氨基糖苷类药物检测方法的进展、应用
及挑战
摘要：氨基酸类抗生素在医药和畜牧业等领域的大量使用，引起了动物和环境中抗生素
类抗生素的污染，对动物、环境和人类的身体健康造成了严重威胁。然而，目前所用的样品
多为混合样品，而氨基酸苷类药物又缺少荧光基团，而且其层析能力不强，故发展高特异性、高灵敏的蛋白质组学分析新技术对于解决这一难题具有重要意义。文章对目前国内外对氨基
糖甙类药物的分析技术进行了总结，重点介绍了目前国内外对其分析技术的研究现状，包括
对其提纯、不同色谱分离、与质谱结合等方面的研究进展，并对其发展前景进行了展望。
关键词:氨基糖苷;检测;液相色谱;质谱
引言
氨基葡萄糖苷类抗生素是一种具有广泛杀灭革兰（Glu）及多种细菌的新型抗生素，由Waksman教授于1944年首先发明。目前，以链霉和小单孢为代表的两种微生物合成氨基糖苷
类抗生素，小单孢为代表的是“mycin”，而小单孢为代表的是“micin”。另外，在1971
的地贝卡星，1972的阿米卡星，1973的阿贝卡星，1973的异帕米星，1975的奈替米星，1976的半合成氨苷酸系。它们的主要结构是氨环醇和2个或2个以上的氨基糖，通过糖苷键
连接，其中氨环醇骨架有两种： streptamine和 deoxystreptamine （见图1）。这类抗生
素的具体结构，抗菌活性及其相关的抗菌活性，已经在文献中作了详细的介绍。
图1链霉素和氨基糖苷类药物核心结构
1氨基糖苷类药物的提纯
想要对药物的浓度进行测定，必须从有关样本中提取并提纯出氨基糖苷类药物，传统的
过程包括：混匀、酸剂或有机溶剂析出蛋白、机械振荡或超声处理释放药物、分离沉淀和液
相、固相萃取柱（SPE）提取、脱脂以及浓缩等。传统的从肌肉、牛奶、肾脏（鸡、猪、马、牛等）中萃取得到的氨基酸，可分为4个阶段：①采用三氯醋酸（TCA）和 EDTA作为萃取介质；②采用固相微萃取技术进行萃取；③前一阶段的淋洗溶液采用蒸馏方法进行富集，④采
用少量溶液再溶解。在试样中加入10 mL的萃取物（2% TCA及0.1%Na2EDTA•2H2O)，进行漩
涡搅拌，然后用超声波进行5分钟的时间，将上清液装进15 mL的小瓶中；利用诸如
Chroma-bondHR-X （首先以5 mL甲醇，5 mL水，5 mL提取液调整）之类的萃取柱来净化前
一步骤中的萃取物；提取塔用1 mL的水洗涤，并且提取塔30分钟的自然空气干燥；然后，
以6 mL的甲醇对其进行了洗提，并在40℃对其进行了浓缩；所述沉淀用0.5 ml或1 ml的
水进行再溶解，然后被传送到由聚丙烯（Polypropylene）物质制造的液体色谱瓶中。
2液相色谱法
因缺少发光单元，无法实现对重金属离子的直接探测，但采用 PAD、电喷雾质谱、ELSD、电荷气溶胶等光化学法，可以实现对重金属离子的有效探测。在电喷雾质谱（ESI-MS）、电喷雾质谱（ELSD）及计算机辅助分析（CAD）时，必须采用易挥发的流动相助剂，
如易挥发的离子对助剂（IPR)；然后， PAD在柱子上加入氢氧化钠，将 pH值调整到12。针
对氨基葡萄糖苷类抗炎药强极性的特性，采用反相液相分析法时，在适宜 pH值的条件下，
质子化抗炎药不易滞留，而采用 IPLC、HIL-IC等方法可以有效地克服以上问题。
3液相色谱-质谱法
目前常用的液相色谱-质谱法（LC-MS）已被应用于氨基酸苷类抗生素的分析，然而，因
氨基酸苷类抗生素分子之间存在着类似的化学键，其片段化合成的同时会形成类似的离子，
给其分析带来很大难度。所以，在测定时，需要特别注意母体/中间体的结合，以免对测定
结果造成干扰。
基于庆大霉素的结果，我们可以很好地解释在正电荷-串联质谱法中，氨基葡萄糖苷类
的普遍存在形式（如图2 A）。三种基本的碎片离子是：氨基葡糖胺（RA)/Z160 (RA),2-去
氧链霉胺（RB)/Z163 (RB)，与嘌呤（RC)，其中， M/Z129是庆大霉素（C1a）的峰值，
M/Z143是庆大霉素（C2）、C2a、C2b的峰值， M/Z157是庆大霉素（C1）的峰值（参见附图2）。另外，因为嘌呤单位的缺失（AB型）或葡萄糖胺单位的缺失（BC型），所以可以分别
在 m/z322上探测到离子峰。之前已经有文献报导，如果这些碎片离子持续失去水、氨或
CH3NH2，就会产生二次碎片离子。
在正离子ESI-MS环境下，根据流动相的组成，大多数氨基糖苷类药物中都有双电荷离
子〔 M+2 H〕2+和单电荷离子〔 M+2 H〕2+。当 IPR缺失时， HILIC中的双电离子较多，
IPLC中的单电离子较多。在负电荷电离质谱和高 pH反相色谱中，可以观察到脱质子态的
（M-H)-，而在负电荷电离模型中则不能观察到。破碎离子的相对丰度取决于其破碎的大小，比如，在单电的链霉素中，其破碎的最大峰为 m/z 263,245，而在双电的链霉素中，破碎离
子的最大峰位为 m/z176,263,2 H,176,409。
Bohm等报告了HILIC-MS/MS分析技术在蜂蜜中的应用。对两种 HILIC柱子（150x2.1
毫米）进行了试验；3微米（微米级）: Waters Atlantis硅胶柱及瓦氏单晶硅（VarianMono-Chrom Si）柱及维氏碳酸钙（Cryptomycin) Si，此方法适用于5-80 mg•kg-1
的测定，而 Crycin的CCα为11.8µ g•kg--1, Bryocycin为11.5µ g·kg-1, Br. cin为18.9µ g•Kg-1, Cryocarcin为19.9µ g.kg-1。另外，还介绍了采用3.5微米的 Inertsil HILIC柱体对妥布霉素进行了测定。本研究采用的流动相采用了乙腈-5 mM醋酸铵和0.1%甲
酸（60:1, v/v）的组合，速率为0.30 mL.min-1，以西索米星为内参量，其浓度在
0.51~1051 ng.mL-1之间，表现出了线性关系。
将High-pHRPLC-MSHigh-pHRPLC-MS与电喷雾质谱结合，建立了一种基于High-pHRPLC-MS的阴离子检测方法。该流动相包括以0.2 mL.min-1的速度，以0.2 mL.min-1的速度添加
到水中的0.7 mL的28%~30%的氨水溶液。将 Waters XterraRP18用作最后的检出极限是
0.063µ g.mL-1的固定相。此外，还有文献报导，利用 GeminiNXC18柱子与由溶剂 A （水、氨液（25%, m/m）与冰乙酸比为96:3.6:0.2 (V/V/V))与溶剂 B （甲醇）构成的流动相中，
对两种药物中的杂质进行了鉴别。
4其他方法
如何选用 IPLC, HILIC，或反相色谱法，取决于对所需要的资讯程度，也取决于是否有
