叶绿素及其检测技术
徐长亮 西北农林科技大学食品科学与工程学院 712100
摘 要:绿色是果蔬及其部分制品的重要商品性状，本文通过对叶绿素的结构和稳定性的分析，提出了包括护色、染色等护绿技术；探讨了叶绿素的紫外分光光度法、荧光分析法、光声光谱法和.基于机器视觉技术的叶绿素检测方法等检测技术的优劣。
关键词: 叶绿素；护绿；检测技术；展望
果蔬的色泽是构成产品品质的重要因素,也是检验果蔬成熟衰老的依据,色泽不仅反映果蔬的新鲜度,还可促进人们的食欲,美丽天然的食品颜色是优质果蔬的一个重要特征。果蔬的绿色主要来源于叶 绿素,叶绿素决定了产品的品质特征,同时还具有改善便秘、降低胆固醇、抗突变等生理功能。而叶绿素在果蔬贮藏、加工和货架期极易褪色或者变色,严重影响了产品质量,同时也大大降低了商品价值。而叶绿素含量的测定方法主要有紫外分光光度法、荧光分析法、活体叶绿素仪法、光声光谱法和高效液相色谱法。但是这些检测繁杂、耗时长，精度易受各种因素的影响。因此叶绿素的快速检测技术日益受到关注。
1.叶绿素
1.1叶绿素的化学结构和理化性质
图1叶绿素分子结构及其模型 叶绿素是高等植物进行光合作用的重要物质，结构为一个镁和四个吡咯环上的氮结合以卟啉为骨架的绿色色素的总称[1]。早在1818年，Berzelius 就开始了对叶绿素的研究[2]。1933年美国以有机溶剂法为基础，开始工业生产叶绿素，此方法延用至今[3]。图1是叶绿素a 的结构和模型。主要有叶绿素a 和叶绿素b 两种,在一些藻类中还有叶绿素c 和叶绿素d 。叶绿素是脂溶性色素,不溶于水,可溶于丙酮、乙醇和石油醚等有机溶剂,在颜色上,叶绿素a 呈蓝绿色,叶绿素b 呈黄绿色,它们的含量之比约为3∶1。叶绿素a 和叶绿素b 及衍生物的吸收光谱表明,
它
们在红光区(620~700nm)和蓝紫区(400~500nm)出现了较深的黑带,也就是说,这些光线被叶绿素强烈吸收;而在绿光区(520~580nm)没有黑带,即未被吸收,这也正是叶绿素是绿素的原因。戴荣继等人[4]采用紫外检测器和二极管阵列的三维检测器多次尝试后,最终确定叶绿素a的发射波长为433nm,激发波长为664nm;叶绿素b 的发射波长为469nm,激发波长为670nm。
1.2叶绿素的功能应用
食品行业中用来分析叶绿素衍生物添加剂的含量以及食品的色泽。绿色食品近年来受到了人们广泛关注，而存在于绿色植物中的一种独特而重要的营养物质—叶绿素，它的一些生理功能也开始备受重视。叶绿素的结构和血红素极相似，易于被人体吸收，有赋活细胞的作用，在医药、食品和日化工业中有广泛用途，由于叶绿素为天然品，无毒副作用，长期食用安全、可靠，因此，FAO/WHO对叶绿素每人日允许摄入量未作规定。目前，叶绿素已广泛应用于口香糖、硬糖、果汁、琼脂、糕点等食品（但不能用于酸性或含钙食品，否则，易产生沉淀），日本已将其作为绿色色素用在食品添加剂中医药工业上叶绿素具有改善便秘、降低胆固醇、抗衰老、排毒消炎、脱臭、抗癌抗突变、抗贫血、保肝等功能，对皮肤组织有再生作用，可用于治疗烫伤，慢性溃疡，能抑制葡萄球菌和链球菌生长，对齿龈炎、口臭、中耳炎等有一定疗效。另外，叶绿素可以防治感冒，感冒患者可将叶绿素溶液内服涂口唇或含漱，每日数次，1～2 d后症状可减轻。以叶绿素为原料研制治疗缺铁性贫血的叶绿素铁钠盐，提高白血球水平的叶绿素钴钠盐，增强智力和记忆力的叶绿素锌钠盐具有重要价值，由叶绿素制得的叶绿素铜钠盐更是生产治疗肝炎、胃病及十二脂肠溃疡药物的重要原料。叶绿素铜钠盐还是“肝宝”胶囊剂、“胃肝绿”片、“升血宝”、“胃康U”等药物的重要有效成分。日化工业中用作制造香皂、香水、护肤霜、香波及牙膏等产品。因此，叶绿素的市场前景非常广阔，而降低生产成本、简化提取工艺、加强对叶绿素活性的一系列研究将对果蔬产业化应用、食品科学、医药保健等领域产生深远影响[5~7]。
1.3影响叶绿素稳定的因素
果蔬中叶绿素的降解是其色泽退化的根本原因。影响叶绿素稳定的因素有很多，比如光、叶绿素酶、温度、pH、氧气、微生物以及金属离子等[8]。研究表明，光和氧气对叶绿素的降解具有极显著的影响，温度、pH等对叶绿素降解影响也较显著。
1.3.1光
光对叶绿素的降解机理，国内外已有大量的研究。在活体植物中，叶绿素可以得到很好的保护，不仅不会发生降解，还可以进行光合作用。但离体的叶绿素在光的作用下变为三线态，通过电子传递，产生自由基等活性氧而破坏蛋白质、碳水化合物及DNA等生物分子的结构，引起叶绿素分子的降解［9,10］。
研究发现，紫堇叶绿素随着光照时间的增加，其光吸收值降低，同时叶绿素的颜色逐渐变浅，当光照时间大于4h时，紫堇叶绿素在430nm处的光吸收值明显降低。唐小俊等[11]在室外自然光、室内自然光和黑暗条件下对苦瓜叶绿素的光稳定性进行了研究，结果表明，苦瓜叶绿素对光非常不稳定，光越强，稳定性越差。胡秋娈等[12]对荠菜叶绿素光稳定性的研究和王敏等[13]对冬青叶绿素光稳定性的研究都得出相似的结果。
1.3.2氧气
在叶绿素的降解中占有重要地位，活性氧可使叶绿素四吡咯环碳环双键裂解，导致卟啉大环裂解，同时O2还能影响相关酶的活性，对叶绿素的降解具有显著性影响。许多文献报道，叶绿素的降解速率与氧气的浓度呈正相关，随着环境中氧气浓度的增加，叶绿素的褪色现象愈来愈严重。
1.3.3温度
对叶绿素的降解具有显著影响。研究表明，在不同受热温度条件下，叶绿素提取液的降解速率曲线有明显的拐点。一般认为，温度影响叶绿素降解的机理主要是影响果蔬体内各种酶的活性。如在青花菜中，叶绿素过氧化物酶的活性随温度的升高而升高，到达一定温度时，叶绿素的含量迅速降低。
1.3.4叶绿素
在中性和弱酸弱碱性条件下较稳定，研究表明，pH在6～11之间叶绿素的保存率高达90%。酸性过强会导致叶绿素脱镁而褪色明显，碱性过强则会加速脱酯反应使叶绿素分解，但碱性条件下叶绿素不会发生脱镁或碳环裂解反应，能保持相对稳定的色泽。
1.3.5叶绿素酶
