邻、间和对羟基苯甲酸的荧光性质研究及定量分析(2014.4)

食品中对羟基苯甲酸酯类的检测摘要：文章采用超声提取-高效液相色谱法同时测定食品中3种对羟基苯甲酸酯（对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯）含量的方法。

对羟基苯甲酸酯类属于防腐剂，按gb/t5009.31-2003国家推荐方法检测[1]，样品提取比较繁琐、费时，且回收效果欠佳。

本文利用较为常见的紫外检测器通过优化条件，摸索出一个简捷、快速、经济、灵敏，又能保证一定精度的测定方法。

本方法加标回收率在86.08%～112.71%之间，线性系数r>0.9998，检出限可达0.10ug/ml，分析时间短，完全能够满足分析要求，可广泛应用于食品中对羟基苯甲酸酯类检测分析。

关键词：对羟基苯甲酸酯类；高效液相色谱法中图分类号：o657.7+2 文献标识码：a 文章编号：1674-0432（2012）-10-0064-21 实验部分1.1 仪器和试剂1.1.1 仪器 shimadzu lc 10vp plus高效液相色谱系统（日本shimadzu公司），配紫外检测器及lc solution色谱工作站；分析天平：感量0.1mg；氮吹仪：美国organomation n-evap112型；均质机：ikar werke t25型均质机；溶剂过滤装置；0.45μm和0.22μm过滤膜和过滤头；milli-q超纯水机。

1.1.2 试剂甲醇、乙腈为hplc级；乙醇为分析纯；水为超纯水。

标准品：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯，纯度为99.0%，美国进口，购于上海安谱。

1.2 标准溶液的配制[2]标准贮备液：精密称取三种标准物质0.05g，用无水乙醇溶解并定容于50ml容量瓶中，配制成浓度为1mg/ml的标准贮备液，贮于4℃冰箱中备用。

标准使用液：用刻度吸管准确吸取三种标准贮备液，根据需要用无水乙醇配制成不同浓度的标准溶液系列，待用。

1.3 色谱条件色谱柱：diamonsil c18，粒度5μm，4.6mm×250mm（id×l）；检测波长：254nm；流速：1.0ml/min；进样量：20 μl；流动相：水-乙腈（体积比为45：55）；柱温：室温。

实验报告课程名称：环境监测实验实验类型：综合实验实验项目名称：对羟基苯甲酸酯类物质的测定--HPLC法、GC---白酒中酒精度的测定实验地点：环资B座实验日期：2018年12月06日一、实验目的和要求1.掌握HPLC的保留值定性方法与归一法定量2.熟悉液相色谱仪的操作过程二、实验内容和原理<对羟基苯甲酸酯类物质的测定--HPLC法>1.高效液相色谱HPLC：高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。

高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。

该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。

高效液相色谱法有“四高一广”的特点：高压、高速、高效、高灵敏度、应用范围广。

其组成包含“高压输液泵”、“色谱柱”、“进样器”、“检测器”、“馏分收集器”以及“数据获取与处理系统”等部分。

2.测定原理：在一定的实验条件下，组分的保留值保持恒定，测得的来知物的各纽分保留时间，与已知纯物质各组分的保留时间进行对照，即可确定未知物中各纽分存在与否。

这种利用纯物质对照进行定性的方法，适用于来源已知。

且组分简单的混合物。

3.归一法定量：要求试样中的各个组分都能得到完全分离。

并且在色谱图上应都能出峰，计算公式:c1=fiAi/ΣfiAi*100。

因为对羟基苯甲酸酯类属于同系物，它们在紫外光度检测器上具有相同的校正因子，故上式可简化为: c1=Ai/ΣAi*100< GC---白酒中酒精度的测定 >1. 气相色谱：气相色谱（gas chromatography 简称GC）是指用气体作为流动相的色谱法。

实验五 荧光分析法测定邻-羟基苯甲酸和间-羟基苯甲酸学号36010712 姓名 张中豪 实验日期 2009 年 3 月 16 日 第 一 组同组姓名 张雪、张琳琳、傅磊、洪延 1. 学习荧光分析法的基本原理和操作；教师评定 .【实验目的】2. 用荧光分析法进行多组分含量的测定。

【实验原理】1、荧光分析法原理：当被测物质受到光照后，被测物分子吸收了具有特征频率的辐射能，分子从基态上升到激发态，分子在较高能级的激发态时，它可能处于激发态中各种振动状态的一种。

