Sf9培养要点：
温度：27-28摄氏度
pH：，sf9最适的pH6.2，随培养时间的延长，Ph值会增加
传代时间：72h（三天左右）
细胞来源：Sf9（货号B825-01）和Sf21（货号B821-01）细胞系是传统的用于杆状病毒表达的细胞系，源于美国农业部昆虫病理实验室。此细胞系适用于InsectSelect系统。这两株细
（以上来自invitrogen）胞衍生于IPLBSF-21细胞系，来源于秋蝇蠕虫（草地夜蛾）蛹的卵巢组织。
细胞特点：规则的带有颗粒球形。贴壁紧。
标准条件的定义：
培养最低密度：0.6×106/ml（健康对数生长期细胞活率至少应不低于90％。活率低于90％细胞不是在最佳条件下培养不能用于实验）1×106/mL将出现对数生长状态
传代培养：传代培养需将细胞调整到维持对数生长状态和最大活率。
贴壁培养: 贴壁细胞传代需在细胞长成单层（如下定义）然后1：5（细胞体积：最后培养基体积）稀释维持对数生长。形成单层细胞可以传代培养
悬浮培养：在细胞密度达到2.0×106-2.5×106细胞/mL后将密度调整至0.7×106-1.0×106细胞/mL进行悬浮传代。确保传代细胞密度不高于4×106个/mL或保持密度高于1×106个/mL以达到对数生长状态。
Sf9悬浮培养所需要的细胞数
培养基：sf-900 ⅢSFM（添加2%的血清减小感染过程中蛋白水解量）
培养瓶与培养体积：
冻存：一旦细胞系建立且倍增规律则可以进行冻存。细胞需达到90％活率和80-90％融合的要求（如：低代次）推荐冻存几管。当融解细胞，它将会达到最佳使用状态。
1. 用细胞计数板计数细胞。需要足够的如上表所示密度的细胞冻存2-4管。细胞可是悬浮或贴壁培养；
2. 将无菌冻存管立于冰上，做好标记；
3. 室温400-600×g离心10min。移除上清。
4. 以给定的密度在冻存液中重悬细胞；
5. 移取1mL细胞悬液置于无菌冻存管中；
6. 置于-20℃1h，然后移至-80℃24-48h；
7. 储存于液氮中。
转染的细胞：需要的是对数期的细胞＞95%发育能力，可以完成成功的转染。
载氧：对于最优生长条件和蛋白的表达，昆虫细胞要求被动的通氧。积极的通氧系统要求溶氧饱和在10%-50%
Sf900II和sf900Ⅲ的区别：一般推荐Sf900II来大量表达蛋白
Sf900II含有表面活性剂（剪切力保护剂（保护细胞在转瓶中培养时不会受到剪切力伤害））
当设计纯化多聚组氨酸标签蛋白的计划时，注意无血清培养基不能直接用于螯合树脂，因为培养基的成分会除去树脂中的镍离子。
细胞培养的一般顺序：复苏——传代——传代稳定——冻存
应当遵循的一般过程：复苏——贴壁培养——悬浮——悬浮扩大培养（产生目标蛋白）（也可不经过贴壁培养，直接悬浮培养）
贴壁时间：45min
悬浮的转速：80rpm
附：离心机rcf与g的换算：
无血清培养基可以选择性加入一定的抑菌剂防止细菌或者真菌污染：
培养基：GIBCO-SFM900
加青霉素链霉素抑制细菌生长两性霉素B抑制真菌生长
A549细胞的培养 A549细胞为人肺腺癌细胞，属于传代细胞系，可稳定地传代培养。一般用胰酶消化后，加入生长液稀释，以1：2～1：3传代培养都是可行的。 一、 [所需溶液] 1，细胞冲洗液：磷酸盐缓冲液(PBS)——无Ca、Mg NACL 8.00g； KCL 0.20g; KH2PO4 0.20g; Na2HPO4 .。12H2O 1.15g 加水至 1 000mL,将PH调至7.4，高压灭菌。 2，胰酶-PBS消化液 结晶胰酶 2.5g; 高压灭菌后的PBS 1000ml 用磁力搅拌器搅拌均匀，使其完全溶解，通过0.22μm的滤膜过滤除菌，分装备用，放置—20℃保存。 3，细胞培养液：RPMI 1640培养液 二、［细胞的维持和培养］ １，细胞的复苏 （１）准备一个盛有40℃温水的烧杯，从液氮罐中取出存有Ａ５４９细胞的冻存管，放于40℃温水中，用镊子夹住轻轻摇动使其迅速融化（2-3 min）。
（２）在无菌操作台中采用75%的乙醇彻底擦拭冻存管，然后打开冻存管，注意动作要轻柔。 （３）加入10ml以上预热的细胞培养液至25cm2培养瓶中。（４）倒置显微镜下观察，37℃、5%CO2培养。 （５）8-10h后，更换新的培养液。 （６）常规传代培养。 ２， A549细胞更换新的培养液 （１）无菌操作打开培养瓶瓶盖，倒掉培养液。 （２）用PBS反复冲洗细胞2～3遍。 （３）加入新鲜的预热好的培养液及10%的胎牛血清。 （４）倒置显微镜下观察，37℃、5%CO2培养。 ３， A549细胞的传代 （１）无菌操作打开培养瓶瓶盖，倒掉培养液。 （２）向已经长满的细胞中加入消化液1ml，轻轻摇动培养瓶，使消化液流遍所有的细胞表面，吸弃或倒掉，轻轻冲洗细胞表面2～3遍，以尽可能去除原培养液中的牛血清。 （３）加入1ml消化液，在室温1-2min后把培养瓶放置在倒置显微镜下观察，发现细胞的胞质回缩、胞间质增大后，立即终止消化。 （４）加入5ml预热至37℃的培养液，用玻璃吸管反复吹打以分散细胞。吹打过程按顺序进行，从培养瓶底部一边开始到另一边结束，以确保所有的底部都被吹到。
龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/867915987.html, 昆虫滞育研究进展 作者：卓德干李照会门兴元等 来源：《山东农业科学》2010年第08期 摘要：昆虫的滞育是对不利环境的适应，受光周期、温度、湿度和食料等因素的影响。滞育期间昆虫体内发生代谢物质积累、能量代谢降低、脂肪和氨基酸含量改变等变化，这－系列复杂的生命活动通过昆虫自身神经及内分泌系统共同响应与整合进行。 关键词：滞育；诱导因素；生理生化基础；内分泌调节 中图分类号：Q965 文献标识号：A 文章编号：1001—4942(2010)08—0086—05 昆虫属变温动物，各种外界环境诸如光照、温度、湿度、水、食料等的不适宜都对昆虫滞育有诱导作用。滞育是昆虫对不利环境条件的一种适应，也是昆虫生活周期与季节变化保持一致的－种基本手段，具有遗传特性。根据滞育特性的不同，滞育通常分为兼性滞育和专性滞育。兼性滞育指多化性昆虫滞育的诱导和解除是由光周期、温度或者两者的变化导致的；专性滞育则是针对－化性昆虫而言，其滞育出现在确定的诱导期和特定的虫龄，滞育的开始独立于环境。