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霍乱的实验室检测课件

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霍乱弧菌实验室检测ppt课件

霍乱弧菌实验室检测ppt课件

11.12.2020
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11.12.2020
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• 6.增菌培养6-8小时后，需要取胨水生长物再次观察动力 ，进行6-8小时动力报告。并转种到庆大霉素平板并放入 35℃孵箱中培养。在进行6-8小时动力报告时，需要先取 消之前的审核，在原报告单上进行审核（1505970005） 。
11.12.2020
0139霍乱弧菌，并认定为真正的霍乱弧菌。
三、不典型01群霍乱弧菌：可被多价01群血清所凝集，但该群 菌不产生肠毒素，因此无致病性
11.12.2020
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6
霍乱病原学特点
• 形态与染色
– 弧状或逗点状 – 革兰染色阴性 – 有一根单鞭毛，细菌运动非常活泼，呈鱼群穿梭样或流星状
11.12.2020
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7
霍乱实验室检测
2020/12/11
检验科
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1
霍乱病原菌发现
• 1883年德国科学家Koch发现霍乱弧菌 • 1 9 0 5 年埃及埃儿托检疫站首次分离到ElTor弧菌，与霍乱
弧菌甚为相似，但经过多年的观察并不致病或仅引起轻度 腹泻，直到1937-1958年发生4次爆发后才逐渐认识到 ElTor弧菌致病性 • 1992年10月印度马德拉斯发现了新菌型O139霍乱弧菌
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11.12.2020
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疑似菌落初步鉴定：
7.庆大平板培养18-24h后挑取可疑菌落进行动力观察， 如动力阴性，可进行最终阴性报告，如下图。
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23
11.12.20ห้องสมุดไป่ตู้0
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24
• 注意：
• 1.动力试验阴性，无需进行血清制动试验。 • 2.任何一次动力阳性，都需进行血清制动试验并

霍乱检测课件

霍乱检测课件

抵抗力
水中存活20天 怕酸耐碱 庆大霉素耐药 消毒 漂白粉：吐泻物（1：4）,1hr
二、临床意义
致病物质 • 侵袭力： 鞭毛 菌毛 • 霍乱肠毒素（cholera enterotoxin ,CE)
A1肽链
具有激活腺苷酸环
霍 乱 肠 毒 素
1个A亚单 毒性
位 单位 A2肽链
化酶的酶活性
结合B亚单位； 参与转位
生物学性状
具有嗜盐性，氯化钠的最适浓度为3.5%；
增菌培养基: 1%NaCl碱性蛋白胨水或 4%NaCl蛋白胨水 TCBS琼脂: 菌落圆形、隆起、光滑、湿润、不透明， 蓝绿色 SS琼脂： 2-3mm，扁平、无色、半透明、蜡滴状， 菌落不易挑起 我妻琼脂培养集: β–溶血(神奈川现象，KP)
培 养 特 性
cholerae)
• 到目前为止共发生了七 次霍乱世界大流行
流行情况 1817-1923年 六次大流行 （均从印度恒河三角洲发源地） 古典生物型
1961年
第七次大流行 El Tor生物型
亚洲流行（印度、盂加拉、泰国） O139群
1992年
一、生物学特性
形 态 与 染 色
• 革兰氏染色阴性 • 弧型或逗点状,米泔水样粪便涂片镜检：可见
霍 乱 红 反 应（cholera red test）
硝酸盐 色氨酸 亚硝酸盐 靛基质
红色
浓硫酸
5. 分型鉴定
(1) 使用小川型及稻叶型的单价血清作玻片凝集反应 小川型单价血清凝集 小川型 稻叶型 彦岛型 稻叶型单价血清
+
+
+ +
(2)古典型和埃尔托型的鉴别
我国流行以El Tor、小川型霍乱弧菌为主

