Molish反应--是糖和苷类的检识反应。样品+浓硫酸+a萘酚=界面处紫色环。碳苷和糖醛酸与Molish阴性。Smith降解—检测糖的种类，连接方式，氧环大小·特点：反应条件温和、易得到原苷元
适用：苷元不稳定的苷和碳苷，不适合苷元上有邻二醇羟基或易被氧化的基团的苷。
样品（含稀醇）+ NaIO4=糖开裂成醛+ NaBH4=伯醇，再调pH=2，放置。Smith裂解获得连一个醛基的苷元
异羟肟酸铁反应---鉴定内酯环的存在：碱性条件下，香豆素内酯开环，并与盐酸羟胺缩合成异羟肟酸，再在酸性条件下与三价铁离子络合成盐而显红色。
酚羟基反应：具酚羟基取代的香豆素类在水溶液中可与三氯化铁试剂络合而产生不同的颜色。
酚羟基的对位未被取代，6-位上没有取代，内酯环碱化开环后，可与Gibb’s试剂、Emerson试剂反应。Gibb’s反应：2,6-二氯(溴）苯醌氯亚胺试剂蓝色。
Emerson反应： 2%的4-氨基安替匹林和8%的铁氰化钾试剂红色。
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Feigl反应碱性加热与醛类及邻二硝基苯紫色化合物。
无色亚甲基蓝显色反应—苯醌及萘醌类的专用显色剂（蓝色斑点）与蒽醌区别。
Borntrāger`s反应，羟基醌碱性溶液颜色加深，多呈橙，红，紫红色，蓝色。
活性次甲基试剂的反应（K-C法）苯醌及萘醌类环上有未被取代的位置氨碱性 ==蓝绿色或蓝紫色。
与金属离子的反应（α-酚羟基、邻位二酚羟基；Pb2+,Mg2+）。
盐酸-镁(锌)粉反应黄酮(醇) 二氢(醇)红色至紫红色异黄酮、查尔酮无色
四氢硼钠(钾)反应---二氢（醇）专属反应（红色、紫红色）
锆盐-枸椽酸显色反应。区别3，5-OH 3-OH+ZrOCl2黄色褪5-OH+ZrOCl2黄色不褪
氯化锶(SrCl2)。具邻二酚羟基生成绿-棕色、黑色沉淀
Sabety反应：挥发油1 滴→1ml氯仿＋5%溴的氯仿溶液→产生蓝紫色或绿色
与Ehrlich试剂(对-二甲胺基苯甲醛浓硫酸)反应产生紫色或红色
浓硫酸-醋酐（L-B反应）：三萜-红甾体-绿
三氯化锑反应：三萜显黄色、灰蓝、灰紫斑点，UV下蓝紫色荧光。甾体UV黄色荧光。
三氯醋酸（Rosen-Heimer反应）红紫色斑点
氯仿-浓硫酸（Salkowsk反应）三萜样品溶于氯仿，滴加浓硫酸，氯仿层血红色或青色，硫酸层绿色荧光。
甾体：毛地黄毒苷类、黄色。羟基毛地黄毒苷类、蓝色。异羟基毛地黄毒苷类、灰蓝色
泰尔登反应-亚硝酰氯，鉴定萜类，蓝、绿色
D-A反应：带共轭双键的萜类，得到结晶性加成产物
Vitali反应：发烟硝酸鉴别莨菪碱呈深紫色樟柳碱阴性
氯化汞反应：莨菪碱黄红色东莨菪碱白色
糖 邻二羟基--银镜反应、斐林反应、硼酸形成络合物 糠醛衍生物+芳胺或酚类 缩合 显色 Molish 反应：样品+浓硫酸+α萘酚-------棕色环（多糖、低聚糖、单糖、苷类均阳性） 香豆素： 试剂： Gibb ——2,6-二氯(溴)苯醌氯亚胺 Emerson ——氨基安替匹林和铁氰化钾 条件：有游离酚羟基，且其对位无取代者——呈阳性 异羟肟酸铁反应（识别内酯） 醌类 颜色反应 ①Feigl 反应：醌类化合物在碱性加热条件下与醛类及临二硝基苯反应生成紫色化合物（反 应前后醌类化合物无变化，只起到电子传作用） ②Borntr?ger 反应： 羟基蒽醌类遇碱显红-紫红色 羟基醌类遇碱颜色加深，呈橙、红、紫红及蓝色 蒽酚、蒽酮、二蒽酮需氧化成羟基蒽醌后才显色 ③无色亚甲蓝反应：苯醌及萘醌，用于PC,TLC 的喷雾剂，显蓝色斑点 ④与活性次甲基试剂的反应： 苯醌及萘醌类：醌环上有未被取代的位置，可在氨碱性条件下与活性次甲基试剂（乙酰醋酸 酯、丙二酸酯等）反应生成蓝绿或蓝紫色。 ⑤与金属离子的络合反应：具有α-OH 或临二酚OH 的蒽醌，与Pb2+、Mg2+络合显色 与醋酸镁络合具有一定的颜色-----鉴定 黄酮类 HCl-Mg 反应 含黄酮（醇）、二氢黄酮（醇） （+）橙红色-紫红色 查耳酮、橙酮、黄烷（醇）类 （-）不显色 操作方法：1ml 样品 + Mg 粉 + 几滴浓HCl （花色素及部分橙酮、查耳酮在浓盐酸中会变色，故需做对照） 香豆素Gibb Emerson 试剂与酚羟基对位活性氢缩合蓝色红色
铝盐：1% AlCl3或Al （NO2）3 黄色定性、定量 铅盐：1%醋酸铅或碱式醋酸铅黄~红色沉淀 锆盐：2%ZrOCl2的甲醇溶液黄色游离的3，5-羟基 锆-枸橼酸反应：黄绿色荧光 镁盐：二氢黄酮（醇）类天蓝色5-酚羟基色泽更明显 氯化锶：氨性甲醇溶液（具有邻二酚羟基）绿色~棕色~黑色沉淀三氯化铁：酚类显色剂三氯化铁-铁氰化钾 碱性试剂显色反应： （碱：氨蒸汽 可逆； 碳酸钠水溶液不可逆） 二氢黄酮类开环橙色~黄色 黄酮醇类黄色~棕色（通入空气）其他黄酮无次反应 含有邻二羟基或3,4’-二羟基取代的黄酮类不稳定易氧化黄色~深红色~绿棕色 萜类 不饱和萜类与亚硝酰氯反应;生成的氯化亚硝基衍生物多呈蓝色至绿色结晶 挥发油功能团的鉴定： 酚类：三氯化铁乙醇溶液——蓝色、蓝紫或绿色 羰基化合物：硝酸银氨溶液——银镜反应——醛类 挥发油的乙醇溶液+2,4-二硝基苯肼、氨基脲、羟胺等试剂——结晶性衍生物 沉淀——醛或酮类 不饱和化合物和薁类衍生物：挥发油的三氯甲烷+溴的三氯甲烷溶液——红色褪去——含有不饱和化合物，继续滴加，如果产生蓝、紫、绿——含有薁类化合物 挥发油的无水甲醇溶液加浓硫酸——蓝色、紫色——含有薁类衍生物 内酯类化合物：挥发油的吡啶溶液+亚硝酰氰化钠及氢氧化钠溶液——出现红色并逐渐消失——含有不饱和内酯类化合物 三萜化合物（萜类）显色反应 强心苷：1）甾体母核颜色反应与三萜类相同（但全饱和的甾体、C3无羟基的呈阴性）2）不饱和内酯环产生的反应： 样品 硼酸 草酸 枸橼酸 黄色并有绿色荧光 黄色，无荧光 丙酮