研究昆虫滞育对防治害虫、保护益虫有重要意义。本文综述了环境因素(光周期、温度、湿度、食料等)对兼性滞育诱导的影响、昆虫滞育的生理生化基础和滞育的激素调节等。 1 昆虫滞育的诱导因素 1.1光周期 光周期是所有的环境因子中最有规律的，也是预测季节变化最可靠的，因此是大多数昆虫滞育诱导的主要因子。在长日照下发育而在短日照下进入滞育的昆虫种类通常称为长日照型，反之称为短日照型。大多数的昆虫种类分属于这两种类型，例如大草蛉(Chrysopa septempunctata)是短光照诱导滞育型，诱导预蛹滞育的临界光周期处于(10.5L／13.5D)和(11L／13D)之间；有些昆虫的种群则同时存在长日照和短日照的关系，如黑纹粉蝶(P／er／s me／ete Menetries)是以蛹滞育，夏滞育和冬滞育分别被较长日照(>13L／11D)和短日照( 同时，光周期暗期受到光冲击后也会影响有些昆虫的滞育。Fantinou等(1995)对西非蛀茎夜蛾(Sesamia nonagrioldes)幼虫进行的研究发现，当给诱导滞育的光周期(10L/l4D)暗期的前－
实验记录 24/2/2014 一、细胞培养 一、培养基的配制 a. RPMI 1640 1×（with L-glutamine）类培养基组分：RPMI ，10%FBS（胎牛血清），双抗生素（penicillin，盘尼西林（青霉素），streptomycin，链霉素）； 配制方法：500 ml RPMI(一瓶) + 50 ml FBS + 5 ml 双抗生素 b. DMEM 1×类培养基组分：DEMI，10% FBS，双抗生素； 配制方法：500 ml DMEM(一瓶) + 50 ml FBS + 5 ml 双抗生素 二、培养细胞RNA的提取 1.从培养箱中拿出6孔板（每孔培养2 ml），吸出培养液； 2.PBS清洗；用大枪管吸取PBS加入每个培养孔中（枪头不要触碰培养板，防止交叉污染），用1 ml枪吹匀清洗（把培养板倾斜，吸溶液指最高处打出）。重复以上操作一次。 3. 每孔中加1 ml Trizol ，吸出放-80℃冰箱冷冻。 三、培养细胞DNA的提取 1.从培养箱中拿出6孔板（每孔培养2 ml），吸出培养液； 2.PBS清洗；用大枪管吸取PBS加入每个培养孔中（枪头不要触碰培养板，防止交叉污染），用1 ml枪吹匀清洗（把培养板倾斜，吸溶液至最高处打出）。重复以上操作一次。 3. 向培养板中加酶消化（时间较长，放进培养箱，看到有白色悬浮后取出），取出加DMEM类培养基； 4. 吸出至1.5 ml 离心管，3600 rpm，4 min离心； 5. 吸出上清（不要触及沉淀），加PBS 1ml清洗，3600 rpm，4 min离心； 四、常用细胞系（人） 名称细胞类型来源核型培养液 A431 上皮型表皮细胞肿瘤非整倍体（76，XX）DMEM+10%FBS HeLa 上皮样宫颈癌非整倍体（81-83，XX）MEM+NEAA 10%FBS Hep G2 上皮样肝细胞癌非整倍体（55，XY）MEM+NEAA 10%FBS MEM：极限必需培养液（Eagle）；NEAA：非必需氨基酸；DMEM：Dulbecco’s MEM改良培养液；RPMI：Roswell Park Memorial 研究所；BrdU：5-溴脱氧尿苷；APRI：腺苷磷酸核糖转移酶 实验室除snu系列与国产7721用1640培养基，其它用DMEM培养基。 五、原代培养----肝细胞 1.切除乳鼠肝脏组织放进小烧杯中，用PBS或培养液漂洗2-3次，去除血污； 2.加少量培养液，用剪子把组织剪碎，1 平方mm左右，再用吸管吹打； 3.加含10%小牛血清的1640培养液，制成均匀的细胞悬液，移入培养瓶，将组织块放在培养瓶底部，采用薄层营养液培养法，盖上瓶盖。 4.换液，只将旧的培养液吸弃，换上新的培养基。 六、传代培养 1.显微镜观察是否需要传代 细胞生长良好：上清液清亮，无悬浮物，折光性好，均质而透明，胞膜完整，胞内颗粒少，无空泡和脂滴。细胞生长不良：悬浮物多，发差增大，胞膜不完整，胞质中颗粒多，出现空泡和脂滴。
Sf9培养要点： 温度：27-28摄氏度 pH：，sf9最适的pH6.2，随培养时间的延长，Ph值会增加 传代时间：72h（三天左右） 细胞来源：Sf9（货号B825-01）和Sf21（货号B821-01）细胞系是传统的用于杆状病毒表达的细胞系，源于美国农业部昆虫病理实验室。此细胞系适用于InsectSelect系统。这两株细 （以上来自invitrogen）胞衍生于IPLBSF-21细胞系，来源于秋蝇蠕虫（草地夜蛾）蛹的卵巢组织。 细胞特点：规则的带有颗粒球形。贴壁紧。 标准条件的定义： 培养最低密度：0.6×106/ml（健康对数生长期细胞活率至少应不低于90％。活率低于90％细胞不是在最佳条件下培养不能用于实验）1×106/mL将出现对数生长状态 传代培养：传代培养需将细胞调整到维持对数生长状态和最大活率。 贴壁培养: 贴壁细胞传代需在细胞长成单层（如下定义）然后1：5（细胞体积：最后培养基体积）稀释维持对数生长。形成单层细胞可以传代培养 悬浮培养：在细胞密度达到2.0×106-2.5×106细胞/mL后将密度调整至0.7×106-1.0×106细胞/mL进行悬浮传代。确保传代细胞密度不高于4×106个/mL或保持密度高于1×106个/mL以达到对数生长状态。 Sf9悬浮培养所需要的细胞数 培养基：sf-900 ⅢSFM（添加2%的血清减小感染过程中蛋白水解量） 培养瓶与培养体积： 冻存：一旦细胞系建立且倍增规律则可以进行冻存。细胞需达到90％活率和80-90％融合的要求（如：低代次）推荐冻存几管。当融解细胞，它将会达到最佳使用状态。
1. 用细胞计数板计数细胞。需要足够的如上表所示密度的细胞冻存2-4管。细胞可是悬浮或贴壁培养； 2. 将无菌冻存管立于冰上，做好标记； 3. 室温400-600×g离心10min。移除上清。 4. 以给定的密度在冻存液中重悬细胞； 5. 移取1mL细胞悬液置于无菌冻存管中； 6. 置于-20℃1h，然后移至-80℃24-48h； 7. 储存于液氮中。 转染的细胞：需要的是对数期的细胞＞95%发育能力，可以完成成功的转染。 载氧：对于最优生长条件和蛋白的表达，昆虫细胞要求被动的通氧。积极的通氧系统要求溶氧饱和在10%-50% Sf900II和sf900Ⅲ的区别：一般推荐Sf900II来大量表达蛋白 Sf900II含有表面活性剂（剪切力保护剂（保护细胞在转瓶中培养时不会受到剪切力伤害）） 当设计纯化多聚组氨酸标签蛋白的计划时，注意无血清培养基不能直接用于螯合树脂，因为培养基的成分会除去树脂中的镍离子。
