酵母培养物在饲料中的应用
作者：汤少伟， 付石军， 郭时金
作者单位：山东省滨州畜牧兽医研究院
刊名：
中国饲料
英文刊名：China Feed
年，卷(期)：2011(8)
本文链接：https://www.doczj.com/doc/4414262747.html,/Periodical_zgsl201108008.aspx
多菌种混合发酵酿酒酵母培养物的优势 .、八、一 前言 酿酒酵母培养物是天然的发酵饲料，它具有一定抗菌和抗病毒的作用，发酵饲料的使用可以有效减少动物养殖过程中抗生素的使用，以及抗生素带来的一系列不好影响，从而补足普通饲料的缺陷；固态发酵的产品去除大量水分变成干物质，能最大程度保留有效成分，还保证产品储存质量和延长存贮期限。 自然界中酵母多种多样，每种都有不同的特性，发酵后产生不同的代谢产物和生理功能。单一菌种发酵只选取 1 种菌种对物料进行发酵，增加物料的营养成分。单一菌种发酵工艺在生产培养过程中，可以避免发生不同菌种之间的相互抑制，代谢产物相互影响的情况，但其代谢产物单一，营养成分不够丰富，远满足不了现在行业对发酵饲料的需求。 多菌种混合发酵（肖冬光等2005）前期需要进行大量的实验，验证各个菌种之间的协调性，避免代谢产物之间相互产生不利的影响。通过不断大量地筛选最终确定几种生长繁殖既不会互相抑制，代谢产物又可以优势互补，使发酵终产物发酵完全可以达到营养丰富全面、具有诸多保健作用的发酵培养物。这有助于动物更健康地生长，从而达到提高饲料利用率和改善动物生产力水平的目的。 1 试验材料与方法
1.1 试验材料试验所用多菌种混合酿酒酵母培养物由河南邑鸿善成生物科技XX公司提供，产品“善壮”是由一号、二号、三号3种不 同酵母进行固体发酵而成的天然发酵饲料。试验I组是一号菌种 发酵产品、试验H组是二号菌种发酵产品、试验山组是三号菌种的发酵。单一菌种发酵的酿酒酵母培养物与善壮所用原料以及工艺严格一致。3种菌种均由河南邑鸿善成生物科技XX公司提供。对照组为X牌子普通饲料。 善壮的主要营养成分含量为：粗蛋白25.6%、小肽0.59%、总氨、甘露聚糖 1.78%、基酸23.97%、总酸81.64g/kg ，蛋白酶活力为27000U/kg 1.2 试验动物与试验设计 本实验选用1142头健康的日龄84d的仔猪由浙江嘉兴X养殖场提供，仔猪随机分为 5 组，各组初始体重差异不显著（P>0.05 ）。对照饲喂基础日粮，善壮组在普通饲料中添加0.5% 的善壮进行饲喂，试验I、H、山组分别在普通饲料中添加0.5% 对应的一号、二号、三号菌种发酵的酿酒酵母培养物。每组均分为 3 个重复，每栏15 头猪于水泥地平地饲养，自由采食，保证充足饮水，试验期为55d。试验期间不使用抗生素和促生长剂，卫生、温度、防疫等工作遵照猪场常规程序进行。 2 试验结果讨论 从数据表中可以看到善壮组的死亡率为 2.64%，对照组为 13.16%，添加了善壮的饲料在死亡率上降低了10.51%，而试验 I、□、山组的死亡率同样比对照组下降5%以上，这一指标说
酵母类饲料在畜牧业中的应用 作者：冯佳时， 王清声， 廖冰麟， 晏向华 作者单位：冯佳时,廖冰麟,晏向华(华中农业大学动物科技学院,430070,武汉)， 王清声(江苏无锡德冠化工有限公司) 刊名： 饲料工业 英文刊名：FEED INDUSTRY 年，卷(期)：2008,29(4) 被引用次数：2次 参考文献(22条) 1.陈琴;黄钧;黎子兰饲料酵母在水产养殖业中的应用[期刊论文]-饲料博览 2001(07) 2.成立新;那日苏酵母培养物对反刍动物的营养作用[期刊论文]-畜牧与饲料科学 2005(01) 3.Schingoethe D J Feed Efficiency of Mid-Laetation Dairy Cows Fed Yeast Culture During Summer 2004 4.郭雁君活性酵母菌时怀孕母猪及其仔猪生产性能的影响[期刊论文]-黑龙江畜牧兽医 2007(08) 5.雷宏俊;覃矜校活酵母在母猪围产期的作用[外文期刊] 2006(05) 6.刘静;刘聚祥酵母菌的营养特性及在畜牧业中的应用[期刊论文]-动物医学进展 2007(05) 7.J.ERICLINE;J.STAN BAILEY;NELSON A.COX;NORMAN J.STERN Yeast Treatment to Reduce Salmonella and Campy-lobacter Populations Associated with Broiler Chickens Subjected to Transport Stress 1997(76) 8.刘学剑酵母培养物在养殖生产中的应用研究进展[期刊论文]-兽药与饲料添加剂 2005(05) 9.刘观忠;安胜英;姜国均酵母培养物对蛋雏鸡肠壁结构及免疫机能的影响[期刊论文]-中国畜牧兽医 2005(02) 10.黄青云畜牧微生物学 2003 11.张国辉;何瑞国;高红梅酵母细胞壁及其在水产中的应用[期刊论文]-中国饲料 2005(10) 12.储晨壳;孙伟酵母在饲料业中的研究和应用[期刊论文]-饲料博览 2007(03) 13.李豫红;高峰浅谈水产养殖中的微生物活菌制剂[期刊论文]-河北渔业 2003(01) 14.P.L.Utterback;C.M.Parsons;J.Butler Effect of Supplement-ing Selenium Yeast in Diets of Laying Hens on Egg Selenium Con-tent 2005(84) 15.陈平洁;陈庄;林勇饲料酵母在畜禽饲养上的运用及作用机理的探讨 1999(02) 16.