足够的仪器和资料。HILIC作为一种新型的不需要 IPLC和反相色谱的新型色谱，与质谱分
析方法比较，其测定下限明显低于 IPLC和反相色谱。但是， IPLC虽然比 IPLC更高效，但
是对于质谱分析来说， IPLC需要易变的 IPRs，而且会受到离子压制。所以， HILIC被推
荐用于食物安全性分析。IPLC可用于测定与氨基甙有关的物质。在无质谱装置时，可采用反
相色谱法。高 pH反相色谱对其他物质的测定也有较好的效果。免疫分析、微生物分析和荧
光分析等也被用于对氨基糖苷类药物的检测。可以利用金纳米粒（AuNPs）装载特异性识别
卡那霉素 A的核酸核酸，实现对乳制品中卡那霉素 A的快速测定。当无卡纳米星时，核酸
适配体与纳米金结合，纳米金的荧光发生猝灭。
5结语
综上所述，目前常用的 UV荧光探针不能用于对目标化合物进行衍生物修饰，这是因为
其缺少生色基团。质谱（MS）作为一种新的分析方法，可以在三种液质色谱中同时应用易挥
发的液质联用，实现对氨基酸类化合物的快速分析。另外，核酸核酸适配子的高灵敏、高灵敏、高通量、高灵敏度、高灵敏度等优点使得核酸核酸适配子的分析成为可能。然而，目前
能应用于氨基酸核酸探针的核酸核酸适配体种类较少，亟待进一步开发新的核酸适配体。并
结合电化学、光学及光电化学等多种分析手段，构建多种信号放大及输出方式的核酸适配体
传感系统。但是，目前大部分的传感器还停留在理论和实验上。发展快速、高品质、低成本、数字化、智能化的新型生物传感技术具有十分重要的意义。
参考文献
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氨基糖苷类药物的危害及其检测方法研究进展 高月;王耀;胡骁飞;邓瑞广;侯玉泽 【摘要】氨基糖苷类药物是一个种类丰富的抗生素类别,因其能防治某些动物性疾病且能促进动物的生长发育,在养殖业中应用广泛.但长期高剂量使用该类药物,会因其降解困难对环境造成危害,并且可通过食物链传递给人.该类药物能够在人体内蓄积,从而产生耳毒性、肾毒性等危害.因此,检测食物中氨基糖苷类药物的残留十分必要.对氨基糖苷类药物的危害及其检测方法进行综述,并对其未来发展方向进行展望.【期刊名称】《河南农业科学》 【年(卷),期】2016(045)006 【总页数】6页(P9-14) 【关键词】氨基糖苷类药物;危害;检测方法 【作者】高月;王耀;胡骁飞;邓瑞广;侯玉泽 【作者单位】河南科技大学食品与生物工程学院/畜禽疫病诊断与食品安全检测河南省工程实验室,河南洛阳471023;河南科技大学食品与生物工程学院/畜禽疫病诊断与食品安全检测河南省工程实验室,河南洛阳471023;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州450002;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州450002;河南科技大学食品与生物工程学院/畜禽疫病诊断与食品安全检测河南省工程实验室,河南洛阳471023 【正文语种】中文 【中图分类】S859.84
氨基糖苷类药物(aminoglycosides，AGs)是一类天然发酵产物或者半合成衍生物，其结构中包含1个氨基环醇和1个或多个氨基糖分子，二者通过配糖键连接[1]。 该类药物含有多个氨基和羟基基团，所以具有较强的极性，易溶于水，脂溶性差，还具有较强碱性，且在碱性环境中抗菌性能增强。AGs自身无发色集团，无特征 紫外吸收。其主要包括新霉素(Neo)、链霉素(Str)、卡那霉素(Kan)、庆大霉素(Gen)、大观霉素、阿米卡星等，各类似物性质接近,被广泛应用于防治某些动物性疾病。但研究发现，长期高剂量使用此类药物会对用药动物产生蓄积毒性，更严重的是能够通过食物链传递给人类，所以各国制定了针对AGs的国家标准，在动物 性食品流入市场之前要对AGs进行检测，检测的方法有微生物学检测方法、免疫 学检测方法、理化检测方法等。详细阐述了AGs的危害并对各种检测方法进行综述，最后对其发展方向进行展望, 旨在为建立快速、简单、高效的AGs检测方法提供参考。 自Waksman等在1944年制得AGs后，又陆续产生了3 000多个种类AGs，根据AGs的发展历程，可将其分为3类[2]。第一类源于链霉菌培养液中，如链霉素，能有效抑制巴氏杆菌(Pasteurella)、结核杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、 布氏杆菌(Brucella)、沙门氏菌(Salmonella)、志贺痢疾杆菌(Shigella)、放线菌(Actinomycete)等，可以用来治疗白痢、鼠疫、猪肺疫、禽霍乱、犊肺炎、布氏 杆菌病、牛出血性败血病；新霉素，能抑制放线菌、大肠杆菌(Escherichia coli)、变形杆菌(Proteusbacillus vulgaris)、阿米巴原虫(Amebic protozoa)等，可以用来治疗鸡白痢、幼畜白痢等疫病；卡那霉素，能够抑制葡萄球菌(Staphylococcus)、巴氏杆菌、沙门氏菌等，可以用于治疗禽霍乱、雏白痢、猪 哮喘、猪萎缩性鼻炎等动物疾病；广泛兽用的安普霉素(Apr)等。这类药物的结构 中完全羟基化的氨基糖与氨基环醇结合(图1)，不具有抗绿脓杆菌的能力[3]。 第二类来自于小单胞菌，如庆大霉素，能有效抑制支原体、肺炎球菌溶血性链球菌
氨基糖苷类药物检测方法的进展、应用 及挑战 摘要：氨基酸类抗生素在医药和畜牧业等领域的大量使用，引起了动物和环境中抗生素 类抗生素的污染，对动物、环境和人类的身体健康造成了严重威胁。然而，目前所用的样品 多为混合样品，而氨基酸苷类药物又缺少荧光基团，而且其层析能力不强，故发展高特异性、高灵敏的蛋白质组学分析新技术对于解决这一难题具有重要意义。文章对目前国内外对氨基 糖甙类药物的分析技术进行了总结，重点介绍了目前国内外对其分析技术的研究现状，包括 对其提纯、不同色谱分离、与质谱结合等方面的研究进展，并对其发展前景进行了展望。 关键词:氨基糖苷;检测;液相色谱;质谱 引言 氨基葡萄糖苷类抗生素是一种具有广泛杀灭革兰（Glu）及多种细菌的新型抗生素，由Waksman教授于1944年首先发明。目前，以链霉和小单孢为代表的两种微生物合成氨基糖苷 类抗生素，小单孢为代表的是“mycin”，而小单孢为代表的是“micin”。另外，在1971 的地贝卡星，1972的阿米卡星，1973的阿贝卡星，1973的异帕米星，1975的奈替米星，1976的半合成氨苷酸系。它们的主要结构是氨环醇和2个或2个以上的氨基糖，通过糖苷键 连接，其中氨环醇骨架有两种： streptamine和 deoxystreptamine （见图1）。这类抗生 素的具体结构，抗菌活性及其相关的抗菌活性，已经在文献中作了详细的介绍。 图1链霉素和氨基糖苷类药物核心结构 1氨基糖苷类药物的提纯 想要对药物的浓度进行测定，必须从有关样本中提取并提纯出氨基糖苷类药物，传统的 过程包括：混匀、酸剂或有机溶剂析出蛋白、机械振荡或超声处理释放药物、分离沉淀和液