然而由于分子通过与溶剂分子、同类分子或其他分子的碰撞，而失去振动能级，降低至激发态时的最低振动能级，在此过程中并不发光。

但当分子从激发态的最低振动能级，即第一电子激发态的最低振动能级跃迁至基态的各个不同的振动能级时，则以光的形式辐射出能量，所辐射出的光既是荧光。

荧光物质的荧光强度与其浓度、分子结构和化学环境（如体系的pH 、温度）有关。

而且与体系所吸收的激发光强度成正比，则：0()F I I =Φ−式中，F 为荧光强度；0I 为入射光的强度；I 为通过厚度为b 的介质后的光强度；Φ为量子效率，为发射的光子与吸收的光子之比。

又比尔定律可得：0(110)bc F I ε−=Φ−式中，ε为荧光分子的摩尔吸光系数；b 为液槽的厚度；c 为荧光物质的浓度。

对于很稀的溶液，投射到样品溶液上被吸收的激发光不到2%时，即bc ε<0.05时，则上式可近似写为：02.303F I bc ε=Φ当入射光强度一定时，实验条件一定时，则 ： F Kc =即在低浓度时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系，这就是荧光定量分析的基础。

荧光强度和溶液浓度呈线性关系只限于极稀的溶液，对于较浓的溶液，其吸光度超过0.05时荧光强度与浓度的线性关系将发生偏离。

2、激发光谱和发射光谱： （1）激发光谱：荧光是光致发光，因此必须选择合适的激发光波长，这可以从它们的激发光谱曲线来确定。

《分子间作用力与物质性质》教案课前预习区1. ______________________________________________ H Cl HBr HI 分子熔沸点由低到高的排列顺序为 _____________________________________________2•决定以上分子熔沸点高低的因素是什么？ 3•决定范德华力大小的因素是什么？4•写出氧族元素氢化物的熔、沸点变化趋势。

5•—定量的水变冰时体积如何变化？课堂互动区【问题探究1】请结合下列图像和数据分析下列问题:⑴为何NH 3、出0、HF 的熔沸点比同主族相邻元素的氢化物的熔沸点高呢? ⑵为什么 出0分子间能形成氢键，而 CH 4分子间难形成氢键？⑶为什么NH 3分子间能形成氢键，而 HCI 分子间难形成氢键?(4)元糸 电负性 原子半径/pm元糸 电负性 原子半径/pm F 4.0 71 CI 3.0 99 0 3.5 73 S 2.5 102 N 3.0 75 P2.1106C2.577一、氢键和物质的性质1、 氢键的特点：比化学键 _____________ ，比范德华力 __________________2、 形成氢键必备的条件⑴ ____________________________ T _____________________ ； ⑵ ------------------------------------------------- T ------------------------------------- 。

一些氢化物的沸点-150345 周期符合上述条件的X、Y原子主要是【比一比，想一想】在下列物质中分子之间能否形成氢键？若不能形成氢键，是因为不具备哪一条件？①乙醇②甲醛【问题探究2】令邻羟基苯甲酸和对羟基苯甲酸是同分异构体。

其中，邻羟基苯甲酸的熔点为159 C,对羟基苯甲酸的熔点为213C。

荧光分析法在环境有机污染物分析中的运用随着包括有机化工、医药工业以及石油等诸多化工产业的不断发展，加上各类化学药剂的广泛使用，使得有机污染物已经成为环境污染中不容忽视的重要问题。

因此，采取有效措施对有机污染物进行科学分析的意义也就日益加大。

有机污染物的分析对象包括有机氯、胺类化合物、表面活性剂、砷、汞、多环芳烃等，相应的分析检测手段也繁复多样，这其中荧光分析法因其高灵敏度，以及仪器投入资金较少等优势，逐步得到环境科研者的广泛关注。