生物碱：生物界的含氮有机物。溶血指数：使红细胞完全溶解时的药物最低浓度。挥发油：具芳香气味油状液体总称。天然药物化学：运用现代理论方法与 技术研究天然药物中化学成分的学科。单体：即化合物，具有一定分子量、分 子式、理化常数和确定化学结构的化学物质。有效成分：具有生物学活性，能 起防治疾病作用的化学成分，能用分子式和结构式表示，并具有一定物理常数 的单体化合物。香豆素：具有苯骈α吡喃酮母核的天然产物。β清除反应：苷键的β位有吸电子基团能使苷元α位氢活化，在碱液中与苷键消除使苷键裂解。 薄层色谱法：制版，点样，展开，显色。柱色谱:装柱，上样，洗脱。两相萃取原理：利用混合物各成分在两种互不相溶的溶剂中分配系数不同达到分离方法。破乳：加热敷；乳化层抽滤；长时间放置。结晶：加晶种；摩擦内壁；减少溶剂；盐析；降温及自然挥发。鉴定天然产物步骤：纯度测定；分子式测定；化 合物功能基团和分子骨架的推定；结构式确定。香豆素分类：简单、呋喃、吡喃、其他。木脂素结构分类：简单、单环氧、环、双环氧、联苯型、（环）木 脂内醋等黄酮类分类：黄酮类、黄酮醇类、三氢黄酮（醇）类、异黄酮类、花 色素类、橙酮类、黄烷醇类。黄酮类显色反应还原：盐酸镁锌粉反应、四氢硼 钠还原反应。络合：铅盐、锆盐、镁盐、氯化锶、三氧化铁反应。硼酸显色反应。碱性试剂显色反应。槐米中芦丁提取注意：碱度不宜过高以免破坏黄酮类 母核、酸化时酸性不宜过高以免生成盐降低产率。黄酮类聚酰胺分离原理及规 律原理：“氢键吸附”。吸附强度取决于酚羟基的数目、位置及溶剂与黄酮形 成氢键的能力。规律：1，黄酮醇＞黄酮＞二氢黄酮醇＞异黄酮2，能形成氢键的酚羟基越多吸附越强3，与形成氢键的位置有关4，受洗脱剂影响等 萜类化合物化学性质：加碱、氧化、脱氢反应。挥发油组成：萜类、芳香族、 脂肪族、含硫氮化合物以及其衍生物。挥发油提取方法：水蒸气蒸馏、油脂吸收、溶剂提取法、压榨法、超临界流体萃取法。溶剂极性规律：石油醚＜四氯 化碳＜苯＜二氯甲烷＜乙醚＜乙脂＜正丁醇＜丙酮＜甲醇＜乙醇＜水
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摘要 目的：从槐花米中提取并精制芦丁，用特征反应及紫外鉴定； 方法：碱提取-酸沉淀法提取芦丁，盐酸-镁粉反应、枸橼酸反应、Molish 反应及紫外进行鉴定； 结果：成功从槐花米中提取出 1.3243g 芦丁粗品，精制后得0.6908g芦丁精品。 结论：碱提取-酸沉淀法能从槐花米中提取一定量芦丁。 Abstract Objective: To extract rutin from Pagodatree Flower and refined it. Identify it with characteristic responses and UV identification; Methods: Use alkaline extraction - acid precipitation to extract rutin, and hydrochloric acid - Mg reaction, ZrOCl 2 /citrate reaction, Molish reaction and UV are used to identiy it; Results: The extracted rutin crude from Pagodatree Flower is 1.3243g, refined rutin is 0.6908g. Conclusion:The alkaline extraction - acid precipitation did extract some rutin from Pagodatree Flower. 文献综述 槐花米是豆科植物槐（Sophora japonica L.）的干燥花蕾及花。芦丁(Rutin)，又称芸香甙(Rutioside)，是由槲皮素C。位上的羟基和芸香糖结合而形成的双糖甙，，其化学结构为5，7，3 ，4 ，一四羟基，3一芸香糖黄酮，对心血管系统的疾病有很好的预防和治疗作用[1]。产品为黄绿色或淡黄色针状晶体，常含有3个结晶水，置空气中颜色变深，熔点为188℃～190 C，225℃分解，旋光度为+1 3．82。(23 cC醇中)；在冷水中溶解度为1／1 000，沸水中为1／200，冷醇中为1／650，热醇中为1／60；可溶于吡啶及碱性溶液中，几乎不溶于苯、醚、氯仿及石油醚。芦丁是中药槐花米中止血的有效成分，有维生素P样的作用，能调节毛细血管的渗透性，保持和恢复血管的正常弹性，临床上主要用于治疗高血压及毛细血管出血。由于芦丁的药用价值，所以开发利用的较早[2]。 提取芦丁后，取芦丁及其标准品的乙醇溶液进行TLC鉴别[3]；取芦丁的甲醇液用诊 断试剂NaOMe，A1C1 3/HC1，NaOAc/H 3 BO 3 ，在200～500 nm波段内进行扫描，进行UV光 谱鉴别。研究发现碱提pH 10、酸沉pH 2时，粗品得率为20．7％，纯品得率为14．2％；而碱提DH 9、酸沉pH 3时，粗品得率为20．2％，纯品得率为18．1％，表明酸碱浓度适宜，则可提高芦丁产率；而碱提pH值偏高，酸沉pH值偏低，虽然可以提高粗提率，但杂质含量较高，同时发现这一条件较前者能加快反应速度。因此从反应速度与纯品得