《普通昆虫学》常见英文术语 一、形态学 1、entomology 昆虫学：以昆虫为研究对象的学科。 2、insect morphology 昆虫形态学：涉及昆虫的结构、功能、起源和演化。 3、head 头：昆虫体躯的第一段，由数个体节愈合而成。 4、thorax 胸：昆虫体躯的第二段，由前胸、中胸和后胸三个体节组成。 5、abdomen 腹：昆虫体躯的第三段，也是最后一段，其内部包藏着主要内脏器官和生殖器官。 6、somite 体节 7、tergut 背板：背面的骨化区（骨化：大多数成虫羽化后体壁很快硬化）。 8、ternum 腹板：腹面的骨化区。 9、pleuron 侧板：侧面的骨化区。 10、endoskeleton 内骨骼：沟下陷入部分呈脊状或板状称为内脊；呈或刺状或叉状者叫内突。 内脊和内突构成昆虫的内骨骼。 11、ecdysial line 蜕裂线：位于头部背面的一条常呈倒“Y”形的线。 12、frontoclypeal sulcus 额唇基沟：位于口器上方，为额与唇基的分界线，常为一条较深 的横沟，有时呈“?”形或中断甚至消失。 13、frons(front) 额：蜕裂线侧臂之下、额唇基沟之上、额颊沟之间的区域。 14、clypeus 唇基：额与上唇之间的区域。 15、occiput 后头：后颊以上的部分。 16、tentorium 幕骨：昆虫头部的内骨骼。 17、antenna 触角：着生于额区的一对分节附肢，其基部包被与膜制的触角窝内。由柄节、梗 节、鞭节三节构成。 18、scape 柄节：最基部的一节，常粗短。 19、pedicel 梗节：触角的第二节，较小。 20、flagellum 鞭节：触角的端节，常分若干亚节，此节在不同的昆虫中变化很大。
1.操作台基本要求： 2.随着传代次数的增加，连续培养细胞系遗传物质不稳定，不得将细胞存放于-20℃或-80℃冰柜中，因为细胞存在次低温条件下活力迅速降低。 3.细胞污染： （1）细菌污染
（2）酵母污染 （3）霉菌污染 初期PH值维持稳定，污染严重后PH值迅速升高，导致培养基浑浊。 （4）病毒污染 一般不会对与其宿主物种不同的细胞培养物造成不良影响，通过电子显微镜检查、一组抗体的免疫染色，ELISA实验或者采用适当病毒引物的PCR技术可以检测出细胞为病毒污染。 （5）支原体污染 唯一检测支原体污染的方法是采用荧光染色、ELISE、PCR、免疫染色、放射自显影 4.抗生素只能作为对付污染的最后手段而且只能短期使用，并应尽快撤出 5．适合贴壁的细胞和悬浮的细胞
6.基础培养基，减血清培养基，无血清培养基 7.PH值：大多数正常哺乳动物细胞系PH为7.4； 成纤维细胞系适合轻度偏碱（pH7.4-7.7） Sf9和sf21等昆虫细胞系最适合在PH值为6.2的环境中生长8.温度：大多数人和哺乳动物细胞系在36℃至37℃最佳 昆虫细胞在27℃为最佳 禽类细胞在38.5℃最佳 冷血动物（15℃-26℃） 9.动物细胞形态划分： ●成纤维细胞，贴附生长 ●上皮样细胞呈多角形，贴附 ●淋巴母细胞样细胞呈球形，不贴附 ●特殊形态： ?I型有长突触 ?Ⅱ型没有轴突 10.细胞增长模式
11.何时传代？ ●哺乳动物：生长的PH值通常表示乳酸储积，且有毒性，当PH迅速降低（） 0.1-0.2PH单位），同时细胞浓度增大，则应对细胞进行传代。 ●昆虫细胞PH值会上升但不超过6.4 12．贴壁细胞的解离
昆虫研究技术 1. 采集：利用一些工具，将分散各处的昆虫搜集到一起。 诱集：主要在于“引诱”。利用种种手段，将远处的昆虫诱集到一起。 2. 常见的昆虫的采集工具有哪些？ 捕虫网（空网，扫网，水网，马勒氏网），吸虫管，毒瓶，活虫采集盒，采集袋，纸袋， 贝氏漏斗集虫器，放大镜、虫筛、铲子、锯、镊子、毛笔、记录本、刮网、接虫伞等也是常用的。 3. 诱集的方法有哪些？ 灯光诱集，颜色诱集，气味诱集（糖醋诱集，食物诱集，性诱集）4. 昆虫的采集方法归纳哪几个字（8个字）？并解释。 1．找寄主，被害状（破叶、缀叶、断枝、蛀死、虫瘿）、分泌物（虫粪、密露等）及共生现象来搜索采集。 2．听用于具有鸣声、飞行声的大个体。 3．嗅本身具气味的昆虫（橘凤蝶）。 4．扫适用于草丛中或叶面及小枝上昆虫。 5．诱非常有效（灯、食物陷阱井）。 6．吸适用小型、量少的昆虫（飞虱）。 7．震受惊有伪死习性的昆虫（甲虫）。 8. 养饲养。 5.采集昆虫标本时应注意哪些事项？（思考） 1.要求完整及一定数量。 2.应尽量连同寄主一并采集。 3.作好采集时间、地点、海拔、 寄主、习性、为害、小生境等记录。 4.对幼体不能鉴定时，应尽量养至成虫。 5.采集计划应细心设计，到适宜的季节、地点、环境中进行采集。 6.要爱护生物，除去所需要的，不要滥杀乱采，尤其是对分布区狭
窄、数量极少的物种，不要一网打尽。特别是我国的特有种，更应加以保护。 第二章昆虫的饲养方法 1.要获得饲养的成功，取决于哪几个方面？ 虫源、饲料和环境条件3个方面。 2. 饲养的基本类型通常有几种（4种）？ 室外饲养，实验室饲养，大规模饲养，单种饲养 3. 解决饲料途径（有哪几个方面）？ 天然饲料，人工饲料，人工与天然饲料相配合 4. 大规模饲养的用途有哪些？ 昆虫病增殖毒用于生防。 作为家养动物饲料黄粉虫。 繁殖天敌用于田间释放，防治重要农林害虫。 生产不育性昆虫用低剂量射线照射昆虫，使体细胞可忍受，而生殖细胞受损，引起不育。产生不育雄虫与自然界雌虫交配后却无繁殖后代能力-我国不育性松毛虫。 5. 大规模饲养应具备哪些条件？ ①生活周期短；②生物潜能高；③食物需求简单；④特殊用途（虫草等）。 6. 天然饲料、人工饲料的优（特）点有哪些？ 天然食物（寄主）是最原始、简便、有效的饲料。 其特点： 昆虫易接受，饲养昆虫活力高； 受季节、气候和土地等因素的限制； 适合阶段性或季节性饲养-蚜、小菜蛾、二化螟等可室内育苗饲养。 人工饲料优点： A.不受气候、寄主等因子限制，能常年饲养； B.不受寄主、捕食和污染等因子干扰；
