Masson 三色染色液染色步骤及注意事项

Masson三色染色试剂盒说明书Masson 三色染色试剂盒说明书（南京森贝伽生物科技有限公司）【产品介绍】Masson 染液是显示组织中纤维染色的主要方法之一，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。

该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关。

分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。

淡绿分子量最大。

因此Masson 染色肌纤维红色，胶原纤维绿色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

【用途】主要用于胶原纤维染色。

【产品特点】①染色稳定；②分化时间短，1～2 分钟；③色彩清晰鲜艳；④适用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；⑤所染切片保存时间长且不易褪色。

固定：甲醛升汞或甲醛盐溶液。

切片：所有类型。

【产品组成】编号名SBJ0126（7×50ml）SBJ0126（7×100ml）SBJ0126（7×500ml）Storage试剂（A）A1：苏木素染色液25ml 100ml 500ml RTA2：三氯化铁水溶液25ml 100ml 500ml RT 临用时取A1、A2 等量混合，成为试剂（A），不可预先配制后放置，因染色液的色素根与铁会化合，形成不容性沉淀，等量混合后，一般24h 后失去染色力。

试剂（B）: 盐酸乙醇分化液50ml 100ml 500ml RT 试剂（C）: 氨水水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（D）: 丽春红酸性品红染色液50ml 100ml 500ml RT 试剂（E）: 乙酸水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（F）: 磷钼酸水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（G）: 苯胺蓝染色液50ml 100ml 500ml RT 【参考操作步骤】1、切片脱蜡至水。

2、试剂（A）染色5min～10min。

3、试剂（B）分化、水洗，试剂（C）返蓝、水洗。

Masson三色法（根据Masson,1929）一、试剂配制（一）Weigert氏铁苏木素液（可用Herris苏木素代替）甲液：苏木素1g无水酒精（或95％酒精）100ml乙液：29％三氯化铁水溶液4ml蒸馏水95ml （30%三氯化铁溶液则为100ml）盐酸1ml临用时，取甲、乙液等量混合即可应用。

混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。

铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。

由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。

能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线退色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。

（二）丽春红酸性品红液丽春红（Ponceau 2R）0.7g酸性品红（acid fuchsin）0.3g蒸馏水99ml冰醋酸(glacial acetic acid) 1ml（三）1%磷钼酸水溶液磷钼酸（phosphomolybdic acid）1g蒸馏水加至100ml（四）2%苯胺蓝液苯胺蓝（aniline blue）2g冰醋酸（glacial acetic acid ）2ml蒸馏水加至100ml（五）亮绿液亮绿（light green）1g蒸馏水99ml冰醋酸（glacial acetic acid ）1ml（六）Bouin氏液苦味酸饱和液（1.22％）75ml福尔马林25ml冰醋酸5ml此液一般在临用时配制，对皮肤及肌腱有软化作用。

二、操作方法1．组织固定于Bouin氏液，流水冲洗一晚，常规脱水包埋。

2．切片脱蜡至水：（1）二甲苯中脱蜡10分钟×3次，用吸水纸吸干液体；（2）100%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；（3）95%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；；（4）流水2分钟，用吸水纸吸干水分；3．Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。

Masson 三色染色液30ml+20ml*5RT产品简介：由Mallory 三色染色改造，利用两种或三种阴离子染料混合一起或先后作用完成染色，与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。

根据组织不同的渗透性能，选择分子大小不同的阴离子的染料进行染色，便可把不同组织成分显示出来。

包装内容：产品货号产品名称规格G1006-1重铬酸钾媒染剂30ml G1006-2Weigert 铁苏木素A 液20ml G1006-3Weigert 铁苏木素B 液20ml G1006-4丽春红酸性品红染液20ml G1006-5磷钼酸溶液20ml G1006-6苯胺蓝染液20ml保存条件：室温保存，有效期1年。

