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革兰氏染色名词解释
革兰氏染色是一种针对微生物的染色法，由彼得·革兰（Paul Ehrlich）于1883年发明。
它的主要原理是利用染料的化学色素物质在微生物细胞表皮上形成不同的染料沉积，从而使微生物细胞得到彩色，以此来对微生物进行分类和分析。
革兰氏染色法与其它染色方法相比有三大优势：1.可实现多种不同样式的染色，它可以在一次染色中实现多种染色方式，如单色、双色、三色染色等；2.染色效果很好，革兰氏染色能够将微生物细胞表面染得很彩艳，即使在低倍镜下也非常清晰，能更好的反映微生物的特征；3.染色速度快，革兰氏染色的染色速度比传统的染色方法快几倍，可以在几分钟内完成一次染色。
革兰氏染色是生物学实验中采用最多的染色方法之一，它的法则和技巧都相当成熟，应用范围也广泛。
革兰氏染色技术广泛应用于细菌生理学、药物耐药性研究、病原鉴定、细菌分类学研究以及细胞学研究等多个研究领域，它也被用于食品行业、环境污染检测、放射性检测、肿瘤检测等多个领域。
实验一细菌的革兰氏染色实验一细菌的革兰氏染色实验一_细菌的革兰氏染色实验一细菌的革兰氏染色生物科学贺冰冰[1**********]5周二9、0节1自学显微镜油镜的采用方法2学习微生物的无菌操作技术3自学细菌的革兰氏染色法1显微镜及油镜物镜的使用原理1)油镜头的标志油镜头上常刻有oi或hi字样，有的还刻有一圈红线或黑线标记。
在低倍物镜、高被物镜和油镜3种物镜中，油镜的放大倍数和数值孔径最大，而工作距离最短。
2)显微镜的分辨率显微镜性能主要就是看看它的分辨率的大小，然后看看它的总压缩倍数。
分瓣率是所指显微镜能够辨别出来物体两点间最轻距离（d）的能力。
d值愈小说明分辨率愈低。
d值与光线的波长（λ）成正比，与物镜的数值孔径（na）成反比：d=λ/2na2细菌的革兰氏染色原理革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家c.gram创立的。
作为细菌学上最常用最重要的鉴别染色法。
革兰氏染色的基本步骤就是：先用初染剂结晶紫展开染色，再用碘液媒染，然后用乙醇脱色，最后里韦县染剂番红复染。
革兰氏染色法可以将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（g+）和革兰氏阴性菌（g－）两大类.g－菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。
g+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。
1菌种：培育24h的枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆营养琼脂菌斜面培育物。
2染色液和试剂：生理盐水、草酸铵结晶紫染液、碘液、95%乙醇、番红为丛藓科扭口藓染液,香柏油，显微镜冲洗液.3器材：酒精灯、接种环、镊子、载玻片、擦镜纸、吸水纸、记号笔、试管夹、显微镜等。
1涂片:挑一整洁载玻片,中央几滴一小几滴生理盐水,无菌操作取菌无菌操作(快):在酒精灯上灼烧接种环(注意手势)---松动试管帽---取下试管帽---灼烧管口---在火焰旁接种环通过火焰进入菌种管---接种环在管壁冷却---挑取菌少许---退出---灼烧管口---盖帽---涂片(调匀涂成薄膜)---灼烧接种环.2潮湿:室温自然肥干活3固定:手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）.4染色:初染(加草酸铵结晶紫一滴,约一分钟,自来水水洗)---媒染(加碘液冲回去残水,并全面覆盖一分钟,水洗)---脱色(将水打翻净,方体白背景,用95%酒精几滴洗至流入的酒精不发生紫色时年才,约20-30秒,立即用水冲净酒精)---复染(用蕃红液染2-3分钟,水洗)5干燥:室温凉干或吹风机吹干6镜检:先低倍观测，再高倍观测，并找到适度的视野后，将高倍镜办理手续，在涂片上有香柏油，油观测细菌的形态。
![3[1].革兰氏染色](https://img.taocdn.com/s1/m/60cbc19f85868762caaedd3383c4bb4cf7ecb79b.png)
环境微生物学实验(参见课本P388-392)实验1 细菌的革兰氏染色一.实验目的(1)了解细菌的涂片和染色在微生物学试验中的重要性。