昆虫细胞表达系统 昆虫细胞表达系统是四大表达系统（昆虫细胞、细菌、酵母、哺乳动物细胞表达系统）之一。昆虫细胞表达系统原理是通过转座作用将转移载体中的表达组件定点转座到能在大肠杆菌中增殖的杆状病毒穿梭载体（Bacmid）上，通过抗性和蓝白斑筛选到重组穿梭质粒，提取穿梭质粒DNA转染昆虫细胞后，得到的子代病毒即为重组病毒。将病毒上清浸染昆虫细胞，获得表达的重组蛋白。 杆状病毒是一类闭合环状双链病毒，病毒粒子呈杆状，以昆虫为主要宿主。杆状病毒还是一种出芽型分泌性病毒粒子，在感染细胞后能迅速在培养细胞中水平传播而保持细胞在相当长的时间内不裂解，从而最大限度地保持了外源蛋白的稳定，昆虫细胞表达系统又被称为昆虫杆状病毒系统。昆虫细胞表达系统本身是一个蛋白裂解性系统，在杆状病毒感染昆虫细胞的过程中，杆状病毒可以编码一些蛋白酶如木瓜蛋白酶等导致蛋白的降解。因此，收集细胞后，在裂解细胞之前要加入蛋白酶抑制剂防止蛋白的降解。 昆虫细胞表达系统属于真核细胞表达系统，但又不同于酵母及哺乳动物细胞表达系统，酵母表达的蛋白易纯化但也易降解，而哺乳动物细胞表达系统表达的蛋白具有生物活性但成本高。细菌表达系统属于原核表达系统，操作简单、周期短收益大、表达产物稳定，但是表达基因的相对分子量有限，且不能对表达产物进行翻译后加工修饰。而昆虫细胞表达系统具有很多优点： (1)具有糖基化作用、乙酰化作用、磷酸化作用等一系列蛋白质翻译加工修饰系统； (2)正确的蛋白折叠、二硫键形成，使重组蛋白在结构和功能上更接近天然蛋白，有利于表达产物形成天然的高级结构； (3)具有对重组蛋白进行定位的功能，如将核蛋白转送到细胞核上，膜蛋白则定位在膜上，分泌蛋白则可分泌到细胞外等；
昆虫天然免疫的研究进展 摘要：昆虫是目前地球陆地上最繁盛的物种类群，是人类取之不尽的资源宝库。近年来，昆虫的免疫在其基础和应用研究方面受到极大关注，通过实验来研究与昆虫免疫相关的机制、信号等问题，对害虫防治、益虫防病、开发利用抗菌物、研究人类免疫机制等有着非常重要的现实意义。 关键词: 昆虫；天然免疫；体液免疫；细胞免疫 Abstract：At present, insect is the most blooming species on the earth. And it is also a treasure-house of kinds of resources for humanity. For the past few years, the fundamental researches and application researches of insect immunity have been paid close attention to. Many scientific researchers study the mechanism and signal that related to insect’s immunity by doing experiments. It is of significance for pest control, preventing disease of beneficial insect, developing and using antibacterial material, studying humanity immunity and so on. Key words: Insect；Innate immunity；Humeral immunity；Cellular immunity 昆虫作为生物界分布最广、数量众多的一类群体, 在长期的进化过程中具备了高度的适应能力和独特的免疫体系。虽然昆虫没有像人一样的获得性免疫反应能力，但是昆虫拥有高效的先天性免疫反应系统。昆虫的先天性免疫系统包括体液免疫和细胞免疫两部分, 它们协同作用吞噬和清除血淋巴中的外源入侵物。[冯从经，陆剑锋，黄建华，等，2009]本文主要基于目前对昆虫天然免疫的研究进展做一简介。 1．体液免疫 1.1抗菌肽 抗菌肽（AMPs），具有广谱抗菌活性和高效杀菌性，一直以来都承载着人类的一个梦想——取代抗生素。人类已经发现多种抗菌肽，测定出其结构，并获得抗菌肽基因，如Mdatta2基因[柳峰松，孙玲玲，唐婷，等，2011]、MdDpt基因[柳峰松，王丽娜，唐婷，等，2009]。根据氨基酸组成和结构特征, 一般可以把昆虫抗细菌肽分为 4类：即形成两性分子α-螺旋的抗细菌肽类、有分子内二硫桥的抗细菌肽类、富含脯氨酸的抗细菌肽类及富含甘氨酸的抗细菌多肽类。[柳峰松，王丽娜，唐婷，李伟，2009]昆虫抗菌肽中除绝大多数对细菌具有广谱高效的抑杀作用外, 近 10 年来也陆续发现了10多种抗真菌肽。昆虫抗真菌肽可分成两类: 昆虫组成性抗真菌肽、经免疫诱导在血淋巴中产生的抗真菌肽, 即昆虫免疫诱导型抗真菌肽[谢咸升，董建臻，李静，等，2011]。 AMPs 的产生主要由以下两个不同信号转导途径的活化而产生的: Toll途径和Imd途径，这两种途径通过激活不同的转录因子来调控不同AMPs 的基因表达。[王英，黄复生，2008]昆虫抗菌肽既具有种的差异性,又具有一定的同源性,抗菌物质在昆虫中普遍存在,可能是昆虫—植物—病原菌长期协同进化在免疫学上的体现,可以作为抗性资源利用[谢咸升，李静，董建臻，等，2009]。但是目前对抗菌肽作用机制仍需进一步研究，面对病原菌抗药性的升级, 抗菌肽及其基