大量研究证明，叶绿素酶在叶绿素酶促降解代谢的最初步骤中起作用，其最适反应温度为60～80℃，当温度大于80℃时，叶绿素酶活性下降，100℃时已完全失活。
1.4护绿
1.4.1降低体系的水分活度和贮藏温度
果蔬中的水分活度可以影响微生物的繁殖、代谢和生存。当水分活度小于0.6时，果蔬在不需要冷藏的情况下可获得较长的货架期，色泽基本不变在低温条件下，叶绿素酶的活性大大降低。研究表明，果蔬中叶绿素b的降解速度在40℃时比25℃时快3.2～5.2倍，比4℃时快11～21倍。通过真空冷冻干燥可以在低温条件下降低果蔬中的水分活度使果蔬中的叶绿素得到最大限度的保留。1.4.2金属离子取代镁
叶绿素分子卟啉环中的镁离子在酸性条件下被氢离子取代，生成黄褐色的脱镁叶绿素，但脱镁叶绿素分子中的氢离子被铜、锌、钙等金属离子取代，生成相应的叶绿素金属离子络合物，恢复为绿色，这种络合物对酸、热、氧气和光等的稳定性大大提高，可使叶绿素较长时间的保存。同时，在果蔬加工过程中，配合热烫处理，酸碱度调节等，可以达到很好的护绿效果。
1.4.3染色技术
叶绿素铜钠、叶绿素锌钠等是叶绿素的衍生物作为安全的天然食品添加剂，具有很好的护绿效果叶绿素铜钠呈蓝黑或墨绿色，易溶于水，微溶于乙醇、氯仿，不溶于油脂，其耐光、耐热性强于叶绿素有一定的吸湿性。叶绿素锌钠呈墨绿色，水溶性好难溶于丙酮和乙醇，耐热性强，但耐光性较差，具有很好的抗氧化、还原性
1.4.4其它护绿技术
气调贮藏是在一定的温度和湿度条件下，通过控制贮藏环境中的气体成分，延缓果蔬的生长势，降低其呼吸强度，从而达到贮藏保鲜目的的贮藏方法。壳聚
糖是一类涂膜保鲜剂，它可在果蔬表面形成半透膜，具有很好的护绿保鲜效果。盛玮等用高压脉冲电场处理果蔬，可以达到很好的护绿效果。其它护色技术还包括减压贮藏、真空包装或充氮包装，利用蜂胶护色保鲜等。
2.叶绿素的检测技术
叶绿素含量的测定方法主要有紫外分光光度法、荧光分析法、活体叶绿素仪法、原子吸收光谱法和光声光谱法。快速测定的方法包括基于计算机视觉技术的叶绿素含量检测系统、快速检测仪如SPAD-502 叶绿素仪。其中分光光度法具有准确度高的特点,是叶绿素含量测定过程中应用最为广泛的方法。
2.1紫外分光光度法[14]
因紫外分光光度法精确性高，所以GBT 22182-2008 油菜籽叶绿素含量测定就是使用的分光光度计法。紫外分光光度法测定叶绿素含量主要依据Arnon公式,其计算方法是:分别以提取溶剂作空白,测定叶绿素提取液吸光度A645、A663,根据下面的公式:
叶绿素a浓度(mg/L):C a=12*7A663-2*69A645;
叶绿素b浓度(mg/L):C b=22*9A645-4*68A663;
叶绿素总浓度(mg/L):C a+b=C a+C b。
上述公式可以定量地说明叶绿素提取液受不同影响因子作用后的降解率。但是测试程序耗时，需要有经验的分析人员方能确保良好的数据及长期的一致性；且受多方面的因素影响。
2.2荧光分析法
由于分光光度法测量需要进行叶绿素的取样、萃取和离心等工序，在操作上较为繁琐，而荧光测量法测量简便，并具有较高的精度和较宽的测量范围，所以在叶绿素a的实时检测系统中使用较为广泛。在叶绿素a检测过程中，由于水体中叶绿素a的含量较低，所以不容易检测，且极易受到外部信号的干扰。同时激发光源和发射光会受到水体中悬浮微粒的散射作用影响而减小光强，并且水体受到光照时，除了荧光物质发光外，还存在入射光相同的液体分子散射，无机悬浮物的粒子散射等。所以目前研究遇到的问题主要是有效激发光的选择、小信号的提取、电路抗干扰能力以及缩小整个系统的体积和重量等。
2.3原子吸收光谱法
通过测定镁元素的含量，进而间接计算叶绿素的含量。但是只能研究含镁叶绿素。
2.4光声光谱法
光声光谱法作为一门新兴技术已被广泛地应用于各门学科的研究之中[15]。光声光谱可以得到任何类型固态物质(如晶体、粉末、凝胶直至生物活体)的光谱对于许多传统光谱难于测定的不透明、高反射、高散射试样，常无需制样或稍加制样即可简便地加以测定。生物试样的光声光谱研究近年来有迅速增长。光声光谱是直接探测无辐射跃迁过程的唯一手段，70年代以来已发展成一个专门的研究领域，研究对象涉及物理、化学、生物、材料等学科，并且能给半导体工业和微电子工业的研究提供一种新的研究和检测手段。光声光谱直接测量光束与材料相互作用后所吸收的热量，显然，它是光谱技术与量热技术的组合。同传统的光
谱技术相比较。光声光谱技术具有下列特点：（1）直接测量光束与材料相互作用后所吸收的热量；（2）对散射光不敏感；（3）样品本身就是电磁辐射的检测器。光声光谱技术本身的特点使得它能胜任传统光谱技术难于完成或不能完成的某些工作。
2.5.基于机器视觉技术的叶绿素检测方法[16]
基于计算机视觉的叶绿素检测方法是一种快捷、便利的监测方法，具有无损伤实时等特点，成为植物叶绿素信息获取的新手段。植物叶片颜色的变化实质上是植体内叶绿素及其它色素含量变化引起的。叶片的颜色与叶绿素含量有着密不可分的系，人们往往把叶片颜色变化作为判断作物营养和缺素症发生的直接依据。这种测定方法与分光光度计法相比，其优势在于快速，简便，省时，省力，节成本，操作简单，不足之处是精度不如分光光度计法高，但也完全能满足指定农业产的需要。与SPAD（日本美能达公司产的SPAD-502叶绿素含量测定仪，其工作原是通过测量叶片在两种波长范围内的透光系数来确定叶片当前叶绿素的相对数量。测定方法相比，因SPAD的测定是点触式的，读取的数值仅是仪器探头触点处的叶素含量值，不能代表整个叶片的叶绿素含量水平，若要获取整个叶片的叶绿素含量要进行大量测定。流程如下：对象图像采集→数据预处理→图像分析→叶绿素数据分析。
3.展望
叶绿素的检测技术会向着快速、无损检测的方向发展。基于机器视觉技术的叶绿素检测方法实现了快捷化的操作，但是其精确度太低，误差较大，只有解决了这些问题，其检测方法才能有更高的可信度。
参考文献：
[1]布坎南B,格鲁依森姆W,琼斯R L.植物生物化学与分子生物学[M].北京:科学出版
社,2004:466~474.