【传染病学】霍乱PPT课件

【传染病学】霍乱PPT课件
•2、特异性血清制动实验：依次加入01群抗血 清-0139抗血清停止运动
— 早期快速诊断的主要参考
实验室检查（3）
3、培养和分离： 病原诊断：PH8.6碱性蛋白胨增菌后培养 -----确诊、鉴定与分离
4、核酸检测：CTxA TcpA (PCR) o139 5、霍乱弧菌快速辅助检测：胶体金快速检测
不典型OⅠ群霍乱弧菌：可被01群血清凝集，但不产生 肠毒素，无致病性。
病原学（2）
抵抗力：
古典型在外环境抵抗力弱，埃尔托型对 外环境抵抗力强， 易形成流行
两型对热、干燥、酸和一般消毒剂均敏 感，胃酸4分钟杀灭。
自然环境中存活时间较长，河海井水埃 尔托型可存活1-3周，粘附于藻类和甲壳 类动物，存活时间更长，长达1年
液体种类：
5：4：1即含氯化钠5g，碳酸氢钠4g，氯化钾1g， 葡萄糖20g
如： 0.9%氯化钠550ml 1.4%碳酸氢钠300ml
10%氯化钾10ml, 10%葡萄糖140ml
注意：幼儿肾功能排钠功能差，其比例常调整 为氯化钠2.65g，碳酸氢钠3.75g，氯化钾1g，葡 萄糖10g
补液量 ： 最初24h补液量
霍乱疫苗接种 保护率低：50% - 80% 有效时间短：3-6个月
流行特征：流行性（散发和暴发）、地方
性（印度）、 季节性（夏秋季节7-10月） 流行地区：两广，江浙沪一带
O139的特点：
有荚膜， 能在无NaCL或30g/L NaCL蛋白胨生长 发病无家庭聚集性 以成人为主 男性多于女性 主要经水和食物传播 新流行菌株，普遍易感 霍乱菌苗无保护作用
尿液检查：• 比重1.010 ~ 1.025 • 蛋白、红细胞、白细胞及 管型
粪常规：少许粘液 白细胞 红细胞

霍 乱 PPT课件

霍 乱 PPT课件
霍乱
cholera
广东医学院传染病学教研室 主任医师 张武英 P178
[概述] [病原学] 霍乱弧菌 一. 形态 O1群G-弧形或逗点状
O139血清形,荚膜囊较薄
菌体一端有 一根单鞭毛
二．分类 WHO腹泻控制中心将其分为： A生．物O型1群。霍乱弧菌:古典生物型和埃尔托
B．不典型O1无致病性，不产生肠毒素。 C孟．加非拉O流1群：其中O139血清型是1992年于
根据其O抗原由3种抗原因子。 A，B，C组成，又可分三个血清型:
小川型（A.B） 稻叶型（A.C） 彦岛型（A.B.C）
毒素： 肠毒素（即霍乱毒素Cholera foxin , CTX）
是致泻毒素中最为强烈的毒素， 不耐热，56℃，30分钟被破坏。 神经氨酸酶 血凝素 内毒素 五．抵抗力 对干，热消毒剂均敏感，煮沸1~2分钟可 杀死，在正常胃酸仅存活4分钟。
[预防] 一．控制传染源 二．切断传播途径 三．提高人群免疫力
谢谢
B． 静脉补液:用于中度、重度脱水病人。 中度：4000—8000 ml / d 重度：8000—12000 ml / d 输液原则
1． 三定：定脱水程度，脱水性质，及输液速度。 2． 先快后慢，先盐后糖，先浓后淡，重症补碱，及
时补钾。
C.输液计划
输液量
液体性质 输入速度
轻度脱水：
早期等张液
小儿70—80ml/kg
毒素行基时因发。现的弧菌，含有与O1群相同的
三．培养
O1和O139血清型在普通培养基中生长好， 在碱性培养基生长繁殖更快，
Ph8.4~8.6碱性蛋白胨水中,可快速增菌。
四．抗原结构和毒素
霍乱弧菌有菌体抗原O,特异性高，耐热。 鞭毛抗原H, 所有霍乱弧菌有相同的H抗原， 不耐热。 O1群霍乱弧菌