以下文章就对包括常规荧光分析法、导数荧光光谱法、固体表面荧光光谱法等多种荧光分析法在有机污染物分析中的应用展开分析，具体如下。

1 直接荧光分析法及其在有机物污染分析中的应用此种方法是目前最为常用的荧光分析手段之一，其操作方法是通过对有机物荧光强度进行分析，从而确定出有机物浓度。

目前国内已成功应用直接荧光分析法，针对苯酚、邻羟基苯甲酸的不同荧光性质，测定出检测水样的苯酚与邻羟基苯甲酸混合物总含量。

要注意的是，因苯酚及邻羟基苯甲酸的特性所致，要在PH值分别为6和11的情况下进行测定。

此外，国内还通过常规分析法测定出了苯并（a）芘在空气飘尘中的总含量。

总体来看，直接荧光分析法的操作简单，但应用并不是十分普遍，这其中的一大要因是很多有机化合物并无荧光，或是其荧光率低，难以直接测定。

因此，其应用存在一定局限性。

2 间接荧光分析法及其在有机物污染分析中的应用2.1 荧光增强法间接荧光分析法可细分成两种分析方法。

一是对本身无荧光的有机化合物通过化学反应、讲解反应、偶联反应、酶降解反应以及氧化还原等多种途径使其转化为可进行荧光测定的标准。

例如有机磷对硫磷本身不存在荧光，但其通过水解反应后对氨基酚则有荧光，之后就可通过荧光法进行测定。

这种方式就是通过增强有机化合物的荧光性质从而实现荧光分析的。

因此，此种方式又称为荧光增强法。

2.2 荧光猝灭法除以上分析法外，荧光猝灭法也是间接荧光分析的一个重要技术手段，具体的应用方法是：如果某种不具有荧光的分析物存在使某些荧光化合物发生荧猝灭的化学反应能力，利用这种能力实现间接的荧光分析。

荧光分析法测定药品中的羟基苯甲酸异构体含量一．实验目的1.学习荧光分析法的基本原理和操作；2.熟悉荧光分析法进行多组分含量的测定方法。

二．实验原理1、荧光分析法原理：当被测物质受到光照后，被测物分子吸收了具有特征频率的辐射能，分子从基态上升到激发态，分子在较高能级的激发态时，它可能处于激发态中各种振动状态的一种。

然而由于分子通过与溶剂分子、同类分子或其他分子的碰撞，而失去振动能级，降低至激发态时的最低振动能级，在此过程中并不发光。

但当分子从激发态的最低振动能级，即第一电子激发态的最低振动能级跃迁至基态的各个不同的振动能级时，则以光的形式辐射出能量，所辐射出的光既是荧光。

2、激发光谱和发射光谱：激发光谱：荧光是光致发光，因此必须选择合适的激发光波长，这可以从它们的激发光谱曲线来确定。

绘制激发光谱曲线时，选择荧光的最大发射波长为测量波长，改变激发光的波长，测量荧光强度的变化。

以激发波长为横坐标、荧光强度为纵坐标作图，即得到荧光化合物的激发光谱。

激发光谱的形状与吸收光谱的形状极为相似，经校正后的真实激发光谱与吸收关顾不仅形状相同，而且波长位置也一样。

这是因为物质分子吸收能量的过程就是激发过程。

发射光谱：发射光谱简称荧光光谱。

如果将激发光波长固定在最大激发波长处，然后扫描发射波长，测定不同发射波长处的荧光强度，即得到荧光光谱。

3、试验方法机理：邻- 羟基苯甲酸（亦称水杨酸）和间- 羟基苯甲酸分子组成相同，均含一个能发射荧光的苯环，但因其取代基的位置不同而具有不同的荧光性质。

在pH=12 的碱性溶液中，二者在310nm附近紫外光的激发下均会发射荧光；在pH=5.5的近中性溶液中，间-羟基苯甲酸不发荧光，邻-羟基苯甲酸因分子内形成氢键增加分子刚性而有较强荧光，且其荧光强度与pH=12时相同。

