改良Masson 三色染色液使用说明

Masson 三色染色试剂盒（甲苯胺蓝）说明书修订日期：2018.07.31Cat number：KGMST-8004Store at 2-8℃ for 12 monthsFor Research Use Only（科研专用）【适用范围】Masson 三色染色试剂盒主要用于结缔组织染色。

用于判定各种组织、器官的病变程度与修复情况，以不同色调显示与区分某些非结缔组织及物质成分；如显示与区分肌肉及其肿瘤组织的正常或异常成分。

尤适用于软组织肿瘤的鉴别诊断。

【主要成分】【染色步骤】1、切片脱蜡处理至水。

2、滴加 1 滴（50-100µl）苏木素染色液（试剂 A）染色 5-10 分钟。

蒸馏水冲掉染液。

3、蒸馏水或自来水冲洗 2-5 分钟。

4、滴加 1 滴（50-100µl）复合染色液（试剂 B）染色 5 分钟。

5、蒸馏水或自来水冲洗一下（2-3 秒，冲掉染液即可）。

6、滴加 1 滴（50-100µl）磷钼酸（试剂 C）染色 1 分钟。

7、甩干或自然晾干。

8、滴加 1 滴（50-100µl）甲苯胺蓝染色液（试剂 D）染色 5min 左右。

9、蒸馏水或自来水冲洗一下（2-3 秒，冲掉染液即可）。

10、放入烘箱（50－60 摄氏度）烘干。

中性树胶封片。

【结果】胶元纤维、黏液、软骨、神经纤维呈蓝色；肌肉、弹力纤维呈红色；神经轴索呈粉红色；纤维素呈紫红色；红血球呈橘红色。

细胞核呈蓝紫色。

【注意事项】1、不同的固定液或固定时间以及不一样的组织，染色效果可有差异，要根据显微镜下观察来掌握染色或分化时间。

2、染色液必须充分淹盖组织。

3、每次染色宜用阳性切片作对照。

【有效期】12 个月仅供研究、不用于临床诊断。

改良Masson三色染色液使用说明书货号：G1345规格：8×50ml/8×100ml有效期：室温保存，12个月有效产品简介：结缔组织狭义上是指其含有的三种纤维：胶原纤维、网状纤维、弹力纤维、而胶原纤维（collagen fiber）是分布最广、含量最多的一种纤维。

Masson三色染色又称马松染色，是结缔组织染色中最经典的一种方法，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。

所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。

该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。

然而，淡绿或苯胺蓝的分子量很大，因此Masson染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色或蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

改良Masson三色染色与常规Masson三色染色的区别在于采用天青石蓝苏木素淡染细胞核。

其特点在于：分化时间短(1～2分钟)；色彩清晰鲜艳；适用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；所染切片保存时间长且不易褪色。

改良Masson染色胶原纤维呈蓝色，肌纤维、胞质、纤维素、角蛋白和红细胞呈红色，细胞核呈蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

产品组成：名称规格8×50ml8×100ml Storage试剂(A):Bouin液50ml100ml RT试剂(B):天青石蓝染色液50ml100ml4℃避光试剂(C):Mayer苏木素染色液50ml100ml4℃避光试剂(D):酸性乙醇分化液50ml100ml RT试剂(E):丽春红品红染色液50ml100ml RT避光试剂(F):磷钼酸溶液50ml100ml RT避光试剂(G):苯胺蓝染色液50ml100ml RT避光试剂(H):弱酸溶液50ml100ml RT使用说明书1份自备材料：10%的福尔马林、蒸馏水、系列乙醇、二甲苯、染缸操作步骤（仅供参考）：1、组织固定于10%的福尔马林中，常规脱水包埋。

Masson三色染色试剂盒说明书Masson 三色染色试剂盒说明书（南京森贝伽生物科技有限公司）【产品介绍】Masson 染液是显示组织中纤维染色的主要方法之一，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。

该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关。

分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。

淡绿分子量最大。

因此Masson 染色肌纤维红色，胶原纤维绿色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

【用途】主要用于胶原纤维染色。

【产品特点】①染色稳定；②分化时间短，1～2 分钟；③色彩清晰鲜艳；④适用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；⑤所染切片保存时间长且不易褪色。

