也证实，在饲料中添加0.05%~0.1%酵母核酸，就能显著提高平均日增重和饲料利用率。在本次试验中，酵母核酸的添加能显著降低断奶仔猪的腹泻率，这和潘树德等（2008）的结果一致。由于酵母所含有的不是单一的核酸，化学成分复杂，因此表现出众多的功能，尤其是诱食方面的功能，因此，试验猪只表现出明显的采食量的增加。而对于腹泻率的降低主要是由于酵母核酸的添加，显著提高了肠道正常菌群数量、肠绒毛数量及高度。
4结论
在试验日粮中添加酵母核酸提取物，能显著提高猪只的日均采食量和平均日增重，降低料肉比和腹泻率，0.5%添加剂量组添加效果优于0.3%添加剂量组。
参考文献
[1]J.D Carve,W.A.Walker.The role of nucleotides in human nutri－
tion[J].The Journal of nutritional Biochemistry,1995,6(2):58-72.[2]Hartma P A,Hays V W,Baker R O,et al.Digestive enzyme devel－
opment in the young pig[J].J.Anim.Sci.,1961,20:114-123. [3]Lindemann M D,Cornellus S G,El Kandelgy S M,et al.Effect of
age,Weaning and diet on digestive enzyme levels in the piglet[J].
J.Anim.Sci.,1986,62:1298-1307.
[4]Owsley W F,Orr D E,Tribble L R.Effect of age and diet on the
development of the pancreas and the sythesis and secretion of de－velopment of the pancreatic enzymes in the young pig[J].J.Anim.
Sci.,1986,63:497-504.
[5]Jensen M S,Jesen S K,Jakobsen K.Development of digestive en－
zymes in pigs with emphasis on lipolytic activity in the stomach and pancreas[J].J.Anim.Sci.,1997,75:437-445.
[6]鲁小翠,齐德生,张妮娅，等.酵母核酸对肉仔鸡生长性能和血液
生化指标的影响[J].中国粮油学报,2007,22(4):85-90.
[7]施用晖,乐国伟,刘建文，等.外源核苷酸对肉鸡生产性能的影响[J].
无锡轻工业大学学报，2000（19）:598-599.
[8]潘树德,李学俭,边连全.酵母核酸对断奶仔猪生产性能及肠道菌
群影响的研究[J].中国畜牧杂志，2008,44（5）：37-40.
（编辑：高雁，snowyan78@https://www.doczj.com/doc/d317314356.html,）
酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）是单细胞微生物，属于真菌类，耐酸性强，是兼性厌氧菌。活性干酵母、酵母培养物、酵母提取物、酵母细胞壁等都是我国农业部《饲料添加剂品种目录》（2008）所允许使用的饲料添加剂。酵母类产品能有效改善畜禽消化道菌群平衡、增强机体免疫力、提供丰富的营养物质，从而达到防治消化道疾病和促进生长等多重作用，具有无毒、无副作用、无污染、不产生抗药性等特点，是一种绿色的饲料添加剂，在饲料工业中有广泛的研究和应用。文中对酵母源饲料添加剂的作用机理、种类及应用效果做了简述。
1酵母源添加剂的作用机理
1.1保持动物胃肠道微生态平衡
动物胃肠道内寄生了大量的微生物，这些微生物在合适的营养底物下能够保持正常的生长代谢，这将有利于维护各菌系之间的代谢平衡并为动物胃肠道消化吸收功能提供一个良好的微生态环境，使得日粮中的各种养分在胃肠道内能被充分吸收和利用，实现养殖效益的最大化。活性干酵母、破壁酵母粉和酵母培养物都能作为微生态制剂，改善动物胃肠道生态环境。酵母菌为兼性厌氧菌，在动物体内生长繁殖，能消耗肠道内的氧气造成厌氧环境，并代谢产生乳酸等有机酸，从而有利于乳酸菌等有益菌的生长，抑制大肠杆菌、沙门氏菌等有害菌的生长，因此可改善胃肠道环境和菌群结构，促进胃肠对营养物质的消化、吸收和利用。王学东等（2006）在猪饲料中添加活性干酵母的研究显示，与对照组相比，饲喂活性干酵母组胃内厌氧菌及双歧杆菌数明显上升。破壁酵母粉中含有的甘露聚糖（MOS）能够无选择地吸附结合多种霉菌毒素和阻止病原菌定居增殖，改善动物消化道的菌群结构，也能起到维护动物肠道微生态平衡的作用，其作用机理是：许多病源菌利用含有D-甘露糖受体的Ⅰ型纤毛附着于肠道表面，而MOS可为细菌提供甘露
酿酒酵母源饲料添加剂的研究与应用
王鹏银王海燕段文娟卢晓菲崔胜男
王鹏银，北京挑战农业科技有限公司，100081，北京市海
淀区中关村南大街12号中国农业科学院饲料研究所六层。
王海燕、段文娟、卢晓菲、崔胜男，单位及通讯地址同第一
作者。
收稿日期：2010-10-23
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
糖源，细菌与MOS结合后，失去了在肠道定植的能力，与MOS一同被排出体外。Nuwman(1993)报道，在犊牛饲料中每日加入含2g甘露寡糖的酵母细胞壁，饲喂5周后，粪便中大肠杆菌数量显著下降，呼吸道疾病从9.9％降到3％。酵母培养物含有未知生长因子，通过向寄宿在动物胃肠道内的微生物提供额外的营养底物来刺激它们的代谢活性和维护微生态环境的相对稳定，具有抑制真菌和大肠杆菌的作用，对动物消化道菌群具有较好的调节功能。
1.2增强动物免疫功能
酵母微量元素、酵母多糖、功能性多肽、核苷酸等均有提高动物免疫水平的作用。破壁酵母粉中富含葡聚糖等功能性多糖，β-葡聚糖能刺激动物体产生对机体免疫功能起关键作用的巨嗜细胞，可清除体内损伤、衰亡的细胞和侵入体内的病原微生物。甘露聚糖通过提高免疫球蛋白水平，改善巨噬细胞活性等提高机体免疫力。核苷酸在维持机体正常免疫功能、肠道发育和正常肝脏功能方面具有重要营养生理功能。酵母硒和酵母铬可提高免疫球蛋白含量，减少发病率。近年来研究发现，硒对动物的免疫系统的有效运行有着重要作用，有机硒能增强机体细胞免疫功能，加强淋巴细胞转化能力和迟发型超敏反应（DTH），有机硒能增强体液免疫，刺激免疫球蛋白的形成。崔保安等（2003）研究发现，0.15mg/kg有机硒能显著提高雏鸡淋巴细胞玫瑰花环形成率、脾脏指数、法氏囊指数，说明有机硒能刺激机体的免疫系统，提高机体免疫功能。黄志坚等（2004）在研究富硒酵母对奶牛免疫功能影响时发现，随着补硒天数的增加，乳牛血清中淋巴细胞的转化能力增强，T淋巴细胞百分率增多，说明硒对T淋巴细胞免疫功能有增强作用。锌参与体内多种酶的生物合成以及调节多种酶促反应，合理的锌含量可以保证动物各组织、器官功能处于最佳的功能状态，强化防御能力、免疫系统，增强动物对疾病的抵抗能力。