实验一天然产物化学成分系统预试验 天然产物中所含的化学成分种类很多，在深入研究之前应首先了解其中含有哪些类型的化学成分，如生物碱、皂苷、黄酮类等等。这就需要进行各类化学成分的系统定性预试验。或根据研究的需要进行单项预试法来初步判断。 一、实验目的与要求 掌握未知成分的天然产物是怎样初步提取分离的，熟悉各主要成分的试管试验、沉淀反应和纸层析、薄层层析的方法并根据试验结果判断含有什么类型的化学成分。 二、基本原理 利用各类成分的颜色反应和沉淀反应，对天然产物的提取液进行检查可以初步判断其中的化学成分。由于提取液大多数颜色较深，影响对颜色变化的观察，可以使用薄层层析（TLC）或纸层析（PC）等方法对天然产物的提取液进行初步分离，再进一步检查。 三、实验内容： 利用不同成分在各种溶剂中的溶解度的不同，一般可采用以下3种溶剂分别提取，试验。 1．水浸液：取中草药粗粉5 g加水60 ml，在50~60℃的水浴上加热1小时，过滤，滤液进行下列试验。
下
糖鉴定 （1）α-萘酚一硫酸试剂检查还原糖。 ①溶液I：10％α-萘酚乙醇溶液。溶液II：硫酸。取1ml样品的稀乙醇溶液或水溶液，加入溶液I 2滴～3滴，混匀，沿试管壁缓缓加入少量溶液II，二液面交界处产生紫红色环为阳性反应。 （2）斐林试剂检查还原糖。 溶液I：6．93g结晶硫酸铜溶于100ml水中。溶液II：34．6g酒石酸钾钠、10g氢氧化钠溶于100ml水中。取1ml样品热水提取液，加入4滴～5滴用时配制的溶液I、II等量混合液，在沸水浴中加热数分钟，产生砖红色沉淀为阳性反应。如检查多糖和苷，取1ml样品水提液，加入1m110% 盐酸溶液，在沸水浴上加热10min，过滤，（成盐去除杂质）再用10％氢氧化钠溶液调至中性，按上述方法检查还原糖。或者直接用高效液相色谱看色谱图。 酚类鉴定试剂 （1）三氯化铁试剂检查酚类化合物、鞣质1％～5％三氯化铁水溶液或乙醇溶液，加盐酸酸化。取1ml样品的乙醇溶液，加入试剂1滴～2滴，显绿、蓝绿或暗紫色为阳性反应。作色谱显色剂用，喷洒后，显绿或兰色斑点为阳性。 2．乙醇提取液
0644814 许丛宇 2008/12/30 生物碱 (1)Vitali 反应 C H C H 2O H C O O R H N O 3 C H C H 2O H C O O R N O 2 O 2N N O 2K O H C 2H 5O H N C O O K N O 2 O 2N C O O R C H 2O H 紫色 (2)DDL 反应 C O CH OH HIO 4 O HCHO CH 3CCH 2CCH 3O O CH 3COONH 4 N H C C H 3C CH 3 O O H 3C CH 3DDl 黄色 （3）沉淀反应 书本P155 糖 Molish 反应（试剂：浓硫酸，α-萘酚。常用色谱显色剂：邻苯二甲酸和苯胺） 糠醛衍生物和许多芳胺、酚类及具有活性次甲基的基团化合物缩合成有色的化合物 香豆素： （1）异羟肟酸铁反应--------内酯的显色反应 碱性条件下，香豆素内酯开环，并与盐酸羟胺缩合成异羟肟酸，再在酸性条件下与三价铁离子络合成盐而显红色。 （2）与酚类试剂的反应 具有酚羟基，可与FeCl3试剂产生颜色反应； 若酚羟基的对位未被取代，或6-位上没有取代，其内酯环碱化开环后，可与Gibb’s 试剂、Emerson 试剂反应。机制如下： Gibb’s 反应：符合以上条件的香豆素乙醇溶液在弱碱条件下，2,6-二氯(溴）醌氯亚胺试剂与酚羟基对位活泼氢缩合成蓝色化合物。 Emerson 反应：符合以上条件的香豆素的碱性溶液中，加入2%的4-氨替比林和8%的铁氰化钾试剂与酚羟基对位活泼氢缩合成红色化合物。 醌类 颜色反应: 取决于其氧化还原性质以及分子中的酚羟基的性质。 （1）Feigl 反应----醌的通性，所有具醌核的化合物均可反应。（方法、机理：见书 312页） 醌类化合物在碱性条件下，经加热能迅速与醛类及邻二硝基苯反应，生成紫色化合物 O O OH COONa HONH 2.Cl H O H N H OH O O H N H O O Fe Fe 3+ H + C C 1/3 ( 红 色) O H H O N Br Br Cl O N Br Br -O O N Br Br O + pH 9~10 O H H N N N H 2CH 3 CH 3 O K 3Fe(CN)6 N N N CH 3CH 3 O O + [O]氨基安替比林 （ 红 色）