固定：甲醛升汞或甲醛盐溶液。

切片：所有类型。

【产品组成】编号名SBJ0126（7×50ml）SBJ0126（7×100ml）SBJ0126（7×500ml）Storage试剂（A）A1：苏木素染色液25ml 100ml 500ml RTA2：三氯化铁水溶液25ml 100ml 500ml RT 临用时取A1、A2 等量混合，成为试剂（A），不可预先配制后放置，因染色液的色素根与铁会化合，形成不容性沉淀，等量混合后，一般24h 后失去染色力。

试剂（B）: 盐酸乙醇分化液50ml 100ml 500ml RT 试剂（C）: 氨水水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（D）: 丽春红酸性品红染色液50ml 100ml 500ml RT 试剂（E）: 乙酸水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（F）: 磷钼酸水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（G）: 苯胺蓝染色液50ml 100ml 500ml RT 【参考操作步骤】1、切片脱蜡至水。

2、试剂（A）染色5min～10min。

3、试剂（B）分化、水洗，试剂（C）返蓝、水洗。

马松三色染色法马松三色染色法是一种用于显示组织中纤维的染色技术，特别适用于结缔组织的染色。

该方法使用三种染料：苏木精、酸性品红和丽春红，分别染色细胞核、肌纤维和胶原纤维。

首先，切片需要经过常规脱蜡至水的过程，以确保染色剂能够充分渗透到组织中。

然后，使用配制好的Weigert氏铁苏木素染色液对组织进行染色，以突出显示细胞核。

染色完成后，需要充分水洗，以去除未结合的染料。

接下来是酸性品红染色，用于标记肌纤维。

这个步骤需要在弱酸环境中进行分化处理，以将染色剂与组织中的碱性物质区分开来。

弱酸还能帮助酸性品红更好地渗透到组织中。

最后，使用丽春红品红染色液对胶原纤维进行染色。

在这个步骤中，需要使用弱酸工作液来洗去未结合的染料。

在整个染色过程中，组织固定起着非常重要的作用。

不同的固定液会影响染色时间，因此需要根据具体情况进行调整。

在完成染色后，需要进行常规脱水、透明和封固处理，以便在显微镜下观察。

马松三色染色法的优点在于它能够清晰地显示结缔组织中的胶原纤维和肌纤维，特别是在病理情况下，如器官硬化性疾病和瘢痕组织的鉴别诊断中，该方法能够提供有价值的信息。

此外，该方法具有较高的特异性和灵敏度，能够检测出病理变化中较小的差异。

然而，该方法也有一些局限性。

首先，该方法需要使用多种染料和化学试剂，这使得操作过程相对复杂。

其次，某些组织可能需要特定的处理步骤，例如脱蜡、脱水和固定等。

这需要技术人员具备一定的经验和技术水平。

尽管存在这些局限性，马松三色染色法仍是一种非常重要的病理学技术。

它可以提供关于组织结构和功能的重要信息，有助于病理医生做出准确的诊断和制定治疗方案。

Masson三色法（根据Masson,1929）一、试剂配制（一）Weigert氏铁苏木素液（可用Herris苏木素代替）甲液：苏木素1g无水酒精（或95％酒精）100ml乙液：29％三氯化铁水溶液4ml蒸馏水95ml （30%三氯化铁溶液则为100ml）盐酸1ml临用时，取甲、乙液等量混合即可应用。

混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。

铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。

由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。

能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线退色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。

（二）丽春红酸性品红液丽春红（Ponceau 2R）0.7g酸性品红（acid fuchsin）0.3g蒸馏水99ml冰醋酸(glacial acetic acid) 1ml（三）1%磷钼酸水溶液磷钼酸（phosphomolybdic acid）1g蒸馏水加至100ml（四）2%苯胺蓝液苯胺蓝（aniline blue）2g冰醋酸（glacial acetic acid ）2ml蒸馏水加至100ml（五）亮绿液亮绿（light green）1g蒸馏水99ml冰醋酸（glacial acetic acid ）1ml（六）Bouin氏液苦味酸饱和液（1.22％）75ml福尔马林25ml冰醋酸5ml此液一般在临用时配制，对皮肤及肌腱有软化作用。

二、操作方法1．组织固定于Bouin氏液，流水冲洗一晚，常规脱水包埋。

2．切片脱蜡至水：（1）二甲苯中脱蜡10分钟×3次，用吸水纸吸干液体；（2）100%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；（3）95%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；；（4）流水2分钟，用吸水纸吸干水分；3．Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。