2024年度霍乱ppt课件

2024年度霍乱ppt课件

抗菌治疗
作为液体疗法的辅助治疗，能 减少腹泻量和缩短排菌期。可 根据病原菌的种类和药敏试验 结果选择抗菌药物。
2024/3/24
12
预防措施及策略
01
02
03
控制传染源
及时发现患者和带菌者， 予以隔离和治疗。对密切 接触者进行医学观察，及 时发现和治疗续发病例。
2024/3/24
切断传播途径
加强饮水消毒和食品管理 ，确保用水安全。改善卫 生设施，提高环境卫生水 平。
心律失常
严重脱水和电解质紊乱可导致心 律失常，如室性心动过速、房颤 等。治疗时应积极纠正脱水和电 解质紊乱，同时给予抗心律失常
药物。
休克
严重脱水、酸中毒和感染可引起 休克，表现为血压下降、四肢湿 冷、脉搏细速等。治疗时应迅速 补充血容量，给予升压药物和抗
休克治疗。
2024/3/24
17
患者心理干预与支持
作提供依据。
2024/3/24
提高公众认知
加强霍乱防治知识宣传，提高 公众对霍乱的认识和自我防护 能力。
强化医疗救治
加强医疗机构对霍乱患者的救 治能力，提高治愈率，降低病 死率。
推进疫苗研发与应用
加大霍乱疫苗研发力度，提高 疫苗保护效果，扩大疫苗接种
覆盖面。
25
未来研究方向及挑战
深入研究霍乱弧菌的致病机制
完善霍乱疫苗研究
进一步揭示霍乱弧菌的致病机理，为药物 研发和临床治疗提供新思路。
针对现有疫苗的不足，研发更加安全、有 效、便捷的霍乱疫苗。
加强国际合作与交流
应对气候变化对霍乱传播的影响
加强全球范围内的霍乱防控合作与交流， 共同应对霍乱疫情的挑战。
关注气候变化对霍乱传播的影响，制定适 应性策略以应对未来可能出现的疫情。

医学检验·检查项目：霍乱弧菌检测_课件模板

医学检验·检查项目：霍乱弧菌检测_课件模板
医学检验·各论 霍乱弧菌检测 内容课件模板
医学检验·各论ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ霍乱弧菌检测 >>>
简介： 霍乱弧菌检查常规方法是：直接涂片、
染色检查、动力观察制动试验。
医学检验·各论：霍乱弧菌检测 >>>
临床意义：
阳性结果的临床分析：显微镜检查可 作为快速诊断的参考。革兰染色镜检可见 典型革兰阴性弧菌。悬滴暗视野检查可见 穿梭样活泼运动。免疫制动试验阳性，具 有重要参考意义。上述结果只能做出初步 诊断，最后的确诊仍需以培养结果为准。 阳性：见于霍乱。
医学检验·各论：霍乱弧菌检测 >>>
相关疾病： 霍乱样综合征、非霍乱弧菌感染、霍乱、 非01霍乱弧菌肠炎。
谢谢！
医学检验·各论：霍乱弧菌检测 >>>
正常值： 未检出霍乱弧菌。
医学检验·各论：霍乱弧菌检测 >>>
相关检查： 粪便寄生虫、乙状结肠镜检查、粪便粘液、 粪便酸碱度（粪便pH）、粪便白细胞、纤 维结肠镜检查。
医学检验·各论：霍乱弧菌检测 >>>
相关症状： 水泻伴低血钾、代谢性酸中毒、脱水、急 性肾衰竭、指纹皱瘪。

霍 乱 ppt课件

霍 乱 ppt课件
印度是世界古典型霍乱的地方性疫源地， 印尼的苏拉威西岛是El-Tor型霍乱的地
方性疫源地。
印度是世界O139霍乱的地方性疫源地
〔2〕 O139流行特征： 疫情来势猛，传播快，病
例散发，无家庭聚集现象。与 O1群无交叉免疫力。
其余情况与O1群相似。
(3)季节性与周期性： 在热带地区全年可发病。我 国以夏秋季为流行季节，高峰 期7～8月。
尿液呈酸性，比重1.010～1.025， 有尿蛋白，RBC及WBC管型。
3、粪便检查：
(1)常规检查 (2)细菌学检查： ①粪便直接检查：粪便悬滴镜检：G-、
流星样运动 ②粪便培养(甲Ⅱ)
4、血清学检查
抗菌抗体和抗毒抗体的检测。〔病后第5 日出现〕
1.凝集试验：病程2周效价1：100有意义。 2.杀弧菌试验：效价1：32或双份血清抗体效价4倍以上增
霍乱的确诊依靠粪便培养阳性
或其他特异检查。
疑似诊断：
①有典型症状，但病原学检查未确定 者。 ②流行期间有明显接触史，且发生泻 吐症状，不能以其他原因解释者。
根据细菌培养结果确立 或排除诊断。
每日作粪培养，如3次阴性，且血清学检 查2次阴性，可否定诊断。
鉴别诊断
1.急性胃肠炎 2.急性细菌性痢疾 3.大肠杆菌性肠炎
四、发病机制和病理生理
〔一〕发病机制及病生
小肠碱性环境
↓
霍乱弧菌 → 粘附肠粘膜后大量繁殖－
→产生霍乱肠毒素及释放内毒素〔弧菌崩 溃时〕
霍乱肠毒素
|
受 体 （小肠粘膜细胞膜） 腺苷环化酶
|
ATP—>cAMP
| 腺细胞分泌功能增加
| 肠液分泌增加
1、霍乱肠毒素激活细胞cAMP系 统而引起小肠过度分泌。