[2]罗庆峰.叶绿素的研究进展及叶绿素铜钠的开发利用[J].林产化工通讯,1995(1):32~33.
[3]蔡秋声.叶绿素及其衍生物的特性和生理功能[J].食品工业,1997(2):38~40.
[4]戴荣继,佟斌,黄春等. HPLC测定饮用水中藻类叶绿素含量[J].北京理工大学学报. 2006, 26
(1): 87~89
[5]郑国栋,欧阳文,颜苗,等.叶绿素及其衍生物的药理研究进展[J].中南药
学,2006,4(2):146~148.
[6]刘计.叶绿素铜钠片与利血生片治疗抗精神病药物所致粒细胞减少症的疗效对照研究[J].
中国民康医学,2007,19(12):1068~1070.
[7]柳新平,王新明,周开文,等.叶绿素在肿瘤防治中的应用研究进展[J].中国肿瘤临床与康
复,2007,14(3):269~271.
[8]黄持都，胡小松，廖小军，等.叶绿素研究进展［J］.中国食品添加剂，2007(3):114~118.
[9]杨晓棠,张昭其,庞学群.果蔬采后叶绿素降解与品质变化的关系[J].果树学报,2005,22(6)
691~696
[10]杨晓棠,张昭其,徐兰英等.植物叶绿素的降解[J].植物生理学通讯,2008,44(1) :7~12
[11]唐小俊,张雁,池建伟等.苦瓜叶绿素提取工艺研究[J].食品科技,2007,32(8):142~144
[12]胡秋娈,于相丽，郭向萌，等.荠菜中活性物质叶绿素稳定性研究［J］.安徽农业科学，2006，
34(9):1796~1797.
[13]王敏，姜莉，张为民.冬青叶绿素稳定性的试验研究［J］.安徽农业大学学报，2003，
30(4):455~458.
[14]袁方,李鑫,余君萍,等.分光光度法测定海水中叶绿素含量的研究[J]植物生理学通报
2009,45(1)63~66
[15]伍荣护.植物色素的光声光谱研究[J].光谱学与光谱分析,2002,22(3):378~380
[16] 蒋丽华. 2009.10. 基于计算机视觉技术的叶绿素含量检测系统[硕士论文] 苏州大学
第一节 叶绿素荧光参数及其意义 韩志国，吕中贤（泽泉开放实验室，上海泽泉科技有限公司，上海，200333） 叶绿素荧光技术作为光合作用的经典测量方法，已经成为藻类生理生态研究领域功能最强大、使用最 广泛的技术之一。由于常温常压下叶绿素荧光主要来源于光系统II 的叶绿素a ，而光系统II 处于整个光合 作用过程的最上游，因此包括光反应和暗反应在内的多数光合过程的变化都会反馈给光系统II ，进而引起 叶绿素a 荧光的变化，也就是说几乎所有光合作用过程的变化都可通过叶绿素荧光反映出来。与其它测量 方法相比，叶绿素荧光技术还具有不需破碎细胞、简便、快捷、可靠等特性，因此在国际上得到了广泛的 应用。 1 叶绿素荧光的来源 藻细胞内的叶绿素分子既可以直接捕获光能，也可以间接获取其它捕光色素（如类胡萝卜素）传递来 的能量。叶绿素分子得到能量后，会从基态（低能态）跃迁到激发态（高能态）。根据吸收的能量多少， 叶绿素分子可以跃迁到不同能级的激发态。若叶绿素分子吸收蓝光，则跃迁到较高激发态；若叶绿素分析 吸收红光，则跃迁到最低激发态。处于较高激发态的叶绿素分子很不稳定，会在几百飞秒（fs ，1 fs=10－15 s ）内通过振动弛豫向周围环境辐射热量，回到最低激发态（图1）。而最低激发态的叶绿素分子可以稳定 存在几纳秒（ns ，1 ns=10－9 s ）。 波长吸收荧光红 B 蓝 荧光 热耗散 最低激发态较高激发态基态吸收蓝光吸收红光能量A 图1 叶绿素吸收光能后能级变化（A ）和对应的吸收光谱（B ）（引自韩博平 et al., 2003） 处于最低激发态的叶绿素分子可以通过几种途径（图2）释放能量回到基态(韩博平 et al., 2003; Schreiber, 2004)：1）将能量在一系列叶绿素分子之间传递，最后传递给反应中心叶绿素a ，用于进行光化 学反应；2）以热的形式将能量耗散掉，即非辐射能量耗散（热耗散）；3）放出荧光。这三个途径相互竞 争、此消彼长，往往是具有最大速率的途径处于支配地位。一般而言，叶绿素荧光发生在纳秒级，而光化 学反应发射在皮秒级（ps ，1 ps=10－12 s ），因此在正常生理状态下（室温下），捕光色素吸收的能量主要用 于进行光化学反应，荧光只占约3%～5%(Krause and Weis, 1991; 林世青 et al., 1992)。 在活体细胞内，由于激发能从叶绿素b 到叶绿素a 的传递几乎达到100％的效率，因此基本检测不到 叶绿素b 荧光。在常温常压下，光系统I 的叶绿素a 发出的荧光很弱，基本可以忽略不计，对光系统I 叶 绿素a 荧光的研究要在77 K 的低温下进行。因此，当我们谈到活体叶绿素荧光时，其实指的是来自光系 统II 的叶绿素a 发出的荧光。
叶绿素含量的测定 一、原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。 根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A 与其中溶质浓度C 和液层厚度L 成正比，即A ＝αCL 式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm 时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。 如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a 、b 和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A ，并根据叶绿素a 、b 及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a 、b 时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。 已知叶绿素a 、叶绿素b 的80%丙酮溶液在红外区的最大吸收峰分别位于663、645nm 处。已知在波长663nm 下叶绿素a 、叶绿素b 在该溶液中的吸光系数的分别为82.04和9.27；在波长645nm 处的吸光系数分别为16.75和45.60。根据加和性原则列出以下关系式： A663=82.04Ca+9.27Cb （1） A645=16.76Ca+45.60Cb （2） 式（1） （2）A 663nm 和A645nm 为叶绿素溶液在663nm 和645nm 处的吸光度，C a C b 分别为叶绿素a 、叶绿素b 的浓度，以mg/L 为单位。 解方程（1） （2）组得 C a =12.72 A 663—2.59 A 645 (3) C b =22.88 A 645—4.67 A 663 (4) 将C a +C b 相加即得叶绿素总量C T C T ＝ C a 十C b ＝20.29A 645—8.05 A 663 (5) 从公式（3）、（4）、（5）可以看出，，就可计算出提取液中的叶绿素a 、b 浓度另外，由于叶绿素a 叶绿素b 在652nm 的吸收峰相交，两者有相同的吸光系数（均为30.5），也可以在此波长下测定一次吸光度（A 652）而求出叶绿素a 、叶绿素 b 总量 所测定材料的单位面积或单位重量的叶绿素含量可按下式进行计算： C T ＝ 5 .341000 652 A (6) 有叶绿素存在的条件下，用分光光度法可同时测出溶液中类胡萝卜素的含量。Licht-enthaler 等对Arnon 进行了修正，提出了 80%丙酮提取液中3种色素含量的计算公式： C a ＝12.21A 663—2.59 A 646 (7)
