6-流动相

离子色谱常见问题及对策离子色谱(HPIC)仪作为一种有效分离检测离子的分析仪器,在水质分析实验中已广泛应用。

这种高效分离痕量离子的检测仪具有分析速度快、检测灵敏度高、选择性好,并且可同时检测多种离子的优点。

【离子色谱的特点】不同的操作者都可得到好的样品分析重现性；经过稀释、过滤后可以测定多种样品；多价态可氧化元素（NO2﹣&NO3﹣，SO32-&SO42-等）；不同价态离子（Fe3+&Fe2+,Cr3+&Cr6+等）；可单独测定某种离子（通常为同时测定）。

应用领域广泛离子色谱常见问题类型 A. 压力异常（偏高、波动）； B. 漏液； C. 保留时间漂移； D. 基线问题（漂移、噪声）； E. 峰形异常。

一、常见故障排除及原因分析－压力异常现象：无压力，流动相不流动可能原因1、保险丝断或电源问题2、柱塞杆折断3、泵头内有空气或流动相不足4、单向阀损坏或单向阀上粘附固体颗粒5、漏液6、压力传感器损坏(流动相流动正常，但无压力) 现象：压力持续偏高或不断上升1、流速设定过高2、保护柱或色谱柱筛板堵塞3、流动相使用不当或有缓冲盐析出4、色谱柱选择不当5、进样阀损坏或堵塞6、线路过滤器堵塞7、管路拧的过紧堵塞现象：压力持续偏低1、流速设定过低2、色谱柱选择不当3、柱温过高4、系统漏液现象：压力波动可能原因1、泵头中有气泡2、单向阀损坏3、柱塞密封圈损坏4、脱气不充分5、系统漏液6、使用了梯度洗脱－漏液接头处漏液1、接头处松动2、接头磨损3、部件不匹配泵漏液1、单向阀松动2、泵密封损坏3、排液阀损坏4、接头松动（不要拧的太紧）进样阀漏液可能原因1、转子密封损坏2、定量环堵塞3、进样口密封松动4、进样针尺寸不合适5、废液管产生虹吸6、废液管堵塞检测器漏液可能原因1、手紧接头处漏液2、废液管堵塞3、流通池堵塞－保留时间漂移可能原因1、柱温或室温变化2、流动相组分变化3、色谱柱没有平衡4、流速变化5、泵中有气泡6、流动相选择不当－基线问题基线漂移可能原因1、温度波动2、流动相不均匀(脱气，使用纯度更高的试剂) 3、电导池被污染或有气泡4、流动相配比不当或流速变化5、柱子平衡（约30－60min）6、流动相污染，变质或由低品质试剂配成7、样品中有强保留的物质以馒头样峰被洗出基线噪声（规则的）可能原因1、流动相、泵、检测器中有气泡2、有地方漏液3、流动相混和不均匀4、温度影响（环境温度波动太大）5、其他电子设备的影响基线噪声（不规则的）可能原因1、流动相污染、变质或由低质溶剂配成2、有地方漏液3、流动相各溶剂不相溶或混和不均匀4、电导池污染5、电导池内有毛刺6、系统内有气泡－峰形异常前沿峰、拖尾峰可能原因1、柱塞板堵塞2、色谱柱塌陷3、柱外效应4、干扰峰5、平衡不足或不合适6、重金属污染7、样品溶剂选择不当8、样品过载9、柱温过低分叉峰可能原因1、保护柱或分析柱污染2、样品溶剂不溶于流动相峰展宽进样体积过大流动相粘度过高检测池体积过大保留时间过长柱外体积过大样品过载峰变形可能原因1、样品过载2、样品溶剂选择不当鬼峰1、进样阀残余峰2、样品中未知物3、柱未平衡4、水污染—离子分离度不好原因分析一:淋洗液浓度选择不当。

酚类化合物的测定----液相色谱分析法1 范围1.1 本法规定了液相色谱法测定水中苯酚、4-硝基酚、3-甲基酚、2，4-二氯酚、2，4，6-三氯酚和五氯酚。

1.2 本法适用于生活饮用水、地下水和地表水中苯酚、4-硝基酚、3-甲基酚、2，4-二氯酚、2，4，6-三氯酚和五氯酚的测定。

1.3 本法的最低检测质量浓度：取水样1.0L，固相萃取后溶剂洗脱，定容1.0mL，进样体积40μL，最低检测质量浓度（μg/L）见下表。

最低检测质量浓度酚类苯酚4-硝基酚3-甲基酚2，4-二氯酚2，4，6-三氯酚五氯酚Sp i，μg/L 0.16 0.032 0.15 0.093 0.14 0.072 0.61 0.12 0.56 0.35 0.54 0.272 原理用固相小柱吸附水中酚类化合物，然后用溶剂洗脱，经氮吹气浓缩至一定体积后，用反相高压液相色谱法分析。