氨基糖苷类抗生素的药物浓度检测原理及方法氨基糖苷类抗生素包括阿米卡星，庆大霉素、妥布霉素等。由于氨基糖苷类抗生素的有效血药浓度和毒性浓度之间范围很窄，而且这类抗生素在肾脏浓度高达血药浓度的10～50倍，肾脏毒性大。因此，进行血药浓度监测显得非常重要。 氨基糖苷类抗生素血药浓度的测定方法包括：高效液相色谱法、微生物法、MARKIT酶分析法、EMIT及SLFIA酶免疫法和荧光偏振酶免疫法。 庆大霉素高效液相色谱法测定庆大霉素血药浓度如下： 1.原理 本法为柱后荧光衍生化法。用葡聚糖凝胶（CM-Sephadex）小柱从血清标本中粗分出庆大霉素（gentamicin）后，进行反相离子对色谱分析，分离的庆大霉素匀速连续流注到柱后管道内，并与管内的邻-二苯甲醛（O-phthalaldehyde）发生反应形成荧光产物，通过荧光检测器进行检测。可设相应内标物。 2.主要仪器及条件 该色谱分析系统是在一般的色谱分析系统的柱后增加了一套柱 后反应装置。该装置由试剂瓶、氮气加压装置、流量计、聚四氟乙烯管、试剂阀和聚四氟乙烯蛇形反应管道等组成。试剂瓶中盛有邻-二苯甲醛试剂，经过氮气加压的试剂通过聚四氟乙烯管限制其流速后，
与经过色谱柱分离的庆大霉素柱后合流，在管内发生反应，产生荧光物质流入荧光检测器。分析条件如下： （1）分析柱： 30cm×3.9mm（内径）μ-Bondapak C18分析柱；分离柱：4.3cm ×4.2mm，5μm Microprt C18柱。流速：2.0ml/min。荧光检测器，激发光340nm，发射光418nm。 （2）柱后反应装置： ①试剂管道为9.0m×0.3mm（内径）的聚氟乙烯管。流量保持 0.55ml/min；②2.0m×0.6mm的聚四氟乙烯反应管。 3.主要试剂 （1）邻苯二甲醛试剂：取邻苯二甲醛80mg加入0.5ml 以2-巯基乙醇与30%Brij35的水溶液3∶2比例配制的混合溶液中混匀，至脱色后加入甲醇1.0ml。加硼酸钾缓冲液（0.4mol/L，pH，10.38～10.42）至100ml。 （2）流动相：硫酸钠58.816g（0.2mol/L）、磺酸戊烷钠7.688g （0.02mol/L）、醋酸2ml（0.174mol/L）和甲醇60ml，加水至2000ml。 （3）离子对试剂：为戊烷磺酸钠3.46g（0.18mol/L）、醋酸1.0ml （0.174mol/L）、甲醇和水40/60（V/V）溶液100ml。 （4）庆大霉素标准贮存液（1mg/ml）：精密称取庆大霉素标准品10mg，溶解于10ml磷酸盐缓冲液（0.1mol/L，pH 8.0）中。配制庆
动物组织中氨基糖苷类药物残留量的测定高效液相色谱一质谱/质谱法 1 原理 试样中氨基糖苷类药物残留，采用磷酸盐缓冲液提取，经过C18固相萃取柱净化，浓缩后，使用七氟丁酸作为离子对试剂，高效液相色谱一质谱/质谱测定，外标法定量。 2试剂和材料 2. 1 甲醇：液相色谱级。 2. 2 冰乙酸：液相色谱级。 2. 3 甲酸：液相色谱级。 2. 4 七氟丁酸：纯度≥99%。 2. 5 浓盐酸。 2.6 氢氧化钠。 2. 7 三氯乙酸：纯度≥99%。 2. 8 乙二胺四乙酸二钠(Na2 EDTA)：纯度≥99%。 2. 9 磷酸二氢钾。 2.10 七氟丁酸溶液(HFBA) ：100 mmol/L，准确量取6. 5 mL七氟丁酸((2. 4)，用水稀释至500 mL(4℃避光可保存6个月)。 2.11 七氟丁酸溶液：20 mmol/L准确量取100 mmol/L七氟丁酸溶液50 mL(2.10)，用水稀释至250 mL(4℃避光可保存6个月)。 2.12 磷酸盐缓冲液(含0.4 mmol/L EDTA和2%三氯乙酸溶液)：准确称取磷酸二氢钾(2. 9)1. 36 g，用980 mL水溶解，用1. 0 mol/L的盐酸调pH到4. 0，分别加人Na2EDTA(2.8)0. 15 g和三氯乙酸(2.7)20 g，溶解混匀并定容至1 000 mL(4℃避光可保存1个月)。 2.13 甲酸：0.1%(体积分数)，准确吸取1. 0 mL甲酸(2. 3)于1 000 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。 2.14 壮观霉素、潮霉素B、双氢链霉素、链霉素、丁胺卡那霉素、卡那霉素、安普霉素、妥布霉素、庆大霉素、新霉素标准品：纯度范围92. 0%～99%。 2.15 10种氨基糖苷类药物标准贮备液：分别准确称取适量的每种氨基糖苷类药物标准品(2.14)，用水溶解，配制成浓度为100 μg/mL的标准贮备溶液（4 ℃避光可保存6个月)。 2. 16 l0种氨基糖苷类药物混合标准中间溶液：分别准确量取壮观霉素、双氢链霉素、链霉素、丁胺卡那霉素、卡那霉素、妥布霉素、庆大霉素标准贮备溶液(2. 15)各1.0 mL，新霉素、潮霉素B、安普霉素标准贮备溶液((2.15)各5. 0 mL，于25 mL容量瓶中，用水定容至刻度，配制成壮观霉素、双氢链霉素、链霉素、丁胺卡那霉素、卡那霉素、妥布霉素和庆大霉素浓度为 4.0μg/mL，新霉素、潮霉素B和安普霉素浓度为20. 0 μg/mL的混合标准中溶液(4℃避光可保存1个月)。 2.17 10种氨基糖苷类药物标准工作溶液：精密量取标准中间溶液（2.16）适量，用用空白样品基质配制成不同浓度系列的混合标准工作溶液(现用现配)。 2.18 固相萃取C18柱：500mg,3mL。 3 仪器 3. 1 高效液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源。 3. 2高速组织捣碎机。 3. 3均质器。 3. 4旋转蒸发器
简述氨基糖苷类药物的结构特点与鉴别反应氨基糖苷类药物的结构特点 氨基糖苷类药物具有共同的化学结构，其结构包括葡萄糖残基（一个α-葡糖基），其上另外连接了一个单硫代氨基甘酸（thiolactic acid）的缩合物。由于氨基糖苷类药物具有共性，它们之间的区别主要在于葡萄糖残基（alpha-glucose）上不同的官能团含量，典型的官能团有甲基，间甲氧基，羟基，氢氧基等。 氨基糖苷类药物的结构特征具有以下几个明显的特点： 1、氨基糖苷类药物具有较强的酸碱性，由于它具有单硫代氨基甘酸（thiolactic acid）的缩合物，因此它在弱酸环境中具有较强的酸性，在强碱环境中具有较强的碱性； 2、氨基糖苷类药物具有较强的抗氧化性，由于它具有单硫代氨基甘酸（thiolactic acid）的缩合物，它能够抵抗体内的氧化作用，从而延缓药物的降解和耐受性的降低； 3、氨基糖苷类药物具有较高的动物体内及细胞体外吸收率，因其结构紧凑，体积小，可以被动物体内的肽酶和细胞外酶分解，从而提高药物的生物利用率。 鉴别反应 1、氨基糖苷类药物的鉴别可以通过溴水色谱鉴别法进行。这种方法是用人工构建一个温和酸性溴水环境，使氨基糖苷类药物在溴水环境中反应，产生可见的色谱，从而进行鉴别。 2、氨基糖苷类药物也可以通过干酪素试验进行鉴别。该方法是