1.3消除动物体内有毒物质及抗氧化作用
活性干酵母在动物体内生长繁殖消耗氧气造成动物肠道内厌氧环境，并代谢产生乳酸，可抑制大肠杆菌等好氧菌的生长，因此，降低好氧菌对蛋白质的分解，从而降低动物体内胺和氨的浓度。超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽都是重要的抗氧化剂和自由基消除剂。酵母菌体内的超氧化物歧化酶（SOD）可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞。谷胱甘肽在酵母细胞内含量较高，可消除自由基，能起到强有力的保护作用。谷胱甘肽还具有整合解毒作用，能与体内的有毒化合物、重金属离子或致癌物质等相结合，并促进其排出体外，起到中和解毒作用。谷胱甘肽可阻止氧化血红蛋白，保护巯基酶分子中-SH基，有利于酶活性的发挥，并且能恢复已被破坏的酶分子中-SH基的活性功能，使酶重新恢复活性。酵母中的有机硒作为动物体内重要的抗氧化剂，可阻止多不饱和脂肪酸的氧化，改善肉的品质，且有机硒的效果要优于无机硒。硒是谷胱甘肽过氧化物酶的成分，组织硒含量与谷胱甘肽过氧化物酶的活性呈高度正相关。研究表明，有机硒与VE具有协同抗氧化、改善肉质功能，硒通过GSH-Px来发挥作用，与VE协同稳定细胞膜，改善肉质。GSH-Px主要是在细胞内通过清除过氧化物来预防膜上脂类过氧化反应的发生，VE是自由基清除剂，位于细胞膜靠近膜磷脂的一端，它可阻断脂类过氧化反应。酵母细胞壁多糖成分β-葡聚糖作为膳食纤维有助于胃肠的蠕动，可促进肠内有害物的排出，甘露寡糖（MOS）可以螯合胃肠道释放的黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮。
1.4改善动物生长性能和繁殖性能
铬、硒等矿物元素对改善动物的生长和繁殖性能具有重要的意义。硒对于精子的形成和发育具有特异的作用，硒是精子线粒体外膜硒蛋白的成分之一，可以保护精子细胞膜免遭损害，通过放射性自显影技术发现硒掺入精子并集中于精子中段，与精子中段的角质结构有关；缺硒会损害子宫平滑肌的生理机能，导致胎衣不下和受精率降低。铬能使母猪排卵增加，因而提高了母猪的繁殖性能。有机硒也能提高母猪的繁殖性能，并降低死胎率。庄惠君等（2004）研究认为，有机硒能有效提高精子活力，效果优于无机硒，其机制与GSH-Px活性增强、一氧化氮合酶（NOS）活性降低、自由基生成减少、膜脂质过氧化等细胞损害受到遏制以及精子尾部结构完整性有关。家禽饲粮中添加有机矿物元素后，产蛋率、孵化率等也可以得到提高。Valentic等（2003）研究了酵母硒对肉用种鸡和产蛋鸡的影响发现，把酵母硒和无机硒的饲喂量从0.3mg/kg 提高到0.5mg/kg，有机硒组所产鸡蛋的硒含量比无机硒组高出了30%，并能促进胚胎发育和雏鸡出壳，雏鸡出生最初几天的抗氧化能力也与蛋中的硒含量有关，使雏鸡的成活率和整齐度得到提高。
1.5酶作用和营养作用
酵母菌代谢能产生多种酶，降解饲料中的抗营养因子，降低肠道内食糜粘度，促进胃肠对营养物质的
消化、吸收和利用，提高饲料利用率。酵母细胞富含畜禽生长需要的多种营养物质，如蛋白质、脂肪、碳水化合物、矿物质、维生素和激素等。蛋白质含量达到45%～60%，可以和大豆蛋白相媲美；氨基酸组成合理，动物必需的8种氨基酸含量均很高，尤其是赖氨酸、色氨酸、苏氨酸、异亮氨酸等几种重要的必需氨基酸含量较高，因此对赖氨酸含量较低的谷物是非常有效的补充物；富含B族维生素如烟酸、胆碱、核黄素、泛酸、叶酸等，一直被认为是天然B族维生素的丰富来源，VB2以结合形式存在，动物体对其吸收率可达60%以上，是一种理想的VB2补充源；含有丰富的矿物质（6%～9%），如钾、镁、磷、铁、锌、锰等；以及含核酸（6%～8%）、生理活性物质（1%～2%）等，为动物提供多种营养成分。此外，酵母培养物中含有未知生长因子，具有促生长作用。
2酵母源添加剂种类及其应用效果
2.1饲料酵母
饲料酵母，又称单细胞蛋白（single cell protein，简称SCP），是酵母类产品的初期产品，用作反刍动物的蛋白质补充饲料。酵母细胞粗蛋白质含量很高，可达干物质的50％左右，因此将酵母细胞作为饲料用蛋白，应用较多的有酿酒酵母、啤酒酵母、热带假丝酵母和毕赤酵母等，主要是采用秸秆类物质、糖蜜等副产物和废弃物经过微生物发酵所得。单细胞蛋白曾被广泛应用，但酵母细胞壁较厚，在动物体内不能被有效降解，因此，蛋白利用率低，而酵母细胞内其它营养物质如氨基酸、维生素、矿物质等，以及β-葡聚糖、甘露聚糖、谷胱甘肽、核苷酸等功能性物质更难以被动物利用。
2.2破壁酵母粉
酵母细胞营养丰富，但酵母细胞壁成分复杂，细胞内营养物质和生理活性物质很难被动物有效吸收利用，大部分作为废弃物被排出动物体外。破壁酵母粉是针对上述缺陷设计的新型饲料添加剂，采用物理或生物化学方法破碎酵母细胞壁，使酵母细胞内容物充分释放到胞外和大分子物质适当降解的一种产品，目前工业上主要采用高压匀浆法和酶法破壁。酵母细胞经破碎后，细胞内的蛋白质、氨基酸、核酸、维生素等营养物质和谷胱甘肽、海藻糖、SOD等生理活性物质都被释放到胞外，细胞壁中的葡聚糖和甘露聚糖被分解为寡糖等功能性多糖，蛋白质被分解为多肽，营养作用和功能性都大大提高。
国内外已投入大量力量对破壁酵母粉主要成分
的应用效果进行了研究。Danny M.Hooge（2004）研究表明，在火鸡日粮中添加酵母细胞壁甘露寡糖（MOS），可使火鸡重量增加2.09%，死亡率降低25.13%，添加量在0.05%～0.2%之间无明显变化，比添加抗生素对照组效果要好。张红梅等（2006）在鲤鱼饲料中添加酵母甘露寡糖的研究结果表明，试验组免疫器官胸腺和脾脏成熟快，T细胞、B淋巴细胞增多，能产生大量抗体，提高鲤鱼的免疫功能。阎桂玲等（2008）研究了啤酒酵母甘露寡糖对肉仔鸡肠道微生物和机体免疫机能的影响，结果表明：添加酵母甘露寡糖减少了盲肠内大肠杆菌数量（为对照的28.95%）和沙门氏菌的数量为对照的（对照组的29.50%）（P＜0.01）；0.05%和0.10%添加量可以促进双歧杆菌生长（分别提高11.98%和10.54%）（P＜0.01）；0.1%添加量提高了淋巴细胞对ConA的反应性（P＜0.05），并提高了巨噬细胞的吞噬力（P＜0.05）。S.Firmin等（2010）研究表明，酵母细胞壁多糖能显著降低单胃动物饲料中毒枝菌素的量。