(2)掌握革兰氏染色法的基本操作技术。
二.实验材料(1)器皿：显微镜、接种环、载玻片、酒精灯。
(2)试剂：草酸铵结晶紫染液、革兰氏碘液、95%乙醇、5g/L沙皇染色液。
(3)材料：常见菌种。
三.实验内容各种细菌经革兰氏染色法染色后，能区分成两大类，一类最终染成紫色，称革兰氏阳性细菌（Gram positive bacteria,G+）；另一类被染成红色，称革兰氏阴性细菌（Gram negative bacteria,G-）。
其过程如下：(1)涂片、固定(干燥)取干净的载玻片于试验台上，在正面边角作几号，并滴一滴无菌蒸馏水于载玻片的中央，灼烧接种环，待冷却后从斜面挑取少量菌种与玻片上的水滴混匀后，在载玻片上涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过多。
干燥过程最好在空气中自然晾干，为了加速干燥，也可在微小火焰上方烘干。
烘干后再在火焰上方快速通过3~4次，使菌体完全固定在载玻片上。
但不宜在高温下长时间烤干，否则急速失水会使菌体变形。
(2)初染滴加草酸铵结晶紫染色液1―2min,水洗。
(3)媒染滴加革兰氏碘液，染1-2min,水洗。
(4)脱色滴加体积分数为95%的乙醇，约45s后即水洗；或滴加体积分数为95%的乙醇后将玻片摇晃几下即倾去乙醇，如此重复2-3次后即水洗。
(5)复染滴加沙黄液（番红），染2-3min,水洗并使之干燥。
(6)镜检按显微镜的操作步骤观察菌体形态，及时记录。
根据呈现的颜色判断该菌属是G+还是G-细菌。
观察时先用低倍镜观察，发现目的物后用油镜观察。
四.注意事项（1）涂片所用载玻片要洁净无油污迹，否则影响涂片。
（2）挑菌量应少些，涂片宜薄，过厚重叠的菌体则不易观察清楚。
（3）染色过程中勿使染色液干涸。
用水冲洗后，应甩去玻片上的残水以免染色液被稀释而影响染色效果。
（4）革兰氏染色成败的关键是脱色时间是否合适，如脱色过度，革兰氏阳性细菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性细菌。
微生物实验报告细菌的革兰氏染色及形态观察一、目的要求：1、熟悉光学显微镜的使用方法。
2、掌握革兰氏染色法。
3、掌握大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的染色结果和形态特征二、器材和器皿：1、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌2、革兰氏染色液、香柏油、二甲苯3、显微镜、擦镜纸、酒精灯、载玻片、盖玻片、接种环等三、实验原理：革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram 创立。
未经染色的细菌，由于其与周围环境折光率差别很小，在显微镜下极难观察。
染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。
革兰氏染色属复染法。
该染色法所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。
G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。
G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色，呈现蓝紫色。
四、实验步骤：1、取载玻片用纱布擦干，涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。
2、涂片：液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。
固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。
3、晾干：让涂片在空气中自然干燥。
4、固定：让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。
5、染色：在菌膜上滴加草酸铵结晶紫液，染1min。
6、水洗：用蒸馏水轻轻冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。
简单染色结束可观察细胞形态。
革兰氏染色名词解释革兰氏染色（Gram staining）是一种常用的细菌鉴定和分类方法，由丹麦细菌学家克里斯蒂安·格拉默（Christian Gram）于1884年首次提出，并被广泛应用于临床微生物学和实验室研究中。