将氨基糖苷类药物与干酪素结合，在弱碱性条件下反应，在反应产物蓝色，则说明氨基糖苷类药物存在。 3、氨基糖苷类药物的鉴别也可以通过抗原反应试验进行。该方法是使特定的抗体与氨基糖苷类药物发生结合反应，如果结合反应发生，可以通过检测反应产物的特点来得出结果；另外，该方法还可以检测出含有氨基糖苷类药物的原料中其他药物的存在。
水产品中氨基糖苷类药物残留的高效液相色谱-串联质谱检测 方法研究 高玲;张丹;高峰;郭栋;杨瑞章;于伯华 【摘要】A high performance liquid chromatography- tandem mass spectrometric (HPLC -MS/MS) method was developed for the determination of five aminoglycosides drugs such as streptomycin, dihydrostreptomycin, kanamycin, gentamicin and neomycinb in aquatic products. The aminoglycosides drugs interested were extracted from the samples with phosphate buffer solution and separated by a cation exchange chromatographic column. An improved pre- treatment method was used in this study and the eluent solution types and chromatographic parameters were optimized. In the detection of spiked samples, the detection limite of this method was 10.0 μg/kg (S/N = 10) for the five durgs spiked in fish and crayfish respectively, which can match the requirement of the supervision. The recoveries of the five durgs from fish and crayfish samples spiked with three concentration levels of 10.0, 20.0 and 50.0 μg./kg ranged from 60% to 110% with RSD less than 15.0%. The established method was accurate, sensitive and simple, and was suitable for the quantification of aminoglycosides antibiotics residue in aquatic products.%建立了高效液相色谱一串联质谱方法测定水产品中链霉素、双氢链霉素、新霉素、庆大霉素和卡那霉素5种氨基糖苷类抗生素的检测方法。样品中的氨基糖苷类抗生素用磷酸缓冲溶液提取液提取后，经固相萃取进行净化，改进了前处理方法，并对液相和质谱的条件进行了优化。通过实际样品的添加回收试验，方
氨基糖苷类抗生素相关研究的研究进展 【摘要】氨基糖苷类抗生素是一种临床常用抗敏感需氧革兰阴性杆菌所致全 身感染的抗生素类型，然而，随着抗生素耐药性以及不可逆的耳肾毒性问题的日 渐加重，氨基糖苷类抗生素的实际临床应用仍然有待于进一步的拓展分析，因而 低毒性、抗耐药衍生物的研究也成为了氨基糖苷类抗生素的主要开发方向。随着 临床上对于核糖体RNA与氨基糖苷类抗生素之间关系和作用机制研究的日渐深入，氨基糖苷类抗生素的类型也逐渐丰富，常见plazomicin和巴龙霉素衍生物两种，这些药物类型均有利于抗耐药菌所致感染的治疗，另一方面其耳毒性和肾毒性也 相对较小。本文从氨基糖苷类抗生素的相关研究文献和数据资料出发，对氨基糖 苷类抗生素的相关研究进展进行了综述分析。 【关键词】氨基糖苷类；抗生素；毒性 氨基糖苷类抗生素（AmAn）是一种应用率较高的需氧革兰阴性杆菌所致全身 感染疾病治疗药物类型，包括软组织、皮肤、骨和关节感染、尿路感染及胆道感 染感染等。早期天然抗生素普遍来源于妥布霉素（tobramycin）、庆大霉素（gentamicin）、链霉素（streptomycin）等，然而，随着这些药物临床应用的 深入抗生素所致耐药性和毒副作用问题也日渐加重，主要表现为肾毒性和耳毒性，这也促进了阿米卡星（amikacin）和依替米星（etimicin）等第二代 AmAn 及半 合成衍生物的研究与开发。直至20世纪末，临床上越来越推广副作用更小的广 谱β内酰胺类抗生素，AmAn的临床应用率也明显降低，由此所致的耐药性和药 物滥用问题有所改善。由于抗生素应用无法达成预定效果，AmAn的临床价值又得 到了广泛的关注。CHINET 细菌耐药监测网研究结果证实，AmAn对于流感嗜血杆菌、耐药革兰阴性菌如铜绿假单胞菌等菌株的敏感程度较高，因而单一药物或是 联合用药方案用于多药耐药菌的治疗，能够获得较好的效果，包括中枢神经系统 感染、呼吸系统感染、败血症等。 1氨基糖苷类药物的抑菌机制
氨基糖苷类药物的发展历程 氨基糖苷类药物是一类广泛使用于治疗革兰阴性菌感染的药物。它们在治疗多种细菌感染中都表现良好，如肺炎、泌尿道感染、败血症和手术感染等。本文将简要介绍氨基糖苷类药物发展历程，并讨论其发展趋势和未来发展方向。 1. 氨基糖苷类药物的发现和发展 氨基糖苷类药物最早是在20世纪40年代初由Streptomyces菌株中分离出来的，其化合物结构中包含多个氨 基糖苷基团和氨基苷基团。最早的氨基糖苷类药物为卡那霉素，它被证实可以用于治疗革兰阴性菌和肺炎球菌感染。随后，其他较早的氨基糖苷类药物包括链霉素和庆大霉素等。 氨基糖苷类药物的发现和发展受益于化学技术的进步，使得药物合成更加简单和可靠。例如，对氨基糖苷类药物的糖基和核苷基进行化学修饰可以改善其生物利用度和药效，从而提高药物疗效。随着时间的推移，越来越多的氨基糖苷类药物被开发出来，包括新霉素、司米替丁、坦索罗辛和亚胺培南等。 2. 氨基糖苷类药物的应用范围 氨基糖苷类药物在临床实践中被广泛应用于治疗革兰阴性菌感染，如大肠杆菌、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌等。这些药物在治疗肺炎、泌尿道感染、败血症和手术感染等方面表现良好。此外，氨基糖苷类药物也可以用于治疗结核病、鼠疫和梅毒等感染病。