实用哺乳动物细胞培养手册 细胞培养基本概念 细胞培养是指从体内组织取出细胞在体外模拟体内环境下，使其生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。细胞培养的培养物可以是单个细胞，也可以是细胞群。 细胞培养目的与用途 1、科学研究：药物研究开发与基础研究 药物研究与开发 (1) 新药筛选：如化学合成药物药效研究、中药有效成分筛选与鉴定等。 (2) 疫苗研究与开发：如病毒性疫苗的研究与开发（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。 (3) 基因工程药物研究与开发：如干扰素研究与开发，细胞生长因子研究与开发等。 (4) 细胞工程药物研究与开发：生物活性多肽研究与开发，人参皂甙、紫杉醇等生物活性成分研究与开发。 (5) 单克隆抗体制备：包括诊断用单克隆抗体，治疗用单克隆抗体。 基础研究 (1) 药物作用机理 (2) 基因功能 (3) 疾病发生机理 2、生物制药 (1) 疫苗生产：如病毒性疫苗（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。 (2) 基因工程药物生产：如在临床医学中具有治疗价值的一些细胞生长因子如干扰素、粒细胞生长因子、胸腺肽等 (3) 诊断用和药用单克隆抗体生产 (4) 细胞工程药物生产：生物细胞内的一些生物活性多肽，生物活性物质等 细胞培养基本条件 1、合适的细胞培养基 合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。 2、优质血清 目前，大多数合成培养基都需要添加血清。血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。 2 3、无菌无毒细胞培养环境 无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。 4、恒定的细胞生长温度
实验二传代细胞培养与病毒在传代细胞中的培养 一、实验目的 了解倒置显微镜的构造与使用，了解不同传代细胞的形态及接毒后的病变特征，掌握细胞的传代培养方法、病毒接种方法及收毒方法。 二、常用细胞的种类 BHK-21：仓鼠肾传代细胞 PK-15：猪肾传代细胞 IBRS-2：猪肾传代细胞 Hela：人的子宫瘤细胞 Vero：非洲绿猴肾细胞 Marc-145：来源于Vero细胞 TK-143：人的胸苷激酶阴性细胞 Sf9：昆虫细胞 三、材料 1、100ml细胞瓶、吸管、吸球、96孔细胞培养板、加样器、枪头 2、BHK-21（baby hamster kidney）细胞 3、0.25%胰酶 4、生长液：含10%犊牛血清、200U/ml青、链霉素的DMEM 维持液：含2-5%犊牛血清、200U/ml青、链霉素的DMEM
5、伪狂犬病病毒液（PRV） 四、传代细胞培养的条件要求 1）细胞密度：2-3×105个/ml 2）pH范围最适pH7.0-7.4，耐受pH6.6-7.8 3）培养温度 哺乳动物细胞一般为37℃ 昆虫细胞28-30℃ 五、常用细胞分散剂与作用原理 1、胰酶使精氨酸或赖氨酸的羧基和其他氨基酸的氨基之间的多肽链发生水解， 导致细胞间质水解而使细胞或组织块消化为分散的单个细胞。 2、乙二胺四乙酸二钠（EDTA）：与二价钙、镁离子结合，从而使细胞分散。 3、灰色链丝菌酶：由灰色链丝菌提取的一种酶制剂，是蛋白酶、氨肽酶和羧肽 酶的混合物。 六、营养液 1、人工综合营养液 氨基酸、糖类、无机盐类、维生素、辅酶、嘌呤、嘧啶、辅助生长因子。 2、血清 1）血清的种类 胎牛血清、新生犊牛血清、成年牛血清、马血清、鸡血清、兔血清、羊血清、人血清，其中以新生犊牛血清使用最为广泛。 2）血清的处理
昆虫的多样性研究及其利用现状 作者：姜永泽专业：森林培育班级:2015级学号：指导教师：郝建锋 摘要：昆虫多样性的保护和昆虫是自然界中种类最多的动物，在生态系统中具有重要的作用，但是昆虫在生物多样性保护中没有受到应有的重视。本文综述了保护昆虫多样性的重要性，昆虫多样性的研究现状，昆虫多样性的保护和利用对策。 关键词：昆虫多样性；保护和利用 The Research and utilization of insect diversity Abstract：Insects have more species than any other class of animal and play an important role in ecosystems but are oftenoverlooked in biodiversityconservation. This paper discussed the importance of conservation of insect diversity,the Presentsituation and the existing problems of inset diversity,andthestrategiesfor conservation of inset diversity. Key words：insect diversity; conservation and utilization. 昆虫是自然界中种类最多的动物，在全世界约140万种已定名的生物中，昆虫约为75万，占54%，而据估计昆虫总的种数，100万到300万。昆虫虽然个体很小，但是种类繁多。它们不仅可以作为农作物的传粉者和有害生物的天敌，而且可以作为人类的重要资源加以利用，它们在维持生态平衡、生物防治、农业生产、医药保健和作为轻工原料等方面起着重要的作用[1]。然而人口的迅猛增长和人类活动的加剧，导致自然环境日益恶化，生态系统遭到破坏，从而使得生物多样性受到严重的威胁。目前，昆虫资源的开发利用及其产业化已成为相关学科研究的热点之一。 1 昆虫的多样性的研究背景 随着世界经济的高速发展，人类已面临各种资源危机。其中蛋白质资源短缺已是当今世界，特别是发展中国家普遍存在的问题。我国是一个人口大国，蛋白质资源短缺状况尤其严重。目前我国人均膳食中动物性蛋白质的摄取量与世界水平相去甚远，仅相当于经济发达国家的1/5～1/8。 2 昆虫的利用方式 人类从丰富的昆虫资源中直接或间接的获得资源，从而转换为益于人类的价值。其虫体本身开发产物可广泛应用于机械、电子、军工、日用化工、食品、饲料、医药、造纸、农业等行业[2-5]。从原始社会至今，人们利用昆虫资源的方式也趋于多元化，同时也趋于复杂化。主要涉及食品、药品、工业、生物防治、仿生科技等领域。 2.1 昆虫与传粉