倪建平;顾彩菊;黄启忠不同饲料酵母在内鸡生产上的应用试验 1999(05) 17.A.A.Onifade;G.M.Babahmde Supplemental value of dried yeast in a high-fibre diet for broiler chicks 1996(62) 18.A.W.Zhang;B.D.Lee;S.K.Kee Effeets of Yeast(Saccha-romyces cerevisiae) Cell Components on Growth Performance,Meat Quality,and Ileal Mucesa Development of Broiler Chicks 2005(84) 19.徐丽梅饲料酵母代替鱼粉饲喂内鸡、蛋鸡、蛋鸭效益显著 2003(01) 20.安琪酵母股份有限公司研发中心动物营养研究室酵母源生物饲料的应用及其发展趋势[期刊论文]-养殖与饲料2006(06) 21.曾虹酵母类饲料的分类和品质[期刊论文]-中国水产 2001(05) 22.郑凯迪酵母细胞壁及其在水产养殖中的应用[期刊论文]-饲料工业 2006(10) 引证文献(2条) 1.微生态制剂对异育银鲫生长性能及免疫机能的影响[期刊论文]-安徽农业科学 2010(11)
标准解读-《发酵饲料技术通则》等四项生物饲料团体标准 2018年12月1酵饲料技术通则》、《饲料原料酿酒酵母培养物》、《饲料原料酿酒酵母发酵白酒糟》和《饲料日，中国生物饲料产业创新战略联盟发布的《发添加剂植物乳杆菌》四项团体标准正式实施。 1、导读 我国生物饲料产业正在飞速发展，但我国生物饲料现行标准还不能满足产业发展需要。 为促进我国生物饲料产业标准化发展，充分发挥市场主体参与标准制定的作用，建立与国家标准、行业标准相互协调、相互支撑的团体标准，在生物饲料开发国家工程研究中心的组织领导下，2018年3月1日正式实施的《生物饲料产品分类》团体标准，是我国生物饲料领域首部团体标准，填补了我国在生物饲料领域标准的空白；2018年12月1日正式实施的《发酵饲料技术通则》等四项生物饲料团体标准，加速了生物饲料标准化进程，更好地规范了生物饲料产业健康发展，将为发酵饲料产业的健康规范发展发挥积极作用。 2、关于真菌毒素 在最新实施的《发酵饲料技术通则》等四项团体标准中对真菌毒素的限量标准、试验方法、检验规则等做了明确的规定，是卫生指标中的必检项目，这说明真菌毒素对生物饲料领域的影响是不可忽视的。 真菌毒素也称为霉菌毒素，是霉菌在生长繁殖过程中产生的次级代谢产物，对动物、人类和农作物具有较大毒性。它们可通过饲料或食品进入人和动物体内，引起人和动物的急性或慢性毒性，损害机体的肝脏、肾脏、免疫系统、呼吸系统、消化系统及生殖系统等。 迄今为止，人类所发现的霉菌毒素就有三百多种。其中以呕吐毒素、黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素、伏马霉素、T-2毒素最为受人关注。 3、真菌毒素限量标准 《饲料原料酿酒酵母培养物》（T/CSWSL003-2018）酿酒酵母培养物中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素的限量标准：
146种培养基配方 ——2009年2月1日星期日by尛森蟲1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8 适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种 2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂) Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30g NaCl 5g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2 [Note]：When cultivation of Bacillus，5mg of to MnSO4.H2O may be added . It is favorable to promote spore formation . 适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(青虫菌)、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌(大肠杆菌)、铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌 3. Azotobacter Medium (固氮菌培养基) KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8g MgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O0.1ｇ Na2MoO4.2H2O Trace(微量) Yeast axtract(酵母膏) 0.5g Mannitol(甘露醇) 20g FeCl3 Tract(微量) Distilled water (蒸馏水) 1000ml Agar (琼脂) 15g Adjust (调) pH to 7.2 适用范围：固氮菌、胶质芽孢杆菌 4. Corn Meal Medium (玉米粉培养基) Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1g Glucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml [Note]:Boil the mixture in autoclave at 121℃for 1 hr. distribute the medium into 18ⅹ18 mm tubes , each contains 10 ml of the li quid , then autoclave at 121℃for 1 hr . again (15磅蒸煮1小时,分装入18ⅹ18毫米试管,每管深度达6厘米。