叶绿素荧光研究背景知识介绍 前言 近些年来，叶绿素荧光技术已经逐渐成为植物生理生态研究的热门方向。荧光数据是植物光合性能方面的必要研究内容。目前这种趋势由于叶绿素荧光检测仪的改进而得到发展。然而荧光理论和数据解释仍然比较复杂。就我们所了解的情况来看，目前许多研究者对荧光理论不是很清楚，仪器应用仅仅限于简单的数据说明的基础上，本文在此基础上，目的在于简单明晰地介绍相关理论和研究要点，以求简单明确地使用叶绿素荧光检测设备，充分分析实验数据，重点在于植物生理生态学技术的应用和限制。 荧光测量基础 植物叶片所吸收的光的能量有三个走向：光合驱动、热能、叶绿素荧光。三个过程之间存在竞争，其中任何一个效率的增加都将造成另外两个产量的下降。因此，测量叶绿素荧光产量，我们可以获得光化学过程与热耗散的效率的变化信息。尽管叶绿素荧光的总量很小(一般仅占叶片吸收光能总量的1-2%)，测量却非常简单。荧光光谱不同于吸收光谱，其波长更长，因此荧光测量可以通过把叶片经过给定波长的光线的照射，同时测量发射光中波长较长的部分光线的量来实现。有一点需要注意的是，这种测量永远是相对的，因为光线不可避免会有损失。因此，所有分析必须把数据进行标准化处理，包括其进一步计算的许多参数也是如此。 调制荧光仪的出现是荧光研究技术的革命性的创新。在这类仪器中，测量光源是调制(高频率开关)的，其检测器也被调谐来仅仅检测被测量光激发的荧光。因此，相对的荧光产量可以在背景光线(主要是指野外全光照的条件下)存在的条件下进行测量。目前绝大多数的荧光仪采用了调制系统，同时也强烈建议选择调制荧光仪(Kate Maxwell,2000)。 为什么荧光产量会发生改变？Kautsky效应和Beyond 叶绿素荧光产量的变化最早在1960年被Kautsky和其合作者发现。他们发现，当把植物叶片从黑暗中转入光下，荧光产量瞬间上升(大约在1秒左右)这种上升可以解释为光合途径中电子受体的还原(可接受电子的受体的减少)。一旦PSII吸收光能，初级电子受体Q A(质体醌)接受了电子，它将不能再接受电子，直到它把电子传递给下一级电子载体Q B。此期间，反应中心是关闭的，反应中心关闭的比
种子仪器/农业仪器/粮油仪器设备价格优惠，专业生产销售厂家：郑州南北仪器设备有限公司（南北设备集团），南北通过向客户提供领先的产品性能来追求种子仪器/农业仪器/粮油仪器设备行业第一领先地位 便携式叶绿素测定仪/叶绿素仪/便携式叶绿素仪 仪器型号： SPAD-502Plus 产地：日本原装进口 产品介绍：轻巧，简便，实用 SPAD-502Plus是一种可以通过测量作物叶子中的叶绿素含量来帮助用户了解作物营养状况的仪器。叶绿素含量与作物的生长条件有关，因此，可以由此来判断是否还需要添加相应的肥料。通过营养条件最优化，才能生长出更健康的作物，最终得到高质量的大丰收。产品特点: 测量迅速、简便。测量时只需要将叶片插入并合上测量探头即可，无需将叶片剪下，这样就可以在作物的生长过程中全程对特定的叶片进行监测，从而得到更科学的分析结果。叶绿素仪趋势图显示 测量的多组数据走势会显示在图中，那些差异较大的数据可以一目了然就被发现出来，从而得到重视并进行分析。 防水功能 SPAD-502Plus有防水功能（IPX-4），即使下雨天，也可在室外进行测量工作。不可将仪器浸入水中，或用水直接对仪器进行清洗。SPAD-502Plus拥有小巧的机身，仅200g的重量，可以方便地装入口袋并带到现场进行测量。电池消耗低，SPAD-502Plus使用的是LED照明光源，因此可大大降低电池的消耗，一组2节的AA电池，可进行测量约20,000次。 SPAD-502原理 SPAD-502Plus通过测量叶子对两个波长段里的吸收率，来评估当前叶子中的叶绿素的相对含量。下图显示了两种叶子样品中的叶绿素对于光谱的吸收率。
叶绿素含量的测定 一、原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b 及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。 二、材料、仪器设备及试剂 （一）材料：新鲜（或烘干）的植物叶片。 （二）仪器设备：1）分光光度计；2）电子顶载天平（感量0.01g）；3）研钵；4）棕色容量瓶； 5）小漏斗；6）定量滤纸；7）吸水纸； 8）擦境纸；9）滴管。 （三）试剂：1）95%乙醇（或80%丙酮）（v丙酮：v乙醇=2：1的95%水溶液）；2）石英砂；3）碳酸钙粉。暗中2h，0.5g，25ml 三、实验步骤 1）取新鲜植物叶片（或其它绿色组织）或干材料，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。 2）称取剪碎的新鲜样品 0.2g ，共3份，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3ml 95%乙醇，研成均浆，再加乙醇10ml，继续研磨至组织变白。静置3～5m 3）取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。 4）用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至25ml，摇匀。 5）把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内，以95%乙醇为空白，在波长663nm 和645nm下测定吸光度。在波长663nm、645nm下或652nm测定吸光度。 四、实验结果计算 叶绿素a的含量 = 12.7 ? OD 663 – 2.69 ? OD 645 叶绿素a的含量 = 22.9 ? OD 645 – 4.86 ? OD 663 叶绿素a、b的总含量 = 8.02 ? OD 663 + 20.20 ? OD 645
叶绿素含量的测定 一.实验原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。 根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL.式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。 如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。就是吸光度的加和性。如欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b 及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。 植物叶绿素含量测定----丙酮提取法 高等植物光合作用过程中利用的光能是通过叶绿体色素(光合色素)吸收的。叶绿体色素由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。叶绿体色素的提取、分离和测定是研究它们的特性以及在光合中作用的第一步。叶片叶绿素含量与光合作用密切相关，是反眏叶片生理状态的重要指标。在植物光合生理、发育生理和抗性生理研究中经常需要测定叶绿素含量。叶绿素含量也是指导作物栽培生产和选育作物品种的重要指标。 ● 叶绿素不溶于水，溶于有机溶剂，可用多种有机溶剂，如丙酮、乙醇或二甲基亚砜等研磨提取或浸泡提取。