天然药物化学实验 实验报告 实验一、槐米中芦丁的提取、精制和鉴定 （一）实验目的要求 1.制备芦丁，供药用。 2.通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。 3.熟悉重结晶技巧。 4.了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。 （二）实验的基本原理 1.芦丁的提取原理 利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉法）。也可利用芦丁在冷水中溶解度小，在热水中溶解度大的性质进行提取。 2. 芦丁的分离原理 利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。也可采用醇溶水沉法进行精制。 3. 芦丁的鉴定原理 （1）利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。 （2）通过专属的化学显色反应（如三氯化铝显色反应），确定芦丁的成分类型（黄酮类）。 (三) 实验内容 1. 用碱提法、水提法、醇提法提取槐米中芦丁。 2. 用酸沉法和冷却过饱和法分离芦丁。 3. 溶剂重结晶精制芦丁。 4. 薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁 (四) 实验药材仪器与试剂 1. 实验药材槐米20g。 2. 仪器：磁力加热搅拌器、旋转蒸发仪、粉碎机、500ml烧杯，1000ml烧杯，50ml 烧杯，250ml园底烧瓶、500ml园底烧瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml锥形瓶、50ml 锥形瓶、研钵、移液管、减压过滤装置，布氏漏斗，抽滤瓶、层析缸等。 3. 试剂：硼砂、氧化钙、HCI、三氯化铝、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、滤纸、PH试纸等。
第一章 黄柏中小檗碱的提取、分离与鉴定教学目的要求掌握黄柏中小檗碱(季胺型生物碱)的提取原理和方法。 掌握干法装柱和湿法装柱的操作方法 1、 掌握鉴定小檗碱(已知化合物)的一般方法。教学重点难点季铵型生物碱的理化性质及提 取方法。 2、 渗漉法的操作过程及注意事项。 3、 结晶法的注意事项 4、掌握薄层色谱鉴定的方法实验一 黄柏中盐酸小檗碱的提取 （一）实验原理 根据黄柏中含粘液质较多的特点，首先用石灰乳使粘液质生成难溶于水的钙盐，用碱水自黄柏中提出小檗碱，再加盐酸使其转化为盐酸小檗碱沉淀析出。小檗碱能缓缓溶解于水中，在冷乙醇中的溶解度不大，但易溶于热水或热乙醇，难溶于苯、氯仿、丙酮。小檗碱与酸结合脱去一分子水而成盐。小檗碱盐酸盐在冷水中溶解度小，较易溶于沸水，几不溶于乙醇，小檗碱的硫酸盐、磷酸盐在水中溶解度较小，与大分子有机酸生成的盐在水中的溶解度很小。黄柏中主要含有小檗碱，其结构如下 O O NH O O OMe OMe CHO 季铵式（红棕色） 醇式（黄色） 醛式（黄色） 小檗碱的三种互变异构体 川黄柏含小檗碱约1.37％～5.8％，关黄柏含小檗碱约0.60％～1.64％。
(二) 实验方法 实验二黄柏中盐酸小檗碱的纯化及鉴定 一、纯化 1.湿法装柱色谱法 吸附剂：中性氧化铝(100～200目)35g置于烧杯中，加入50ml 95％乙醇，调成浆状，湿法装柱。 上样：取50～100mg自制盐酸小檗碱，溶于少量95％热乙醇中，加入色谱柱中。 洗脱：95％乙醇洗脱，收集开始流出的鲜黄色带，即为纯化的盐酸小檗碱。 2.结晶法 抽率上次提取液，将得到的滤饼用少量水加热溶解，趁热抽率，滤液放冷等待析晶，再抽率得到晶体，即盐酸小檗碱纯品。 二、薄层色谱鉴定 将提取分离出的盐酸小檗碱样品与盐酸小檗碱的对照品共薄层色谱，比较其Rf值是否一致。 吸附剂：硅胶G薄层板 展开剂：①苯一醋酸乙酯一异丙醇一甲醇一水(6：3：1.5：l.5：0.3)，氨蒸汽饱和。 ②氯仿-甲醇-氨水(15：8：1) 显色剂：改良碘化铋钾试剂 1、渗漉前为什么要加入石灰乳搅拌？ 2. 提取时加氯化钠的作用是什么？ 3、在制备薄层色谱板时有哪些注意事项？ 第四章芦丁的提取、分离、精制和鉴定 1、掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2、掌握黄酮苷的水解原理及操作 3、掌握黄酮类及糖类化合物的检识。 1、碱溶酸沉法提取的原理 2、黄酮的检识反应实验七槐米中芦丁的提取
（四）用化学方法区别下列各组化合物 1． 对亚硝基二甲苯胺反应 B 溶液紫色蓝色或绿色 A 阴性 A B 2． Molish 反应：A 紫色环 B 阴性 A B 3． A B 中性醋酸铅 A 沉淀 B 无 A B 4． A B Borntrager 反应：B 红色，A 阴性 （六）用指定的方法区别下列各组化合物 5．化学方法 7-羟基香豆素 黄酮醇 强心苷 Liebermann-Burchard 反应 强心苷红色变成污绿色 异羟戊酸铁反应 红色是香豆素 盐酸-镁粉反应红色的是黄酮醇 6 HO O O CH 3 OH HO O CH 3 OH HO O CH 3 OH HO O O CH 3 O-glc HO O O OH O O O O O O O O O O OH OH O O OH