Masson 三色染色液30ml+20ml*5RT产品简介：由Mallory 三色染色改造，利用两种或三种阴离子染料混合一起或先后作用完成染色，与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。

根据组织不同的渗透性能，选择分子大小不同的阴离子的染料进行染色，便可把不同组织成分显示出来。

包装内容：产品货号产品名称规格G1006-1重铬酸钾媒染剂30ml G1006-2Weigert 铁苏木素A 液20ml G1006-3Weigert 铁苏木素B 液20ml G1006-4丽春红酸性品红染液20ml G1006-5磷钼酸溶液20ml G1006-6苯胺蓝染液20ml保存条件：室温保存，有效期1年。

操作说明：1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min ，自来水洗。

2、重铬酸钾染色：切片入重铬酸钾浸泡过夜，自来水洗。

3、铁苏木素染色：铁苏木素A 液与B 液等比混合成铁苏木素染液，切片入铁苏木素3min ，自来水洗，盐酸酒精溶液分化，自来水冲洗。

4、丽春红酸性品红染色：切片入丽春红酸性品红浸染5-10min ，自来水漂洗。

5、磷钼酸染色：磷钼酸水溶液浸染1-3min 。

6、苯胺蓝染色：磷钼酸之后不用水洗，直接入苯胺蓝染液染3-6min 。

7、分化：切片用1%冰醋酸分化，两缸无水乙醇脱水。

8、透明封片：切片放入第三缸无水乙醇5min ，二甲苯5min 透明，中性树胶封片。

9、显微镜镜检，图像采集分析。

染色结果：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色。

弹力纤维呈棕色。

肌纤维、纤维素和红细胞染红色。

细胞核染蓝黑色。

G 1006注意事项：1、Weigert铁苏木素分A、B两液，临用前将两液等比例混合使用。

不宜预先混合，否则容易氧化沉淀而失去染色力。

2、重铬酸钾染完后水洗要稍快，切片洗干净即可。

3、根据切片的数量对铁苏木素染液进行更换，也可以现配现用；4、丽春红的染色程度要控制好，胶原部分不能是红色或者太红，会影响后续苯胺蓝的着色；5、冰醋酸分化苯胺蓝的过程中，若是分化过度，胶原蓝色太浅，若分化不足，易与丽春红的颜色叠加呈紫蓝色。

试剂名：改良 Masson 三色染色液货号：G1345 品牌：索莱宝1、石蜡切片65℃烘烤1h（使组织更贴合玻片，并溶解石蜡。

如果是刚切好的切片，则烘烤2-3h），立即放入脱蜡剂中脱蜡；2、脱蜡：脱蜡剂Ⅰ（15min）、脱蜡剂Ⅱ（15min）水化：无水乙醇I（5min）、无水乙醇 II（5min）、95%乙醇I（5min）、95%乙醇II （5min）、85%乙醇（5min）、75%乙醇（5min）脱蜡处理，蒸馏水3min3、将 Bouin 液滴在组织上，于室温作用一晚或置入 37℃的温箱内 2h 进行媒染，然后流水冲洗至切片组织上的黄色消失。