15磅再次灭菌15小时。) 5. Lactic-bacteria Medium I (乳酸菌培养基I ) Yeast extract (酵母膏) 7.5g Peptone (蛋白胨) 7.5g Glucose (葡萄糖) 10g KH2PO4 2g Tomato juice (西红柿汁) 100ml Tween (吐温) 80 0.5ml Distilled water (蒸馏水) 900ml pH 7.0 适用范围：植物乳杆菌(胚芽乳杆菌)、嗜热乳酸链球菌 6. Lactic-bacteria Midium Ⅱ(乳酸菌培养基Ⅱ) Lacto-casein peptone (乳酪蛋白胨) 10g Beef extract (蛋白胨) 10g Yeast extract (酵母膏) 5g Glucose (葡萄糖) 5g Tween (吐温) 80 1g K2HPO4 2g Na-acetate (醋酸钠) 5g Diamine citrate (柠檬酸二胺) 2g MgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.H2O 0.05g Distilled water (蒸馏水) 1000m pH 6.5-6.8 适用范围：植物乳杆菌(胚芽乳杆菌) 7. Peotone Glucose Yeast extract Medium PGY (蛋白胨、酵母膏、葡萄糖培养基)
BY4741酿酒酵母菌 BY4741Strain BY4741菌信息： 培养基：YPD 菌株类别：酵母菌 培养条件：28℃，有氧，YPD 质粒转化：电激 保存方式：30%甘油，-20℃ 基本应用：用于蛋白表达 BY4741菌使用说明： 四区划线培养，挑单菌落接种培养使用并保存甘油菌。 BY4741操作说明： 1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 2，为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆菌落进行后续操作。 冷冻管开封： 用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。 BY4741菌株复溶： 无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取1ml左右复溶液，加入到冷冻管中。轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。 BY4741菌株复壮： 用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培养。细菌在30-35℃培养箱中培养24-48h，真菌在23-28℃培养箱中培养24-72h（必要时，可适当延长培养时间）。 BY4741菌株传代： 将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中（尽量增大接种量：如用无菌吸管吸取≥50μl新鲜培养物至固体培养基，边移动边缓慢释放），适宜温度下培养，用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。 注意事项： 1、菌种活化前，将冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中，长时间室温下放置会导致
菌种衰退； 2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行； 3、一些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，部分需连续两次继代培养才能正常生长； 4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基，敬请正确选择，不清楚时来电询问； 5、某些厌氧菌的培养，自开封到接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧状态；培养过程中亦要保持厌氧状态； 6、某些菌种，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要5-10%CO2促进生长； 7、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况，应停止使用对应产品。 8、部分菌种有致病性、扩散性，请专业人员在专业环境下有保护性操作。 BY4741菌保藏条件： -20℃保存（复溶液于2-8℃保存） 保藏时间： 2-10年，应根据菌种状况及时转接