在反相色谱柱上以甲醇/（水+乙酸）为流动相把经预处理的酚类化合物分离，用二极阵列检测器或紫外检测器，测定各种酚的峰高或峰面积，以外标法定量。

3 试剂3.1 流动相3.1.1 甲醇：HPLC级，经0.22μm滤膜过滤。

3.1.2 高纯水：经0.22μm滤膜过滤。

3.2 标准物酚类标准储备液各组分浓度（μg/mL）苯酚2004-硝基酚503-甲基酚2002，4-二氯酚2002，4，6-三氯酚200五氯酚2003.3 四氢呋喃：重蒸馏。

3.4 正己烷：重蒸馏。

3.5 硫酸：0.5mol/L。

3.6 冰乙酸。

3.7 无水亚硫酸钠。

4 仪器4.1 高效液相色谱仪：可编程紫外检测器。

4.2 微量注射器：50μL、100μL。

4.3 色谱柱：C18或C8柱。

4.4 化学工作站。

4.5 尖底浓缩瓶：10ml具刻度。

4.6 富集柱。

5 样品5.1 水样采集及贮存方法：样品应贮于棕色玻璃瓶中避光，用硫酸调pH至＜2，冷冻保存，应尽快过柱，检测。

5.2 样品的预处理5.2.1 富集柱的活化：首先用10~15ml甲醇活化，再用30ml纯水活化，然后浸在纯水。

资料整理6-ba的基本情况1.⾖芽质量安全的关键影响因素分析及对策：1.1 ⽬前情况：本⽂做了⼤量的实验，进⾏数据分析，讨论得出了研究结果，⼀是运⽤⽓相⾊谱-质谱技术开展了⾖芽中农药残留的检测分析⼯作，结果表明⾖芽中马拉硫磷、对硫磷、甲拌磷、久效磷、甲胺磷、氧化乐果等农残合格率100%。

⼆是运⽤液相⾊谱-质谱联⽤技术开展了⾖芽中的添加剂指标的检测分析⼯作，该⽅法采⽤有机溶剂盐析提取⽬标物和质谱负模式检测技术，有效提取⽬标物，去除杂质⼲扰，适合于市场样品实际检测，经检测6-苄基腺嘌呤与4-氯苯氧⼄酸钠合格率分别为96.4%和76.7%。

三是运⽤原⼦荧光和微波消解前处理技术开展了⾖芽中总砷的检测分析⼯作，经对市场35 个⾖芽样品的实际检测，结果表明合格率为100%，未检出总砷超标的⾖芽样品。

四是运⽤紫外可见分光光度法检测分析了⾖芽中亚硝酸盐和亚硫酸盐的含量情况，其中亚硝酸盐合格率89.7%、亚硫酸盐合格率为53.2%，这两项指标是影响上市⾖芽质量的主要因素，同时，从不同单位⾖芽产品的检测结果来看，⼩作坊⽣产企业⾖芽合格率整体较低，安全隐患较⼤，⽽品牌⾖芽的质量相对较好。

综合分析各实验数据，本⽂找出了影响⾖芽质量安全的主要指标，为⽣产质量管理、市场执法监督、群众放⼼消费提供了数据⽀持。

1.2 ⽣产引⼊的污染物及危害1.2.1 ⽣长调节剂的概述（主要作⽤、限制⽤量、物理性质、化学性质、作⽤机理、毒理范围）6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧⼄酸钠俗称AB 粉，是⾖芽⽣产使⽤的2 个主要添加剂，主要作⽤是促进⾖芽⽣长、抑制长根，提⾼产量。

国家标准GB2760《⾷品添加剂使⽤卫⽣标准》规定⾖芽中4-氯苯氧⼄酸钠残留量⼩于 1.0mg/kg、6 苄基腺嘌呤残留量⼩于0.2mg/kg。

6-苄基腺嘌呤（6-Benzylaminopurne）分⼦式C12H11N5，相对分⼦质量225.25。

⽩⾊微针状结晶或类⽩⾊粉末，难溶于⽔，可溶于酸、碱，在酸性、碱性条件下均稳定。

HPLC使用注意事项及HPLC柱子使用经验之谈HPLC使用注意事项1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um 或更细的膜过滤)。