《霍乱监测与防控》课件

《霍乱监测与防控》课件

总结经验教训
分析防控工作中的问题和不足，总结经验 和教训。
加强国际合作
与国际社会加强合作，共同应对霍乱的挑 战，分享防控经验和资源。
04
霍乱疫情的ห้องสมุดไป่ตู้对
疫情的发现与报告
总结词：及时发现和报告霍乱疫情是防 控工作的关键。
加强疫情报告制度，确保信息传递的准 确性和及时性。
提高基层医务人员的疫情识别能力，确 保疑似病例能够及时上报。
监测系统的运行机制
监测系统应建立完善的组织架构和运行流程，确保各个环 节之间的有效衔接和信息畅通，同时应加强培训和演练， 提高应对能力。
监测的主要内容与方法
病例定义与报告
明确霍乱病例的定义 和报告标准，建立病 例报告制度，确保病 例信息及时上报。
流行病学调查
对病例进行流行病学 调查，了解病例的发 病时间、地点、人群 分布等信息，分析疫 情趋势和传播途径。
作提供科学依据。
疫情的宣传教育与心理疏导
总结词：提高公众对霍乱 的认知和预防意识，减轻 恐慌情绪。
详细描述
通过各种媒体渠道宣传霍 乱的防控知识和预防措施 。
加强学校和社区的健康教 育，提高公众的自我保护 能力。
对受疫情影响的人群提供 心理疏导，帮助他们缓解 焦虑和恐慌情绪。
05
国际合作与交流
国际合作的重要性与必要性
加强技术合作与支持，共同攻克技术难题 ，提高防控工作的科技含量。
加强疫苗研发与分发的国际合作，提高疫 苗的可及性和接种率。
THANKS
感谢观看
霍乱的传播与气候、地理、社会经济等因素密切 03 相关，在发展中国家和地区尤为常见。
霍乱的危害与影响
01 霍乱是一种烈性传染病，可导致严重腹泻、呕吐 、脱水、电解质紊乱甚至死亡。

霍乱弧菌实验室检验技术PPT课件

霍乱弧菌实验室检验技术PPT课件
骨可以改善融合率。加拿大一项 4 年的研究结果发现
rhBMP-2的融合率（94％）高于髂骨植骨组（69％）。另
一项研究发现联合应用 “ INFUSE ” + 自体髂骨”可以提
高椎间融合率（> 95％）。65岁以上的老年患者与年轻患
者使用rhBMP-2，二者的并发症发生率并没有太大差异。
+ 椎间盘置换术
在过去的几年内，有2种新型的人工椎间盘装置获得了美国
FDA 的批准，其适应症是单节段脊髓神经根病，还有1种装置同
时适用于单节段或者双节段的病变。这3种人工椎间盘装置的临 床功能预后和安全性和其他已经批准上市的人工椎间盘类似。
+ 椎间盘置换术
已获得上市的人工椎间盘 7-9 年的随访显示其具有较好的预 后，和融合手术相比，其邻近节段退变而导致的再手术率较低。
但是，人工椎间盘也有其潜在的缺点，如边缘撞击造成的椎间盘
装置磨损，由此而形成的磨损碎屑的炎症反应等，目前报道这类
并发症的发生率较少。美国医疗保险数据库的调查发现，使用人
工椎间盘的花费要少于融合手术，可能与术后较少的再手术率和 术后较少的费用相关。
+ 2013 年脊柱生物学研究的焦点在重组人骨形态发生蛋白
+ 过去数十年间，有3种人工椎间盘获得了相关监管机构的批
准，其长期随访取得了较为满意的结果。
+ 脊髓型颈椎病
Fehling 等人报道一项对 222 例脊髓型颈椎病患者进行了术后 1 年随访的多中心观察研究，结果发现术后疼痛、功能、步态、 生活质量等可以获得较好的改善。 作者认为：前后路手术效果无显著差异；多因素分析显示， 临床功能预后较差有关的因素包括：症状持续时间长，术前较差 的基础功能，合并有精神疾病，严重步态障碍，较高的年龄等。