A B 用Labat 反应；试剂：浓硫酸、没食子酸；结果：B 溶液蓝绿色，A 阴性。 用指定的方法鉴别下列各组化合物 ．化学方法 8、 A B 氨性氯化锶反应 ：A 阴性 B 阳性 9、 A B 锆盐-枸橼酸反应：A 黄色不退去为A 不退去为B 10、芦丁和槲皮素 甘草酸和甘草次酸 Molish 反应：芦丁为阳性 槲皮素为阴性 甘草酸阳性，甘草次酸阴性 1.物理方法：人参皂苷-齐墩果酸 泡沫反应：人参皂苷阳性，齐墩果酸阴性 1、化学方法 11 N Glc A N B 12、 A B O OH O OH HO O OH O OH OH O OH O OH OH O OH HO OH
O O OH O （洋地黄毒糖）3 A OH HO O OH B O O OH O C Kedde反应阴性者为B，阳性者为A或C 再用K-K反应鉴别阳性为A，阴性为C I型强心苷和Ⅱ型强心苷 用去氧糖反应，阳性为I型强心苷，阴性为Ⅱ型强心苷，如K-K反应，呫吨氢醇反应，对-二甲氨基苯甲醛反应，过碘酸-对硝基苯胺反应 O O OH O O OH
Molish反应--是糖和苷类的检识反应。样品+浓硫酸+a萘酚=界面处紫色环。碳苷和糖醛酸与Molish阴性。Smith降解—检测糖的种类，连接方式，氧环大小·特点：反应条件温和、易得到原苷元 适用：苷元不稳定的苷和碳苷，不适合苷元上有邻二醇羟基或易被氧化的基团的苷。 样品（含稀醇）+ NaIO4=糖开裂成醛+ NaBH4=伯醇，再调pH=2，放置。Smith裂解获得连一个醛基的苷元 异羟肟酸铁反应---鉴定内酯环的存在：碱性条件下，香豆素内酯开环，并与盐酸羟胺缩合成异羟肟酸，再在酸性条件下与三价铁离子络合成盐而显红色。 酚羟基反应：具酚羟基取代的香豆素类在水溶液中可与三氯化铁试剂络合而产生不同的颜色。 酚羟基的对位未被取代，6-位上没有取代，内酯环碱化开环后，可与Gibb’s试剂、Emerson试剂反应。Gibb’s反应：2,6-二氯(溴）苯醌氯亚胺试剂蓝色。 Emerson反应： 2%的4-氨基安替匹林和8%的铁氰化钾试剂红色。 . Feigl反应碱性加热与醛类及邻二硝基苯紫色化合物。 无色亚甲基蓝显色反应—苯醌及萘醌类的专用显色剂（蓝色斑点）与蒽醌区别。 Borntrāger`s反应，羟基醌碱性溶液颜色加深，多呈橙，红，紫红色，蓝色。 活性次甲基试剂的反应（K-C法）苯醌及萘醌类环上有未被取代的位置氨碱性 ==蓝绿色或蓝紫色。 与金属离子的反应（α-酚羟基、邻位二酚羟基；Pb2+,Mg2+）。 盐酸-镁(锌)粉反应黄酮(醇) 二氢(醇)红色至紫红色异黄酮、查尔酮无色 四氢硼钠(钾)反应---二氢（醇）专属反应（红色、紫红色） 锆盐-枸椽酸显色反应。区别3，5-OH 3-OH+ZrOCl2黄色褪5-OH+ZrOCl2黄色不褪 氯化锶(SrCl2)。具邻二酚羟基生成绿-棕色、黑色沉淀 Sabety反应：挥发油1 滴→1ml氯仿＋5%溴的氯仿溶液→产生蓝紫色或绿色 与Ehrlich试剂(对-二甲胺基苯甲醛浓硫酸)反应产生紫色或红色 浓硫酸-醋酐（L-B反应）：三萜-红甾体-绿 三氯化锑反应：三萜显黄色、灰蓝、灰紫斑点，UV下蓝紫色荧光。甾体UV黄色荧光。 三氯醋酸（Rosen-Heimer反应）红紫色斑点 氯仿-浓硫酸（Salkowsk反应）三萜样品溶于氯仿，滴加浓硫酸，氯仿层血红色或青色，硫酸层绿色荧光。 甾体：毛地黄毒苷类、黄色。羟基毛地黄毒苷类、蓝色。异羟基毛地黄毒苷类、灰蓝色 泰尔登反应-亚硝酰氯，鉴定萜类，蓝、绿色 D-A反应：带共轭双键的萜类，得到结晶性加成产物 Vitali反应：发烟硝酸鉴别莨菪碱呈深紫色樟柳碱阴性 氯化汞反应：莨菪碱黄红色东莨菪碱白色
天然药物化学 2.生物合成途径：醋酸－丙二酸途径(AA-MA) 代谢产物：脂肪酸类、酚类、蒽醌类。甲戊二羟酸途径(MVA)代谢产物：萜类、甾体类化合物、胡萝卜素类。桂皮酸途径及莽草酸途径代谢产物：苯丙素类、黄酮类苯丙烯、苯丙酸、香豆素、木质素、木脂体。氨基酸途径代谢产物：生物碱类。 3.溶剂极性顺序：乙酸≥吡啶≥水≥乙腈≥甲醇≥乙醇≥丙酮≥正丁醇≥乙酸乙酯≥乙醚≥二氯甲烷≥氯仿≥苯≥三氯乙烷≥四氯化碳≥二硫化碳≥石油醚。 4.分离因子β：表示分离的难易，A、B两种溶质在同一溶剂系统中分配系数的比值β≥100——仅作一次简单萃取就可实现差不多分离100>β≥10——需萃取10－12次β≤2——作100次以上萃取才能实现差不多分离。 5.液－滴逆流色谱〔DCCC〕：可使流淌相呈液滴形式垂直上升或下降，通过固定相的液柱，实现物质的逆流色谱分离，分配用的两相溶剂不必震荡，故不易乳化或产生泡沫，专门适用于皂苷类的分离。上行：流淌相密度大。 6.分离提纯：硅胶、氧化铝：极性吸附〔硅胶：酸性，氧化铝：碱性〕，活性炭：非极性吸附在水中对溶质表现出较强的吸附能力。聚酰胺：氢键吸附〔＋分配原理〕极性非极性均适用，适合分离酚类、醌类、黄酮类〔羟基、羰基多的、分子小的、芳香核共轭双键多的易被吸附，分子内氢键不易吸附〕，用不断提高浓度的含水醇洗脱。离子交换树脂：酸，阴离子交换树脂，碱洗脱；碱，阳离子交换树脂，酸洗脱。 7.苷键的裂解：酸催化水解反应：水或稀醇溶液中，与稀酸共热催化水解，酸水解易难程度为：N-苷>O-苷>S-苷>C-苷、呋喃糖苷>吡喃糖苷、酮糖>醛糖、去氧糖>羟基糖>氨基糖、芳香苷>脂肪苷、苷元小基团苷键横键>苷键竖键、苷元大基团苷键竖键>苷键横键、N-处于酰胺时，N-苷也难水解，水解后生成糖和苷元。