叶绿色素在特定提取溶液中对特定波长的光有最大吸收，用分光光度计测定在该波长下叶绿素溶液的吸光度(也称为光密度)，再根据叶绿素在该波长下的吸收系数即可计算叶绿素含量。 ●利用分光光计测定叶绿素含量的依据是Lambert-Beer定律，即当一束单色光通过溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和液层厚度的乘积成正比。其数学表达式为： ●A=Kbc 式中：A为吸光度；K为吸光系数；b为溶液的厚度；c为溶液浓度。 ●叶绿素a、b的丙酮溶液在可见光范围内的最大吸收峰分别位于663、645nm处。叶绿素a 和b在663nm处的吸光系数（当溶液厚度为1cm，叶绿素浓度为g·L-1时的吸光度）分别为82.04和9.27；在645nm处的吸光系数分别为16.75和45.60。根据Lambert-Beer定律,叶绿素溶液在663nm和645nm处的吸光度（A663和A645）与溶液中叶绿素a、b和总浓度（a+b）（Ca、Cb 、Ca十b，单位为g·L-1），的关系可分别用下列方程式表示： ●A663=82.04C a+9.27C b （1） ●A645=16.76C a+45.60C b（2） ●C a=12.7 A663—2.59 A645(3) ●C b=22.9 A645—4.67 A663 (4) ●C a十b＝20.3 A645—8.04 A663 (5) ●
便携式叶绿素测定仪详细介绍 据实验研究表明，叶片中的叶绿素含量判断植物营养状况好坏的标志，根据它可以判断出植物需要什么肥料及肥料配比的数量，而传统的叶绿素检测方法十分麻烦。为此，托普云农研究开发出一种便携式的叶绿素测定仪仪，可以带到田间直接测量各种植物叶片上叶绿素的浓度和含量，从而即时调整田间的施肥标准。本文就从各方面详细介绍一下便携式叶绿素测定仪。 一、便携式叶绿素测定仪是什么？ 便携式叶绿素测定仪是一款可以无损快速测量植物的叶绿素相对含量或“绿色程度”仪器，仪器主要是通过测量叶片在两种波长范围内的透光系数来确定叶片当前叶绿素的相对数量，也就是在叶绿素选择吸收特定波长光的两个波长区域，根据叶片透射光的量来计算测量值。 二、便携式叶绿素测定仪有哪些功能特点？ 1、快速无损植物活体检测，不影响植物成长。 2、一次操作可同时测定所有参数，实时显示。 3、叶绿素，叶温两种参数同一屏幕同时中文显示，且可同时储存，自动求取四种指标的平均值 4、中文界面具有“系统设置”“查看数据”“节能设置”“时钟设置”“删除数据”等功能。 历史数据查看，既可顺序查看，也可跳转查看。 6、可输入植物名称，标准氮含量及利用率可以直接计算出标准施肥量 7、意外断电后已保存在主机里的数据不丢失。 8、对于历史数据既可逐条删除，也可以一键式全部删除。 9、仪器自带USB接口，可连接计算机将测量数据导出，便于植物养分的管理和分析。 10、内置锂电池供电，可直接充电无需换电池，仪器自带背光功能。 三、便携式叶绿素测定仪该怎么用？ TYS-B便携式叶绿素测定仪使用方法： 1、校准：打开电源开关，进入主页面，按住测量压头，直到显示屏显示校验成功，同时蜂鸣器发出“滴”声； 2、测量：测量时请将植物放入测量位置，按下测量压头2-3秒，蜂鸣器会 发出“滴”声，此时松开测量压头，显示屏自动显示所测叶片的叶绿素值和叶片温度值； 3、均值：在主界面下，长按确定键3秒，可对最近几次测量数据取平均值； 4、使用完毕，关闭电源开关。 TYS-B便携式叶绿素测定仪使用注意事项： 1、保持测量位置的清洁，以免影响测量结果。
叶绿素含量测定方法---丙酮法 由于微藻的生长周期比较复杂，包括无性繁殖阶段和有性繁殖阶段，其在不同阶段的生理形态不同，有时藻细胞会聚集在一起，以片状或团状形式存在，在显微镜下难以确定其所包含的细胞数量。 藻细胞中叶绿素的含量（特别是叶绿素a的含量）通常随与细胞的生长呈较好的线性关系，因此可通过测定藻细胞中叶绿素含量变化来反映微藻的生长情况。叶绿素测定采用丙酮研磨提取法。 取适量藻液于10 mL离心管中在4000 rpm转速下离心10 min，弃去上清液，藻泥中加入适量的100 %的丙酮。采用丙酮提取法时在试管研磨器中冰浴研磨5 min，4000 rpm离心后，上清液转入10 mL容量瓶中。按上述方法对藻体沉淀进行萃取，直至藻体沉淀呈白色为止。定容后，采用722S型可见分光光度计分别测定645 nm和663 nm下萃取液的吸光值，叶绿素含量用以下公式进行计算（Amon,1949）： 叶绿素a含量用以下公式进行计算： Chlorophyll a (mg/L) = (12.7×A663 nm－2.69×A645 nm)×稀释倍数 叶绿素b含量用以下公式进行计算： Chlorophyll b (mg/L) = (22.9×A645 nm－4.64×A663 nm)×稀释倍数 叶绿素总含量用以下公式进行计算： Chlorophyll a＋b (mg/L) = (20.2×A645 nm＋8.02×A663 nm)×稀释倍数 由于丙酮的沸点较低，较高温度下挥发很快。此外，叶绿素稳定性较差，见光易分解，因此，本实验中叶绿素的提取和测定均在低温黑暗条件下进行，以减少提取过程中的损失。 叶绿素提取方法 提取液：本试验用DMSO/80%丙酮(l/2，v/v)提取的叶绿素，谭桂英周百成底栖绿藻叶绿素的二甲基亚砜提取和测定法* 海洋与湖沼 1987 18（3）295--300. 一、直接浸提法： 1、准确量取10ml藻液,加到15ml离心管中，放在台式离心机离心，3500r/min （根据不同的藻选择不同那个的离心转速）离心5min倒上清；留藻泥。随后在盛有藻泥的离心管中加入蒸馏水，与藻泥混匀后再次离心，目的是除去藻细胞表面的盐份，此清洗过程重复三次。 2、往藻泥中加二甲基亚砜3.33ml，65℃水浴9h，20h； 3、然后离心，将上清转移到10ml棕色瓶中， 4、添加6.67ml80%丙酮到离心管中，混匀，离心，再将上清转移到10ml棕色瓶中。 5、定容，待测。
便携式叶绿素测定仪 仪器用途： 可以即时测量植物的叶绿素相对含量（单位SPAD）或绿色程度、氮含量、叶面湿度、叶面温度，从而了解植物真实的硝基需求量并且了解土壤硝基的缺乏程度或是否过多地施加了氮肥。可以通过此款仪器来增加氮肥的利用率，并可保护环境。可广泛应用于农林相关科研单位和高校对植物生理指标的研究和农业生产的指导。 功能特点： 快速无损植物活体检测，不影响植物成长。 一次操作可同时测定所有参数，实时显示。 氮，叶绿素，叶温，叶片湿度四种参数同一屏幕同时显示，且可同时储存 内置GPS定位功能，实时显示当前经纬度 历史数据查看，即可顺序查看。 测量数据可连接计算机将测量数据导出，便于植物养分的管理和分析。 历史数据查看，即可顺序查看，也可跳转查看。 意外断电后已保存在主机里的数据不丢失。 对于历史数据可以一键式全部删除。 可连接计算机将测量数据导出，便于植物养分的管理和分析。 使用锂电池供电，带背光功能。 每种参数的报表、曲线图均可选择时段查询查看。 可将存储记录的数据以EXCEL格式备份保存，方便以后调用。 可将存储记录的数据曲线图以BMP图片格式备份保存，方便以后调用。 技术参数： 1、测量范围：叶绿素：0.0-99.9SPAD 氮含量：0.0-99.9mg/g 叶面湿度：0.0-99.9RH% 叶面温度：-10-99.9℃ 2、测量精度：叶绿素：±1.0 SPAD单位以内(室温下，SPAD值介于0-50) 氮含量：±5% 叶面湿度：±5% 叶面温度：±0.5℃ 3、重复性：叶绿素：±0.3 SPAD单位以内(SPAD值介于0-50) 氮含量：±0.5单位 叶面湿度：±0.5单位 叶面温度：±0.2℃ 4、测量面积：2mm*2mm 5．测量时间间隔：小于3秒 6．数据存储容量：2000组数据 7．电源：4.2V可充电锂电池 8．电池容量：2000mah 9．重量：200g