Chang（1999）等研究表明，添加0.2%β-1,3葡聚糖（β-1,3glucan）在饲料中投喂斑节对虾幼体和成体，幼体于15d后用白斑综合症病毒（White spot syndome virus）浸泡攻毒，成体于20d后用白斑病毒腹节注射攻毒，结果显示，攻毒后6d幼体成活率为12.2％，成体成活率为20％，对照组为0；攻毒12d 后幼体成活率为5.5％，成体成活率为13.3％，结果表明，添加β-葡聚糖可以减轻斑节对虾感染白斑综合症病毒。迟淑艳等（2006）在罗非鱼饲料中分别添加不同水平的β-葡聚糖注射嗜水气单胞菌7d后，对照组的存活率仅为25%，β-葡聚糖添加组的存活率在60%～70%，1.0%β-葡聚糖添加组可以显著提高奥尼罗非鱼头肾组织酸性磷酸酶（ACP）和溶菌酶（LSZ）的活性，结果表明，在全雄奥尼罗非鱼饲料中添加1.0%～1.5%的β-葡聚糖可以明显改善其生长性能和抗嗜水气单胞菌感染的能力。高海等（2009）研究了外源性核酸对感染传染性法氏囊病毒（IBDV）雏鸡免疫功能和抗氧化能力的影响，结果表明，日粮中添加不同剂量的核酸均可提高T淋巴细胞转化率和T淋巴细胞数，法氏囊和脾脏的相对质量均明显增加，并能促进法氏囊和脾脏的快速发育，增强白细胞的吞噬功能；并可显著提高鸡血清中SOD和GSH-Px活性；因此，核酸能补偿IBDV对雏鸡免疫系统的抑制作用，具有一定的抗氧化能力，而且能促进雏鸡修复组织损伤。
2.3活性干酵母
活性干酵母是一种兼性厌氧菌，作为益生菌使
用。酵母菌进入动物胃肠道后，消耗胃肠道内的氧气造成厌氧环境，抑制大肠杆菌、沙门氏菌等需氧菌的生长和繁殖，同时促进双歧杆菌、乳酸杆菌等厌氧有益微生物的增殖，改善动物胃肠道微生态平衡。另一方面，酵母菌代谢产生有机酸和蛋白酶、淀粉酶等酶制剂，降低胃肠道pH值，提高饲料消化率。酵母菌是真菌，因此对大多数针对细菌的抗生素不敏感，可与常用的抗生素联合使用。目前市场上优质产品的活菌数一般为200亿个/g，普通产品的活菌数一般在100亿个/g以下。
活性干酵母已广泛应用于反刍动物和猪养殖业中。王学东（2006）研究表明，日粮中活性干酵母添加量1×106和2×107CFU/g组母猪所产仔猪21日龄断奶前的平均日增重显著高于其他各组（P＜0.05），同时，添加适量活性干酵母具有提高哺乳母猪采食量、提高仔猪断奶率及改善母猪胃内菌群结构的作用。谭斌等（2008）研究表明，在仔猪、妊娠母猪的饲料中添加饲用活性干酵母产品，可以显著地提高断奶仔猪的生长速度，提高母猪的繁殖性能，降低母猪的便秘发生率，其中在断奶仔猪和妊娠母猪日粮中添加量以1kg/t为宜，在防止母猪便秘方面添加量为0.6kg/t。李琅等（2008）研究了反刍专用酵母制剂对奶牛生产性能的影响，结果显示，每头奶牛添加1g/d反刍专用酵母在提高产奶量、增加奶牛食欲、改善粪便成型度等方面效果显著。蒋小艺等（2007）研究了不同酵母菌添加剂对奶牛产奶量及乳成分的影响，结果表明，酵母菌对奶牛产奶量和奶成分有不同程度的影响，几种酵母菌能提高奶牛的产奶量，其中两种酵母菌组产奶量与对照组相比增加显著（P＜0.05）；不同型号的酵母菌制剂对牛乳成分也有不同程度的影响，添加酵母组乳脂日产量比对照组显著增加（P＜0.05）；添加酵母组蛋白质日产量比对照组都有所增加，其中两组增加显著（P＜0.05）；试验组的产量与对照组没有显著差异（P＜0.05）；各试验组的所生产牛奶的乳糖、非脂固形物、比重、冰点、酸度与对照组无显著差异，乳中体细胞数均比对照组低。活性干酵母能促进幼龄反刍动物瘤胃的微生态平衡，完善瘤胃功能。Chaucheyras等（2001）研究表明，饲喂活性干酵母能加快羔羊瘤胃内分解纤维素的菌群的建立速度，并且菌群较未饲喂组稳定，活性干酵母能使羔羊瘤胃内纤毛虫更加迅速出现和定植。刘庆华等（2009）研究了活性干酵母添加水
平对产蛋初期铁脚麻种鸡生产性能的影响，结果表明，添加100g/t活性干酵母组0～13及0～33d产蛋率极显著或显著高于对照组（P＜0.01或P＜0.05），各期破蛋率与对照组无显著差异。刘宗英等（2005）研究了高活性干酵母对中华鳖非特异性免疫功能和抗病力的影响，结果表明，投喂高活性干酵母能增强中华鳖幼鳖对人工感染嗜水气单胞菌（A.hydrvphila）活菌的抵抗力，在中华鳖幼鳖饵料中添加高活性干酵母的量以每千克体重1200.0mg左右为宜。
2.4酵母培养物
酵母培养物（yeast cultures，简称YC）是一种复杂的发酵产品，是根据微生物代谢理论及发酵工程技术，将酿酒酵母经扩大培养后进行厌氧发酵，以产生多种代谢产物的发酵产品，其代谢产物有肽、有机酸、寡糖、氨基酸、核苷酸、酯类、维生素及其它未知生长因子。酵母培养物通过向动物胃肠道内的微生物提供营养底物来刺激它们的代谢活性，从而维护动物体内微生态环境的相对稳定。另外，在酵母菌发酵过程中产生的芳香类物质能起到改善饲料适口性和提高动物采食量的作用。因此，多种代谢产物生物活性成分的综合作用是酵母培养物能够促进动物健康和提高生产性能的关键所在。
酵母培养物在畜牧业有广泛地应用。Alshaikh等（2002）进行了酵母培养物在奶牛中应用试验，结果表明，饲喂了酵母培养物的奶牛生产性能明显好于对照组奶牛，产奶量也比对照组约增加了1kg/d。姚晓红等（2009）研究了酵母培养物对奶牛生产性能的影响，试验结果表明，添加酵母培养物使奶牛的日均采食量比对照组提高0.76％～1.95％（P＞0.05），日增重提高8.59％～15.04％（P＜0.05），日均产奶量提高7.45％～14.61％（P＜0．05），乳脂率提高5.81％～8.14％，其中添加量为250g/(d·头)试验组应用效果较好。汪德明等（2008）研究了仔猪断奶日粮中添加酵母培养物对仔猪断奶后生长发育的影响，结果表明，日粮中添加0.25%～0.5%酵母培养物可极显著提高断奶仔猪的平均日增重（P<0.01），同时，添加酵母培养物组仔猪腹泻次数低于对照组，表明在日粮中添加酵母培养物对缓解仔猪断奶后的营养应激和促进断奶后仔猪生长发育和预防仔猪腹泻有一定的作用。高俊等（2008）通过实验表明，肉仔鸡日粮中添加0.25%剂量的酵母培养物可以强化免疫机能，并对营养素的消化率、肠粘
膜形态起着有益的作用，在应激条件下YC添加量可适当提高。本试验旨在研究酵母培养物（YC）对产蛋鸡生产性能和鸡蛋品质的影响。武书庚等（2010）研究了酵母培养物对产蛋鸡生产性能和蛋品质的影响，在玉米-豆粕-杂粕型饲粮基础上添加适量YC，结果表明，产蛋鸡饲粮中添加YC能够改善料蛋比、提高产蛋率和平均蛋重、延长产蛋高峰期、降低死淘率；添加0.22％YC在改善平均蛋重、料蛋比、平均日采食量方面表现优异。张爱忠等（2010）研究了酵母培养物对绒山羊机体抗氧化能力的影响，结果表明，与对照组相比，添加酵母培养物各组血清谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活力提高33.24%～142.52%，血浆超氧化物歧化酶（SOD）的活力及总抗氧化能力（T-AOC）都显著提高，由此可知，日粮中添加酵母培养物可以提高绒山羊机体的抗氧化能力。
2.5富集微量元素酵母