革兰氏染色的原理是通过对细菌细胞壁的染色特性进行区分。
细菌的细胞壁在结构上分为两种类型：革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
革兰氏阳性菌具有厚实的胞壁，其细胞壁主要由多聚肽和多糖组成，对革兰氏染色染料结构相对稳定。
而革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，含有一个内膜和一个较薄的胞壁，对革兰氏染色染料结构不稳定，容易被清洗脱色。
革兰氏染色方法通常由紫晶染液（crystal violet)、碘液（iodine）、酒精脱色液（ethyl alcohol）和洗净液（wash buffer）组成。
以下是革兰氏染色的步骤：1. 取一块无菌玻璃片，用手套或钳子夹住，然后在玻璃片上滴加一滴样本（可以是细菌培养物或分离纯培养的菌液），将细菌均匀涂抹于玻璃片上形成细菌涂片。
2. 将预先烘干的细菌涂片放置在静止的温和热环境中，使菌液完全固定在玻璃片上。
3. 将预热的紫晶染液倒在细菌涂片上，让染液覆盖整个细菌涂片，静置片上1分钟。
4. 倒掉多余的紫晶染液，用洗净液将染液冲干净。
5. 加一倍稀释的碘液在细菌涂片上，静置片上1分钟。
6. 倒掉多余的碘液，用洗净液将碘液冲洗干净。
7. 用酒精脱色液滴在细菌涂片上，进行制片人定时（通常为15-30秒），直到底色变得非常浅。
8. 倒掉酒精脱色液，用洗净液将细菌涂片冲干净。
9. 加入红粉溶液，让染料覆盖细菌涂片，静置片上1分钟。
10. 倒掉多余的红粉溶液，用洗净液将细菌涂片洗净，待片子晾干。
观察结果时，革兰氏阳性菌会呈现出紫色或蓝色，因为其细胞壁能够保留紫晶染料和碘复合物的结晶。
而革兰氏阴性菌则会呈现出红色或粉红色，因为其细胞壁无法保留紫晶染料和碘复合物的结晶，在酒精脱色过程中已经被去除。
革兰氏染色关键步骤革兰氏染色是一种广泛应用于微生物学研究中的染色方法，通过染色使细菌分为革兰阳性和革兰阴性两类，这对于鉴定和分类细菌非常重要。
下面将详细介绍革兰氏染色的关键步骤。
一、准备工作1.1 培养基选择首先需要选择适合的培养基进行培养。
不同种类的细菌需要不同的培养基，例如大肠杆菌需要在LB培养基上生长。
1.2 细菌培养将选好的培养基加入试管中，接种适量的细菌，在恒温摇床上进行培养。
通常情况下，需要在24小时内达到足够数量的细菌。
二、制备干片2.1 净化玻璃片用肥皂水或其他清洁剂清洗玻璃片，并用去离子水冲洗干净。
然后用96%乙醇消毒玻璃片。
2.2 制备干片取出消毒好的玻璃片，在干燥无尘环境下放置至少30分钟。
然后用铅笔在玻璃片上标记编号。
三、染色步骤3.1 固定细菌将培养好的细菌取出，滴在制备好的玻璃片上。
然后用火焰将玻璃片加热，使细菌固定在玻璃片上。
3.2 染色将固定好的细菌涂上革兰紫染料，静置1分钟。
然后用去离子水冲洗干净。
3.3 醋酸洗涤将涂有革兰紫染料的细菌加入醋酸中浸泡30秒钟。
然后用去离子水冲洗干净。
3.4 染色再次涂上碘化钾溶液，静置1分钟。
然后用去离子水冲洗干净。
3.5 酒精洗涤将涂有碘化钾溶液的细菌加入95%乙醇中浸泡30秒钟，直到颜色变浅。
然后立即用去离子水冲洗干净。
3.6 洗涤和对比染色最后将细菌涂上对比染料（如苏丹红），静置1分钟。
然后用去离子水冲洗干净，并将玻璃片倒立在滤纸上晾干。
四、观察结果4.1 革兰阳性细菌革兰阳性细菌在染色后呈紫色或紫红色，因为它们的细胞壁含有大量的多糖和类脂质。
4.2 革兰阴性细菌革兰阴性细菌在染色后呈粉红色或红色，因为它们的细胞壁只含有一层较薄的多聚肽和脂质。
总结革兰氏染色是一种简单而有效的方法，用于鉴定和分类微生物。
通过以上步骤可以得到清晰可见的结果，从而为微生物学研究提供了重要依据。
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师、细菌学家Christain Gram创立。
细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G—）。
为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。
阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。