昆虫的一般形态特征教案 一、说教材 教材：高等教育出版社出版的《植物保护技术》第二版 “实验实训1.昆虫的一般形态特征”。 （一）地位和作用： 1、通过实验观察进一步认识昆虫体躯的组成及附器。 2、复习和巩固昆虫口器、触角、足、翅的构造及类型。 3、为鉴别昆虫打下坚实的基础。 （二）教学目标分析 1、知识目标 （1）认识昆虫体躯外部形态结构和特征。 （2）理解昆虫口器、触角、足、翅的各部分构造和作用。 （3）掌握昆虫的口器、触角、足、翅的基本类型。 2、能力目标 （1）学会观察昆虫的外部形态。 （2）培养学生合作学习的能力。 3、德育目标 发展学生的科学探究能力，培养学生对自然和社会的责任感。 （三）教学重难点 1、认识昆虫体躯外部形态结构和特征。 2、掌握昆虫口器、触角、足、翅的结构及类型，特别是触角类型繁多，学生不容 易掌握，则是教学难点。 二、说教法： 1、借助多媒体弥补实验过程中不容易观察到部分结构，如把昆虫的体躯放大,蜜蜂的 触角放大，蝴蝶的翅放大、蝗虫的后足放大、蝗虫的口器放大，通过感官和视觉， 把抽象变为具体，把难以理解的内容用多媒体展现出来，调动学生的直观功能，对 突破难点创造了良好的氛围，真正达到了对触角、口器、足、翅的结构的理解。 2、利用多媒体的趣味性，吸引学生的注意力。 1）、触角的类型部分，通过学生观察后回答，答对一个给一个动画笑脸，答错一 个给一个动画哭脸，体现多媒体的趣味性特点，这集中了学生的注意力，激发了学 生的学生兴趣和好奇心。培养了学生的创造性思维。 2）、对于昆虫的足、翅的类型，学生观察后，答对一个就把该类型的图片展现 出来，把无声的教学内容，变得有声有色，有静有动，带学生进入教学的情景 之中，使学生对学习内容产生极大的情趣，自然的步入积极的思维状态中。三、说学法 （１）课前准备 组织学生外出捕捉昆虫，要求学生在家附近搜集昆虫，由于学生个人的兴趣、经验、所处环境不同，学生搜集到的昆虫种类、数量不同，这就为学生提供了一 个广阔的空间，形成了开放性的学习过程。同时，这一阶段的学习具有很强的灵 活性，为本节课教学作好了充分的准备。 （２）教学实验 利用搜集到的昆虫材料，认识、辨别、分析昆虫各部分结构及分类，这就让
一、细菌污染 状态：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。 预防和补救： 1.仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间和压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要检查培养液是否存在浑浊现象！ 2.可在培养液或血清中加支原体预防剂。 3.若细胞一旦污染，建议加支原体清除剂，能清楚常见的革兰氏阴性和阳性菌。 二、霉菌及真菌污染 状态：肉眼观察培养基发现培养基颜色基本无变化，不浑浊，但是培养基中由絮状漂浮物，显微镜下观察，若感染真菌可看到分叉细丝状的结构（不同种类结构不同），若感染霉菌显微镜下可看到片状的结构，不透明，真菌及霉菌对影响细胞的生长影响不大。 预防和补救： 1.保证细胞房的干净整洁，干燥的环境(潮湿的环境利于霉菌及真菌的生长)。 2.控制外来人员进出实验室。 3.对实验室及培养箱进行彻底消毒。 4.若细胞非常珍贵，且不易获得，可以对污染的细胞采取如下操作。 悬浮细胞：收集细胞并离心，用PBS漂洗，重复此操作数次。贴壁细胞：用PBS轻轻冲洗细胞，丢弃，重复此操作数次。 三、支原体感染 状态：镜下黑色，多为多形，培养液一般会浑浊，国内血清很多没做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。 预防和补救： 预防：实验室新购买的血清及培养基需检测是否含有支原体，引进的新品种细胞需做支原体检测，向培养基中添加预防支原体的抗生素。 补救：向培养基中添加抗生素，（如氧氟沙星10 μg/ml、环丙沙星10 μg/ml、卡那霉素20~50 μg/ml、四环素10~50 μg/ml、庆大霉素200μg/ml等抗生素），或者向培养基中添加支原体清除剂清除支原体数天。 四、黑蛟虫 状态：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍镜下可看见黑色的小虫游来游去，培养液不浑浊，一般不会太影响，细胞还可以用。常常可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。 预防和补救：一般黑胶虫不会影响细胞的生长状态，可以尝试改变培养基的品牌。血清冻融采取逐级冻融的方法。 五、原虫感染 状态：培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可用生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。他们与细胞可共生，但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的，
实验一传代细胞培养与病毒在传代细胞中的培养 一、实验目的 了解倒置显微镜的构造与使用，了解不同传代细胞的形态及接毒后的病变特征，掌握细胞的传代培养方法、病毒接种方法及收毒方法。 二、常用细胞的种类 BHK-21：仓鼠肾传代细胞、PK-15：猪肾传代细胞、IBRS-2：猪肾传代细胞、Hela：人的子宫瘤细胞、Vero：非洲绿猴肾细胞、Marc-145：来源于Vero细胞、Sf9：昆虫细胞。 三、材料 1、100ml细胞瓶、吸管、吸球、96孔细胞培养板、加样器、枪头 2、BHK-21（baby hamster kidney）细胞 3、0.25%胰酶 4、生长液：含10%犊牛血清、200U/ml青、链霉素的DMEM 维持液：含2-5%犊牛血清、200U/ml青、链霉素的DMEM 四、传代细胞培养的条件要求 1）细胞密度：2-3×105个/ml 2）pH范围最适pH7.0-7.4，耐受pH6.6-7.8 3）培养温度 哺乳动物细胞一般为37℃ 昆虫细胞28-30℃ 五、常用细胞分散剂与作用原理 1、胰酶使精氨酸或赖氨酸的羧基和其他氨基酸的氨基之间的多肽链发生水解， 导致细胞间质水解而使细胞或组织块消化为分散的单个细胞。 2、乙二胺四乙酸二钠（EDTA）：与二价钙、镁离子结合，从而使细胞分散。 3、灰色链丝菌酶：由灰色链丝菌提取的一种酶制剂，是蛋白酶、氨肽酶和羧肽 酶的混合物。 六、营养液 1、人工综合营养液 氨基酸、糖类、无机盐类、维生素、辅酶、嘌呤、嘧啶、辅助生长因子。