实验报告 植物生理学及实验（甲）实验类型：课程 名称：实验名称：叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶 绿素含量的测定姓名：专业：学 号：指导老师：同组学生姓名： 实验日期：实验地点： 二、实验内容和原理一、实验目的和要求装 四、操作方法与实验步骤三、主要仪器设备订 六、实验结果与分析五、实验数据记录和处理 七、讨论、心得一、实验目的和要求、掌握植物中叶绿体色素的分离和 性质鉴定、定量分析的原理和方法。1 和b的方法及其计算。a2、熟悉在 未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿素二、实验内容和原理以青菜为 材料，提取和分离叶绿体色素并进行理化性质测定和叶绿素含量分析。 原理如下：80%的乙醇或95%叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，1、常用的丙酮提取。、皂化反应。叶绿素是二羧酸酯，与强碱反应， 形成绿色的可溶性叶绿素2． 盐，就可与有机溶剂中的类胡萝卜素分开。- COOCHCOO3 Mg + 2KOH C32H30ON4Mg + 2KOH +CH3OH
HONC43230+C20H39OH 、3H+可依次被在酸性或加温条件下，叶-COOCOOCH39 20 绿素卟啉环中的Mg++取代反应。Mg2+, Cu2+ 取代Cu++取代形成褐色的去镁叶绿素和绿色的铜代叶绿素。(H+和H+ ) 取代(Zn2+) 绿色褐色 、叶绿素受光激发，可发出红色荧光，反射光下可见红色荧光。4645其中叶绿素吸收红光和兰紫光，红光区可用于定量分析，5、定量分析。 652可直接用于总量分析。663用于定量叶绿素a,b及总量，而和C最大吸收光谱不同的两个组分的混合液，它们的浓度根据朗伯-比尔定律， *k+C*kOD=Ca*k与吸光值之间有如下的关系： OD=Ca*k+C b2 1g/L和b的80查阅文献得，2b1 b1a1a2b时，比吸收系％丙酮溶液，当浓度为 叶绿素a 值如下。数k k 比吸收系数波长/nm b 叶绿素a 叶绿素 9.27 82.04 663 45.60 645 16.75
植物生理学实验报告实验题目：叶绿素含量的测定 姓名 班级 学号
一、实验原理和目的 根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比。叶绿素(丙酮)在652nm(混合）、663nm、645nm有最大吸收峰。 叶绿素(95%乙醇)在665nm、649nm，类胡萝卜素在470nm有最大吸收峰，根据在分光光度计下测定的吸光度，求得叶绿素的含量 二、实验器具和步骤 植物材料：女贞 实验器具：分光光度计；电子天平；研钵；试管；小漏斗；滤纸；吸水纸；移液管；量筒；剪刀 试剂：95％乙醇（或80％丙酮）；石英砂；碳酸钙粉 步骤：1.称取剪碎的新鲜样品0.1g 左右，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及3～5ml 95％乙醇，研成均浆，继续研磨至组织变白。静置3～5min 2. 取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到10ml试管中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。 3.用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至10 ml ，摇匀 4. 把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95％乙醇为空白，在波长665nm、649nm、470nm下测定吸光度 5. 计算公式： 叶绿素的含量（mg/g）= (浓度×提取液体积×稀释倍数）/样品鲜重。 Ca=13.95A665－6.88A649； Cb=24.96A649－7.32A665 C类=(1000A470-2.05Ca-114.8Cb)/245 单位：mg/L 三、实验数据和作业
2、计算叶绿素含量 计算公式： 叶绿素的含量（mg/g）= (浓度×提取液体积×稀释倍数）/样品鲜重。 Ca=13.95A665－6.88A649； Cb=24.96A649－7.32A665 C类=(1000A470-2.05Ca-114.8Cb)/245 单位：mg/L 由上面的公式进行代入计算，有： Ca=13.95*1.820-6.88*0.953=18.83236 Cb=24.96*0.953-7.32*1.820=10.46448 C类=（1000*1.948-2.05*18.83236-114.8*10.46448）/245=2.8901 则：叶绿素含量=（29.29684*10*0.001*1）/0.1=2.9297 四、数据分析 实验中可能清洗研钵和滤纸不是特别干净可能造成误差 五、思考题 为什么提取叶绿素时干材料一定要用80％的丙酮，而新鲜的材料可以用无水丙酮提取？答：因为叶绿素存在于叶绿体内囊体上与其上的蛋白质组成色素蛋白复合体，要 分离叶绿素和蛋白质必须有水，叶绿素的头部为极性的，有亲水性
叶绿素含量测定仪的特点及应用 叶绿素含量的测定方法有很多种，使用最广泛的方法是研磨法，也是比较传统的一种方法，该方法需要把植物植物的材料研磨并经转移、过滤或离心处理，不仅工作量大，损害植物，而且不可避免地使试验人员较长时间与挥发于空气中的试剂相接触，对人体损害较大。因此，为了弥补传统检测方法的不足，叶绿素含量测定仪的研发及应用得到了实验人员的广泛的关注，该仪器的应用不仅提高了工作效率，还能够实现快速无损植物活体检测，而且还不影响植物的生长。 除此之外，叶绿素含量测定仪的测量方法也很简单，操作人员只需要手持叶绿素含量测定仪，将叶片插入仪器的感应部位，然后合上测量探头即可。这种测量方法还有一大好处就是，不会对叶片造成损伤，可以实现无损快速测量，尤其是在作物的生长过程中全程对特定的叶片进行监测，可以得到更科学的分析结果。除此之外，应用于这种测定的仪器又被叫做便携式叶绿素仪，因为该叶绿素含量测定仪拥有小巧的机身，仅200g的重量，可以方便地装入口袋并带到现场进行测量。由此可见，叶绿素含量测定仪产品拥有诸多的特点。 托普云农研发生产的TYS-B叶绿素含量测定仪，其主要是通过测量叶片在两种波长范围内的透光系数来确定叶片当前叶绿素的相对数量，也就是在叶绿素选择吸收特定波长光的两个波长区域，根据叶片透射光的量来计算测量值。植物之所以呈现绿色，正是因为它含有丰富的叶绿素，而植物叶片中的叶绿素含量指示了植物本身的状况，长势良好的植物的叶子会含有更多的叶绿素，并且有相关研究表明，叶绿素的含量与叶片中氮的含量有很密切的关系，因此使用叶绿素含量测试仪快速无损测量植物的叶绿素含量还能反应植物真实的硝基需求量，从而有利于合理的施加氮肥，提高氮的利用率，并可保护环境。
测定叶绿素a和b的方 法及其计算 Document serial number【NL89WT-NY98YT-NC8CB-NNUUT-NUT108】