然而，氨基糖苷类药物的临床使用受到一定限制，主要原因是它们的不良反应和毒性。例如，氨基糖苷类药物可能会导致肾功能损害和耳毒性。因此，医生必须密切监测患者的肾功能和听力，并改变给药方案以减少不良反应的风险。 3. 氨基糖苷类药物的未来趋势和发展方向 未来的氨基糖苷类药物的发展方向包括提高疗效和降低不良反应的风险。它们可能会通过运用新技术，例如基因编辑和机器学习，来设计更有效的药物分子。 此外，新的氨基糖苷类药物可能会更加个性化，以满足患者的不同需要。例如，基于患者的基因型和细菌感染情况，药物可以在一定程度上进行定制，从而提高治疗效果并减少不良反应风险。 总的来说，氨基糖苷类药物是一类有效的治疗革兰阴性菌感染的药物，其发展历程经历了多年的发现和开发，并为临床实践提供了重要的贡献。未来，新药的研发和创新将持续推动氨基糖苷类药物的进步，为患者提供更好的治疗选择。
氨基糖苷类抗生素有关物质检测的初步研究
发布日期20061117 栏目化药药物评价>>化药质量控制 标题氨基糖苷类抗生素有关物质检测的初步研究 作者陈蔚东霍秀敏 部门 正文内容审评三部六室陈蔚东霍秀敏 1、概述 自1944年Waksman等报道了链霉菌 产生的链霉素以来，已报道的天然和半 合成氨基糖昔类抗生素的总数已超过 3000种，其中微生物产生的天然氨基糖 昔类抗生素有近200种。氨基糖苷类 (aminoglycosides)抗生素是临床上重 要的一类抗感染药物，具有水溶性好、 化学性质稳定、抗菌谱广、抗菌能力强 和吸收排泄良好等特点，虽然近年受到 口内酰胺类和喹诺酮类抗感染药物的挑
战，但仍是治疗G 菌和结核杆菌感染的首选药物一。对某些革兰阳性也有良好的杀菌作用。与青霉素类或头孢菌素类合用,常可取得协同作用。其杀菌活力在一定范围内为浓度依赖性,并具有明显的抗生素后效应(PAE) 。 根据氨基糖苷类抗生素的抗菌特性及结构特点，此类抗生素可分为三个发展阶段。以卡那霉素为代表的第一代氨基糖苷类抗生素，其结构特点是完全羟基化的氨基糖与氨基环醇相结合，不抗绿脓杆菌；第二代以庆大霉素为代表，其结构中均含有脱氧氨基糖并具有抗绿脓杆菌的特点；第三代则是氨基环醇上氮位取代衍生物,品种有阿米卡星、阿司米星和我国创新的一类新药依替米星等，其特点是保留了母体的抗菌活性，耳肾毒性小，抗耐药性等。根据氨基糖数目分为假三糖类和假二糖类，氨基含量越多，抗菌能力越强。（见表1）。 表1 氨基糖苷类抗生素的分类
2 临床应用的主要品种及特性 临床应用的主要品种可分为耐酶品种和不耐酶品种。 耐酶品种：细菌所产的乙酰转移酶、磷酸转移酶和核苷转移酶等氨基糖苷类钝化酶可破坏卡那霉素、妥布霉素等，而新品种对钝化酶较稳定，如阿米卡星、依替米星和异帕米星，均主要用于耐庆大霉素菌株。阿米卡星的抗菌谱与庆大霉素相似，其抗菌活性优于卡那霉素，稍次于庆大霉素。奈替米星的抗菌作用与庆大霉素相似；对各种氨基糖苷类钝化酶较稳定，稍次于阿米卡星；临床也用于较重的革兰阴性杆菌(主要为耐庆大霉素菌株)所致感染。依替米星其分子结构与奈替米星极相似，仅少一双链，故更稳定。对氨基糖苷类钝化酶的稳定性、抗菌作用及其临床疗效均与奈替米星相似。异帕米星的抗菌谱与阿米卡星相似，
氨基糖苷类药残留分析技术（一） 3.1. 4.1 前处理办法目前，AGs残留检测涉及的主要基质有蜂蜜、牛 奶，以及肝脏、肾脏、肌肉等动物组织。这些基质往往含有较多蛋白质和，使AGs易与和脂类等混杂在一起，导致色谱柱污染。样品的预处理是为了除去混杂物以免污染色谱柱和干扰AGs的分别分析。样品前处理主要包括提取、净化和浓缩等步骤。 (1)提取办法生物样品中AGs难以用非极性有机溶剂提取，常用水溶液和极性溶剂提取，采纳的提取办法主要有液液萃取法(LLE)、加速溶剂萃取法(ASE)和基质固相簇拥法(MSPD)等。 1)液液萃取(liquid liquid extraction, LLE) AGs具有水溶性，可以用、水等极性溶剂挺直提取。同时，在提取时还可加入、、等溶液沉淀蛋白质，将生物样品与酸溶液混匀或一起均质。 Kowalski 等用毛细管电泳法(CE)检测蛋黄中的链霉素，采纳乙腈作提取溶剂，同时沉淀蛋白质，回收率可达71.8%。Kumar等建立了检测动物肾脏和蜂蜜中10种AGs的测定办法。肾脏用水溶液提取,蜂蜜用水溶解,经弱阳离子交换柱固相萃取净化后,液相色谱-三重四极杆质谱(LC-MS/MS)检测。蜂蜜和肾脏中的定量限(LOQ)分离为2～125ug/kg和25～264ug/kg,日间相对标准偏差(RSD)分离为6%～26%和2%～21%。Tao等应用 LC-MS/MS建立了同时测定肌肉、肝脏(猪、鸡和牛)、肾脏(猪和牛)、牛奶和鸡蛋中15种AGs的全自动分析办法。匀浆后的样品用缓冲液(含乙二胺四乙酸)萃取，用羧酸柱举行自动固相萃取净化，LC-MS/MS测定。10种AGs的检测限(CCa)和检测能力(CCβ)值范围分离为8.1～11.8ug/kg和16.4～21.8ug/kg；办法回收率范围为71%～108%。 Vinas 等在检测蜂蜜、牛奶、鸡蛋和肝脏中链霉素和双氢链霉素时，用0.5 mol/L高氯酸溶液水解，释放蛋白结合态的分析物，并沉淀蛋白质，上清液用饱和氢氧化钠溶液调至中性后，进高效液相色谱(HPLC)检测，回收率良好，链霉素的检出限(LOD)为7.5μg/kg，双氢链霉素为 15ug/kg。Almeida等建立了测定家禽、猪、马和牛肾脏中10种AGs 残留的分析办法。用法含有三氟乙酸的磷酸盐缓冲液提取后，举行中 第1页共2页