常用抗生素 氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml） 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml） 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林（methicillin）（100mg/ml） 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml） 溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml） 溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素（streptomycin）（50mg/ml） 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml） 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素（tetracyyline）（10mg/ml） 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。(实验室一般都不调PH) SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1 mol/L 氯化钾2.5ml
酵母菌、霉菌常用培养基得配制 一、目得要求 了解合成培养基、半合成培养基与天然培养基得配制原理、学习与掌握麦芽汁培养基、马铃薯葡萄糖培养基、豆芽汁葡萄糖培养基与察氏培养基得配制方法。 二、基本原理 麦芽汁培养基与马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养酵母菌与霉菌。马铃薯葡萄糖培养基有时也可用于培养放线菌。豆芽汁葡萄糖培养基也就是培养酵母菌及霉菌得一种优良培养基。察氏培养基主要用于培养霉菌观察形态用。麦芽汁培养基为天然培养基,马铃薯葡萄糖培养基与豆芽汁葡萄糖培养基二者均为半合成培养基,而察氏培养基则为合成培养基。培养基配方中出现得自然pH系指培养基不经酸、碱调节而自然呈现得ｐH。 三、实验材料 (一)药品 葡萄搪、蔗糖、NaN03、K2HＰ０4、KCl、ＭｇSO4·７H2O,ＦｅＳ04、琼脂。(二)仪器 天平、高压蒸汽灭菌锅。 (三)玻璃器皿 移液管、试管、锥形瓶、烧杯、量筒、培养皿、玻璃漏斗等。 (四)其她物品 药匙、ｐH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸、新鲜麦芽汁、黄豆芽、马铃薯等。 四、实验内容 (一)麦芽汁培养基得配制 １、培养基成分 新鲜麦芽汁一般为1０—15波林、 2.配制方法
(1)用水将大麦或小麦洗净,用水浸泡６—1２h,置于15℃阴凉处发芽,上盖纱布,每日早、中、晚淋水一次,待麦芽伸长至麦粒得两倍时,让其停止发芽,晒干或烘干,研磨成麦芽粉,贮存备用。 (２)取一份麦芽粉加四份水,在６5℃水浴锅中保温3-4h,使其自行糖化,直至糖化完全(检查方法就是取0。5mｌ得糖化液,加２滴碘液,如无蓝色出现,即表示糖化完全)。 (3)糖化液用4-6层纱布过滤,滤液如仍混浊,可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清,加水20m1,调匀至生泡沫,倒入糖化液中,搅拌煮沸,再过滤)、 (4)用波美比重计检测糖化液中糖浓度,将滤液用水稀释到１0—15波林,调ｐH 至6、4。如当地有啤酒厂,可用未经发酵,未加酒花得新鲜麦芽汁,加水稀释到1０—1５波林后使用。 (5)如配固体麦芽汁培养基时,加入2%琼脂,加热融化,补充失水。 (６)分装、加塞、包扎、 (7)高压蒸汽灭菌100 Pa灭菌20 ｍｉｎ。 (二)马铃薯葡萄糖培养基得配制 1、培养基成分 马铃薯20ｇ 葡萄糖 2 g 琼脂1、5—２g 水100mｌ自然ｐH 2.配制方法 (1)配制２0％马铃薯浸汁取去皮马铃薯200g,切成小块,加水１000m１。80℃浸泡lh,用纱布过滤,然后补足失水至所需体积、10０Pａ灭菌２0 min。即成20％马铃薯浸汁,贮存备用、
酵母在饲料工业中的新应用 酵母菌（yeasts）是单细胞真菌，圆形、卵圆形或圆柱形，其细胞大小约为1～5μm×5～30μm，最长可达100μm。酵母细胞含丰富的蛋白质，氨基酸以及多种维生素，尤其是B 族维生素以及各种消化酶类，在饲料工业中酵母主要作为蛋白质饲料使用，最早是用作反刍动物的蛋白质补充饲料(Carrer等，1944)。随着科学的进步，特别是现代生物工程技术的飞速发展，人们除了生产单细胞 蛋白作为优质饲料蛋白外，还利用不同的酵母以及不同的加工方法研制成对动物有不同功效的多种饲料添加剂。一般说来，适用于饲料的有产阮假丝酵母、热带假丝酵母、啤酒酵母、酶脂假丝酵母、葡萄酒酵母、巴氏酵母、生香酵母和白地霉等。 1 优质的单细胞蛋白饲料 随着畜牧业生产的发展，畜禽必需的蛋白质饲料越来越缺乏。1980年全世界的畜牧业所需蛋白质为4.3亿吨，而到1990年这个数字超过5.24亿吨，到2000年这个数字已超过9亿吨。因此，许多国家都已建立起单细胞蛋白的新产业。饲料酵母单细胞蛋白，是指用作饲料的酵母单细胞蛋白。酵母菌体蛋白的营养价值很高，饲料酵母干物质中蛋白质含量可高达50％，其赖氨酸含量比大豆还高，接近动物蛋白，色氨酸含量比大豆高7倍以上（张力，2000），还含有B族维生素、矿物质以及其它生理活性物质，是一种多维高蛋白活性酵母饲料，而一直作为单细胞蛋白被广泛使用。生产单细胞蛋白，目前多用假丝酵母、得巴利酵母、球拟酵母和红酵母来生产单细胞蛋白。利用酵母生产单细胞蛋白（SCP），生产速度快，周期短。接种酵母1～3h后可繁殖一代。 