2、血清 1）血清的种类 胎牛血清、新生犊牛血清、成年牛血清、马血清、鸡血清、兔血清、羊血清、人血清，其中以新生犊牛血清使用最为广泛。 2）血清的处理 无菌采集，过滤除菌。用前56℃灭活30min。 七、传代细胞系培养 1、优点：1) 可以无限的传代。 2) 不少细胞系对病毒很敏感。 3) 某些传代细胞系能在悬浮培养条件下培养，适合病毒抗原的大量生产。 4) 生长旺盛，繁殖快速，对营养条件不苛刻。 2、缺点：在传代过程中遭到支原体和病毒的污染。 细胞培养 步骤： ①取长满单层的细胞一瓶，掉到培养液。 ②加入2ml胰酶消化液，置于37℃培养几分钟（也可以轻轻吹打几下），直到细胞间出现空隙或细胞变圆后倒掉消化液。（目的就是让细胞脱离贴壁状态，但不掉下来） ③加入生长液，吹打几次，使细胞分散成单个细胞（两三个聚集一起这种程度就好），然后分装于3个小瓶中，在每个瓶中补充生长液至10ml。 注意：胰酶消化不能太长（此时细胞大量脱离，会造成细胞损失，后面加生长液吹打时也不容易分散成单个细胞，容易成块，培养后长得不光滑） 细胞冻存 冻存液：现在一般用二甲亚砜，也可以用甘油。 步骤： 1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液； 2. 取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。
教案模板（试行） 教研组长审阅 年月日 日期：课程：茶树病虫害防治 班级：茶叶1601 章节：昆虫的外部形态（一般构造及头部） 【教学目标】： 知识目标： 1.了解昆虫的体向、体躯的一般构造。 2.了解昆虫的头部的主要器官。 能力目标： 1.掌握昆虫的体向、体躯的一般构造。 2.掌握昆虫的头部的主要器官的作用。 情感目标： 培养同学们对昆虫的体向、体躯的一般构造及头部的兴趣，提高学习积极性。 【教学重点】 1.昆虫的体躯的一般构造。 2.昆虫的头部的主要器官的作用。 【教学难点】 昆虫的头部的主要器官的作用。 【课时安排】 组织教学1min 回顾上一节课内容4min 本节课的新内容80min 重点内容的总结3min 考勤、组织教学2min
【教学过程】 1、中国分为哪些大的茶区？主要的产茶省份有哪些？ 答：华南茶区：位于欧亚大陆东南缘，是我国最南部茶区，包括广东、广西、台湾、闽南等茶区。 西南茶区：位于我国西南部，包括贵州，四川，重庆，云南中北部和西藏东南部。 江南茶区：位于长江以南，包括粤北、桂北、闽中北、浙、赣、湘、苏南、皖南、鄂南等地。 江北茶区：包括甘南、陕南、鄂北、豫南、皖北、苏北、鲁东南等地，是我国最北的茶区。 2、中国茶树病虫害种类 答：我国茶区地域辽阔，气候适宜，环境多样，因而病虫区系复杂，种类繁多。已知的茶树害虫达400多种，造成经济损失的害虫有50一60种。这些害虫主要是昆虫，少数是螨类。已知的茶树病害有100多种，其中常见的有30余种。茶树病害主要是由一些真菌侵染所致，还有藻类、线虫和寄生性种子植物等。 导入新课： 昆虫体躯的一般构造 一、体躯和体段 昆虫的身体由一系列连续的环节组成，每一个环节称为一个体节，昆虫的体节分别集合成头、胸、腹三个体段。 有些体节的侧面着生有成对分节的附肢，根据胚胎学和比较解剖学的研究表明，昆虫体躯共有18~20个体节。 1、体躯的分节与分段 3段20节，6、3、11 切；头部愈合无节痕，胸部各节紧相接；腹部节数常11，少增多减附多缺。
CHO细胞无血清培养基技术手册2009 北京清大天一生物技术有限公司 BEIJING TSINGHUA SKYWING BIO TECH Co.,LTD. 2009年9月
1 CHO细胞 CHO细胞是中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary，CHO)，1957年美国科罗拉多大学Dr. Theodore T. Puck从一成年雌性仓鼠卵巢分离获得，为上皮贴壁型细胞，是目前生物工程上广泛使用的细胞系。工业生产上应用较多的是CHO-K1细胞，为转化细胞系，细胞染色体分布频率是2n＝22，系亚二倍体细胞。ATCC 保存CHO-K1细胞株，编号为CCL-61，被广泛地用于重组DNA蛋白的表达。由于该细胞存在遗传缺陷，无脯氨酸合成基因，不能将谷氨酸转变为谷氨酸-γ-半醛，培养过程中需在培养基中添加L-脯氨酸才能生长。并且由于该细胞已经霍乱毒素适应，形态学有所改变。最初细胞为贴壁型细胞，经多次传代筛选后，也可悬浮生长。 ATCC提供的CHO-K1细胞照片 CHO细胞容易发生基因突变，也较易进行基因转染，是良好的哺乳动物基因表达宿主细胞，代表性细胞有二氢叶酸还原酶（dihydrofolate reductase）营养缺陷型突变细胞株（CHO/dhfr-）、转染谷氨酰胺合成酶（Glutamine synthetase,GS）基因的GS-CHO细胞。 二氢叶酸还原酶是真核细胞核苷酸生物合成过程中起着重要作用的一种酶，是常用的遗传选择标记之一，它可催化二氢叶酸还原成四氢叶酸。对于dhfr突变体细胞而言，由于不能够合成四氢叶酸，阻断了正常核酸代谢途径，因此不能在常规培养基上生长，但若在培养基中加入次黄嘌呤（hypoxanthine）和胸苷（thymidine），则突变体细胞可以借助核苷酸的补救合成途径维持生长。利用