氨基糖苷类药残留测定方法（五） 6)液相色谱-质谱联使用(liquid chromatography-mass spectrametery， LC-MS) 质谱仪是目前兽药残留分析中敏捷度最高的检测仪器，同时还可以举行化合物的结构鉴定。而色谱-质谱联使用是目前对复杂样品举行定性、定量分析的最佳办法。在兽药残留检测应用中，因为目标物浓度低、样品基质复杂，液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术已成为残留分析的主要进展方向。AGs因其结构中含有多个伯胺或仲胺基团而呈弱碱性，在质谱上有较强的正离子响应，用正离子方式检测比负离子方式有更高的敏捷度。常用的质谱电离源有电喷雾电离源(ESI)和大气压化学电离源(APCI)，而ESI源更适合溶液中极性较强、呈离子态的AGs。 A.电喷雾电离(ESI) Granja等采纳LC-MS/MS测定蜂蜜中的链霉素。色谱分别采纳GeminiC18柱(50mm×2mm)，5 mmol/L(HFBA)-(85+15，v/v)为流淌相，流速0.2mL/min，在ESI正离子模式下，多反应监测(MRM)采集数据。该办法在5ug/kg、10ug/kg、15ug/kg和20ug/kg添加浓度下，回收率可以达到近100%，检测限可达到4.7ug/kg。Cherlet等开发了牛组织和牛奶中的残留分析办法。组织样品用10mmol/L的缓冲液(含2%)提取，奶用50%三氯乙酸稀释，经CBASPE柱净化后，用LC-MS/MS测定。色谱柱为Nucleosil(5um)C18柱，流淌相为20 mmol/L HFBA和乙腈，ESI电离，MRM检测，链霉素为内标定量。组织和牛奶的LOQ分离为10 ng/g和1ng/mL，LOD为1.9～4.2ng/g和0.6ng/mL。van Bruijnsvoort等建立了蜂蜜和牛奶中的链霉素和双氢链霉素的LC-MS/MS分析办法。用含有庚烷磺酸钠的磷酸盐提取，SPE净化，LC-MS/MS在ESI源电离测定。蜂蜜中两种药物的LOQ 分离为2ug/kg和1ug/kg，牛奶中分离为10 ug/kg和5ug/kg。Bogialli 等用MSPD提取牛奶中的链霉素和双氢链霉素，LC-ESI-MS/MS测定。该办法外标法定量的回收率在70%～92%之间，内标法定量的回收率在80%～107%之间，RSD小于11%；LOQ在2～13ugL之间。 Heller等报道了牛血浆、牛奶和牛肾样品中庆大霉素的LC-MS/MS测定办法。样品 第1页共3页
氨基糖苷的用途 氨基糖苷是一类广泛应用于生命科学领域的化合物，其中最著名的代表是链霉素、卡那霉素、庆大霉素等。氨基糖苷具有广谱抗生素活性，对于革兰氏阴性和某些阳性细菌表现出良好的杀菌效果。除了作为抗生素外，氨基糖苷还可以用于其他领域，包括生物学研究、疾病治疗和基因工程等。 第一个重要的用途是氨基糖苷作为抗生素的应用。由于氨基糖苷具有较强的抗生素活性，广泛用于细菌感染的治疗。氨基糖苷能够通过结合细菌的核糖体，抑制蛋白质的合成，从而导致细菌死亡。氨基糖苷对于革兰氏阴性细菌的杀菌效果较好，包括大肠杆菌、奇异变形杆菌和铜绿假单胞菌等。此外，氨基糖苷还可以用于治疗革兰氏阳性细菌感染，如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。由于氨基糖苷的广谱抗菌活性和较低的毒性，使其成为临床上重要的药物之一。 第二个用途是氨基糖苷在生物学研究中的应用。氨基糖苷可以通过选择性抑制蛋白质合成的能力，用于研究细胞的生物合成和代谢途径。研究人员可以利用氨基糖苷抑制蛋白质合成，从而研究特定蛋白质的功能和相互作用。另外，氨基糖苷还可以用于构建细菌基因工程中的选择标记。通过在特定基因中引入氨基糖苷抗性基因，研究人员可以选择性地筛选带有目标基因的转基因细胞和生物体。 第三个用途是氨基糖苷在疾病治疗中的应用。由于氨基糖苷具有较广泛的抗菌活性，可用于治疗多种细菌感染引起的疾病。包括呼吸道感染（如肺炎、支气管炎）、尿路感染、皮肤感染、中耳炎等。在一些情况下，氨基糖苷也用于治疗与细菌感
染相关的严重感染，如败血症和敗血症休克。然而，由于氨基糖苷在高浓度下可能引起肝肾毒性，临床应用时需要仔细控制剂量和使用时间。 第四个用途是氨基糖苷在基因工程中的应用。由于氨基糖苷对细菌的广泛抗性，可以作为抗生素选筛中常用的选择标记物。通过将含有氨基糖苷抗性基因的质粒导入细菌中，只有带有目标基因的细菌才能在富含抗生素的培养基中生长。这种选择性标记系统在基因工程研究中起到重要作用，可以方便地筛选出带有目标基因的转基因细胞。 综上所述，氨基糖苷作为一类广谱抗生素，在生命科学领域有着广泛的应用。它们不仅可以用于抗菌治疗，还可以用于生物学研究、基因工程等领域。由于其抗生素活性和较低的毒性，氨基糖苷成为医疗和科研中重要的工具之一。然而，随着耐药菌株的出现，研究人员也在努力开发新的抗菌剂以应对抗药性的挑战。
16S rRNA甲基化酶导致的氨基糖苷类抗生素高水平耐药研 究进展 余方友 【摘要】16S rRNA甲基化酶能够造成对包括阿贝卡星在内的所有氨基糖苷类抗生素耐药,并且为高水平耐药.自2003年在革兰阴性杆菌临床分离株中发现第一个质粒介导的16S rRNA甲基化酶ArmA以来,已发现7种质粒介导的16S rRNA甲基化酶,包括ArmA、RmtA、RmtB、RmtC、RmtD、RmtE和NpmA.16S rRNA 甲基化酶基因通常和ESBL基因位于同一可转移的质粒上,造成多重耐药.世界各地在革兰阴性杆菌临床分离株中检测出16S rRNA甲基化酶,而我国分离的临床分离株中只检测出ArmA和RmtB.16S rRNA甲基化酶是导致革兰阴性杆菌临床分离株对氨基糖苷类药物高水平耐药的主要原因. 【期刊名称】《实验与检验医学》 【年(卷),期】2011(029)005 【总页数】6页(P463-468) 【关键词】革兰阴性杆菌;氨基糖苷类抗生素;16S rRNA甲基化酶 【作者】余方友 【作者单位】温州医学院附属第一医院检验科,浙江温州325000 【正文语种】中文 【中图分类】R446.5;R978.1;Q522+.3;Q939.92
氨基糖苷类抗生素可以治疗革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌引起的感染，由于氨基糖苷类抗生素具有耳和肾毒性，在临床上的应用受到一定的限制。氨基糖苷类抗生素具有浓度依赖性快速杀菌作用、与β-内酰胺类抗菌药物可产生协同作用、细菌的 耐药率低、抗生素后效应较长等优点，它仍是目前临床常用的药物，广泛用于治疗革兰阴性杆菌所致的严重感染。在治疗严重感染时，特别是由多重耐药菌株引起的严重感染时，单独使用氨基糖苷类抗生素治疗时可能疗效不佳，常需联合应用其他对革兰阴性杆菌具有强大抗菌活性的抗菌药物，如第三代头孢菌素及氟喹诺酮类药物等。 氨基糖苷类抗生素的使用同样面临着耐药问题，近年来，细菌对氨基糖苷类抗生素的耐药率不断上升。细菌对氨基糖苷类抗生素产生耐药的机制主要由细菌产生氨基糖苷类药物钝化酶引起，如N-乙酰基转移酶、O-磷酸转移酶及O-腺苷转移酶[1-4]。氨基糖苷类抗生素修饰酶能够催化氨基糖苷抗生素的氨基或羟基共价修饰，导致氨基糖苷类抗生素与核糖体的结合减少从而导致耐药。这些修饰酶通常只作用一种或几种结构类似的抗生素，不能灭活所有的氨基糖苷类抗生素，如阿米卡星[4]。近年来，发现一类质粒介导的16S rRNA甲基化酶，该酶能够保护细菌的30S核 糖体16S rRNA不被氨基糖苷类抗生素结合，造成对包括阿贝卡星在内的所有氨 基糖苷类抗生素耐药，并且为高水平耐药 [5-8]。本文就16S rRNA甲基化酶导致的氨基糖苷类抗生素高水平耐药机制的研究进展进行综述。 1 16S rRNA甲基化酶的作用机制 近年来，革兰阴性杆菌的核糖体16S rRNA的甲基化已成为一种对氨基糖苷类抗 生素产生耐药的新机制。革兰阴性杆菌的核糖体30S亚基的甲基化是由新发现的16S rRNA甲基化酶所导致，该酶类似于产氨基糖苷类抗生素的放线菌产生的物质。16S rRNA甲基化酶导致革兰阴性杆菌对目前临床上使用的氨基糖苷类抗生素高水