实验二十五测定叶绿素a和b的方法及其计算 一目的要求： 熟悉在未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿素a和b的方法及其计算。 二实验原理： 如果混合液中的两个组分，它们的光谱吸收峰虽然有明显的差异，但吸收曲线彼此有些重叠，在这种情况下要分别测定两个组分，可根据Lambert-Beer定律，通过代数方法，计算一种组分由于另一种组分存在时对光密度的影响，最后分别得到两种组分的含量。 如图z-4叶绿素a和b的吸收光谱曲线，叶绿素a的最大吸收峰在663nm，叶绿素b在645nm，吸收曲线彼此又有重叠。 图z-4 叶绿素a和b的吸收光谱曲线 横坐标为波长（nm），纵坐标为比吸收系数 根据Lambert-Beer定律，最大吸收光谱峰不同的两个组分的混合液，它们的浓度C与光密度OD之间有如下的关系： OD1=Ca·ka1+Cb·kb1 （1） OD2=Ca·ka2+Cb·kb2 （2） 式中：Ca为组分a的浓度，g/L。 Cb为组分b的浓度，g/L。 OD1为在波长λ1（即组分a的最大吸收峰波长）时，混合液的光密度OD值。 OD2为在波长λ2（即组分b的最大吸收峰波长）时，混合液的光密度OD值。
ka1为组分a的比吸收系数，即组分a当浓度为1g/L时，于波长λ1时的光密度OD值。 kb2为组分b的比吸收系数，即组分b当浓度为1g/L时，于波长λ2时的光密度OD值。 ka2为组分a（浓度为1g/L），于波长λ2时的光密度OD值。 kb1为组分b（浓度为1g/L），于波长λ1时的光密度OD值。 从文献中可以查到叶绿素a和b的80%丙酮溶液，当浓度为1g/L时，比吸收系数k值如下： 将表中数值代入上式（1）、（2），则得： OD663=×Ca+×Cb OD645=×Ca+×Cb 经过整理之后，即得到下式： Ca= OD645 Cb= OD663 如果把Ca，Cb的浓度单位从原来的g/L改为mg/L，则上式可改写为下列形式： Ca= OD645 （3） Cb= OD663 （4） CT= Ca+ Cb= OD663+ OD645 （5） （5）式中CT为总叶绿素浓度，单位为mg/L。 利用上面（3）、（4）、（5）式，即可计算出叶绿素a和b及总叶绿素的浓度 （mg/L）。 [附注]一般大学教学实验室所用的分光度计多为721型，属低级类型，其单色光的半波宽要比中级类型的751型宽得多，而叶绿素a和b吸收峰的波长相差仅18nm（663-645nm），难以达到精确测定。此外有时还由于仪器本身的标称波长与实际波长不符，
手持叶绿素测定仪技术参数及功能特点 手持叶绿素测定仪可以即时测量植物的叶绿素相对含量（单位SPAD）或绿色程度、叶面温度，从而解植物真实的硝基需求量并且了解土壤硝基的缺乏程度或是否过多地施加了氮肥。可以通过便携式叶绿素仪来增加氮肥的利用率，并可保护环境。便携式叶绿素测定仪广泛应用于农林相关科研单位和高校对植物生理指标的研究和农业生产的指导。 托普云农手持叶绿素测定仪/便携式叶绿素仪可以即时测量植物的叶绿素相对含量或绿色程度、叶面温度，从而了解植物真实的硝基需求量并且了解土壤硝基的缺乏程度或是否过多地施加了氮肥。 手持叶绿素测定仪原理: 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A=αCL式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。 手持叶绿素测定仪技术参数： 测量范围：叶绿素：0.0-99.9SPAD
叶面温度：-10-99.9℃ 测量精度：叶绿素：±3.0 SPAD单位以内 (室温下，SPAD值介于0-50) 叶面温度：±0.5℃ 重复性：叶绿素：±0.3 SPAD单位以内(SPAD值介于0-50) 叶面温度：±0.2℃ 测量面积：2mm×2mm 测量时间间隔：小于3秒 数据存储容量：32KB 电源：4.2V可充电锂电池 电池容量：2000mah 重量：200g 工作及存储环境：-10℃~50℃≤85%相对湿度 手持叶绿素测定仪功能特点： 1、快速无损植物活体检测，不影响植物成长。 2、一次操作可同时测定所有参数，实时显示。 3、叶绿素，叶温两种参数同一屏幕同时显示，且可同时储存。 4、中文界面具有“系统设置”“查看数据”“节能设置”“时钟设置”“删除数据”等功能。 5、历史数据查看，既可顺序查看，也可跳转查看。 6、可以输入植物名称，标准氮含量及利用率可以直接计算出标准施肥量。 7、意外断电后已保存在主机里的数据不丢失。 8、对于历史数据既可逐条删除，也可以一键式全部删除。 9、仪器自带USB接口，可连接计算机将测量数据导出，便于植物养分的管理和分析。 10、内置锂电池供电，直接充电无需换电池，仪器自带背光功能。
植物生理学实验报告 实验题目：叶绿素含量的测定 姓名 班级 学号 一、实验原理和目的 根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比。 叶绿素(丙酮)在652nm(混合）、663nm、645nm有最大吸收峰。 叶绿素(95%乙醇)在665nm、649nm，类胡萝卜素在470nm有最大吸收峰，根据在分光光度计下测定的吸光度，求得叶绿素的含量 二、实验器具和步骤 植物材料：女贞 实验器具：分光光度计；电子天平；研钵；试管；小漏斗；滤纸；吸水纸；移液管；量筒；剪刀 试剂：95％乙醇（或80％丙酮）；石英砂；碳酸钙粉 步骤：1.称取剪碎的新鲜样品左右，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及3～5ml 95％乙醇，研成均浆，继续研磨至组织变白。静置3～5min 2. 取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到10ml试管中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。 3.用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至10 ml ，摇匀 4. 把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95％乙醇为空白，在波长665nm、649nm、470nm下测定吸光度 5. 计算公式： 叶绿素的含量（mg/g）= (浓度×提取液体积×稀释倍数）/样品鲜重。 Ca=－； Cb=－ C类= 单位：mg/L 三、实验数据和作业 2、计算叶绿素含量 计算公式： 叶绿素的含量（mg/g）= (浓度×提取液体积×稀释倍数）/样品鲜重。 Ca=－； Cb=－ C类= 单位：mg/L 由上面的公式进行代入计算，有： Ca=* Cb=* C类=（1000*）/245= 则：叶绿素含量=（*10**1）/= 四、数据分析