有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。
革兰氏阳性菌对青霉素敏感，革兰氏阴性菌对链霉素敏感。
可根据革兰氏染色法鉴别不同菌种并对症下药。
革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。
现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。
另外，阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同PH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料很多，因此不易脱去，阴性菌则相反。
所以染色时的条件要严格控制。
例如，在强碱的条件下进行染色，两类菌吸附碱性染料都多，都可呈正反应；PH很低时，则可都呈负反应。
此外，两类菌的细胞壁等对结晶紫—碘复合物的通透性也不一致，阳性菌透性小，故不易被脱色，阴性菌透性大，易脱色。
所以脱色时间，脱色方法也应严格控制。
革兰氏染色原理： G＋菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。
呈紫色。
Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是： 1）涂片固定。
在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，固定。
2）草酸铵结晶紫染1分钟。
3）自来水冲洗，去掉浮色。
4) 用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。
5）用中性脱色剂如乙醇或丙酮酸脱色，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。
6）用蕃红染液复染1分钟，革兰氏阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。
革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌即被区别开。
为了研究细菌的形态，微生物学家发明了对细菌的染色，有用一种染色剂的称单染，仅能对细菌形态观察。
用两种以上的称复染，革兰氏发明了复染色法；先后用两种染色剂和媒染剂、脱色剂组合，由此而命名为革兰染色。
革兰染色不仅可以观察细菌的形态，同时将细菌分为两大类。
一类是染色阳性菌是紫色，另一类染色阴性的是红色。
由于细菌的结构上的差异，形成了不同的染色效果。
了解染色性能有助于临床用药和细菌的鉴定； 如青霉素对革兰染色阳性菌有效，当化脓性细菌感染可首选药物。
而氟哌酸对革兰染色阴性杆菌有效，如肠道病、腹泻为常用药。
当从尿道培养出革兰阴性双球菌，可以作为淋病感染的重要指症。
如出现革兰染色阳性的葡萄球菌，又可作为金黄色葡萄球菌感染依据。
鞭毛染色法
玻片处理：将玻片用洗衣粉煮沸10分钟，水洗，再用清洁液浸泡，加温10分钟，水洗，再放入95%酒精脱脂，同时取出凉干，可制成涂片．
染色液的配制：
20%的鞣酸溶液（加温溶解）2毫升
钾明矾饱和液2毫升
石碳酸饱和液5毫升
10%碱性复红无水乙醇溶液1．5毫升
将上述各液混合后放置2-3日，过滤后备用，此液使用不得超大型过5周．
染色步骤：将细菌接种在琼脂平板上，培养8-18小时，（35-37℃），用无水乙醇浸泡过的而且干燥的新玻片加一滴无菌DW，用接种环挑取菌落，置DW液面上，然后自然干燥．滴加染色液染1-2分钟，水洗干后镜检．
结果：鞭毛染成红色．
细菌的荚膜染色法
一、目的要求
学习并掌握荚膜染色法
二、基本原理
荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质。
由于荚膜与染料的亲和力弱，不容易着色；而且可溶于水，易在用水冲洗时被除去。
所以通常用衬托染色法(负染色法)染色，使菌体和背景着色，而荚膜不着色，从而在菌体周围形成一透明圈。
由于荚膜富含水分，制片时应自然干燥，不可以加热固定，避免加热蒸发，影响观察。
三、菌种：褐球固氮菌（A zotobacter chroococcus）的斜面培养物。
染液：齐氏石炭酸复红染液
四、操作步骤
制片——自然干燥——结晶紫或石炭酸复红染液染色2分钟——水洗——干燥——镜检
五、实验报告
绘图示褐球固氮菌的形态特征。