操作说明：1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min ，自来水洗。

2、重铬酸钾染色：切片入重铬酸钾浸泡过夜，自来水洗。

3、铁苏木素染色：铁苏木素A 液与B 液等比混合成铁苏木素染液，切片入铁苏木素3min ，自来水洗，盐酸酒精溶液分化，自来水冲洗。

4、丽春红酸性品红染色：切片入丽春红酸性品红浸染5-10min ，自来水漂洗。

5、磷钼酸染色：磷钼酸水溶液浸染1-3min 。

6、苯胺蓝染色：磷钼酸之后不用水洗，直接入苯胺蓝染液染3-6min 。

7、分化：切片用1%冰醋酸分化，两缸无水乙醇脱水。

8、透明封片：切片放入第三缸无水乙醇5min ，二甲苯5min 透明，中性树胶封片。

9、显微镜镜检，图像采集分析。

染色结果：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色。

弹力纤维呈棕色。

肌纤维、纤维素和红细胞染红色。

细胞核染蓝黑色。

G 1006注意事项：1、Weigert铁苏木素分A、B两液，临用前将两液等比例混合使用。

不宜预先混合，否则容易氧化沉淀而失去染色力。

2、重铬酸钾染完后水洗要稍快，切片洗干净即可。

3、根据切片的数量对铁苏木素染液进行更换，也可以现配现用；4、丽春红的染色程度要控制好，胶原部分不能是红色或者太红，会影响后续苯胺蓝的着色；5、冰醋酸分化苯胺蓝的过程中，若是分化过度，胶原蓝色太浅，若分化不足，易与丽春红的颜色叠加呈紫蓝色。

试剂名：改良 Masson 三色染色液货号：G1345 品牌：索莱宝1、石蜡切片65℃烘烤1h（使组织更贴合玻片，并溶解石蜡。

如果是刚切好的切片，则烘烤2-3h），立即放入脱蜡剂中脱蜡；2、脱蜡：脱蜡剂Ⅰ（15min）、脱蜡剂Ⅱ（15min）水化：无水乙醇I（5min）、无水乙醇 II（5min）、95%乙醇I（5min）、95%乙醇II （5min）、85%乙醇（5min）、75%乙醇（5min）脱蜡处理，蒸馏水3min3、将 Bouin 液滴在组织上，于室温作用一晚或置入 37℃的温箱内 2h 进行媒染，然后流水冲洗至切片组织上的黄色消失。