叶绿素含量的测定 有谁知道用分光光度计法测定叶绿素含量的具体步骤????谢谢!!!!!! 一、原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A 与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。当溶液浓度以百 分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。 二、材料、仪器设备及试剂 （一）材料：新鲜（或烘干）的植物叶片。 （二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 电子顶载天平（感量0.01g）；3. 研钵；4. 棕色容量瓶；5. 小漏斗；6. 定量滤纸；7. 吸水纸；8. 擦境纸；9. 滴管。 （三）试剂：96％乙醇（或80％丙酮）；石英砂；碳酸钙粉。 三、实验步骤 1. 取新鲜植物叶片（或其它绿色组织）或干材料，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。 2. 称取剪碎的新鲜样品0.2g，共3份，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙 粉及2～3ml95％乙醇，研成均浆，再加乙醇10ml，继续研磨至组织变白。静置3～5min。3. 取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。4. 用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至25ml，摇匀。5. 把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95％乙醇为空白，在波长665nm、649nm下测定吸光度。 四、实验结果计算：将测定得到的吸光值代入下面的式子：Ca=13.95A665－6.88A649；Cb=24.96A649－7.32A665。据此即可得到叶绿素a和叶绿素b的浓度（Ca、Cb：mg/L），二者之和为总叶绿素的浓度。最后根据下式可进一步求出植物组织中叶绿素的含量： 叶绿素的含量（mg/g）= [叶绿素的浓度×提取液体积×稀释倍数]/样品鲜重（或干重）。
实验报告 植物体叶绿素含量的测定 摘要：本实验采用分光光度法，利用95%乙醇提取菠菜叶片中和番茄叶片中叶绿 体色素，叶绿素a ，叶绿素b 和类胡萝卜素最大吸收峰的波长分别是665nm 、649nm 和470nm 。根据分光光度计测定的吸光度值，从而计算出乙醇提取液中叶绿体色素含量。 实验原理：利用95%乙醇提取叶绿体色素，叶绿素a ，叶绿素b 和类胡萝卜素最 大吸收峰的波长分别是665nm 、649nm 和470nm 。 根据分光光度计测定的吸光度值，可以计算出乙醇提取液中叶绿体色 素含量。 实验目的：掌握分光光度计法对叶绿素a 、叶绿素b 、叶绿素总浓度和类胡萝卜 素总浓度测定和计算的方法。 实验材料： 生物材料：菠菜叶片0.25g ，自己培养的全素番茄苗叶片0.2g ，缺磷 番茄苗叶片0.2g ； 试剂：95%乙醇、石英砂、碳酸钙； 仪器：分光光度计、电子天平、研钵、漏斗、玻璃棒、小烧杯、10ml 量筒、50ml 容量瓶、剪刀、滤纸、滴管。 实验步骤： 1.叶绿体色素的提取 取新鲜菠菜叶片0.25g ，擦干，去中脉，剪碎放入研钵，加入少许 石英砂和CaCO 3，再加入95%乙醇3ml,研磨成匀浆，再加95%乙醇 10ml ，静置10min ，用漏斗滤去残渣，用乙醇反复冲洗研钵、残渣 至无色；用容量瓶定容至50ml 。 2.吸光度的测定 取光径1cm 比色杯，注入上述叶绿素提取液，以95%乙醇注入另 一同样的比色杯内作为空白对照，在波长665、649、和470nm 下 测定吸光度。 3.结果计算 依据下列计算公式，分别计算出叶绿素a 、B 的浓度及其叶绿素总 浓度和类胡萝卜素的浓度。 C a （叶绿素a ）=13.95A 665 – 6.8A 649 C b （叶绿素b ）=24.96A 649 – 7.32A 665 C T （叶绿素）=C a +C b =18.16A 649 + 6.63A 665 C x.c （类胡萝卜素）=(1000A 470 – 2.05C a -114.8C b )/248 叶绿体色素含量 = ） 样品鲜重（稀释倍数）提取液体积（）色素浓度（g /mg ??L L 实验结果： 菠菜叶片提取液吸光值：
实验二十五测定叶绿素a和b的方法及其 计算 一目的要求： 熟悉在未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿素a和b 的方法及其计算。 二实验原理： 如果混合液中的两个组分，它们的光谱吸收峰虽然有明显的差异，但吸收曲线彼此有些重叠，在这种情况下要分别测定两个组分，可根据Lambert-Beer定律，通过代数方法，计算一种组分由于另一种组分存在时对光密度的影响，最后分别得到两种组分的含量。 如图z-4叶绿素a和b的吸收光谱曲线，叶绿素a的最大吸收峰在663nm，叶绿素b在645nm，吸收曲线彼此又有重叠。 图z-4 叶绿素a和b的吸收光谱曲线 横坐标为波长（nm），纵坐标为比吸收系数
根据Lambert-Beer定律，最大吸收光谱峰不同的两个组分的混合液，它们的浓度C与光密度OD之间有如下的关系： OD1=Ca·ka1+Cb·kb1 （1） OD2=Ca·ka2+Cb·kb2 （2） 式中：Ca为组分a的浓度，g/L。 Cb为组分b的浓度，g/L。 OD1为在波长λ1（即组分a的最大吸收峰波长）时，混合液的光密度OD值。 OD2为在波长λ2（即组分b的最大吸收峰波长）时，混合液的光密度OD值。 ka1为组分a的比吸收系数，即组分a当浓度为1g/L时，于波长λ1时的光密度OD值。 kb2为组分b的比吸收系数，即组分b当浓度为1g/L时，于波长λ2时的光密度OD值。 ka2为组分a（浓度为1g/L），于波长λ2时的光密度OD 值。 kb1为组分b（浓度为1g/L），于波长λ1时的光密度OD 值。 从文献中可以查到叶绿素a和b的80%丙酮溶液，当浓度为1g/L时，比吸收系数k值如下：
YLS-501叶绿素测定仪和叶绿素测定仪价格 YLS-501叶绿素测定 仪 标题：YLS-501叶绿素测定仪 叶绿素测定仪 仪器仪器名称：叶绿素测定仪 仪器型号：YLS-501 叶绿素计/手持叶绿素仪功能特点： *测量时间快速 *LCD 直接显示叶绿素值 *仪器小巧便携，可随身携带到野外测量 *30个数据，自动计算并显示平均值 叶绿素计/手持叶绿素仪技术参数： 测量样品:各种植物叶片 测量面积: Ф10mm 测量方式: 2波长光学浓度差方式 感应器: 硅半导体光电二极管 显示方式:测量值：3位数液晶显示 测量次数：2位数液晶显示 测量的最小间隔: 小于2秒 测量范围: 0.0-99.9SPAD 精度: ±1.0 SPAD (室温下，SPAD 值介乎0-50) 重复性: ±0.3 SPAD 单位以内(SPAD 值介乎 0-50) 重现性: ±0.5 SPAD 单位以内 (SPAD 值介乎0-50) 操作温度: 0～50℃ 储存温度:-20~～55℃ 电源：2节5号AA 碱性锰... 厂家：上海政泓 市场价格： 优惠价格：百度搜索联系 TYS-A 叶绿素仪/叶绿 素计 标题：TYS-A 叶绿素仪/叶绿素计 仪器名称：手持叶绿素仪、叶绿素计 叶绿素计/手持叶绿素仪用途： 叶绿素仪可以即时测量植物的叶绿素相对含量或“绿色程度”，植物叶片中的叶绿素含量指示了植物本身的状况，长势良好的植物的叶子会含有更多的叶绿素，叶绿素的含量与叶片中氮的含量有很密切的关系，因而叶绿素测量值还能说明植物真实的硝基需求量，通过这种仪器有利于合理施加氮肥，提高氮的利用率，并可保护环 境（防止施加过多的氮肥而使环境特别是水源受到污染） 叶绿素计/手持叶绿素仪测量原理： TYS 系列叶绿素仪通过测量叶片在两种波长范围内的透光系数来确定叶片当前叶绿素的相对厂家：上海政泓 市场价格： 优惠价格：百度搜索联系