乙酰解反应：所用的试剂是醋酐和酸，其反应的机理与酸催化相似，但进攻的基团是乙酰基，而不是质子，反应生成乙酰化的低聚糖，爱护苷元部分的羟基。碱催化水解：适用于酯键或类似具有酯键性质结构形式存在的苷键。酶催化水解反应：专属性高、条件温顺。过碘酸裂解反应〔Smith裂解法〕：对苷元结构容易改变的苷以及C-苷的水解研究专门适宜；碳苷用Smith 裂解获得的是连有一个醛基的苷元，不适用于苷元上也有1,2－二元醇结构的苷类。苷易溶于水，苷元难溶于水。 8.苯丙素类：1.苯丙酸类：化学性质：苯丙酸类有—COOH，水溶性强，苯丙酸酯类的水溶性差，苯丙酸〔醇〕苷类的水溶性好。提取、分离：水提或者醇提。鉴定：UV法、FeCl3 甲醇溶液、氨蒸气熏、Millon试剂。2.香豆素类：性状：结晶，芳香，挥发性，升华性，成苷后不表现以上性质，亲脂性，极性，荧光。内酯环：在稀碱液中水解溶解后酸化环合成游离香豆素沉淀析出，可用于内酯类化合物的鉴别和提取分离。异羟肟酸铁反应。提取、分离：系统溶剂法〔常用石油醚、苯、乙醚、醋酸乙酯、丙酮和甲醇顺次提取〕、水蒸气蒸馏法〔小分子，挥发性〕、碱溶酸沉法〔内酯环开合，可用0.5％氢氧化钠水溶液加热提取，提取液冷却后先用乙醚萃取除去杂质，然后加酸调剂到中性，适当浓缩，再酸化〕、色谱分离法〔硅胶、聚酰胺、中性酸性氧化铝〕、3.木脂素类：结构：由2—4个苯丙素单元氧化聚合而成。理化性质：白色晶体，亲脂性，光学活性。提取、分离：乙醇、丙酮等亲水性溶剂提取〔含水醇提取后，回收醇至无醇味后，用CHCl3、Et2O提取〕，二氧化碳超临界提取，吸附色谱分离。 9.醌类化合物：1.结构：苯醌类：对苯醌，2,6-二甲氧基苯醌。蒽醌类：胡桃醌。菲醌类：4. 蒽醌类：1,4,5,8位为α位，2,3,6,7位为β位9,10位为meso位β-ph-OH酸性强于α-ph-OH〔与 C=O成氢键〕，衍生物：大黄素型、茜草素型--色较深〔助色团集中〕，蒽酚、蒽酮为互变异构。 2.理化性质：有色晶体，游离醌升华性，小分子挥发性，苷元极性小不溶于水，成苷后急性增加溶于热水，酸性－COOH > 2个β－OH > 1个β-OH > 2个α-OH > 一个α-OH。 3.衍生物制备：甲基化反应：1〕CH2N2/Et2O，-COOH、β-ph-OH、-CHO。2) CH2N2/Et2O+MeOH，-COOH、β- ph–OH两个α－ph－OH之一、－CHO。3)(CH3)2SO4+K2CO3+丙酮，β－ph－OH、α－ph－OH。4)CH3I＋Ag2O+CHCl3，-COOH、所有ph－OH,醇－OH、-CHO，羟基的酸性越强，甲基化反应越容易进行。乙酰化反应：1)冰HAC 〔少量乙酰氯〕，冷置，醇-OH。2)醋酐，加热短时刻，醇-OH、β－ph－OH；醋酐，加热长时刻，醇-OH、β－ph－OH、两个a－ph－OH之一。3)醋酐＋硼酸，冷置，醇-OH、β－ph －OH。4)醋酐＋浓硫酸，室温或放置过夜，醇-OH、β－ph－OH、a－ph－OH。5)醋酐＋吡啶，室温或放置过夜。醇-OH、烯醇式－OH、a和β－ph－OH。醋酐－硼酸爱护α－OH形成硼酸酯。 4.提取：游离醌：有机溶剂提取法〔醇提，回收至无醇味，CHCl3萃取—苷与苷元的分离〕、碱提酸沉法〔带游离ph -OH的醌类化合物〕、水蒸气蒸馏法〔挥发性〕、超临界流体萃取法、超声波提取法、微波萃取法。 5.分离：pH梯度萃取法、层析法〔硅胶、聚酰胺〕。 6.蒽醌苷类的分离：铅盐法〔Pb(AC)2，沉淀，水洗涤，H2S脱铅，层析〕、溶剂法〔正丁醇〕、层析法〔葡聚糖凝胶柱＋反相硅胶柱〕。 10.黄酮类化合物：1.理化性质：多数晶体，少数粉末，交叉共轭显颜色，苷元难溶于水〔非平面分子溶解度稍大〕，苷可溶于碱水溶液，具有ph-OH显酸性,，酸性强弱C7.4’-(-OH)2 > C7或C4’－OH>一样ph-OH >C5-OH，碱性遇浓酸不稳固。2.提取：溶剂提取法〔乙醇或含水乙醇〕、碱溶酸沉法〔同香豆素，酸碱不宜过强〕、炭粉吸附法〔非极性吸
天然药物化学显色反应总结 一、常见的天然药物化学显色反应及机理 1.生物碱的显色反应 生物碱是一类含有氮原子的碱性物质，可以与酸性试剂反应形成盐类。例如，生物碱和硫酸反应可以产生浅黄色、黄色或橙黄色的显色物质。这 是因为硫酸与生物碱反应后生成硫酸盐，而硫酸盐在酸性环境下呈现黄色。 2.酚的显色反应 酚类物质可以与铁盐反应形成酚酞络合物，产生红色显色物质。这种 反应被广泛用于鉴别和检测酚类物质。例如，苯酚和皮质醇试剂反应可以 在酸性条件下生成有吸光度的酚酞络合物。 3.醛和酮的显色反应 醛和酮是含有羰基（C=O）的化合物，可以与2,4-二硝基苯肼、邻苯 二胺等试剂反应形成显色物质。例如，用2,4-二硝基苯肼试剂检测甘油 醛（醛糖）可以产生橙红色的显色物质。 4.酸碱指示剂的显色反应 酸碱指示剂可以根据溶液的酸碱性质发生颜色变化。例如，天然色素 的嗜酸、嗜碱性质可以用作酸碱指示剂。当草莓汁（富含酸性天然色素） 与碱溶液混合时，会发生显色反应，并产生蓝绿色的显色物质。 二、应用举例 1.阿法酸定量分析