利用此性质，可在pH=5.5 时测定二者混合物中邻-羟基苯甲酸含量时，间-羟基苯甲酸不干扰。

另取同样量混合物溶液，测定pH=12 时的荧光强度，减去 pH=5.5时测得的邻-羟基苯甲酸的荧光强度，即可求出间-羟基苯甲酸的含量。

对羟基苯甲酸酯类混合物的反相高效液相色谱分析引言：羟基苯甲酸酯类化合物广泛应用于医药、农药、染料、涂料等领域。

分析羟基苯甲酸酯类混合物的组分和含量对质量控制和新产品研发具有重要意义。

反相高效液相色谱作为一种广泛应用的分析方法，能够有效分离和测定羟基苯甲酸酯类混合物。

一、反相高效液相色谱的原理反相高效液相色谱通过利用固定相相对于流动相的更强亲和性，通过分子大小、亲水性和亲油性的差异，实现混合物的分离。

反相色谱固定相通常是碳链比较长的疏水性物质，流动相是亲水性的有机溶剂和缓冲溶液。

二、反相高效液相色谱仪器和试剂的准备1.反相高效液相色谱仪器：常见的仪器有普通液相色谱仪和高压液相色谱仪，具体选择根据实验需要。

2.柱和固定相：反相高效液相色谱柱可选择C18柱，其主要成分是碳链较长的疏水性物质。

柱的长短和内径的选择应根据分析目的确定。

3.流动相：在反相高效液相色谱中，流动相通常为亲水性有机溶剂和缓冲溶液的混合物，比如乙腈/水和甲醇/水的混合物。

4.标准样品：准备一系列不同浓度的羟基苯甲酸酯类化合物的标准溶液。

标准样品的纯度以及溶解度要得到验证。

三、反相高效液相色谱方法的优化1.流动相组成的优化：通过试验确定最佳流动相体系，优化色谱条件。

2.流速的优化：试验确认最佳流速，保证分离和分析的准确性。

3.柱温的优化：试验确定最佳柱温，保证分离的效果和色谱峰形。

4.检测器选择：选择合适的检测器，根据实验要求确定检测器的灵敏度和线性范围。

四、反相高效液相色谱条件的确定1.建立标准曲线：根据一系列不同浓度的标准溶液，进行色谱分析，绘制出峰面积与浓度的线性关系曲线。

2.样品预处理：将待测样品进行提取或者稀释，以达到合适浓度的范围。

3.优化反相高效液相色谱条件：根据实验目的和样品特点，选择和优化最佳流动相、流速、柱温等条件。

五、反相高效液相色谱分析结果的处理和表达1.色谱峰面积的积分：根据色谱图中峰的面积大小，进行峰面积的积分。

实验四高效液相色谱法检测食品中对羟基苯甲酸酯类苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯类是食品中常用的防腐剂，广泛存在于酱油、醋、化妆品中。

对羟基苯甲酸酯类有：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸异丁酯。

它们对食品均有防止腐败的作用，苯甲酸的杀菌、抑菌效力随介质的酸度增高而增强，在碱性介质中则失去杀菌、抑菌效力。

山梨酸是使用最多的防腐剂，也是酸性防腐剂。

对羟基苯甲酸酯类以丁酯的防腐作用最好，由于对羟基苯甲酸酯类都难溶于水，所以通常是将它们先溶于乙酸、乙醇、乙腈等强极性溶液中，然后使用，为更好发挥防腐作用，最好是将两种或两种以上的该酯类混合使用。

虽然在限量范围内食用上述防腐剂对人体影响不大，但若大量摄入，则会危害人体健康。

各国都对食品中可以使用的防腐剂种类和用量有严格的要求，如中国的GB2760《食品添加剂使用卫生标准》明确规定了使用范围和最大使用量。

不同商品中的最大限量：苯甲酸0.2-1g/kg（中），山梨酸0.2-1g/kg（中），甲酯1g/kg（中），乙酯0.1-0.25g/kg（中），丙酯0.012-0.2g/kg（中），丁酯0.25g/kg（日），异丁酯0.25g/kg（日）。

本方法可同时检测食品中上述8种防腐剂。

本实验检测溶液中对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯。

一、实验目的和要求1、学习高效液相色谱外标法定量定性分析方法；2、熟悉超高压液相色谱的分析操作规程；3、学习高效液相色谱检测食品中的防腐剂的方法。

二、实验原理在对羟基苯甲酸酯类混合物中含有对羟基苯甲酸酯类，它们都是强极性化合物，可采用高效液相色谱进行分析。

以对羟基苯甲酸酯类标样保留时间定性，采用外标法定量对羟基苯甲酸酯类含量。

X=(A2×C)/A1（为样品中对羟基苯甲酸酯类的含量单位为ug/mL，单位；A1为标样对羟基苯甲酸酯类的峰面积；A2为样品中对羟基苯甲酸酯类峰面积；C为对羟基苯甲酸酯类标准液质量浓度。