4、天青石蓝染色液滴染3min，稍水洗玻片上无染料即可。

5、Mayer 苏木素染色液滴染3min，稍水洗玻片上无染料即可。

（显微镜下观察，细胞核呈现深蓝色，细胞质有蓝色）6、酸性乙醇分化液分化3-5s，流水冲洗 10min返蓝。

（细胞核呈现灰蓝色，细胞质应相对透明无色）7、丽春红品红染色液染 2-5min，稍水洗玻片上无染料即可。

（容易造成深红或紫红色，基本看不清细胞核。

建议先染色30s-1min，显微镜下观察，适当增加时间）8、磷钼酸溶液浸泡10min，倾去上液，切片不用水洗，直接滴入苯胺蓝染色液染 5-10min。

（如果丽春红染色过深，苯胺蓝也应该适当染久一些，最终应该是红蓝色分明，能明显分辨出胶原显微）9、弱酸溶液处理 2min。

10、透明：切片直接依次放入无水乙醇 I（5min）-无水乙醇 II（5min）- 脱蜡剂Ⅰ（5min）- 脱蜡剂Ⅱ（5min）。

然后用纸巾擦干玻片上残余脱蜡剂，或直接铺平玻片在通风橱内，干燥脱蜡剂。

使用中性树脂封片。

注：masson染色不像HE可以把颜色洗脱再重复步骤，建议使用同一批切片，先摸索染色时间。

Masson三色法（根据Masson,1929）一、试剂配制（一）Weigert氏铁苏木素液（可用Herris苏木素代替）甲液：苏木素1g无水酒精（或95％酒精）100ml乙液：29％三氯化铁水溶液4ml蒸馏水95ml （30%三氯化铁溶液则为100ml）盐酸1ml临用时，取甲、乙液等量混合即可应用。

混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。

铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。

由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。

能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线退色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。

（二）丽春红酸性品红液丽春红（Ponceau 2R）0.7g酸性品红（acid fuchsin）0.3g蒸馏水99ml冰醋酸(glacial acetic acid) 1ml（三）1%磷钼酸水溶液磷钼酸（phosphomolybdic acid）1g蒸馏水加至100ml（四）2%苯胺蓝液苯胺蓝（aniline blue）2g冰醋酸（glacial acetic acid ）2ml蒸馏水加至100ml（五）亮绿液亮绿（light green）1g蒸馏水99ml冰醋酸（glacial acetic acid ）1ml（六）Bouin氏液苦味酸饱和液（1.22％）75ml福尔马林25ml冰醋酸5ml此液一般在临用时配制，对皮肤及肌腱有软化作用。

二、操作方法1．组织固定于Bouin氏液，流水冲洗一晚，常规脱水包埋。

2．切片脱蜡至水：（1）二甲苯中脱蜡10分钟×3次，用吸水纸吸干液体；（2）100%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；（3）95%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；；（4）流水2分钟，用吸水纸吸干水分；3．Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。

Masson染色,操作规程实验目的： Masson染色,用于显示组织中纤维的染色方法之一实验原理：Masson氏染色时胶原纤维呈蓝色(被苯胺蓝所染),肌纤维呈红色(被酸性品红和丽春红所染),这与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。

不同的组织和细胞成分,它们的孔隙大小是不同的。

孔隙的大小,决定了组织的渗透性。

如孔隙小,组织结构致密,渗透性低；孔隙宽,组织结构疏松,渗透性高。

如已固定的组织用一系列阴离子水溶性染料先后或混合染色,则可发现红细胞被最小分子的阴离子染料着染.肌纤维与胞质被中等大小的阴离子染料着染,而胶原纤维则被大分子的阴离子染料着染。

由此说明了红细胞对阴离子染料的渗透性最小,肌纤维与胞质次之,而胶原纤维具有最大的渗透性。

根据组织不同的渗透性能,选择分子大小不同的阴离子染料进行染色,便可把不同组织成分显示出来.而染料分子的大小,主要由其分子量来体现。

小分子量者易于穿透结构致密、渗透性低的组织,而大分子最者则只能进入结构疏松,渗透性高的组织。

一般来说,结构疏松,渗透性高的组织多选择大分子染料,而结构致密,渗透性低的组织多选择小分子染料。

试剂仪器：Harris 氏苏木精：苏木精0.4g，硫酸铝钾6g，黄色氧化汞0.16g，蒸馏水80ml。

将蒸馏水预热,预热过程中加入硫酸铝钾，沸腾后拔下电源，加入苏木精，接通电源再度沸腾后，拔掉电源，缓慢加入氧化汞，搅拌混匀，冷却后第二天加入5%比例的冰醋酸即可用。

透明玻璃瓶装缓慢氧化可省略冰醋酸，长期有效。

Masson丽春红酸性复红液：丽春红0.7g，酸性复红0.3g，蒸馏水99ml，冰醋酸1ml。

1%冰醋酸水溶液：冰醋酸1 ml，蒸馏水100 ml。

1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g，蒸馏水100 ml。

1%苯胺蓝水溶液：苯胺蓝1g，蒸馏水100 ml，冰醋酸2 ml。

1%光绿水溶液：光绿 1g，蒸馏水100 ml实验操作程序：1、石蜡切片脱蜡至水。

2、铬化处理或去汞盐沉淀（甲醛固定的组织此步可略）。