阿法酸是一种常用的非甾体抗炎药，可以通过与金属络合物反应显色的方法进行定量分析。例如，阿法酸可以与铜盐反应形成蓝色络合物，并通过测量其吸光度来确定阿法酸的含量。 2.硫酸含量测定 硫酸是一种广泛应用于化工和制药工业的常用试剂，其含量的测定对质量控制至关重要。硫酸可以通过与巴黎蓝反应形成显色物质，根据显色的强度来测定硫酸含量。 3.食品中黄曲霉毒素的快速检测 黄曲霉毒素是一种常见的食品中毒原因，可以使用免疫集成试纸和黄曲霉毒素结合蛋白质发生显色反应进行快速检测。当样品中存在黄曲霉毒素时，试纸会发生颜色变化，从而可以迅速检测出毒素的存在。 三、总结 天然药物化学显色反应作为一种简单、方便、经济的分析方法，被广泛应用于天然药物的质量控制和快速检测。然而，需要注意的是，在应用过程中需要选择适当的试剂和条件，避免假阳性结果的出现。此外，对于复杂样品的分析，可能需要配合其他分离、纯化和测定方法来进行全面的分析。
天然药物化学鉴别反应总结 天然药物化学鉴别反应是通过一系列化学试验和技术手段，对天然药 物进行分析、鉴别和评价的方法。这些反应可以从化学结构、化学性质和 成分组成等方面对天然药物进行鉴别，为药物质量控制和临床应用提供可 靠的基础。下面是对一些常见的天然药物化学鉴别反应进行总结： 1.酚酞试验：主要用于检测酚类化合物，如天然鞣质、挥发油等。该 试验将酚酞溶液与药物溶液混合，出现红色或紫色沉淀则为阳性反应。 2.水合酸法：用于检测酚醛类化合物，如天然鞣质、多聚酚类等。该 反应将药物与胆汁酸和浓硫酸混合，在加热过程中产生红褐色溶液变为黑色，并形成胶状物质。 3.碘试验：主要用于检测含单宁鞣质的药材。将药材粉末与碘溶液混合，出现蓝色或黑色沉淀则为阳性反应。 4.碘中毒试验：检测精油中芳香族碳氢化合物。将药物与碘溶液混合，观察是否产生紫色沉淀。 5.还原糖试验：用于检测药物中的还原糖。将药物与硫酸铜溶液混合，加热后出现红、黄色沉淀则为阳性反应。 6.凝固沉淀试验：用于检测植物中蛋白质和多聚酚类物质。将药物与 硫酸铵混合，在加热过程中形成凝固或沉淀物。 7.墨汁反应：主要用于检测含漆酚的药材。将药材粉末与墨水混合， 出现显色或混浊沉淀则为阳性反应。 8.蓝莓试验：用于检测类黄酮类化合物。将药物与3%的稀氢氧化钠 溶液混合，出现蓝色溶液则为阳性反应。
9.氯化亚铁试剂：用于检测鞣质的存在。将药物与氯化亚铁溶液混合，出现蓝绿色或黑色颜色则为阳性反应。 10.百里酮试剂：主要用于检测黄酮类化合物。将药物与百里酮溶液 混合，出现红色、橙色或黄色沉淀则为阳性反应。 总的来说，天然药物化学鉴别反应的目的是通过化学试剂与药物中的 成分发生特定的反应，从而鉴别药品的成分和质量。这些试验方法基于不 同的化学性质和结构特点，可分析出天然药物中的一些特定成分，为对药 品的质量评价提供有力的支持。同时，在鉴别反应的过程中，还需要结合 其他的化学分析技术，如色谱法、质谱法等，以全面了解药物的化学特性 和成分组成。
天然药物化学实验 实验一：芦丁的提取及鉴定 芦丁（Rutin ）广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如 烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica 的未开放 的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素（Quercetin ）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose ）〔为葡萄糖（Glucose ）与鼠李糖（Rhamnose ）组 成的双糖〕脱水合成的苷。 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无 水物188~190℃。溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。芦丁具有维生素P 样作用。有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，主要用作防治高血压病的辅助治疗剂，亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。 H H O O H O H H O O glu rha O O H OH O H O O H O 槲皮素 芦丁
一、实验目的 1、通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2、通过芦 丁结构的检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。 3、了解UV 及NMR 在黄酮类化合 物结构鉴定中的应用。二、实验内容 1、芦丁的提取分离 2、芦丁的鉴定 三、实验仪器设备和材料清单 1、实验材料；槐米1500 g 2、实验试剂； 甲醇、乙醇、HAc 、KBr 、HCl 、Mg 、H 2SO 4、Ca(OH)2、PbAC 2、FeCl 3、硼砂等。 3、实验仪器。 搅拌机，真空抽滤装置，分析天平，电子天平，紫外光谱，红外光谱仪，核磁共振仪，常用的玻璃仪器等。四、实验要求 1、要拿到以下2个化合物：芦丁、槲皮素。 2、能够拿根据化学试验及UV 、NMR 数据初步推断出芦丁的结构。并对黄酮类化合物的结构测定有一般性的了解。 