微量矿物元素硒、铬、锌等对动物的生长和繁殖有很大影响。动物体内含硒约0.05~0.2mg/kg，肌肉中硒总含量最多，肾肝中硒浓度最高，体内硒一般与蛋白质结合存在，硒营养生物学功能最重要的是作为硒蛋白、含硒酶的必要成分，如硒能活化对肝脏等组织有保护作用的酶系统，还可以通过活化谷胱甘肽过氧化物酶预防细胞膜的氧化，在机体内发挥抗氧化作用，抑制脂质过氧化，消除过多自由基，从而保护生物体的膜结构与功能，目前已在哺乳动物体内发现含硒酶类和含硒蛋白30多种，功能各异。铬是机体必需微量元素，是葡萄糖耐量因子（GTF）的主要活性成分，能间接通过胰岛素和直接调控碳水化合物、脂肪、蛋白质的代谢，可以有效提高动物机体免疫力，显著地促进动物生长，改善胴体品质和繁殖性能等。锌是动物生长所必需的微量元素之一，已证明锌参与体内120多种酶的生物合成，调节300多种酶促反应，合理的锌含量可以保证动物各组织、器官功能处于最佳的功能状态，促进动物生长，强化防御能力、免疫系统，增强动物对疾病的抵抗能力。
微量元素分为无机类和有机类两大类。长期以来，养殖厂多以无机形式如亚硒酸钠、氯化锌等作为畜禽的主要微量元素添加剂，但很多研究发现，无机形式的矿物元素毒性大、吸收转化率低，对动物和环境造成不良影响。硒的吸收是在小肠中进行，无机硒是被动吸收，而硒代蛋氨酸与蛋氨酸的吸收方式相似，是以氨基酸的运输机制主动吸收。有机硒还能通过母体传递给后代，其效果大大优于无机硒。因此，有机矿物元素利用率比无机形式的高，是目前研究开发的热点，富集微量元素酵母即是有机形式的一种。在酵母培养过程中加入亚硒酸钠等形式的无机矿物元素，利用酵母菌代谢作用将无机矿物元素转化为有机形式并富集的一种微生物发酵产物，如酵母硒是以硒代氨基酸的形式存在，酵母铬是活性肽、烟酸和三价铬的复合物，酵母微量元素具有结合率高、生物活性强、利用率高和安全性好等特点。郝素娥等（1999）报道，硒酵母中有机硒含量可达总硒量的90%，主要存在形式是硒代蛋氨酸（70%）和硒代胱氨酸（20%）。
Heugten等（1997）研究证明，断奶仔猪在应激状况下日粮中添加0.2mg/kg有机铬可以提高体液免疫功能；长途运输应激的犊牛精料中补加0.2～1.0mg/kg 有机铬，不仅能提高生长速率，而且还可以提高血清免疫球蛋白浓度，降低应激发病率。赵金香（2009）研究表明，饲料中添加酵母锌可以提高断奶仔猪的平均日采食量，降低饲料的料肉比，日粮中添加200mg/kg 酵母锌即可达到添加2000mg/kg氯化锌的促生长效果，同时添加酵母锌组的腹泻率远低于添加氯化锌组。Mahan等（2004）和Yoon等（2006）研究表明，在妊娠母猪日粮中添加0.3mg/kg有机硒，可降低每窝胎数死亡率；添加0.15mg/kg有机硒，可增加每窝总活产仔数。贾建英等（2007）研究表明，在母猪饲料中添加酵母硒可提高未断奶仔猪肠道中的乳酸杆菌数量，同时降低大肠杆菌数量。
3小结
抗生素的滥用给我国畜牧业的发展带了诸多问题和挑战，研究开发新型饲料添加剂以替代抗生素是当前迫切需要解决的问题。酵母源饲料添加剂是一类天然、绿色的生物产品，在维护动物胃肠道生态平衡、提高动物免疫力和改善动物繁殖性能等方面具有良好的应用前景，采用生物技术开发酵母类产品及其应用研究已成为饲料工业一个活跃领域。然而，我国酵母源饲料添加剂产品质量参差不齐，鱼目混珠的也较多，严重扰乱了市场秩序，给用户造成巨大损失，因此，国家相关部门需制定相关产品质量标准和有效的检测方法，加强对产品质量和市场的监管力度，同时，企业应加大研发力度，不断开发新产品和改进生产工艺，提高产品质量，降低生产成本，提高产品竞争力，
缩短与国际上的差距。
参考文献
[1]Ofek I，Mirelman D，et al．Adherence of E.coli to human mucosal
cells media ted by mannose receptors[J]．Nature，1977，265：623-625．
[2]王学东．活性干酵母对生产母猪生产性能的影响[J]，中国饲料，
2006（17）：17-19．
[3]Rozeboom D W，Shaw D T．Effects of mannan oligosaccharide and
antimicrobial product in nursery diets on performance of pigs reared on three different farms[J]．Journal of Animal Science，2005，83：2637-2644.
[4]崔保安，杨明凡，等．有机硒和某些中草药对鸡免疫功能的影响[J].
畜牧与兽医，2003，35(10)：37-38．
[5]黄志坚，黄依明，等．两种有机铬对母猪繁殖的效应试验[J].养猪，
2001（4）：9-10．
[6]庄惠君，卢素琳，等．富硒蘑菇对小鼠脂质过氧化一氧化氮含量
和精子质量的研究[J].微量元素与健康研究，2004，21(3)：3-6．[7]李海红，同帜，等．玉米秸秆发酵生产蛋白质饲料的研究[J]．西北
大学学报，2003，33(6)：693-696．
[8]侯文华，李枚一，等．利用酒糟生产饲料蛋白的菌种选育[J]．环境
科学，1999，20(1)：77-79．
[9]刘汉灵.高效酵母水解专用酶制剂的开发及其应用研究[J]．中国
食品添加剂，2007（4）：147-150．
[10]徐栋.高压匀质与酶法破碎酵母细胞壁的工艺条件研究[J]．饲料
工业，2009，30(12)：44-47．
[11]孙海翔，尹卓容，等．高压均质破碎啤酒酵母细胞壁的研究[J]．食
品工业科技，2002，23(2)：66-67．
[12]Danny M H．Turkey Pen Trials with Dietary Mannan
Oligosaccharide:Meta～analysis,1993～2003[J]．International
Journal of Poultry Science，2004，3(3)：179-188．
[13]阎桂玲，袁建敏，等．啤酒酵母甘露寡糖对肉鸡肠道微生物及免
疫机能的影响[J]．中国农业大学学报，2008，13(6)：85-90．[14]S Firmin,P Gandia,et al．Modification of aflatoxin B1and
ochratoxin A toxicokinetics in rats administered a yeast cell wall
preparation[J]．Food Additives&Contaminants,2010,27(8)：1153-1160．
[15]迟淑艳，周歧存，等．β-葡聚糖对奥尼罗非鱼生长性能及抗嗜水
气单胞菌感染的影响[J].中国水产科学，2006，13(5)：767-774．[16]张红梅，姜会民．酵母甘露寡糖对鲤鱼非特异性免疫的影响[J].