间甲酚酚醛树脂和对羟基苯甲酸【知识】解析间甲酚酚醛树脂和对羟基苯甲酸随着科技的不断发展和应用的不断深入，新材料的发展也日益引起人们的关注。

在众多材料中，间甲酚酚醛树脂和对羟基苯甲酸不仅是研究热点，还在实际应用中展现出广阔的前景。

本文将从深度和广度两个角度对这两种材料进行全面评估，探讨其在不同领域中的应用和未来发展方向。

一、间甲酚酚醛树脂1. 深度评估（1）基本概念和性质间甲酚酚醛树脂是一种热固性树脂，具有优异的物理性能和化学稳定性。

它是由间甲酚、酚醛树脂和硬化剂等组分经过缩聚反应制得的。

该材料具有高温耐性、耐腐蚀性、电气绝缘性以及机械性能优异等特点。

（2）应用领域间甲酚酚醛树脂广泛应用于电子、航空航天、汽车制造、建筑装饰等领域。

在电子领域，该材料被用于制造电子元件的基板、绝缘材料和封装材料，能够提供稳定的电气性能和高温耐性。

在航空航天领域，间甲酚酚醛树脂能够制备轻质结构材料，可以满足飞行器对重量的要求。

在汽车制造领域，该材料能够制备耐高温和耐腐蚀的零部件，提高汽车的性能和安全性。

在建筑装饰领域，间甲酚酚醛树脂可以制作环保型涂料，具有耐候性和耐污性。

（3）发展趋势随着科技的进步和需求的增加，间甲酚酚醛树脂在新材料领域的应用前景十分广阔。

未来，该材料有望在光电子、能源储存、环保等领域得到更加深入的研究和应用。

2. 广度评估（1）优势和劣势间甲酚酚醛树脂具有耐热、耐腐蚀、绝缘性好等优点，能够满足各种应用场景的需求。

然而，由于其生产工艺复杂、成本较高，以及对原材料的依赖性，目前在实际应用中仍面临一些挑战。

（2）与其他材料的对比与其他树脂材料相比，间甲酚酚醛树脂具有更高的温度稳定性和机械性能，能够满足一些特殊环境下的使用要求。

相比之下，丙烯酸树脂则具有更好的透明度和流动性，适用于一些需要高透明度的应用场景。

对于不同的应用需求，选择合适的材料非常重要。

二、对羟基苯甲酸1. 深度评估（1）基本概念和性质对羟基苯甲酸是一种重要的有机化工原料，具有广泛的应用领域。

荧光分析法测定邻—羟基苯甲酸和间—羟基苯甲酸
刘丽静
【期刊名称】《内蒙古石油化工》
【年(卷),期】2011(000)013
【摘要】使用荧光光度计测定邻—羟基苯甲酸（亦称水杨酸）和二组分混合物的荧光强度,邻—羟基苯甲酸（亦称水杨酸）和间—羟基苯甲酸分子组成相同,均含一个能发射荧光的苯环,但因其取代基的位置不同而具不同的荧光性质。

在pH=12的碱性溶液中,二者在410nm附近紫外光的激发下均会发射荧光;在pH=5.5的近中性溶液中,间—羟基苯甲酸不发荧光,邻—羟基苯甲酸因分子内形成氢键增加分子刚性而有较强荧光,且其荧光强度与pH=12时相同。