霍乱弧菌实验室检验技术PPT医学课件

霍乱弧菌实验室检验技术PPT医学课件
2024/1/24
快速诊断初步报告
1、快诊断实验阳性者同时涂片染色和悬 滴法观察，如镜检为革兰染色阴性弧菌 或悬滴细菌呈“鱼群穿梭样”运动，氧 化酶试验阳性，可作初诊报告。为开展 疫情处理提供依据；
2024/1/24
制动试验
暗视野/相差显微镜直接镜检，水样便滴 在玻片上，可见流星状动力的细菌；当 加入01/0139免疫血清后，运动停止即凝 集成块，根据这种特殊动力和制动试验， 可提早做出初步诊断。
注意：免疫血清使用浓度1：64，并尽可 能不加防腐剂
2024/1/24
胶体金免疫层析快诊
采用胶体金免疫层析双抗体夹心法， 检测标本中霍乱弧菌。以胶体金作 为标记物，交联抗霍乱弧菌单克隆 抗体，与样品中的霍乱弧菌结合。 形成双抗体夹心一步法，呈现出目 测可见的红色条带，显色程度与抗 原含量成正比。
霍乱实验室检测技术
2024/1/24
内容
一、霍乱概述 二、霍乱病原学 三、霍乱弧菌常规检验 四、霍乱弧菌的快速诊断 五、霍乱弧菌的噬菌体-生物分型 六、霍乱菌株的管理、保存与上送
2024/1/24
一、霍乱概述
霍乱是由01群和0139群霍乱弧菌 （V．cholerae）引起的急性肠道传染 病，发病急、传播速度快、波及范 围广、危害严重的甲类传染病。
增菌/二次增菌分离培养 所有粪便标本都 应接种碱性蛋白胨水培养基，放37℃增 菌6～8h后，从菌膜下表层取一接种环培 养物，划线接种于强选择性碱性琼脂和 TCBS琼脂平板各两个。必要时进行二次 增菌
2024/1/24
疑似菌落初步鉴定：
每个碱性琼脂、TCBS琼脂平板上各挑取 5个以上(少于5个的全部挑取)疑似菌落接 种于营养琼脂平板/营养琼脂斜面或克氏 双糖置37℃18-24h纯培养(即每份样品至 少从2个分离平板上获得约10株可疑菌落 菌株)，取斜面纯培养物进行血清鉴定、 并涂片进行革兰氏染色及氧化酶试验等。