饲料研究，2006（10）：9-11．
[17]Chang C F，Su M S，et al．Effect of dietary beta-1,3-glucan on
resistance to white spot syndrome virus(WSSV)in postlarval and
juvenile Penaeus monodon[J]．https://www.doczj.com/doc/d317314356.html,an，1999，36：163-
168．
[18]高海，李秀岚，等．外源性核酸对感染传染性法氏囊病毒（IBDV）
雏鸡免疫功能和抗氧化能力的影响[J].中国兽医学报，2009，29
(5)：637-642．
[19]谭斌．饲用高活性干酵母的研发[D]．华中农业大学，2008．
[20]李琅，戴晋军，等．酵母对奶牛生产性能的影响[J]．饲料与畜牧，
2008(9)：52-54．
[21]蒋小艺，杨得坡，等．几种不同酵母菌添加剂对奶牛产奶量及乳
成分的影响[J].中国乳品工业，2007，35(10)：30-33．
[22]刘庆华，杨晓娇．活性干酵母添加水平对产蛋初期铁脚麻种鸡
生产性能的影响[J].家畜生态学报，2009（5）：66-69．
[23]刘宗英，姚鹃，等．高活性干酵母对中华鳖非特异性免疫功能和
抗病力的影响[J].华中农业大学学报，2005，24(2)：192-196．[24]Chancheyras F，Fonty G．Estabhlishment of cellulolytic bacteria
and development of ferm entative activities in the rumen of
gnotobiotically-reared lambs receiving the microbial additive
Saccharomyces cerevisiae CNCM I-1077[J]．Reprod Nutr Dev，2001，41：57-68．
[25]Chaucheyras F，Fonty G．Influence of a probiotic yeast
(Saceharomyces cerevisiae CNCMI-1077)on microbial colonization
and fermentation in the rumen of newborn lambs[J]．Microb.Ecol.
Health Dis.,2002,14：30-36．
[26]Alshaikh M A，Alsiadi S M，et al．Effect of feeding yeast culture
from different sources on the performance of lactating Holstein
cow in Saudi https://www.doczj.com/doc/d317314356.html,n～Australias[J]．Journal of Animal
Science，2002，15：352-356．
[27]汪德明，杨联，等．酵母培养物对仔猪生长发育的影响[J]．甘肃农
业大学学报，2008，43(3)：52-55．
[28]高俊．酵母培养物对肉仔鸡的作用及其机理[D]．中国农业科学
院，2008．
[29]姚晓红，吴逸飞，等．酵母培养物对奶牛生产性能的影响[J].中国
饲料，2009（2）：22-23,26．
[30]武书庚，刘质彬，等．酵母培养物对产蛋鸡生产性能和蛋品质的
影响[J].动物营养学报，2010，22(2)：365-371．
[31]张爱忠，卢德勋，等．酵母培养物对绒山羊机体抗氧化能力的影
响[J].动物营养学报，2010，22(3)：781-786．
[32]郝素娥，滕冰．硒酵母中有机硒及硒代氨基酸含量的测定方法[J].
分析测试学报，1999，18(3)：72-74．
[33]E V Heugten，J W Spears．Immune response and growth of stressed
weanling pigs fed diets supplemented with organic or inorganic
forms of chromium[J]．Journal of Animal Science，1997，75(2)：409-416．
[34]赵金香，孙会．酵母锌对断奶仔猪生长性能及抗氧化作用的影
响[J]．中兽医医药杂志，2009，28(4)：52-54．
[35]Mahan D C，Peters．Long～term effects of dietary organic and
inorganic selenium sources and levels on reproducing sows and
their progeny[J]．Journal of Animal Science，2004，82：1343-1358．[36]Yoon I，E Mcmillan．Comparative effects of organic and inorganic
on selenium transfer from sows to nursing pigs[J]．Journal of
Animal Science，2006，84：1729-1733．
[37]贾建英，王康宁，等．饲喂酵母硒对母猪头胎断奶仔猪肠道微生
物的影响[J]．饲料广角，2007（7）：23-24．
（编辑：王芳，xfang2005@https://www.doczj.com/doc/d317314356.html,）
酵母菌的培养和观察 目的认识酵母菌的形态特征，了解培养酵母菌的方法。 实验前的思考人类认识和利用酵母菌的历史悠久，早在史前时期，先人们就学会酿酒。约在6000年前，就发明发面的方法。直到十九世纪有了显微镜，人们才窥探到醉母菌的真面目。对酵母菌做纯系培养分类研究的是与巴斯德同时代的丹麦人汉斯，他是为寻求酿造高品质啤酒的途径才去深入研究酵母菌的。 材料器具甜酒酿汁液，新鲜酵母，豆芽；显微镜，载玻片，盖玻皮，玻璃棒，镊子，滴管，吸水纸，酒精灯，石棉网，火柴，漏斗架，玻璃斗，量杯，三角烧瓶，烧杯，天平，量筒，棉絮；蔗糖，乳酸，碘液。 步骤 1．观察酵母菌 （1）用滴管从甜酒酿的汁液中吸取一滴汁液，滴在载玻片上，用针摊开，盖上盖玻片，在低倍镜下就能清楚地看到甜酒酿的汁液中悬浮着无数酵母菌。再换高倍镜仔细观察一个酵母菌，可以看到酵母菌是椭圆形的单个细胞，细胞中有许多小颗粒，也有几个大的液泡（图示）。有的酵母菌的一端长出大小不同的突起，这是酵母菌的芽体。芽体成长脱落，就成为新的个体，有的芽体在从母体脱落前又长出突起。这种繁殖方法叫出芽繁殖。 （2）在盖玻片一边加一滴碘液，从另一边用吸水纸把染液引入盖玻片下。不久就能看到被染成棕褐色的细胞核和变成蓝紫色的淀粉粒。 2．培养酵母菌 （1）用蔗糖液培养在盛有100毫升的三角烧瓶里加5克蔗糖，煮沸。等到溶液稍稍冷却，加一小块鲜酵母，用玻璃棒搅拌均匀；再用棉絮塞紧瓶口。然后把烧瓶放在25～30℃的温暖地方，数小时后就可见到溶液里有气泡产生，并散发出酒味。这是因为酵母菌正在把糖分解成乙醇和二氧化碳。 （2）二三天后吸取溶液在显微镜下观察，就可看到已培养出大量酵母菌。
BY4741酿酒酵母菌 BY4741Strain BY4741菌信息： 培养基：YPD 菌株类别：酵母菌 培养条件：28℃，有氧，YPD 质粒转化：电激 保存方式：30%甘油，-20℃ 基本应用：用于蛋白表达 BY4741菌使用说明： 四区划线培养，挑单菌落接种培养使用并保存甘油菌。 BY4741操作说明： 1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 2，为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆菌落进行后续操作。 冷冻管开封： 用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。 BY4741菌株复溶： 无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取1ml左右复溶液，加入到冷冻管中。轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。 BY4741菌株复壮： 用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培养。细菌在30-35℃培养箱中培养24-48h，真菌在23-28℃培养箱中培养24-72h（必要时，可适当延长培养时间）。 BY4741菌株传代： 将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中（尽量增大接种量：如用无菌吸管吸取≥50μl新鲜培养物至固体培养基，边移动边缓慢释放），适宜温度下培养，用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。 注意事项： 1、菌种活化前，将冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中，长时间室温下放置会导致
