液一液体60 mL×1瓶4℃保存提取液二液体600 μL×2支-20℃保存提取液三液体40 mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶常温保存试剂三液体10 mL×1瓶4℃保存试剂四粉剂×2支-20℃保存试剂五液体5 mL×1瓶常温保存试剂六液体15 mL×1瓶常温保存标准品粉剂×1支4℃保存溶液的配制：1、提取液二：易挥发试剂，用完后盖紧盖儿后及时放回-20℃保存；2、试剂一：临用前加入5 mL 试剂三，充分溶解待用；3、试剂二：临用前加入5 mL 试剂三，充分溶解待用；4、试剂四：临用前加入0.375 mL 双蒸水，充分溶解待用；5、标准品：10 mg α-酮戊二酸。

临用前加入684 μL 蒸馏水，配成100 μmol/m L 标准液；6、工作液的配制：临用前根据用量将试剂一、试剂二按1:1比例混合，现配现用。

产品说明：线粒体异柠檬酸脱氢酶（isocitrate dehydrogenase ，ICDHm ），广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，与线粒体基因表达及线粒体其他的功能有关。

异柠檬酸脱氢酶在生物体内有两种存在形式，以NAD 为辅酶的NAD-依赖型异柠檬酸脱氢酶，和以NADP 为辅酶的NADP-依赖型异柠檬酸脱氢酶。

异柠檬酸脱氢酶的主要功能，是在体内三羧酸循环中，催化异柠檬酸生成α-酮戊二酸，将NAD 还原成NADH ，通过测定α-酮戊二酸的生成量，可以计算出线粒体异柠檬酸脱氢酶活力高低。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

NADP—苹果酸脱氢酶（NADP—MDH）试剂盒说明书NADP苹果酸脱氢酶（NADPMDH）试剂盒说明书微量法100管/96样注意：正式测定前务必取23个预期差异较大的样本做推测定测定意义：MDH（EC1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培育细胞中，线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。

草酰乙酸是紧要的中心产物，连接多条紧要的代谢途径。

因此，MDH在细胞多种生理活动中扮演侧紧要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。

依据不同的辅酶特异性，MDH分为NAD倚靠的MDH和NADP倚靠的MDH，NADPMDH重要存在于真核细胞中。

测定原理：NADPMDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光汲取下降。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂的构成和配制：试剂一、提取液100mL×1瓶，在4℃保存；试剂二、液体20mL×1瓶，在4℃保存；试剂三、粉剂×1瓶，20℃保存；样本测定的准备：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培育细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；依照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500～1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一），超声波碎裂细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：依照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1：5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一），进行冰浴匀浆。

8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调整波长至340nm，蒸馏水调零。

NADP-苹果酸酶（NADP-ME）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC1120规格:50T/48S产品内容：提取液：液体70mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入20mL提取液充分溶解备用；试剂三：粉剂×2支，4℃保存；用时每支加1mL双蒸水充分溶解备用；试剂四：粉剂×2支，-20℃保存；用时每支加500μL双蒸水充分溶解备用。

工作液：在15mL试剂二中加入2mL试剂三和1mL试剂四，可以根据比例现用现配。

产品说明：ME广泛存在于微生物、培养细胞、动物和植物胞浆中，尤其在植物组织中活性较高。

ME催化苹果酸氧化脱羧的可逆反应，产生丙酮酸和CO，以及伴随NAD(P)+的还原反应，是苹果酸代谢的关键酶。

ME活性与2生物合成和抗氧化密切相关。

近年来植物ME活性测定较多，已经成为抗氧化研究的热点。

根据辅酶专一性和对底物特异性的不同，可将ME分为NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。

NADP-ME催化NADP+还原成NADPH，在340nm下测定NADPH增加速率。

试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL石英比色皿、匀浆器和蒸馏水操作步骤：一、粗酶液提取：细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）。

8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。

8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

血清（浆）样品：直接检测。

二、测定步骤：1、紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途线粒体呼吸链复合物I（NADH－辅酶Q还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶Q同功类似物和特异性抑制剂，通过反应系统测定样品中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后峰值的降低，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）－辅酶Q还原酶的特异性活性检测。

其用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。

产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。

技术背景线粒体呼吸链复合物I，通常称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶Q还原酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide coenzyme Q reductase；NADH-CoQ reductase），又称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase；NADH dehydrogenase），是线粒体电子传递链中最大的结构成分：含有30至40多个多肽结构。

其特征性的酶活性是鱼藤酮敏感的NADH－辅酶Q还原酶（NADH:Q Reductase）。

复合物I催化线粒体内电子由供体NADH传递到内膜上辅酶Q受体（泛醌；ubiquinone）的能量转移反应，为整个呼吸链反应系统的第一步。

基于辅酶Q底物，在鱼藤酮存在与否的情况下，通过NADH－辅酶Q还原酶的催化，转化成还原型泛醌（CoQH2），同时还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），在分光光度仪下产生吸收峰值的变化（340nm 波长），由此定量测定NADH －辅酶Q还原酶的特异活性。