食品中磺胺类药物前处理及检测方法研 究进展 摘要：磺胺类兽药残留是目前动物源性食品的一个重要安全问题。磺胺类兽 药在食品中的残留检测具有重要意义。食品底物中痕量兽药残留的测定依赖于有 效的前处理方法和精密的分析仪器！ 引言 前处理是复方磺胺类药物残留测定的重要步骤。预处理既要最大限度地提取 待测目标物，又要最大限度地减少杂质的存在，从而减少基质干扰，降低检测限。目前，预处理方法可分为传统方法和一些新的预处理技术，如压力液萃取、固相 萃取、基质辅助固相分散萃取和“快速、简单、廉价、有效、稳定、安全”的提 取方法。 2.1传统前处理方法 传统预处理方法包括溶剂萃取或液液萃取,食品样品和其他样品,第一步先预 处理通常是匀浆处理样品,后加入一个极性或非极性有机试剂提取,提取结束后电 影处理,去除不溶性底物和杂质的一部分。但是，考虑到样品主要含有脂类或蛋 白质，预处理过程可能还需要一些脂类去除或蛋白质沉淀的过程。乙腈是目前最 常用的提取试剂。对于许多食品底物，已报道用乙腈作为萃取溶剂。用乙腈从肝 组织中提取7种磺胺类药物，加标回收率均在84.6%以上。此外，在蜂蜜和婴儿 食品中使用乙腈也有报道。少数研究已经采用其他有机试剂进行萃取(如甲醇、 乙酸乙酯、二氯甲烷等)，也取得了较好的萃取效果，另外，混合溶剂萃取也常 用作为萃取试剂，常见的混合溶剂萃取有:乙腈、四氢呋喃、甲醇-水和乙腈-磷 酸盐以及甲醇、二甲基亚砜等。同时，为了提高食品样品中有机溶剂的提取效率，在提取过程中经常采用超声波、微波和振荡处理。近年来，在复杂食品底物中同 时测定多种磺胺类药物的新型前处理方法被开发出来。
2.2PLE法 该方法是在较高的温度(50 ~ 200℃)和压力(7 ~ 21 MPa)下，用有机溶剂自 动提取固体或半固体的方法。该方法回收率高，提取时间短(≤15min)，自动化 程度高。该方法具有一定的优越性，可用于动物性食品(肉、肝、肾)和奶粉中磺 胺类药物残留的提取。前者的回收率为71.1% ~ 118.3%，后者为87.6% ~ 91.4%。 2.3SPE法 有机溶剂从食品基质中提取的溶液往往含有各种杂质。为了尽量减少杂质的 干扰和基体的影响，在加载前对样品进行一定的净化处理是必要的。通常，主要 杂质在不同的食物底物中是不一致的，如肉类含有高脂杂质，鸡蛋含有较多的蛋 白质，蜂蜜含有大量的糖。综上所述，不同的食品基质应采用不同的净化方法。 固相萃取柱是最常用的净化方法。待测药物从肉、蛋、奶等不同的食品基质中分 离出来后，通过不同类型的固相萃取柱对杂质进行富集、净化和去除。目前市场 上有多种固相萃取柱，其中许多固相萃取柱已被报道用于磺胺类药物的富集纯化。乙腈、甲醇、甲醇-甲酸铵等溶液作为常用的洗脱溶剂均取得了较好的效果。采 用OASIS HLB柱对蜂蜜进行净化，回收率为70% ~ 106%。用Bond ods - c18色 谱柱测定鸡蛋样品的回收率为73.2% ~ 102.6%。 2.4MSPD法 提出了MSPD方法早在1989年,该方法通常用于液体或粘稠样品含有脂质部 分也适用于原材料,建立7种磺胺类药物的检测在肉MSPD方法中,选择硅藻土作 为吸附剂分散,吸附剂和被测样品质量比是3:1,丙酮作为溶剂洗脱,7种磺胺类药 物的回收率在84.6%以上。建立了鱼中磺胺类药物的检测方法，加标回收率为 69.0% ~ 96.3%。分别比较了硅胶、硅藻土、中性氧化铝等吸附剂和甲醇、二氯 甲烷、正己烷、乙腈、丙酮等洗脱溶剂的效果。结果表明，硅藻土/丙酮是检测 食品基质中磺胺类药物的最佳前处理组合。 2.5QuEChERs法
UPLC/MS/MS测定肉类和乳品中的氨基糖苷类抗生素 Michael S. Young、Kim van Tran、Evelyn Goh和Jeremy C. Shia 沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德) 应用优势 ■从乳品或肉类中快速萃取氨基糖苷类抗生素 ■快速LC/MS/MS分析 ■直接固相萃取(SPE)净化 ■低ppb检测限值 沃特世解决方案 ACQUITY UPLC®系统 ACQUITY®TQD 质谱仪 ACQUITY UPLC HSS PFP 色谱柱 Oasis®HLB 萃取柱 聚丙烯样品瓶 关键词 氨基糖苷类抗生素、固相萃取、乳品、牛肉、LC/MS/MS 引言 氨基糖苷类抗生素会作为兽药被用于治疗产肉和产乳动物，因此需要一种分析其在这些商品中残留的有效分析方法。这类抗生素给残留分析提出了巨大的挑战。与其他大多数抗生素不同，这些化合物无法使用乙腈或其他有机溶剂从组织或乳品中萃取出来。在研究中，使用含有三氯乙酸(TCA)的水性缓冲液将氨基糖苷类抗生素从肉类组织或乳品中萃取出来。加入TCA能够使蛋白质沉淀并抑制蛋白与这些分析物结合。进行LC/MS分析前，利用有效的固相萃取(SPE)净化操作除去残留的TCA，尽量减少共萃取干扰。通过使用Oasis HLB(高效、水可浸润性反相吸收剂)，在牛奶和肉中可获得良好的固相萃取收率和净化效果。在随后的分析中，使用ACQUITY UPLC HSS PFP色谱柱，在反相离子对模式下，可获得出色的
UPLC®分离性能。七氟丁酸(HFBA)用作离子配对试剂。该试剂具有挥发性且能与质谱法结合使用。 在全球范围内，氨基糖苷类抗生素在乳品中的最大残留限量(MRL)一般范围是100 ~ 1000 µg/kg，如图1所示。本应用纪要提供了一种适用于测定牛奶和牛组织中氨基糖苷类抗生素残留在ppb水平的方法，该方法一部分是由参考文献1和参考文献2中的方法发展而来。 实验 UPLC条件 系统：ACQUITY UPLC 色谱柱：ACQUITY HSS PFP 2.1 x 100 mm，1.8 µm部件号186005967 进样量：30 µL 温度：35C 流动相A：20 mM HFBA水溶液 流动相B：20 mM HFBA乙腈溶液 流速：0.50 mL/min 梯度：20% B初始条件，7分钟内线性梯度增至80% B，保持8分钟，浓度降回至20% B，