4、天青石蓝染色液滴染3min，稍水洗玻片上无染料即可。

5、Mayer 苏木素染色液滴染3min，稍水洗玻片上无染料即可。

（显微镜下观察，细胞核呈现深蓝色，细胞质有蓝色）6、酸性乙醇分化液分化3-5s，流水冲洗 10min返蓝。

（细胞核呈现灰蓝色，细胞质应相对透明无色）7、丽春红品红染色液染 2-5min，稍水洗玻片上无染料即可。

（容易造成深红或紫红色，基本看不清细胞核。

建议先染色30s-1min，显微镜下观察，适当增加时间）8、磷钼酸溶液浸泡10min，倾去上液，切片不用水洗，直接滴入苯胺蓝染色液染 5-10min。

（如果丽春红染色过深，苯胺蓝也应该适当染久一些，最终应该是红蓝色分明，能明显分辨出胶原显微）9、弱酸溶液处理 2min。

10、透明：切片直接依次放入无水乙醇 I（5min）-无水乙醇 II（5min）- 脱蜡剂Ⅰ（5min）- 脱蜡剂Ⅱ（5min）。

然后用纸巾擦干玻片上残余脱蜡剂，或直接铺平玻片在通风橱内，干燥脱蜡剂。

使用中性树脂封片。

注：masson染色不像HE可以把颜色洗脱再重复步骤，建议使用同一批切片，先摸索染色时间。

胶原纤维染色（Masson三色染色法）胶原纤维：是三种纤维中分布最广泛，含量最多的一种纤维。

广泛分布于各脏器内。

在皮肤、巩膜和肌腱最为丰富。

胶原纤维染色主要用于和肌纤维的鉴别。

应用意义：定性定量胶原纤维在体内分布广泛。

HE染色不能以不同颜色将其显示出来，而胶原纤维定性特染可作到这一点，故在多种疾病的病理诊断和研究用中具有实用价值.如：1．显示组织，器官的损伤或炎症的修复与纤维板化程度2．判断心肌坏死后被除纤维结缔组织所取代的区域：HE染色时胶原纤维与心肌均为红色，胶原纤维染色则使胶原纤维呈红色，心肌纤维呈黄色。

3．鉴别心肌纤维化与心内膜弹纤维增生症。

4．区别胶原纤维透明变性与淀粉样变性。

5. 对肿瘤方面提供诊断和诊断鉴别的依据。

胶原纤维染色结果：胶原纤维呈绿色，肌纤维呈红色，红细胞呈橘红色。

组织样品应为：4%多聚甲醛固定组织，石蜡切片。

天狼猩红：胶原纤维呈红色，细胞核呈绿色，其它成分呈黄色。

V.G染色法 : 胶原纤维：鲜红色,肌纤维：黄色，红细胞：黄色。

细胞核：蓝黑或灰色。

Nagar-Olsen染色观察心肌缺氧早期改变，是早期心肌病变组织染色：显色结果：缺氧心肌红细胞呈现红色，正常心肌呈黄色或棕黄色，细胞核呈蓝色。

丽春红（Ponceau S）新法染色首先采用维多利亚蓝将细胞核染成绿色，再用Ponceau S 丽春红复合物将胶原纤维染成红色，肌肉成黄色。

实验流程一、实验试剂1. Regaud 氏苏木精：苏木精1g，95%酒精10ml，甘油10ml，蒸馏水80ml。

将苏木精加入蒸馏水内加温溶解，冷却后加入酒精和甘油，放数日后即可应用；2. Masson丽春红酸性复红液：丽春红0.7g，酸性复红0.3g，蒸馏水99ml，冰醋酸1ml；3. 0.2%冰醋酸水溶液：冰醋酸0.2 ml，蒸馏水100 ml；4. 1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g，蒸馏水100 ml；5. 苯胺蓝水溶液：苯胺蓝2g，蒸馏水98 ml，冰醋酸2 ml；6. 1%光绿水溶液：光绿 1g，蒸馏水100 ml。

改良Masson三色染色法在胶原纤维中的应用中华首席医学网 2006年05月24日11:05:41 Wednesday648作者：王珏, 朱礼国，唐幕湘, 张健《郧阳医学院学报》2006年2月25卷1期实验技术加入收藏夹【关键词】胶原纤维[关键词] 改良；Masson三色染色法；胶原纤维目前，Masson三色染色法仍是胶原纤维染色的主要方法之一。

它在临床外检和科研教学等方面有着重要的意义。

在实际工作中，我们认为传统的Masson三色染色法[1]操作程序多，染色效果欠佳，且不太稳定，对其做了改进，现将做法介绍如下。

1 方法1.1 染液的配制Harris苏木素、1%盐酸酒精、丽春红酸性品红、1%磷钼酸、2%苯胺蓝.1.2 染色方法石蜡切片3~4 μm脱蜡至水,Harris苏木素染3 min流水冲洗,1%的盐酸酒精分化3~5 s流水冲洗,温水返蓝1 min流水冲洗, 丽春红酸性品红加温染3 min，蒸馏水冲洗,1%磷钼酸分化1 min，不洗，擦净载玻片上的磷钼酸残液，2%苯胺蓝复染1 min，95%的酒精冲洗，95%酒精及无水酒精脱水，冷风吹干，中性树胶封片。