利用此性质,可在pH=5.5时测定二者混合物中邻——羟基苯甲酸含量,间—羟基苯甲酸不干扰。

另取同
【总页数】3页(P16-18)
【作者】刘丽静
【作者单位】包头师范学院化学学院,内蒙古包头014030
【正文语种】中文
【中图分类】O657.3
【相关文献】
1.高压液相色谱法测定对羟基苯甲酸中邻位和间位羟基苯甲酸含量 [J], 朱申生;
2.双峰倍增配平法用于同步、导数-同步荧光法同时测定邻羟基苯甲酸和间羟基苯甲酸 [J], 唐波;杜鸣;何锡文;沈含熙
3.羟基苯甲酸异构体的毛细管区带电泳分离及阿司匹林片剂中邻羟基苯甲酸的测定[J], 赵新颖;谷学新;叶能胜
4.间羟基苯甲酸邻菲■啉钆(Ⅲ)、镝(Ⅲ)三元配合物的合成及性质 [J], 宋之刚;彭金华
5.荧光法直接测定环境水中邻羟基苯甲酸和苯酚混合物的含量 [J], 张文伟;杨梅;李晓辉;王化南
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高效液相色谱法定量分析化妆品中对羟基苯甲酸酯
陈黎明;田玉平;胡国胜;王虎;朱锡菊
【期刊名称】《上海计量测试》
【年(卷),期】2009(036)006
【摘要】建立了用高效液相色谱测定化妆品中对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸
乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯4种防腐剂的方法.以甲醇与水作为
流动相,DAD检测器的检测波长254 nm,流速为1.0 mL/min,柱温30℃.方法检出
限分别为对羟基苯甲酸甲酯0.18 μg、对羟基苯甲酸乙酯0.20μg、对羟基苯甲酸
丙酯0.20 μg、对羟基苯甲酸丁酯O.21 μg.4种防腐剂在0～100 mg/L呈现良好的线性关系.样品的加标回收率为101.3%～102.5%,相对标准偏差为0.13%-0.21%【总页数】2页(P6-7)
【作者】陈黎明;田玉平;胡国胜;王虎;朱锡菊
【作者单位】上海市计量测试技术研究院;上海市计量测试技术研究院;上海相宜本草化妆品有限公司;上海市计量测试技术研究院;上海相宜本草化妆品有限公司
【正文语种】中文
【相关文献】
1.毛细管气相色谱法测定化妆品中对羟基苯甲酸酯的含量 [J], 朱克旭;汪海宣
2.高效液相色谱法测定化妆品中对羟基苯甲酸酯类防腐剂 [J], 王晓强;胡文炬;张军
3.高效液相色谱法分离测定化妆品中凯松和对羟基苯甲酸酯 [J], 李洁;赵珊;吴大南
4.欧限制5种对羟基苯甲酸酯类在化妆品中的使用 [J],
5.高效液相色谱法测定化妆品中对羟基苯甲酸酯类、苯甲酸、山梨酸 [J], 刘秋华;王丽焱;吴百禄
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荧光分析法测定邻-羟基苯甲酸和间-羟基苯甲酸实验实验目的：1.学习荧光分析法的原理和方法。

实验原理：荧光分析法是利用荧光物质在特定的激发光的照射下，发出特定波长的荧光，进行定量分析的一种方法。

荧光物质的发射光谱可以选择性地量化分析目标物，具有灵敏度高、选择性强、无需昂贵的仪器设备等优点。

邻-羟基苯甲酸和间-羟基苯甲酸可以在氢氧化钠溶液中与1-氨基-2-萘酚反应生成深色荧光物质，利用荧光分析法进行定量测定。

实验仪器与试剂：荧光分析仪、量筒、滴管、加热板、烧杯、移液管、邻-羟基苯甲酸、间-羟基苯甲酸、1-氨基-2-萘酚、氢氧化钠、乙醇。

实验过程：1.制备标准曲线：取一系列不同浓度的邻-羟基苯甲酸和间-羟基苯甲酸的标准溶液，分别加入50 μl 1-氨基-2-萘酚溶液和5 ml 0.2 mol/L 氢氧化钠溶液中，加入水定容至10 ml。

将溶液填入荧光比色皿中，记录吸收光谱和荧光光谱。

记录荧光强度和标准溶液中邻-羟基苯甲酸和间-羟基苯甲酸之间的浓度。

2.测定待测样品：取 1 g 待测样品，加入 50 ml 95% 乙醇，加热搅拌至完全溶解。

取 1 ml 上清液，加至 10 ml，加水至计量器线，得到待测样品溶液。

取 2 ml 待测样品溶液和50 μl 1-氨基-2-萘酚溶液和 5 ml 0.2 mol/L 氢氧化钠溶液，加水至10 ml，得到反应体系。

记录吸收光谱和荧光光谱，计算邻-羟基苯甲酸和间-羟基苯甲酸的浓度。

实验结果：制备标准曲线：荧光物质的发射光谱峰位为455 nm。

吸收光谱和荧光光谱如下图所示：邻-羟基苯甲酸的标准曲线：浓度/ μmol/L 荧光强度3.0 630测定待测样品：以纯邻-羟基苯甲酸和间-羟基苯甲酸为参比标准物质，计算得到待测样品中邻-羟基苯甲酸和间-羟基苯甲酸的含量如下表所示：邻-羟基苯甲酸 94.2结果分析：本实验运用荧光分析法对邻-羟基苯甲酸和间-羟基苯甲酸进行了测定，实验结果较为准确。