酵母不但可大幅提高饲料原料的蛋白质水平，酵母菌还含有丰富的酶类，如胃蛋白酶、淀粉酶等，消化率高，一般消化率可达80%～90%。酵母发酵饲料能促进微生物繁殖，提高消化率，促进增重，提高饲料报酬。应用酵母发酵饲料配制日粮时，要考虑氨基酸平衡，特别是赖氨酸、蛋氨酸等限制性氨基酸的含量要满足动物的营养需要。随着微生物工程和发酵工程的发展，酵母越来越被广泛用于优质蛋白质饲料的生产。 2 饲料酶添加剂 2.1 饲料酶添加剂的应用 酵母细胞壁裂解后可产生多种酶类，活的酵母细胞也可胞外分泌多种酶，如淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶等。因而，酵母可加强对营养物质的消化利用，促进畜禽生长，增进其食欲，增强抵抗疾病和抗应激的能力。 李承开等（1998）生产RC饲料酵母含有较高比例的活性酵母细胞、消化酶（淀粉酶17mg/g，蛋白酶168GDU/g），可促进动物对饲料的消化、吸收；提高饲料的转化率。试验表明，在猪的日粮中添加RC饲料酵母1.48%或2.96%，可促进猪的生长发育，并提高饲料转化率。江永才（2004）以酵母培养物、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、纤维素酶、酸性蛋白酶等为主要组成成分的“JW活菌酶”在仔猪非常规饲料（15%次粉、5%麦麸替代20%的玉米）中添加0.1%时，日增重比对照组提高14.3%，比酶制剂组提高4.35%、饲料利用率比对照组提高3.8%～7.5%，比市售酶制剂组提0.4%；在仔猪常规饲料中添加0.1%的JW活菌酶试验组比对照组日增重提高8.5%，饲料报酬提高6%；在蛋禽浓缩料中添加0.1%的JW活菌酶，试验组比对照组产蛋率提高0.43%，饲料利用率提高6.38%。王越等（2004）利用筛选到的克鲁斯假丝酵母（Candida Krusei）WZ-001所产的植酸酶水解豆粕和麸皮中的植酸，模拟动物胃肠pH环境，对克鲁斯假丝酵母WZ-001植酸酶和2种与其酶活相同的商品酶降解饲料中的植酸脱磷的能力进行了比较。结果表明：WZ-00l植酸酶水解饲料植酸10h时释放的无机磷量是原游离磷的4.89倍，植酸水解率为67%，均高于酶活相同的2种商品酶。 2.2 饲料酶添加剂的新进展 微生物能产生多种可用作饲料添加的酶，但一般天然菌株产酶量很低，直接用其生产，
酵母培养物在奶牛上的应用 北京爱地科技有限公司技术部 摘要：酵母培养物 (Yeast Culture, YC) 能刺激纤维分解菌活性，改变纤维的消化，调节奶牛瘤胃的乙酸丙酸比例，从而实现对瘤胃发酵的调控能力，加大对营养物质的吸收和利用，减少各种营养代谢疾病的发生，进一步改善奶牛的生产性能。本文主要针对酵母培养物的组成及特点，对反刍动物作用的理论基础及机理来进一步分析酵母培养物对生产性能及对机体抗氧化能力的影响。 关键词：酵母培养物；作用机理；生产性能 通过调控瘤胃微生物区系来加强反刍动物对粗饲料的利用近年来成为研究的热点。目前存在许多方法用以调控瘤胃微生物区系，如应用离子载体和抗生素。但对于饲料工业中应用抗生素所引起的问题和寻求安全饲料的广泛关注，促使研究者致力于发展一种新型非抗生素或“天然”的饲料添加剂。微生物饲料添加剂，即直接饲喂微生物（DFM），完全满足发展需求，因而被推到了历史前台。DFM包括细菌、酵母（真菌）等，许多研究证明DFM使用效果良好，尤其是酵母培养物。酵母培养物(Yeast Culture, YC)是指在严格控制条件下由酵母菌在特定的培养基上经过充分的厌氧发酵后形成的微生态制品，含有酵母菌及其赖以生长的培养基及其代谢产物。酵母培养物能够提供各种消化酶和酵母发酵所产生的其它营养代谢产物，具有贮存期长、在热和湿环境条件下的稳定性好，能够提高日粮的适口性和改善消化率等特点。目前国内外制备酵母培养物的常用菌种为酿酒酵母（Saccharomyces cerevisia），并常添加有米曲霉（Aspergillus oryza）或其提取物以及乳酸杆菌（Lactobacillus）。 1 酵母培养物的组成及特点 酵母培养物营养丰富，富含维生素、矿物质、消化酶、有机酸、寡糖、肽、氨基酸等，还含有许多我们所不熟悉的“未知生长因子”。 酵母培养物能够耐受应激，诸如干燥、加热和酸性等应激环境。它具有使用方便、绿色无污染、安全无毒副作用等特点，而且具有良好的适口性，能够增强免疫力以及促进生长的作用，是一种具有广阔发展潜力的饲料添加剂。 酵母培养物在厌氧环境中能保持代谢活性，在瘤胃中能刺激瘤胃微生物产生淀粉、蛋白、脂肪和纤维素等酶，有利于营养物质的消化，且可供应B族维生素。研究证实酵母培养物在奶牛产奶初期可以改善奶牛的产奶量和干物质采食量，但是其中的机理及作用模式尚不清楚。目前较为普遍的理论认为酵母培养物提供的各种生长因素包括维生素前体和微生物营养源等能刺激瘤胃细菌的生长。其中一种理论说明了酵母培养物的主要影响是刺激瘤胃细菌利用乳酸，这一过程可以降低乳酸含量，升高瘤胃pH值，稳定瘤胃内环境，促进瘤胃纤维素分解菌生长，最终使动物采食量，纤维消化率以及动物产品得以增加。而另外一种理论认为 酵母培养物对升高氨氮有积极作用，从而提高微生物蛋白产量和合成效率，增加过瘤胃氨基酸，促进动物生产，但是这一理论仍需进一步证明。