霍乱弧菌检测ppt

霍乱弧菌检测ppt

A、C
异型 中间型
小川型（Ogawa）
彦岛型 （Hikojima）
A、B A、B、C
-
非O1群霍乱弧菌
O139群霍乱弧菌 1992年，在印度印度马德拉斯、泰米尔纳
德发生的霍乱疫情，分离到的菌株不与O1 群霍乱血清凝集，但是引起O1群霍乱的典 型症状。引起WHO重视，定为O139群霍乱弧 菌，被认为下一次霍乱大流行主角。
-
疑似菌落鉴定基本要求：
分别从庆大霉素琼脂或TCBS 琼脂、碱性琼脂 平板上各挑取5 个以上的（少于5 个的全部挑取）
疑似菌落接种于营养琼脂斜面置37℃18-24h 纯培养（即每份样品至少从4 个分离平板上获 得约20 株可疑菌落菌株），取斜面纯培养物 进行O1 群及O139 群霍乱诊断血清玻片凝集试 验，血清凝集阳性的菌株继续相关的系统鉴定 并报告结果。必须注意同一样品中O1、O139群 霍乱弧菌可能同时存在，有必要对所有选出的
TCBS 琼脂平板和一个碱性琼脂平板进行划线 分离培养。 同时，以无菌吸管吸取0.2-0.5ml 增菌液接种 到新的碱性蛋白胨水中，进行二次增菌培养后， 再如上述步骤进行划线分离培养。 特别强调所有环境样品的增菌分离培养步骤必 须包括上述二次增菌和强、弱双平板分离。
-
鉴定
TCBS上出现黄色菌落，4号琼脂或庆大霉素 平板上出现灰褐色中心的菌落，均为可疑 菌落，应使用O1群和O139群霍乱弧菌的多 价和单价抗血清进行玻片凝集试验，结合 菌落特征和菌体形态，作出初步报告。
El Tor霍乱弧菌为主。
-
霍乱弧菌古典生物型和 El-Tor生物型的区别
特征
古典生物型
羊红细胞溶血
-
鸡红细胞凝集
-
VP 试验