2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。

3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。

4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。

对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。

5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。

6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。

7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。

8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。

清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。

9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。

10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。

11.要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。

12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。

更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。

高效液相色谱常见故障的断定及解决诊状可能的原因解决方法(一)保留时间变化1.柱温变化柱恒温，必要时需配置恒温箱2.等度与梯度间未能充分平衡至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够用》25mmol/L的缓冲液4.柱污染每天冲洗柱5.柱内条件变化稳定进样条件,调节流动相6.柱快达到寿命采用保护柱(二)保留时间缩短1.流速增加检查泵,重新设定流速2.样品超载降低样品量3.键合相流失流动相PH值保持在3"7.5检查柱的方向4.流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀5.温度增加柱恒温(三)保留时间延长1.流速下降管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡2.硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化3.键合相流失同前(二)34.流动相组成变化同前(二)45.温度降低同前(二)5(四) 出现肩峰或分*1.样品体积过大用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%2.样品溶剂过强采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件4.柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品5.进样器损坏更换进样器转子(五)鬼峰1.进样阀残余峰每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知物处理样品3.柱未平衡重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) 每天新配,用抗氧化剂5.水污染(反相) 通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水(六) 基线噪声1.气泡(尖锐峰) 流动相脱气,加柱后背压2.污染(随机噪声) 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂3.检测器灯连续噪声更换氘灯4.电干扰(偶然噪声) 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)5.检测器中有气泡流动相脱气,加柱后背压(七)峰拖尾1.柱超载降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰清洁样品,调整流动相3.硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品4.同前(四)4 同前(四)45.同前(四)3 5.同前(四)36.死体积或柱外体积过大连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管7.柱效下降用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱(八)峰展宽1.进样体积过大同(四)12.在进样阀中造成峰扩展进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢设定速率应是每峰大于10点4.检测器时间常数过大设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高增加柱温,采用低粘度流动相6.检测池体积过大用小体积池,卸下热交换器7.保留时间过长等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.柱外体积过大将连接管径和连接管长度降至最小9.样品过载进小浓度小体积样品液相色谱柱使用经验谈色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。

一、概述六氟异丙醇（HFIP）是一种常用的溶剂，具有良好的流体性能和溶解性能。

它被广泛应用于色谱分析中，特别是在凝胶渗透色谱（GPC）中作为流动相。

在GPC分析中，参数k和a值是评价六氟异丙醇流动相性能的关键指标。

二、六氟异丙醇的物理性质1. 分子结构：六氟异丙醇的分子式为C3HF6O，是一种具有氟原子取代的异丙醇。

其化学结构稳定，具有良好的溶解性和稳定性。

2. 流体性能：六氟异丙醇在常温下呈无色透明液体，在室温下也能保持流动性，适合作为色谱流动相使用。

3. 溶解性能：六氟异丙醇具有较强的溶解能力，能有效溶解大多数有机物。

三、六氟异丙醇在GPC中的应用1. 良好的分离效果：六氟异丙醇作为GPC流动相时，能有效分离高聚物和低聚物，提高分析分辨率。

2. 高灵敏度：六氟异丙醇的溶解性能和流体性能使得GPC分析具有较高的灵敏度和准确性。

3. 广泛适用性：六氟异丙醇适用于多种类型的样品，包括聚合物、生物大分子等。

四、六氟异丙醇流动相中的k和a值的意义1. k值：k值是衡量六氟异丙醇在GPC中分离效果的重要参数，它反映了溶剂对不同聚合物的溶解能力，是评价分析系统性能的重要指标。

2. a值：a值是用来表征色谱柱对流动相的亲和性和排斥性的参数，它对应着流动相在色谱柱内的传质过程和色谱分离效果。

五、影响六氟异丙醇流动相k和a值的因素1. 流动相浓度：六氟异丙醇的浓度会直接影响k值和a值，一般来说，随着浓度的增加，k值会增大，a值会减小。

2. 温度：温度对六氟异丙醇的流体性能有一定影响，当温度升高时，k 值会减小，a值可能会有所增加。

3. 流动相pH值：流动相的pH值会影响溶解性能和亲和性，从而影响k和a值的大小。

六、六氟异丙醇流动相中k和a值的测定方法1. 色谱分析法：通过色谱仪对流动相中的样品进行分析，得出k和a 值。

2. 质谱分析法：利用质谱仪对流动相的组分进行分析，进而推算出k和a值。

七、结论六氟异丙醇作为GPC流动相时，k和a值是衡量其性能的重要参数，其值的大小对分析效果具有重要影响。

高效液相流动相的选择 The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020高效液相色谱流动相选择流动相1.流动相的性质要求一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。

流动相选择1：由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。

2：三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。

这是一个聪明而又省力的办法。

调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。

3：粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。

选择流动相时应考虑以下几个方面：①流动相应不改变填料的任何性质。

低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。

碱性流动相不能用于硅胶柱系统。

酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。

②纯度。

色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。

③必须与检测器匹配。

使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。

当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。

④粘度要低(应<2cp)。

高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。

最好选择沸点在100℃以下的流动相。

⑤对样品的溶解度要适宜。

如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。

⑥样品易于回收。

应选用挥发性溶剂。

流动相的pH值采用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。