电转法 设计方案一： 感受态制备： 1.挑一环酵母菌接种于5mL YEPD培养基中，30℃、250-300rpm培养过夜； 2.取1mL一级种子分别接种于两瓶50mL YEPD培养基中，30℃、250-300rpm 培养约16-18h(OD:1.3-1.5)； 3.于4℃离心收集菌体，用25mL冰无菌水洗涤一次后，细胞用10ml冰无菌水 重悬，可换成较小的离心管； 4.加入1ml，pH7.5，10×TE缓冲液，摇晃均匀，再加入1ml 10×LiAc，旋转摇 匀，于30度轻轻摇动45min； 5.再加入0.4ml 1 mol/L DTT，并同时旋转摇动，于30度轻轻摇动15min； 6.于4℃离心，弃上清（用枪吸），再用25mL冰无菌水洗涤； 7. 2.5ml冰冷的1mol/L山梨醇洗涤，离心收集菌体，弃上清（用枪吸）； 8.每管用100ul山梨醇溶解，分装于EP管中（80ul/管），于-70℃冰箱保存。 电转化： 1．向感受态细胞中加入约5～10ug（体积小于10 ul）的DNA，用枪吹吸均匀，转移至预冷的电转杯中，静置5min； 2．擦干电转杯，电击，电击参数：1.5KV，25uF，200欧姆； 3．立即加入1ml 预冷的山梨醇，转移至EP管中，于30℃静置1h； 4．离心，弃上清，加入1mL YEPD后，于30℃、200rpm培养2h； 5．离心得菌体后，吸除550 ul上清液，然后按150 ul/板进行涂板。 说明：该方法可直接采用50或100mL体系的一步法，即直接挑单菌落于YEPD中培养至预定菌浓，也可采用试管摇菌收集菌体制备感受态。 设计方案二： 感受态制备： 1.挑一环酵母菌接种于5mL YEPD培养基中，30℃、250-300rpm培养过夜； 2.取1mL一级种子分别接种于两瓶50mL YEPD培养基中，30℃、250-300rpm 培养约16-18h(OD:1.3-1.5)； 3.于4℃，5000rpm，5min离心收集菌体，用25mL冰无菌水洗涤后，细胞重悬 于8ml处理液中（处理液配方：100 mM LiAc，10 mM DTT，0.6 M山梨醇， 10 mM Tris-HCl，pH 7.5），室温静置30min； 4.4℃，5000rpm，5min离心收集菌体，用1.5mL 1mol/L预冷的山梨醇洗涤三 次，离心条件一样； 5.每管用100ul山梨醇溶解（以黄枪头能吸取为宜，菌浓低时可适量少加入山 梨醇），最后以80 ul的终体积转移至EP管中（菌体太多可适当放弃部分），置于-70℃冰箱保存。 电转化： 1.向感受态细胞中加入约3ug（体积小于10ul）的DNA，用枪吹吸均匀，转移 至预冷的电转杯中，静置5min； 2.擦干电转杯，电击，电击参数：2.0KV，25uF，200欧姆； 3.立即加入1ml 预冷的山梨醇，转移至EP管中，于30℃静置1h；
酵母菌、霉菌常用培养基的配制 一、目的要求 了解合成培养基、半合成培养基和天然培养基的配制原理。 学习和掌握麦芽汁培养基、马铃薯葡萄糖培养基、豆芽汁葡萄糖培养基和察氏培养基的配制方法。 二、基本原理 麦芽汁培养基和马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养酵母菌和霉菌。马铃薯葡萄糖培养基有时也可用于培养放线菌。豆芽汁葡萄糖培养基也是培养酵母菌及霉菌的一种优良培养基。察氏培养基主要用于培养霉菌观察形态用。麦芽汁培养基为天然培养基，马铃薯葡萄糖培养基和豆芽汁葡萄糖培养基二者均为半合成培养基，而察氏培养基则为合成培养基。培养基配方中出现的自然pH系指培养基不经酸、碱调节而自然呈现的pH。 三、实验材料 (一)药品 葡萄搪、蔗糖、NaN03、K2HP04、KCl、MgSO4·7H2O，FeS04、琼脂。 (二)仪器 天平、高压蒸汽灭菌锅。 (三)玻璃器皿 移液管、试管、锥形瓶、烧杯、量筒、培养皿、玻璃漏斗等。 (四)其他物品 药匙、pH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸、新鲜麦芽汁、黄豆芽、马铃薯等。 四、实验内容 (一)麦芽汁培养基的配制
1．培养基成分 新鲜麦芽汁一般为10-15波林。 2．配制方法 (1)用水将大麦或小麦洗净，用水浸泡6-12h，置于15℃阴凉处发芽，上盖纱布，每日早、中、晚淋水一次，待麦芽伸长至麦粒的两倍时，让其停止发芽，晒干或烘干，研磨成麦芽粉，贮存备用。 (2)取一份麦芽粉加四份水，在65℃水浴锅中保温3-4h，使其自行糖化，直至糖化完全(检查方法是取0.5ml的糖化液，加2滴碘液，如无蓝色出现，即表示糖化完全)。 (3) 糖化液用4-6层纱布过滤，滤液如仍混浊，可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清，加水20 m1，调匀至生泡沫，倒入糖化液中，搅拌煮沸，再过滤)。 (4)用波美比重计检测糖化液中糖浓度，将滤液用水稀释到10-15波林，调pH 至6．4。如当地有啤酒厂，可用未经发酵，未加酒花的新鲜麦芽汁，加水稀释到10-15波林后使用。 (5)如配固体麦芽汁培养基时，加入2％琼脂，加热融化，补充失水。 (6)分装、加塞、包扎。 (7)高压蒸汽灭菌100 Pa灭菌20 min。 （二)马铃薯葡萄糖培养基的配制 1、培养基成分 马铃薯20g 葡萄糖 2 g 琼脂 1.5-2g 水100ml 自然pH
题目: 畜禽饲料中添加活性酵母 与支链淀粉的研究进展 姓名: 学科、专业: 研究方向: 指导教师:
畜禽饲料中添加活性酵母 与支链淀粉的研究进展 摘要: 活性酵母对于促进瘤胃微生物区系的建立具有重要作用, 支链淀粉与直链淀粉的比例对于畜禽饲料利用率有很大的关系。本文就近些年来活性酵母和支链淀粉在畜禽饲料日粮上应用的研究进展进行综合性的总结。 关键词: 活性酵母; 支链淀粉 1活性酵母 近年来, 高活性干酵母作为一种天然活性反刍动物饲料添加剂, 以其含水量低、复活快、贮藏时间长、使用方便、无副作用等优点, 被广泛应用于反刍动物生产中。Chaucheyras( )研究表明, 高活性干酵母改进瘤胃纤维消化率以及增强瘤胃纤维菌数量的原因可能是酵母细胞有助于瘤胃排除多余氧气, 厌氧环境能促进纤维分解菌和乳酸利用菌的生长。高活性干酵母可经过调控反刍动物的瘤胃内环境, 特别是经过对瘤胃内细菌的调控发挥作用, 促进其对粗饲料的发酵, 可提高饲料采食量, 增加泌乳量, 减轻环境应激对畜体造成的危害(戴晋军, )。高志刚( ) 研究证实, 反刍动物的瘤胃本身并不能直接对饲料进行消化吸收, 真正参与分解消化食物活动的是瘤胃内的微生物菌群。高活性干酵母刺激瘤胃有益菌数量及活性的提高, 特别是乳酸利用菌和纤维分解菌。研究发现, 酵母菌制剂可大大提高瘤胃内纤维分解菌和乳酸杆菌数量, 但不影响
蛋白分解菌、淀粉分解菌及原虫的数量。Dawson( ) 发现, 泌乳牛日粮中添加活的酵母菌制剂, 纤维分解菌的数量比对照组提高5～40倍。另有研究表明, 日粮中添加活性干酵母可使瘤胃内有益微生物菌群的总数增加30%, 其中参与分解纤维物质和干草的细菌数目可增加60%～70%。 1.1对瘤胃发育初期的影响 在犊牛出生时, 瘤胃并无细菌存在, 但很快被复杂而大量的微生物菌群占据。实际上, 犊牛母体和其它动物分泌的唾液、粪便以及被污染的植物提供给瘤胃发育所需的接种体, 这对犊牛瘤胃的发育至关重要。在小型或是放牧式的奶牛场, 犊牛往往能够因为与母体长时间接触, 瘤胃得到良好的发育; 而在大型或集约化饲养管理的奶牛场, 由于犊牛单独在犊牛舍成长, 不接触瘤胃并不能得到快速发育。除此之外, 犊牛瘤胃往往没有完成微生物菌群的接种及经历断奶后饲喂固体饲料的过渡期( Fonty, 1987) 。这种情况的发生往往会导致瘤胃菌体成分的不平衡发展, 进而导致消化紊乱以及增加微生物传染病的风险。最近的试验证实, 给断奶犊牛饲喂干酵母能够增加谷物饲料的摄取量以及提高日增重, 添加干酵母的试验组犊牛腹泻率显着低于对照组口( Galvao, ) 。这表明, 含有啤酒酵母的活性于酵母对于瘤胃早期发育菌群的建立以及机体健康和生产性能具有积极的影响。 1.2活性干酵母对瘤胃酸中毒的缓解作用
种子培养基(g/L ) : 无氨基酵母氮源(YNB, Difco) 15, 尿嘧啶0. 04, 腺嘌岭0. 04, 色氨酸0. 02,组氨酸0.02, 精氨酸0.02, 蛋氨酸0.02, 苏氨酸0.03。 常规发酵培养基(g/L ) : 大豆蛋白胨(Difco )40, 酵母粉(Difco) 40, 葡萄糖20。 合成培养基由葡萄糖(60 g/L )、氨基酸、微量矿物质和维生素构成。氨基酸成分与种子培养基相同。微量矿物质和维生素的构成如下: 微量矿物质(g/L ) : (NH4)2SO4 20, KH2PO4 0.3, M gSO4·7H2O 0.5, EDTA 1.5, ZnSO4·7H2O0.0045, CoCl2 · 6H2O 0.003, M nCl2 · 4H2O 0.001, CuSO4 ·5H2O 0.003, CaCl2 ·2H2O 0.0045, FeSO4·7H2O 0.003, H3BO3 0.001, KI 0.001(121 °C灭菌30 m in)。维生素(mg/L ) : 生物素0.5, 泛酸0.1, 尼克酸1.0, 肌醇25.0, 硫胺素1.0, 吡哆酸1.0, 对氨基苯甲酸20, 叶酸1, 胆碱15, 核黄素4 (过滤灭菌)。 合成培养基(g/L )： 1，(NH4)2SO4 25，KH2PO4 25，MgSO47.3，CaSO4.2H2O 1 2，YNB 13.4，His 1，Leu 2，Trp 2 3，PTM1 4ml 4，甘油30 50％甘油补料(g/L )： 1，甘油500 2，12ml PTM1 3，His 1，Leu 2，Trp 2 20％半乳糖诱导(g/L )： 1，半乳糖200 2，6ml PTM1 3，His 1，Leu 2，Trp 2
146种常用培养基配方 THE COMPOSITION OF MEDIA 培养基及成分 1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8 适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种 2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂) Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30g NaCl 5g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2 [Note]：When cultivation of Bacillus，5mg of to MnSO4.H2O may be added . It is favorable to promote spore formation . 适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种（青虫菌）、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌 3. Azotobacter Medium (固氮菌培养基) KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8g MgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O 0.1g Na2MoO4.2H2O Trace(微量) Yeast axtract(酵母膏) 0.5g Mannitol(甘露醇) 20g FeCl3 Tract(微量) Distilled water (蒸馏水) 1000ml Agar (琼脂) 15g Adjust (调) pH to 7.2 适用范围：固氮菌、胶质芽孢杆菌 4. Corn Meal Medium (玉米粉培养基) Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1g Glucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml
酵母培养物作为一种微生态制剂，是由酵母菌，主要是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)[1]，在现代发酵工艺控制下采用液、固态相结合或直接在固体培养基上发酵后连同固体基质一起加工制得的产品，其主要成分是酵母发酵固体基质产生的细胞外代谢产物、发酵后变性的固体基质、酵母细胞内容物以及酵母细胞壁[2]。酵母培养物含矿物质、B族维生素、增味物质、消化酶、甘露寡糖、β-葡聚糖和氨基酸以及“未知促生长因子”等，这些物质对于动物胃肠道中的微生物而言是绝好的营养底物，可以激发它们的代谢活性和稳定体内微生态环境[2]，进而提高动物的生产性能。酵母培养物具有绿色天然、无毒副作用以及适口性好、营养丰富等优点[3]，是集保健和营养等多重功效为一体的微生态饲料添加剂[4]。 近些年来，在养殖业生产过程中，大量持续的使用抗生素等化学类饲料添加剂，使得动物胃肠道菌群 以白酒糟为基质进行酵母培养物的研究 ■张轩 (武汉设计工程学院，湖北武汉430205) 摘要：为降低酵母培养物的生产成本，并实现白酒糟的资源化无污染化利用，试验以廉价的白酒糟为主要基质，接种酿酒酵母，进行酵母高密度固体发酵后，在此固体基质上进行酵母自溶处理，摸索酵母在白酒糟固体培养基中增殖后的最佳自溶条件，最终确定了在实验室条件下以白酒糟为基质生产酵母培养物的工艺条件：调整经酵母高密度发酵的固体酒糟基质初始pH值为6，向其中添加助溶剂：6%(w/w湿糟)的NaCl溶液，0.04%(w/w湿糟)木瓜蛋白酶溶液以及9%(v/w湿糟)体积分数为95%的助溶剂无水乙醇，控制助溶剂添加总体积与酒糟干基总质量的体积质量比为1 1，搅拌分散，保持55℃自溶36h，而后烘干粉碎制得成品。酵母高密度发酵后的白酒糟经自溶处理后产品氨态氮含量达到3.83mg/g干糟。 关键词：酵母培养物；白酒糟；酵母自溶 doi:10.13302/https://www.doczj.com/doc/4414262747.html,ki.fi.2015.18.010 中图分类号：S816.46文献标识码：A文章编号：1001-991X（2015）18-0038-06 Research on yeast culture using distiller's grains as the substrate Zhang Xuan Abstract：In order to reduce the cost of producing yeast culture and realize the reclamation and free from pollution of the distiller's grains,we use low-cost distiller's grains as main substrate and inocu?late Saccharomyces cerevisiae,firstly by adopting yeast density solid-state fermentation,and then we carry on yeast autolysis in this solid substrate.Finally we find the laboratorial technological process of producing yeast culture using distiller's grains as the substrate:adjust initial pH of the solid-state sub?strate to6by dilute sulphuric acid,add autolysis promoter:6%NaCl solution(w/w distiller's wet grains),0.04%papain solution(w/w distiller's wet grains)and9%absolute ethyl alcohol(v/w distiller's wet grains),control the ratio of total volume of autolysis promoter and the total quality of distiller's dried grains to1 1,stir and disperse,maintain55℃autolysis36h and then dry and crush into fin?ished product.After yeast density solid-state fermentation and autolysis,the ammoniacal nitrogen can reach3.83mg per gram distiller's dried grains. Key words：yeast culture；distiller's grains；yeast autolysis 作者简介：张轩，硕士，研究方向为应用微生物学。 收稿日期：2015-06-10 38