2 结果胶原纤维呈蓝色，肌纤维胞质呈红色，细胞核呈蓝褐色。

3 讨论通过长期实践探索，我们摸索出一种程序更简洁、组织着色效果更好，且性能稳定的改良Masson三色染色法。

其原理是利用苏木素，酸性品红和苯胺蓝对结缔组织和神经嗜银颗粒、胶原纤维等组织染色，使时间缩短，步骤简便。

改进后的方法，将传统的Masson三色染色法作了如下调整和改动：Bowin氏液由10%中性固定液[2]代替，省略了0.5%碘酒精作用10 min，5%硫代硫酸钠作用5 min和1%冰醋酸处理1min及地衣红染30~60 min 等过程，然后将原丽春红酸性品红，1%磷钼酸，2%苯胺蓝的染色时间分别由15 min，5 min,5 min,缩短为加热3min,1 min,1 min.通过对以上各步的调整和改进，使染色时间由原来的近3 h，缩短为30 min左右，且颜色对比度好，层次清楚，胞核胞浆着色均匀。

马松三色染色原理masson.Masson染色(2010-09-02 14:43:20转载标签:杂谈分类:实验日志masson 染色原理Masson三色法(根据Masson,1929试剂配制(一Weigert氏铁苏木素液(见苦味酸——酸性品红法(二丽春红酸性品红液丽春红(Ponceau 2R 0.7g酸性品红(acid fuchsin 0.3g蒸馏水 99ml冰醋酸(glacial acetic acid 1ml(三 1%磷钼酸水溶液磷钼酸(phosphomolybdic acid 1g蒸馏水加至 100ml(四 2%苯胺蓝液苯胺蓝(aniline blue 2g冰醋酸(glacial acetic acid 2ml蒸馏水加至 100ml(五亮绿液亮绿(light green 1g蒸馏水 99ml冰醋酸(glacial acetic acid 1ml操作方法1. 组织固定于Bouin氏液或Zenker氏液,流水冲洗一晚,常规脱水包埋。

2. 切片脱蜡至水。

如用Zenker氏液固定者,应进行除汞处理,其步骤如下:(1 切片脱蜡后于0.5%碘酒精作用10分钟。

(2 稍水洗(3 5%硫代硫酸钠作用5分钟。

(4 流水冲洗10分钟3. Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。

4. 流水稍洗。

5. 1%盐酸酒精分化。

6. 流水冲洗数分钟。

7. 丽春红酸性品红液染5-10分钟。

8. 蒸馏水稍冲洗。

9. 1%磷钼酸水溶液处理约5分钟。

10.不用水洗,直接用苯胺蓝液或绿液复染5分钟。

11.1%冰醋酸处理1分钟。

12.95%酒精脱水多次。

13.无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固结果:胶原纤维虽蓝色(用苯胶蓝液复染或绿色(用亮绿复染。

胞质、肌纤维和红细胞红色。

胞核蓝褐色。

注意事项:1.组织用Bouin氏液或Zenker氏液固定为佳。

如已用10%甲酸液固定,切片可在脱蜡至水后.再放入Bouin氏液作用一晚或置37。

C温箱内1-2小时,然后流水冲洗切片至黄色消失再进行染色。

masson染色实验步骤概述及解释说明1. 引言1.1 概述Masson染色实验是一种常用的组织学技术，用于观察和分析组织样本中胶原纤维、肌纤维以及其他重要成分的分布和形态。

该实验技术通过特定的染料，能够使不同组织成分显色，并进一步提供了对组织结构和功能的深入认识。

Masson 染色方法已广泛应用于肿瘤学、病理学、解剖学等领域。

1.2 文章结构本文将从引言、Masson染色实验步骤、实验结果与解释、应用与意义以及结论等几个方面进行详细阐述。

1.3 目的本文的目的是为读者介绍Masson染色实验的基本步骤，并对其结果进行解释说明。

同时，还将探讨该实验在各个领域中的应用情况以及潜在意义和价值。

这些内容将有助于读者更全面地了解Masson染色技术，并为其在相关研究工作中提供参考和指导。

期待它们有望增加我们对组织样本中胶原纤维·肌肉纤维及其他关键成分的认识时请加填具体2. Masson染色实验步骤：2.1 实验前准备：在进行Masson染色实验之前，需要做好以下准备工作：1. 资料收集：先了解Masson染色的原理和目的，研究相关文献，了解该实验在什么情况下适用以及可以得到哪些信息。