3、要求学生能独立操作每一个实验步骤，了解和掌握其相关的原理，培养学生熟练 的试验操作。五、实验内容 1．碱提取 称取槐花米粗粉（20g ），在500ml 烧杯中加入水250ml ，硼砂1g[注1]在加热至 沸腾时， 投入槐花米，继续直火煮沸2~3分钟，在搅拌下小心加入石灰乳，调至8.5~9[注2] 保持微沸30分钟，趁热用尼龙布挤过滤，取滤液。 2．酸沉淀 滤液在60~70℃下用浓盐酸调pH 至4[注3]，静置6小时以上析出沉淀。 3．芦丁的 精制 取静置物抽滤, 用蒸馏水洗沉淀1~2次至中性，滤液弃去，沉淀即为芦丁粗品。粗品 粗称重后按芦丁在热水中1：200的溶解度加蒸馏水进行重结晶。将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热煮沸15分钟，趁热过滤。弃去残渣，滤液充分静置析晶，抽滤，60-70干燥，称重得芦丁精品。 4．黄酮苷的鉴别 取芦丁少量于试管中，加乙醇10ml ，在水浴上加热溶解。 4.1．取芦丁液2ml ，加浓盐酸2~3滴及镁粉少量，放置（或于水浴中微热），产生 红色反应。
天然药物化学 总论 1、主要生物合成途径 醋酸——丙二酸（AA-MA:脂肪酸、酚类、慈酮类 脂肪酸：碳链奇数：丙酰辅酶A、支链：异丁酰辅酶A、a-甲基丁酰辅酶A、 甲基丙二酸单酰辅酶A、碳链偶数：乙酰辅酶A 甲戊二羟酸途径（MVA 桂皮酸途径和莽草酸途径 氨基酸途径 复合途径 2、分配系数：两种相互不能任意混溶的溶剂 K=C U C L（C U溶质在上相溶剂的浓度、C L溶质在下相溶剂的浓度） 3、分离难易度：A、B两种溶质在同一溶剂系统中分配系数的比值 0=K A/K B（0>100一次萃取分离；10<0<100萃取10-12次；0<2一百以上；0=1不能分离） 4、分配比与PHPH=pKa+lg[A]/[HA]（pKa=[A-][H3O+]/[HA]） 当PH<3酸性物质为非解离状态[HA],碱性物质为解离状态[BH+] 当PH>12酸性物质为解离状态[A-],碱性物质非解离状态[B] 5、离子交换树脂 阳离子交换树脂：交换出阳离子，交换碱性物质 阴离子交换树脂：交换出阴离子，交换酸性物质糖和音 1、几种糖的写法： D-木糖（Xyl）、D-葡萄糖（Glc）、D-甘露糖（Man）、D-半乳糖（Gal）、D-果糖（Flu）、L-鼠李糖（Rha） 2、还原糖：具有游离醛基或酮基的糖 非还原糖：不具有游离醛基或酮基的糖 3、样品鉴别：样品+浓H2SQ+a-蔡酚>棕色环 4、羟基反应： 醛化反应（甲醛化）：Haworth法一可以全甲基话、Purdic法一不能用于还原糖、Kuhn 法一可以部分甲基化、箱守法一可以全甲基化、反应在非水溶液中 5、酸水解难易程度：N>O>S>C 芳香属甘较脂肪属甘易水解：酚昔>菇甘、管昔 有氨基酸取代的糖较-OH糖难水解，-OH糖较去氧糖难水解 （2,6二去氧糖>2-去氧糖>3-去氧糖>羟基糖>2-氨基糖）易-难 味喃糖甘较口比喃糖甘易水解 酮糖较醛糖易水解 口比喃糖昔中：C5取代基越大越难水解（五碳糖>甲基五碳糖>六碳糖>七碳糖） C5上有-COOHX代时最难水解 在构象中相同的糖中：a键（竖键）-OH多则易水解 昔元为小基团一昔键横键比竖键易水解；即e>a 昔元为大基团一昔键竖键比横键易水解；即a>e 6、smith降解（过碘酸反应）：NaSO、NaBH,易得到昔元（人参皂昔一原人参二醇） 7、乙酰解反应：3-昔键的葡萄糖双糖的反应速率（乙酰解反应的易难程度） （1——6）»（1——4）»（1——3）»（1——2）
天然药物化学重点 P17 从药材中提取天然活性成分的方法有溶剂法。水蒸气蒸馏法。升华法。 将固体药材按提取用溶剂的极性递增方式，用不同溶剂，如石油醚or汽油(可提出油脂、醋、叶绿色、挥发油、游离甾体、三萜类化合物)、氯仿or乙酸乙酯(可提出游离生物碱。有机酸。黄酮。香豆素的苷元等中等极性化合物)、丙酮or 乙醇、甲醇(可提出苷类。生物碱盐。鞣质等极性化合物)和水(提出氨基酸、糖类、无机盐等水溶性成分)依次进行提取。得到的各个部分经活性测试确定有效部分后再做进一步分离。 P18 常见溶剂的极性强弱顺序:石油醚(低沸点?高沸点)<二硫化碳<四氯化碳< 三氯乙烯<苯<二氯甲苯<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇<乙腈<水<吡啶<乙酸溶剂法分类:浸渍法，渗漉法，煎煮法，回流提取法，连续回流提取法，超临 界流体萃取技术，超神波提取技术超声波作用于液体介质引起介质的振动，当振动处于稀疏状态时，在介质中形成许多小空穴们这些小空穴的瞬间闭合，可引起高达几千个大气压的压力，同时局部温度可上升到千度高温，这一现象称为空化现象。 P19 中草药有效成分的分离与精制:根据物质溶解度差别进行分离，根据物质 在两相溶剂中的分配比不同时进行分离，根据物质的吸附性差别进行分离P20 在药材浓缩水提取液中加入数倍量高浓度乙醇，以沉淀出去多糖、蛋白质等水溶性杂质(水/醇法);在浓缩乙醇提取液中加入数倍量水稀释，放置以沉淀除去树脂、叶绿素等水不溶性杂质(醇/水法);在乙醇浓缩液中加入数倍量乙醚(醇/醚法)或丙酮(醇/丙酮法)可使皂苷沉淀洗出，而脂溶性的树脂等类杂质则留存在母液中等。 液-液萃取与分配系数K值 K=Cu/Cl