https://www.doczj.com/doc/867915987.html, sf9昆虫细胞 货号基因名称规格货期 huayueyang-531sf9昆虫细胞1ml 现货 细胞描述： Sf9昆虫细胞，可以用来包装扩增杆状病毒并表达蛋白。Sf9昆虫细胞增殖能力取决于培养技术、培养条件等综合因素。请按照正确的培养方法来复苏、传代，以此保证细胞具备良好的增殖能力，方便您的后继研究顺利进行。 质量控制： 本细胞经过严格的质量检测，不含有细菌、真菌、病毒（HIV、HBV、HCV）和支原体等。 培养条件： 27℃，PH值7.2~7.4，120–140rpm，无菌恒温培养。 用途： 本产品仅供科研使用，不可用于治疗等其他用途。 细胞相关操作： sf9细胞复苏 1.37°C水浴预热培养基； 2.从液氮中取出细胞放入37°C水浴快速解冻（解冻后不要继续暖细胞）； 3.在超净台中加入5ml的培养基重悬细胞，1000rpm离心5min； 4.4.弃上清，加入5ml培养基重悬细胞，用血小球计数板进行细胞计数，按细胞密度3-5×105/ml接种到25ml无菌摇瓶中（带空气过滤通气孔的摇瓶）； 5.摇瓶置于27°C培养箱中的摇瓶架上，120–140rpm培养。 sf9细胞传代 1.取细胞计数(详见sf9细胞冻存)，当细胞密度达到1–3×106/ml时，可传代； 2.37°C水浴预热培养基； 3.在超净台中，加适量预热好的培养基到无菌摇瓶中，以细胞终密度为3-5×105/ml接种细胞（也可1000rpm，5min离心后弃上清，用预热好的培养基重悬并调整细胞密度为3-5×105/ml）； 4.摇瓶置于27°C培养箱中的摇瓶架上，120–140rpm培养。 注：昆虫细胞对氧的要求较高，因此，悬浮培养必须具有高表面积体积比，否则细胞的生长会受到抑制。培养基的体积不能超过摇瓶的五分之二；即100毫升的摇瓶不能超过40ml培养基，250ml摇瓶不能超过100ml培养基。
2018年增刊Yunnan Nongye Keji3 传粉昆虫的研究进展 杨大荣 (中国科学院西双版纳热带植物园昆明分部，云南昆明650223) 摘要:传粉昆虫是地球上生态系统最为重要的组成部分，它们的群落结构、种类组成、传粉对象多寡、种群数 量变化直接或间接地反映着生态环境状况及其发展趋势；同时，传粉昆虫为粮食增产和优质粮生产、农副产品 的持续发展、生物资源的正常繁衍与保护、生态环境监测与预警、生态环境的良性发展提供了重要的生态服务 功能，对维持生态系统的动态平衡、相对稳定和绿色生态环境建设发挥了重要作K% 关键词：传粉昆虫；显花植物；多样性;进展;展望 从生态系统和生物的群落水平角度来衡量，植物一传粉者的关系可能是植物一动物相互关系中最重要一对关系。据统计，全球由动物访花的被子植物有308 006种，占到整个显花植物数量的87.5A，植物的自花授粉和靠风雨传粉仅占5A和10A ;在热带雨林中，38A的开花植物由蜜蜂属传粉，41A是由其他昆虫传粉，仅有2 A?3 A 是由风和自花传粉[1]。在不增加人工和投资的情况下，仅 用昆虫传粉就可使作物增产10A?30A-2]。没有传粉者，很多植物不能产生种子和繁衍后代，没有植物提供花粉、花蜜和其他回报，很多动物种群可能下降甚至灭绝，连 带着食物链更高级动物及人类导致灭绝[1，3]。研究显示全球正在经历着第6次多样性持续下降以及大量物种灭绝，平均每10年大概有1A?10A的多样性消失[4]。Bi ees-meijer等发现，23种蜜蜂，18种蝴蝶在200年内已经从英国消失，而且欧洲一些野生蜜蜂和食蚜蝇近年来也大量减少[5];P〇tts等从森林生态环境减少及破碎化加重、农药使用量增加、外来物种增多、全球气候变化严重及其相互影响的角度，系统分析了全球传粉昆虫减少的趋势对全球生态系统及农林经济等影响[6]。许多生态学者对导致传粉昆虫和生物多样性消失的主要原因认为是栖息地的破坏和气候改变[7~8]。可见，近些年由于传粉昆虫减少，资源 匮乏、粮食短缺等世界性问题的日趋严重，传粉生态学和传粉昆虫学的研究受到前所未有的关注与重视。 1传粉昆虫的主要类群 传粉昆虫的种类繁多，主要分属于膜翅目、双翅目、鞘翅 目、鳞翅目、直翅目和缨翅目等10多个目中。其中膜翅目占 全部传粉昆虫的43. 7A，双翅目占28. 4A，鞘翅目占14. 1A，鳞翅目占12. 3A，而半翅目、缨翅目、直翅目、毛翅 目、同翅目等仅占1.5%[9]。 膜翅目（Hymenoptera)是昆虫纲中第三大类群，包括蜂、 收稿日期:2018 -02 -08 作者简介!杨大荣（1954 -)男，研究员，主要从事昆虫生态学、昆虫 资源保护、虫生真菌研究工作，E -mail:yangdr@https://www.doczj.com/doc/867915987.html,。蚁类昆虫。全世界已知约12万种，中国已知2 300余种。除了广腰亚目少部分和细腰亚目的部分寄生蜂外，绝大部分 蜂类和蚁类都有传粉作用。它们中，蜜蜂总科（Apoidea)和 榕小蜂科(Agaontidae)是最为特化的2个类群，其中蜜蜂有较长的口器和特化的采粉结构（花粉篮和花粉刷）；而榕小 蜂最为特化，唯一给榕树类群传粉，大部分种类也像蜜蜂一样具有花粉框和花粉刷。而其它类群的蜂和蚂蚁没有蜜蜂和榕小蜂的特殊结构[10]。 鞘翅目（Coleoptera)为昆虫纲中第一大类群，全世界记载35万种之多，中国记述1万多种，其中传粉昆虫类群主要 是花金龟科（Cetoniidae)、天牛科（Cerambycidae)、花黃总科(Cantharoidea )、金龟科（Scarabaeidae )、隐翅甲总科(Staphylinoidea)、叶甲总科（Chrysomeloidea)等为主[10]。 双翅目（Diptera)昆虫，世界已知85000种，全球分布；中国已知4000余种。传粉昆虫主要有食蚜蝇总科（Syr-phoidea)、丽蝇科（Calliphoridae)、麻蝇科（Sarcophagidae)、J 科（Tabanidae)、小花蝇科（Anthomyzidae)、K蝇科（Phoridae)和大蚊总科（Tipuloidea)等类群为主[10]。 鳞翅目（Lepidoptera)是昆虫纲中第二大类群，全世界已 知约20万种，中国已知约8 000余种。传粉类群主要是锤角亚目（蝶类）的全部种类的成虫；蛾类中日出性（白天活 动）的蛾类全部种类成虫、小蛾类部分类群和夜晚吸食花蜜，需要用花蜜补充营养的全部蛾类[10]。 2传粉昆虫在生态系统功能中的重要作用2.1传粉昆虫保障了粮食增产和优质粮生产 粮食是人类安全生存的最重要基础，传粉昆虫为人类提 供持续的粮食供应，它为人类直接食用的75A的粮食作物 传粉[4]，大部分野生植物（80A )为了生产果实和种子繁衍后代，都直接依赖于昆虫传粉[1，4]。2005年世界粮食总产值为161. 8万亿欧元，其中46种昆虫传粉的农作物产值为6 255亿欧元，占世界粮食总产值的39A。传粉者传粉服务的经济价值为1530亿欧元，占粮食作物总产值的9.5A[11]。 因此，传粉昆虫对于全球粮食安全起到重要作用，面对