2. 材料购买：准备所需的材料，包括Masson染色试剂盒、显微镜玻片和载玻片等。

3. 设备检查：确保显微镜、组织切片机和染色设备等实验设备正常运行并进行必要的校准或维护。

4. 实验环境准备：为了保证实验结果的准确性，要确保实验室环境清洁、无尘，并控制好温度和湿度。

5. 安全措施：遵循实验室安全规定，佩戴个人防护装备，如手套、眼镜和口罩等。

2.2 组织样本制备：在进行Masson染色实验前，需要对组织样本进行制备处理。

具体步骤如下：1. 组织获取：从动物或人体中采集需要研究的组织样本，可以是器官或组织结构。

2. 组织固定：将采集到的组织样本放入适当的组织固定剂中（如福尔马林），使得组织结构保持完整并防止腐败。

3. 组织包埋：将固定后的组织样本进行包埋处理，通常是将其浸泡在液态石蜡中，然后冷却使其凝固。

三色染色实验服务安全操作及保养规程简介三色染色实验是一种常见的细胞学实验，用于染色细胞的染色体和细胞器，进一步观察细胞结构的变化和功能的活动。

在进行三色染色实验时，需要特别注意实验过程中的化学品及设备的安全操作，以及实验后的设备保养工作。

本文档旨在为实验人员提供三色染色实验安全操作以及设备保养规程，以确保实验过程的安全性和设备的使用寿命。

三色染色实验安全操作规程1. 实验前准备在进行三色染色实验之前，需要进行一系列的准备工作，包括试剂的准备、设备的调试、试剂品质的检测等。

1.1 试剂准备根据实验方案所需的试剂及其浓度，准备相应试剂和稀释液。

同时需检查试剂是否过期，有无变质或污染。

1.2 设备调试检查三色染色实验设备的工作状态和功能是否正常，调试并确认设备参数符合实验要求，如温度、压力等。

1.3 试剂品质检测采用内标法对所采购到的每批试剂进行品质检测并留有记录，严格按照实验方案规定的试剂用量和比例进行混合以避免试剂污染。

2. 实验中的安全操作在进行三色染色实验的过程中，需要注意化学品的安全操作，以保障实验人员的身体健康和实验的顺利进行。

2.1 试剂使用在使用试剂时，需要佩戴手套以避免皮肤接触化学品，同时在处理液体时要注意避免产生气溶胶，避免吸入有害气体，同时注意放置和处理化学垃圾，避免污染环境。

2.2 设备操作在进行三色染色实验时，需要根据设备使用手册操作设备，严格按照实验方案场景参数要求操作设备，同时避免设备损坏，提高设备的使用寿命。

3. 实验后的安全操作在完成三色染色实验后，需要进行一些后续的安全操作，以确保化学品对环境和实验人员的影响降到最低。

3.1 试剂处置在实验完成后，要按照相关规定进行试剂的处理，避免化学品的污染和环境的污染。

3.2 设备保养及时对设备进行维护和保养，避免设备因为未及时保养而损坏，为设备换配件时遵照厂家原配件规格进行更换，维护设备的使用寿命并保证实验的精度和稳定性。

三色染色设备的保养规程在保证实验安全操作后，设备的保养工作必不可少，以下是三色染色设备保养规程：1. 清洗消毒三色染色实验设备在使用过程中，需要经常清洗消毒，以确保设备内部和外部环境的干净和卫生。