亲水作用色谱-高分辨质谱测定生鲜牛乳中7种氨基糖苷类药 物残留 王帅兵;曲斌;耿士伟;陆桂萍;蒋天梅;陈蓉 【摘要】建立了生鲜牛乳中链霉素、双氢链霉素、庆大霉素、妥布霉素、卡那霉素、阿米卡星和安普霉素共7种氨基糖苷类抗生素残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法.样品经100 mL/L三氯乙酸-乙腈提取和WCX固相萃取柱净化后,采用亲水作用色谱分离,四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱检测.对样品前处理条件、液相色谱流动相及质谱条件进行了优化.结果表明,7种氨基糖苷类抗生素在20 μg/L～500 μg/L范围内线性关系良好,生鲜牛乳中的加标回收率为88.7%～111.2%,相对标准偏差为6.3%～13.1%,该方法灵敏、准确,可用于生鲜牛乳中多种氨基糖苷类抗生素残留的同时检测. 【期刊名称】《动物医学进展》 【年(卷),期】2017(038)009 【总页数】6页(P67-72) 【关键词】氨基糖苷类;亲水作用色谱-高分辨质谱;生鲜牛乳 【作者】王帅兵;曲斌;耿士伟;陆桂萍;蒋天梅;陈蓉 【作者单位】江苏农牧科技职业学院,江苏泰州 225300;江苏省畜产品质量检验测试中心,江苏南京 210036;江苏省畜产品质量检验测试中心,江苏南京 210036;江苏省畜产品质量检验测试中心,江苏南京 210036;江苏省畜产品质量检验测试中心,江苏南京 210036;中国药科大学理学院,江苏南京 211198
【正文语种】中文 【中图分类】S859.84 氨基糖苷类抗生素(aminoglycosides，AGs)是一类由1个或多个氨基糖分子与氨基环醇通过氧桥连接而成的苷类抗生素，极性大，呈碱性。AGs药物对多种革兰 阳性菌和革兰阴性菌均有较强杀菌作用，在养殖过程中被广泛用于预防和治疗奶牛乳房炎[1]。然而，不合理用药或不遵守休药期规定滥用药物常导致牛、羊等生鲜 乳中出现AGs药物残留，长期饮用含AGs药物残留的乳制品可能对消费者产生耳毒性和肾毒性[2]。此外，AGs药物残留引起细菌产生耐药性的问题也不容忽视[3]。因此，国内外对生鲜乳及其他动物源性食品中AGs药物残留问题非常重视，欧盟、美国对动物性食品中AGs药物残留均有明确规定[4]，我国农业部规定生鲜乳中AGs药物的最高残留限量(MRL)为100 μg/kg～500 μg/kg[5]。 目前，用于测定生鲜乳中AGs药物残留的方法主要有微生物分析法、免疫分析法 和仪器分析法[2]，其中液相色谱-串联质谱法因其定量准确、灵敏度高成为检测AGs药物残留的确证方法[6]。实际测定中因AGs药物极性大，难以在反相色谱柱上保留，故当前多通过向流动相中加入离子对试剂以增强色谱保留[7-8]。然而离 子对试剂容易污染色谱柱，对pH也较敏感，影响试验结果的重复性和重现性。选用亲水作用色谱柱(hydrophilic interaction chromatography,HILIC)则不同，在简单的流动相组成条件下即可大大改善极性化合物的色谱行为，还可提高电喷雾离子化质谱的灵敏度，十分适用于AGs药物分析。本试验根据AGs药物的理化特点，通过改进样品前处理方法，选用HILIC色谱柱，优化测定条件，建立一种高效、 灵敏的AGs药物多残留检测方法，可同时测定生鲜牛乳中7种AGs药物残留，为有效监控该类药物残留提供基础手段。 1.1 材料
氨基糖苷类抗生素新型药物递送系统的临床应用与研发进展邓炜; 吴正昊; 母长明; 金方 【期刊名称】《《中国抗生素杂志》》 【年(卷),期】2019(044)011 【总页数】5页(P1256-1260) 【关键词】氨基糖苷类抗生素; 吸入制剂; 脂质体; 临床应用 【作者】邓炜; 吴正昊; 母长明; 金方 【作者单位】广州健康元呼吸药物工程技术有限公司广州510530; 上海方予健康医药科技有限公司上海201203; 广州医科大学呼吸疾病国家重点实验室广州510120 【正文语种】中文 【中图分类】R978.1 氨基糖苷类抗生素是全球较早应用于细菌性感染的抗生素。与其他抗生素一样，氨基糖苷类抗生素也是某种微生物为对抗同一环境中其他微生物而产生的次级代谢产物。氨基糖苷类药物为静止期杀菌性抗菌药物，属于浓度依赖性杀菌药物，且具有较长的“抗生素后效应”。该类抗生素通过直接干扰细菌蛋白合成并破坏细菌细胞膜的完整性而发挥广谱抗菌活性，对革兰阴性菌有较好的抗菌活性，并对革兰阳性球菌也有一定的选择性活性，且亦能有效抑制结核菌的繁殖。 传统的氨基糖苷类抗生素通常采用静脉注射，由于药物在体内的高暴露量，这种系
统给药方式存在较强的毒副作用。主要表现为耳毒性、肾毒性和神经肌肉阻滞，其中，肾毒性与耳毒性与氨基糖苷类抗生素有着密切的联系，并且发生率高。据报道，氨基糖苷类抗生素引起肾毒性的概率介于1.7%～58%之间[1]，而引起耳毒性的概率，如卡那霉素则高达16%。氨基糖苷类抗生素所造成的耳蜗毛细胞损害不可逆，一旦发生听力损害，则常为持久性的，其对高频听力的影响尤为严重，最严重者各音频听力均丧失，从而导致永久性耳聋。有药理研究表明，当妥布霉素峰浓度大于12μg/mL或谷浓度大于2μg/mL时，可出现肾或听神经的毒性反应[2]。 因此，在氨基糖苷类抗生素的静脉给药方式难以避免在临床治疗中出现显著的毒副作用问题的情况下，氨基糖苷类抗生素的局部给药新剂型成为了目前研究的热点所在，其局部的药物递送可以在保证高治疗效果的同时，降低药物的系统暴露量，从而降低毒性。且由于氨基糖苷类抗生素属于浓度依赖性杀菌药物，该类抗生素局部应用药物浓度高，在提高疗效的同时亦可有效降低细菌耐药率。 1 氨基糖苷类抗生素的临床应用 氨基糖苷类抗生素自20世纪50年代初上市后很快成为国际抗生素市场的畅销产品，至20世纪80年代末氨基糖苷类抗生素达全盛时期，这个时期出现的氨基糖 苷类抗生素主要有地贝卡星、奈替米星、异帕米星等。 然而，随着此类抗生素在临床上的应用越来越广泛，耐药性问题随之而来。同时由于氨基糖苷类抗生素滥用导致的耐药性及其本身明显的毒副作用，20世纪70年 代末，随着喹诺酮类、碳青霉烯类、头孢菌素类等广谱且副作用少的抗生素的广泛使用，全球对氨基糖苷类抗生素的研究日益减少，自1990年阿贝卡星获批使用后，近30年来，仅在1997年和2018年分别批准了依替米星和普拉唑米星两种氨基 糖苷类抗生素进入医疗市场。在2010年，氨基糖苷类抗生素的市场份额在全球仅占2.7%。 我国亦于2004年下发了《抗菌药物临床应用指导原则》，并于2011年在全国范