菌种衰退； 2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行； 3、一些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，部分需连续两次继代培养才能正常生长； 4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基，敬请正确选择，不清楚时来电询问； 5、某些厌氧菌的培养，自开封到接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧状态；培养过程中亦要保持厌氧状态； 6、某些菌种，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要5-10%CO2促进生长； 7、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况，应停止使用对应产品。 8、部分菌种有致病性、扩散性，请专业人员在专业环境下有保护性操作。 BY4741菌保藏条件： -20℃保存（复溶液于2-8℃保存） 保藏时间： 2-10年，应根据菌种状况及时转接
2008, Vol. 29, No. 02 食品科学※生物工程 210收稿日期：２００７－０１－１５ 基金项目：黑龙江省科学技术厅青年基金项目（ＱＣＯ４Ｃ３３）；黑龙江省教育厅一般项目（１０５５１２３３）； 黑龙江大学青年基金项目（ＱＬ２００４３５） 作者简介：葛菁萍（１９７２－），女，教授，博士，研究方向微生物学。Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｅｊｉｎｇｐｉｎｇ５１２＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ＊通讯作者：平文祥（１９５９－），男，教授，学士，研究方向微生物学。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｅｎｘｉａｎｇｐ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ 乙醇脱氢酶Ｉ基因敲除的酿酒酵母重组菌 构建的初步研究 葛菁萍，宋 刚，孙宗祥，凌宏志，蔡柏岩，刘松梅，平文祥＊ （黑龙江大学 微生物黑龙江省高校重点实验室，黑龙江 哈尔滨 １５００８０） 摘 要：本实验根据酿酒酵母乙醇代谢途径，构建一株低乙醇产量的酿酒酵母基因工程菌株，以满足人们对低醇啤酒的需要。利用抗性基因筛选基因敲除突变体的方法，通过引物Ｌ１和Ｌ２扩增潮霉素Ｂ基因（两翼与酿酒酵母同源），按常规醋酸锂法转化酵母细胞后，筛选标记与酵母ａｄｈ Ｉ基因发生同源重组，得到一株ＡＤＨ Ｉ酶活性降低的工程菌株。发酵实验结果表明，转化菌株乙醇含量平均值为１．８％（Ｖ／Ｖ），较原始菌株低了６５％。说明转化菌株体内乙醇生成途径受到干扰。 关键词：酿酒酵母；基因敲除；乙醇脱氢酶Ｉ Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｏｆ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ Ａｌｃｏｈｏｌ Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎｉａｓｅ Ｉ Ｇｅｎｅ ＧＥ Ｊｉｎｇ－ｐｉｎｇ，ＳＯＮＧ Ｇａｎｇ，ＳＵＮ Ｚｏｎｇ－ｘｉａｎｇ，ＬＩＮＧ Ｈｏｎｇ－ｚｈｉ，ＣＡＩ Ｂａｉ－ｙａｎ，ＬＩＵ Ｓｏｎｇ－ｍｅｉ，ＰＩＮＧ Ｗｅｎ－ｘｉａｎｇ＊（Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ， Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｈａｒｂｉｎ １５００８０， Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ ：Ｔｈｅ ｍａｉｎ ｐｕｒｐｏｓｅ ｏｆ ｔｈｉｓ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｓ ｔｏ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ ａ ｌｏｗ ａｌｃｏｈｏｌ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｔｒａｉｎ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ａｌｃｏｈｏｌ ｍｅｔａｂｏｌｉｃｐａｔｈｗａｙ ｏｆ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ， ｓｏ ａｓ ｔｏ ｓａｔｉｓｆｙ ｔｈｅ ｐｅｏｐｌｅ ｗｈｏ ｐｒｅｆｅｒ ｔｏ ｄｒｉｎｋ ｌｏｗ－ａｌｃｏｈｏｌ ｂｅｅｒ． Ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ Ｂ ｒｅｓｉｓｔａｎｔｇｅｎｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｃｒｅｅｎ ｍｕｔａｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｈ Ｉ ｇｅｎｅ ｋｎｏｃｋｅｄ ｏｕｔ． Ａｆｔｅｒ Ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ Ｂ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｇｅｎｅ ｗａｓ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｗｉｔｈ ｐｒｉｍｅｒｓＬ１ ａｎｄ Ｌ２ （ｔｈｅ ｆｌａｎｋｉｎｇ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｗｉｔｈ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ｇｅｎｅ）， ｉｔ ｗａｓ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｉｎｔｏ ｙｅａｓｔ ＨＤＹ－０１ ｂｙ ＬｉＡｃ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｔｈｅ ａｌｃｏｈｏｌ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ Ｉ （ＡＤＨ Ｉ） ｉｎ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ｗａｓ ｄｅｌｅｔｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ． Ａ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｌｏｗ ＡＤＨ Ｉ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ｔｈｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｔｅｓｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ａｌｃｏｈｏｌｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔ ｉｓ １．８％（Ｖ／Ｖ）， ６５％ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｏｒｉｇｉｎ ｏｎｅ． Ｔｈｅ ａｌｃｏｈｏｌ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｔｈｉｓ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔｉｓｉｎｔｅｒｆｅｒｅｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ；ｇｅｎｅ ｄｅｌｅｔｉｏｎ；ａｌｃｏｈｏｌ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ Ｉ （ＡＤＨ Ｉ） 中图分类号：ＴＳ２６２５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２－６６３０（２００８）０２－０２１０－０３ 啤酒是以麦芽为主要原料，添加酒花，经酵母发 酵酿制而成的，是一种含二氧化碳、起泡和低酒精度的饮料酒［１］。其酒精的含量一般为３％～４％（Ｖ／Ｖ）。随着人们生活水平的提高及口味的多样化，低醇乃至无醇啤酒成为部分消费人群的首选。目前，世界上生产无醇啤酒的方法主要有二大类［２］：一是以限制发酵方法来降低制酒发酵过程中生成乙醇的量；另一类是在后发酵过程中将产生的乙醇除去。 随着基因工程技术的快速发展，以及对酿酒酵母基因的深入研究，从代谢途径出发，构建低乙醇产量的酿酒酵母基因工程菌株，可在不改变原有啤酒工艺的基础上，实现低醇乃至无醇啤酒的生产。但目前有关这 方面的研究报道几乎未见到。从酵母代谢途径可知，控制乙醇含量的两个酶是乙醇脱氢酶Ｉ（ＡＤＨ Ｉ）与乙醇脱氢酶ＩＩ（ＡＤＨ ＩＩ）。ＡＤＨ Ｉ的作用是将乙醛变成乙醇，ＡＤＨＩＩ的作用是将乙醇转变为乙醛［３］。 本实验利用抗性基因筛选基因敲除突变体的方法［４］，通过ＰＣＲ技术获得一段带有筛选标记和酵母同源区域的目的基因，通过常规醋酸锂转化法，使筛选标记与酵母ａｄｈ Ｉ基因发生同源重组，得到一株ＡＤＨ Ｉ酶活性降低的工程菌株。１材料与方法１．１ 菌种与质粒