霍乱等感染性腹泻实验室检测技术课件

霍乱等感染性腹泻实验室检测技术课件
➢ 2、做协同凝集试验所用的标本，应是水样便 或经增菌后的培养物，不可用大便直接作凝集， 以免影响结果判断。
➢ 3、本品应放于4℃冰箱保存。用前需先作上 述质量检查。
2020/12/5
霍乱等感染性腹泻实验室检测技术
13
假阳性出现多原因：（2%）
1、大便内有杂质、非特异性物质的存在。
2、操作不当：
• a、切勿直接用大便做凝集反应。
霍乱弧菌与有关细菌的鉴别见手册P54-57。
2020/12/5
霍乱等感染性腹泻实验室检测技术
16
噬菌体分型：
根据5株国内分离的弧菌噬菌体（VP1-VP5） 将埃尔托型霍乱弧菌分成32个噬菌体型。对5株 噬菌体全敏感的噬菌体1型菌株是最常见的流行 株，但并非所有噬菌体1型菌株均为流行株。
2型主要是1型的粗糙型，3-6型也属流行株范 畴。7型以后属非流行株，对5株噬菌体全抵抗的 是32型。非流行株仅引起散发病例，是一些疫区 和非疫区自然水体中的主要菌型。
霍乱等感染性腹泻实验室检测技术
18
O139群霍乱弧菌和O1群弧菌特性对比
相关特性
O139群弧菌
O1群弧菌
抗原构造*
有荚膜
无荚膜
分泌肠毒素
均产生霍乱肠毒素，产毒量为1080ng/ml
（O139群在抑制状态也可恢复产毒能力）
氯霉素、红霉 素、庆大霉素
敏感
耐 链霉素、磺胺、
药 复方新诺明
性
四环素
耐药 敏感
1. 肠道致病性大肠杆菌 (EPEC):
EPEC是最早被认识的腹泻性大肠埃希氏杆菌,其
生化特性与一般大肠杆菌相同, 如分解葡萄糖产
酸并产气,发酵乳糖和蔗糖,靛基质和甲基红试验室 诊断主要靠血清学。
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霍乱弧菌的分离与鉴定 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
1、样本的采集
患者的粪便、呕吐物、肛拭子为必须标本。
水样便或呕吐物采样量一般为1mL-3mL，成型 便采取指甲大小的粪量；肛拭子可用直肠棉拭 或采便管由肛门插入直肠内3cm-5cm处旋转 后取出。
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4、菌株鉴定
4.1 染色
O1群霍乱弧菌为革兰阴性、弯曲呈弧状，无芽孢， 无荚膜，菌体两端钝圆或稍平，单端鞭毛；
O139群霍乱弧菌的形态及运动与O1群霍乱弧菌 近似，但是O139群霍乱弧菌菌体周围有一层比较 薄的荚膜。
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4、菌株鉴定
霍乱弧菌纯培养的镜下形态（革兰染色）
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4、ห้องสมุดไป่ตู้株鉴定
4.2 玻片凝集试验
取纯培养物与O1群霍乱弧菌诊断用单克隆抗 体或O1群多价诊断血清及O139群霍乱弧菌诊断 用单克隆抗体或诊断血清做玻片凝集试验。
2、样本的送检
采得的标本应立即接种于培养基，不能立即接种 的，应放入PH值8.8-9.0碱性蛋白胨水或文腊二 氏保存液或插入Carry-Blair半固体保存培养基 中送检。 标本与保存液的比例约为1:5。
病人标本含有大量病菌，标本装入试管或小瓶时， 注意勿污染容器口外壁，必须妥善包装，运送中 注意安全。
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
霍乱的实验室检测
一 霍乱弧菌的分离与鉴定 二 霍乱实验室诊断的相关实验技术
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
霍乱弧菌的分离与鉴定
1、样本的采集 2、样本的送检 3、分离培养 4、菌株鉴定
3、分离培养
强选择性培养基：庆大霉素琼脂，TCBS琼 脂和四号琼脂等 弱选择性培养基：碱性营养琼脂
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3、分离培养
不同选择培养基上生长的霍乱弧菌典型菌落特征：
碱性营养琼脂：较大，无色，圆形，透明或半透明、表面光 滑、湿润、扁平或稍凸起、边缘整齐，水滴状，菌落直径一 般约为2mm
霍乱实验室诊断的相关实验技术 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
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霍乱实验室诊断的相关实验技术
1、霍乱弧菌基因PCR检测
霍乱毒素是霍乱弧菌主要的致病因子，在霍乱诊断 上霍乱毒素基因（ctxAB）的PCR检测具有重要 的诊断价值。
特异性和灵敏度均较高， 需符合PCR试验条件的实验室， 需要严格的核酸提取操作， 直接检测是否为产毒株。
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4、菌株鉴定
4.4 菌株复核
经初筛阳性或可疑阳性的菌株，应尽快送当地疾病 预防控制中心进行复核鉴定。
复核结果符合O1群或O139群霍乱弧菌的菌株， 按菌株管理的要求进行保存与上送；如复核结果出 现疑问，应尽快将菌株上送省级或省级以上CDC进 行确认分析。
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3、分离培养
増菌后的分离培养： 所有标本均应接种碱性蛋白胨水培养基，
37℃増菌6h-8h。 从菌膜下表层取一接种环培养物，划线接种
于强、弱选择培养基各一个，37℃培养18h24h。
必要时进行二次増菌。
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3、分离培养
直接分离培养： 对急性期患者水样便标本，在进行増菌培养
的同时可取一接种环或用肛拭子直接接种在选择 性培养基上，37℃培养18h-24h。
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4、菌株鉴定
4.4 菌株复核 菌株的复核鉴定应以纯培养物为基础，至少应包括 以下项目：血清凝集试验与血清分型、革兰染色、 黏丝试验、氧化酶试验、动力试验。
生化反应： 葡萄糖（+）、麦芽糖（+）、 阿拉伯胶糖（-）、氧化酶（+）、 DNA酶（+）、霍乱红（+）
庆大霉素琼脂和四号琼脂：透明性略差，多呈半透明状，菌 落中央常呈灰色或灰黑色，并随培养时间的延长而加深
TCBS琼脂：黄色发亮，表面光滑、润湿、稍凸起、边缘整 齐
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3、分离培养
霍乱弧菌在TCBS琼脂平板上的菌落特征（18h-24h）
剩余菌落亦可用来做单价血清的玻片凝集，以 确定血清型。
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4、菌株鉴定
4.2 玻片凝集试验
生长在TCBS上的疑似菌落常因培养基中蔗糖 的影响造成难于乳化，不能直接进行玻片凝集试验。
要注意同一标本存在O1群和O139群等多个 血清群霍乱弧菌混合的可能，每份标本至少挑选5 个以上的疑似菌落逐一进行鉴定。
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4、菌株鉴定
4.3 氧化酶试验
试剂：1%盐酸对氨基二甲苯胺或盐酸二甲基对苯 二胺水溶液
试验方法：取生长在非选择性培养基上的新鲜培养 物涂抹在清洁的滤纸上，然后滴加上述试剂，如培 养物在1-2min内出现粉红-紫红-紫蓝色，有的最 后呈紫黑色，判断为氧化酶试验阳性；培养物不显 色判为阴性。