线粒体柠檬酸(MitoChOndriOnCitriCaCid,MCA)含■试剂盒说明书微・法100管/96样注意s正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定渊定意义：MCA是线粒体三枝酸循环的第一个中间产物，由柠檬酸合酶催化乙酰COA与草酰乙酸合成，其含量是三按酸循环强度的主要指标之一。

配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和MCA含量，其中（1）丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度，（2）综合分析丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰COA含量变化可以反映脂肪酸B・氧化途径提供的乙酰COA情况，（3）乙酰COA含量、柠檬酸合酶活性和MCA含量变化可以反映三竣酸循环进行状况。

渊定原理：MCA在柠檬酸裂解函的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性条件下，。

-酮酸进一步与苯朋反应,生成相应的α∙酮酸苯腺；α-酮酸苯腺在330nm处有吸收峰，该波长下吸光度的变化程度可反映出MCA的含量。

自备仪器和用品：分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵、蒸储水。

试剂组成和配制：酸性提取液：液体IOom1X1瓶，4*C保存。

碱性提取液：液体IOom1X1瓶，4七保存。

试剂一：液体6m1x1瓶，4七保存。

试剂二：液体2m1x1瓶，4βC保存。

试剂三：粉剂X1瓶，4匕保存：临用前加入6m1蒸憎水充分溶解待用；用不完的试剂4七保存：标准液：液体Im1X1支，10μmo1∕m1柠椽酸标准液，4℃保存。

线粒体中柠檬酸提取：称0.05-0.Ig样品（建议称0.1g样本），加入0.5m1酸性提取液,冰上充分研磨，600g∕min4*C离心5min；取上清至另一EP管中，I1OOogzmin4°C离心Iomin,弃上清（取300J1该上清液和300U1碱性提取液中和后可用于细胞质CA含量测定）；沉淀即线粒体，向沉淀中加入0.5m1酸性提取液，充分悬浮溶解，超声波破碎（功率20%,超声3秒，间隔10秒，重复30次），取此溶液300U1和300J1碱性提取液中和，混匀，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

可见分光光度法丙酮酸脱氢酶（PDH）活性检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：UPLC-MS-4318规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体60mL×1瓶4℃保存试剂二液体0.6mL×1支-20℃保存试剂三液体15mL×2瓶4℃保存试剂四液体25mL×1瓶4℃保存试剂五粉剂×2支-20℃保存试剂六粉剂×2支4℃保存试剂七液体8mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1.试剂二：为易挥发试剂，用完后尽快密封，-20℃保存。

2.试剂六：每支试剂六加入1mL蒸馏水溶解备用。

3.工作液的配制：临用前把11.5mL试剂四、一支试剂五、0.9mL试剂六、3.5mL试剂七转移到一瓶试剂三中混合溶解待用；用不完的试剂-20℃分装保存，可以保存4周。

产品说明：PDH（EC4.1.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是丙酮酸脱氢酶复合体(PDHC)催化丙酮酸氧化脱羧的限速酶，催化丙酮酸脱梭生成羟乙基-TPP，把糖酵解和三羧酸循环连接起来。

PDH催化丙酮酸脱氢，同时还原2,6-二氯酚靛酚（2,6-DCPIP），从而导致605nm光吸收的减少。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）组织：称取约0.1g组织，加入1mL试剂一和10μL试剂二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨，4℃11000g 离心10min，取上清，置冰上待测。

细胞或者细菌样本：先收集500万细胞到离心管内，离心后弃上清；之后加入1mL试剂一和10μL试剂二，冰浴超声波破碎细菌（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，总时间5min）；然后11000g，4℃，离心10 min，取上清置于冰上待测。

琥珀酸脱氢酶（SDH ）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0950 规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称 规格 保存条件 试剂一 液体60 mL×1瓶 -20℃保存 试剂二 液体0.6 mL×1支 -20℃保存 试剂三 液体5 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂四 液体4mL×1瓶 2-8℃保存 试剂五液体3mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、 试剂二：为易挥发试剂，用完后尽快密封，-20℃保存； 产品说明：SDH （EC 1.3.5.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。

SDH 是线粒体的一种标志酶，位于线粒体内膜上的一种膜结合酶，是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。

此外，为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。

SDH 催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS ）传递还原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP ），并且在600nm 处具有特征吸收峰，通过600nm 吸光度的变化，测定2,6-DCPIP 的还原速度，代表SDH 酶活性。

Succinic Acid + FAD Fumaric Acid + FADHFADH + PMS FAD + PMSH 2PMSH 2 + Dichlorophenolindophenol (600nm) PMS + Reduced Dichlorophenolindophenol 注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1. 组织样本：称取约 0.1g 组织，加入1mL 试剂一和 10μL 试剂二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨，4℃11000g 离心10min ，取上清，置冰上待测。