146种培养基配方 ——2009年2月1日星期日by尛森蟲1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8 适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种 2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂) Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30g NaCl 5g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2 [Note]：When cultivation of Bacillus，5mg of to MnSO4.H2O may be added . It is favorable to promote spore formation . 适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(青虫菌)、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌(大肠杆菌)、铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌 3. Azotobacter Medium (固氮菌培养基) KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8g MgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O0.1ｇ Na2MoO4.2H2O Trace(微量) Yeast axtract(酵母膏) 0.5g Mannitol(甘露醇) 20g FeCl3 Tract(微量) Distilled water (蒸馏水) 1000ml Agar (琼脂) 15g Adjust (调) pH to 7.2 适用范围：固氮菌、胶质芽孢杆菌 4. Corn Meal Medium (玉米粉培养基) Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1g Glucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml [Note]:Boil the mixture in autoclave at 121℃for 1 hr. distribute the medium into 18ⅹ18 mm tubes , each contains 10 ml of the li quid , then autoclave at 121℃for 1 hr . again (15磅蒸煮1小时,分装入18ⅹ18毫米试管,每管深度达6厘米。15磅再次灭菌15小时。) 5. Lactic-bacteria Medium I (乳酸菌培养基I ) Yeast extract (酵母膏) 7.5g Peptone (蛋白胨) 7.5g Glucose (葡萄糖) 10g KH2PO4 2g Tomato juice (西红柿汁) 100ml Tween (吐温) 80 0.5ml Distilled water (蒸馏水) 900ml pH 7.0 适用范围：植物乳杆菌(胚芽乳杆菌)、嗜热乳酸链球菌 6. Lactic-bacteria Midium Ⅱ(乳酸菌培养基Ⅱ) Lacto-casein peptone (乳酪蛋白胨) 10g Beef extract (蛋白胨) 10g Yeast extract (酵母膏) 5g Glucose (葡萄糖) 5g Tween (吐温) 80 1g K2HPO4 2g Na-acetate (醋酸钠) 5g Diamine citrate (柠檬酸二胺) 2g MgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.H2O 0.05g Distilled water (蒸馏水) 1000m pH 6.5-6.8 适用范围：植物乳杆菌(胚芽乳杆菌) 7. Peotone Glucose Yeast extract Medium PGY (蛋白胨、酵母膏、葡萄糖培养基)
146种培养基配方 1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用） 牛肉膏3g 蛋白胨5g 氯化钠10g 琼脂15~20g pH 7.0~7.2 水1000mL 2、2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用） 可溶性淀粉20g 硝酸钾1g 氯化钠0.5g 磷酸氢二钾0.5g 硫酸镁0.5g 硫酸亚铁0.01g 琼脂20g 水1000mL pH 7.2～7.4 配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。121℃灭菌20min。 查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用） 硝酸钠2g 磷酸氢二钾1g 氯化钾0.5g 硫酸镁0.5g 硫酸亚铁0.01g 蔗糖30g 琼脂15~20g 水1000mL pH 自然 121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用） 葡萄糖10g 蛋白胨5g 磷酸二氢钾1g 七水合硫酸镁0.5g 1/3000孟加拉红 100mL （rose bengal，玫瑰 红水溶液） 琼脂15—20g pH 自然 蒸馏水800mL 112℃灭菌30min。 临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。 5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用） 马铃薯200g 蔗糖（或葡萄糖）20g 琼脂15—20g pH 自然 培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。121℃灭菌30min。 6、麦芽汁琼脂培养基 培养基的配制： (1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。 (2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 (3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 (4)、将滤液稀释到5—6波美度，pH约6.4，加入2%琼脂即成。121℃灭菌30min。 7、无氮培养基（自生固氮菌、钾细菌）
安在时(重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母)) 【药品名称】 商品名称：安在时 通用名称：重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母) 英文名称：Hepatitis B Vaccine Made by Recombined DNA Techniques in Yeast 【成份】 本品系由重组酵母表达的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）经纯化、加佐剂吸附后制成 【适应症】 乙肝易感者，包括婴幼儿、儿童和因职业关系可能接触乙肝病毒的成年人。接种对象应为乙肝病毒表面抗原阴性和转氨酶正常者。 【用法用量】 5 g/次，注射部位为上臂三角肌内，第一针注射后，于1个月和6个月后重复注射，总共3次。 【不良反应】 偶见注射部位红肿或疼痛、发热和头痛 【禁忌】 患有发热、急性或慢性严重疾病者及对酵母成分过敏者禁止使用 【注意事项】 1注射于上臂三角肌内。2应备有肾上腺素，在过敏反应时使用。3用前摇匀，有摇不散的块状物不得使用。4另有乙肝基因工程疫苗为中国仓鼠卵巢细胞分泌的乙肝表面抗原加佐剂氢氧化铝制成，每支10&mu；g，用法同本品。 【药物相互作用】
暂不明确 【药理作用】 1 基因工程疫苗能诱导抗体产生，通过主动免疫方式使人体获得对乙肝病毒的抵抗力。临床上证明本疫苗所产生的抗体几何平均滴度远高于有效保护水平（>10 miu/mL）。 2 用每支5 μg的剂量，经三次接种，即可达到满意的免疫效果，保护率在95%以上，母婴阻断率达85%以上，能有效降低乙型肝炎的感染和病毒携带率，为控制乙肝传播的重要手段和预防肝细胞癌的有效方法之一。 3 基因工程疫苗完全不同于血源乙肝疫苗，不需要乙肝病毒携带者的血浆作为生产原料，因此更安全、高效。本品是一种乙型肝炎表面抗原亚单位疫苗，系采用现代生物技术将乙肝病毒表面抗原基因，克隆进入酵母菌中，通过培养这种重组酵母菌来获取乙型肝炎表面抗原。 【贮藏】 密封保存 【批准文号】 S2*******
常用抗生素 氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml） 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml） 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林（methicillin）（100mg/ml） 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml） 溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml） 溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素（streptomycin）（50mg/ml） 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml） 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素（tetracyyline）（10mg/ml） 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。(实验室一般都不调PH) SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1 mol/L 氯化钾2.5ml
发酵乳中酵母菌和乳酸菌生长的相互影响 李先胜姜铁民陈历俊* (1 大连工业大学大连 116034 2 北京三元食品股份有限公司北京 100085) 摘要：探讨了乳酸菌和酵母菌之间的相互作用。在发酵过程中，酿酒酵母对乳酸菌的生长有抑制作用。乳酸菌能促进酿酒酵母和马克思克鲁维酵母的生长。酿酒酵母和乳酸菌共同接种有利于保持产品冷藏期间活菌数的稳定，菌株之间可能存在共生作用。 关键词：乳酸菌，酵母菌，相互作用 The growth interaction between lactic acid bacteria and yeast in fermentation milk LI Xian-Sheng JIANGTie-Min CHEN Li-Jun* （1. Dalian Polytechnic University, Dalian 116034; 2. Beijing Sanyuan Foods CO., Ltd, Beijing 100085）Abstract：Various interactions between lactic acid bacteria and yeasts yeasts were investigated.In details,the growth of lactic acid bacteria during fermentation was inhibited by the addition of Saccharomyces cerevisiae．The addition of lactic acid bacteria advanced the growth of Saccharomyces cerevisiae and Kluyveromyces marxianus.A positive interaction between Saccharomyces cerevisiae and lactic acid bacteria was observed during cold storage to improve the viability of each other. Key word：lactic acid bacteria;yeast;interaction 酵母菌广泛存在于自然界中，它们经常存在于商业和传统的发酵乳制品中。有研究报道在发酵乳制品中酵母菌的数量在103-107之间[1-5]。在酸奶中酵母菌被认为是污染物，它们是酸奶变质的主要原因[6]，但在一些商业化的乳制品（kefir和koumiss）中，酵母能够为产品带来期望的香气和风味[7]。在发酵乳制品生产加工过程中起主要作用的是乳酸菌的乳酸发酵，酵母菌所产生的风味物质等代谢产物也能影响乳制品的品质。近年来，不断发现酵母菌作为附属发酵剂对乳制品发酵和成熟过程中的风味影响、抑制有害菌的生长及对人体的潜在益生 基金资助：国家科技部“十一五”支撑计划（2009BADB9B06）； 国家“863”计划(2011AA100903)； 北京市科技计划(D10110504600000)。 作者简介：李先胜，男，硕士 *通讯作者：陈历俊，chlj@https://www.doczj.com/doc/d317314356.html,
重组乙肝疫苗接种告知书（酿酒酵母） 乙型肝炎是由乙型肝炎病毒引起的一种传染病，通过血液、体液和母婴传播。急性肝炎临床症状有疲倦、厌食、恶心、呕吐、皮肤巩膜黄染等。大多数的急性乙肝感染可完全康复，但部分人特别是婴幼儿可成为慢性乙肝携带者，随后可能发展成为慢性肝病、肝硬化或肝癌。我国是乙肝高发国，目前有1. 2亿人携带慢性乙肝病毒，慢性乙肝患者约3000万人。乙肝病毒在体内不断复制使得肝脏发生炎性病变，肝细胞受损，而且还可能恶变成肝硬化和肝癌，威胁生命。在我国，71%的肝癌是由乙型肝炎发展而来的。 接种乙肝疫苗是预防乙肝最有效的手段。本疫苗由重组酿酒酵母表达的乙肝病毒表面抗原经纯化，加入佐剂吸附后制成，抗原含量为10ug/0. 5ml。 【接种对象】可以在出生后任何年龄段使用，推荐用于处于乙肝病毒感染风险较高的人群，如从事医疗工作的医护人员及接触血液的实验人员。 【接种程序】全程接种3针，接种时间分别为0、l、6月，即第一针在出生后24小时内接种；第二针在第一针接种后1个月接种；第三针在第一针接种后6个月接种。 【接种反应】常见局部不良反应有注射部位疼痛、红斑和肿胀，大多轻微，一般在兔疫接种2天后消失。常见和偶见的全身不良反应有发热、头晕、头痛、食欲下降、恶心、呕吐、腹痛、腹泻、肌痛、疲劳、皮疹和瘙痒等。 【接种禁忌】对酵母或疫苗任一成分过敏者禁用，患严重发热性疾病、急慢性严重疾病患者禁用。 注意：接种时请带上儿童预防接种证和本告知书。 备注：《疫苗流通和预防接种管理条例》规定，疫苗分为第一类、第二类疫苗，第一类疫苗由政府免费向公民提供接种，第二类疫苗是公民自费并且自愿受种的疫苗，本疫苗属于第二类疫苗。 酿酒酵母乙肝疫苗接种回执（第针） 儿童姓名：出生日期：年月日户籍：常住□流动□ 接种当日儿童体温：℃上次接种疫苗后有无异常反应：□有□无 有无禁忌症：□有□无 阅读上述说明后如自愿接种本疫苗（替代一类疫苗）并按照该疫苗程序接种，请签名确认；如暂不接种，也请签名确认备档，表明您已明确上述疾病的危害。 □同意接种 家长（监护人）签名 年月日 □不同意接种 家长（监护人）签名 共接种3针，具体接种程序见上“接种程序”一栏自费 年月日
酵母菌、霉菌常用培养基得配制 一、目得要求 了解合成培养基、半合成培养基与天然培养基得配制原理、学习与掌握麦芽汁培养基、马铃薯葡萄糖培养基、豆芽汁葡萄糖培养基与察氏培养基得配制方法。 二、基本原理 麦芽汁培养基与马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养酵母菌与霉菌。马铃薯葡萄糖培养基有时也可用于培养放线菌。豆芽汁葡萄糖培养基也就是培养酵母菌及霉菌得一种优良培养基。察氏培养基主要用于培养霉菌观察形态用。麦芽汁培养基为天然培养基,马铃薯葡萄糖培养基与豆芽汁葡萄糖培养基二者均为半合成培养基,而察氏培养基则为合成培养基。培养基配方中出现得自然pH系指培养基不经酸、碱调节而自然呈现得ｐH。 三、实验材料 (一)药品 葡萄搪、蔗糖、NaN03、K2HＰ０4、KCl、ＭｇSO4·７H2O,ＦｅＳ04、琼脂。(二)仪器 天平、高压蒸汽灭菌锅。 (三)玻璃器皿 移液管、试管、锥形瓶、烧杯、量筒、培养皿、玻璃漏斗等。 (四)其她物品 药匙、ｐH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸、新鲜麦芽汁、黄豆芽、马铃薯等。 四、实验内容 (一)麦芽汁培养基得配制 １、培养基成分 新鲜麦芽汁一般为1０—15波林、 2.配制方法
(1)用水将大麦或小麦洗净,用水浸泡６—1２h,置于15℃阴凉处发芽,上盖纱布,每日早、中、晚淋水一次,待麦芽伸长至麦粒得两倍时,让其停止发芽,晒干或烘干,研磨成麦芽粉,贮存备用。 (２)取一份麦芽粉加四份水,在６5℃水浴锅中保温3-4h,使其自行糖化,直至糖化完全(检查方法就是取0。5mｌ得糖化液,加２滴碘液,如无蓝色出现,即表示糖化完全)。 (3)糖化液用4-6层纱布过滤,滤液如仍混浊,可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清,加水20m1,调匀至生泡沫,倒入糖化液中,搅拌煮沸,再过滤)、 (4)用波美比重计检测糖化液中糖浓度,将滤液用水稀释到１0—15波林,调ｐH 至6、4。如当地有啤酒厂,可用未经发酵,未加酒花得新鲜麦芽汁,加水稀释到1０—1５波林后使用。 (5)如配固体麦芽汁培养基时,加入2%琼脂,加热融化,补充失水。 (６)分装、加塞、包扎、 (7)高压蒸汽灭菌100 Pa灭菌20 ｍｉｎ。 (二)马铃薯葡萄糖培养基得配制 1、培养基成分 马铃薯20ｇ 葡萄糖 2 g 琼脂1、5—２g 水100mｌ自然ｐH 2.配制方法 (1)配制２0％马铃薯浸汁取去皮马铃薯200g,切成小块,加水１000m１。80℃浸泡lh,用纱布过滤,然后补足失水至所需体积、10０Pａ灭菌２0 min。即成20％马铃薯浸汁,贮存备用、
霉菌和酵母菌介绍及检测方法 一、霉菌和酵母菌介绍： 霉菌和酵母菌及其检验酵母菌是真菌中的一大类，通常是单细胞，呈圆形,卵圆形、腊肠形或杆状。霉菌也是真菌，能够形成疏松的绒毛状的菌丝体的真菌称为霉菌。 霉菌和酵母广泛分布于自然界并可作为食品中正常菌相的一部分。长期以来，人们利用某些霉菌和酵母加工一些食品，如用霉菌加工干酪和肉，使其味道鲜美；还可利用霉菌和酵母酿酒、制酱；食品、化学、医药等工业都少不了霉菌和酵母。但在某些情况下，霉菌和酵母也可造成中腐败变质。由于它们生长缓慢和竞争能力不强，故常常在不适于细菌生长的食品中出现，这些食品是pH低、湿度低、含盐和含糖高的食品、低温贮藏的食品，含有抗菌素的食品等。由于霉菌和酵母能抵抗热、冷冻，以及抗菌素和辐照等贮藏及保藏技术，它们能转换某些不利于细菌的物质，而促进致病细菌的生长；有些霉菌能够合成有毒代谢产物－霉菌毒素。霉菌和酵母往往使食品表面失去色、香、味。例如，酵母在新鲜的和加工的食品中繁殖，可使食品发生难闻的异味，它还可以使液体发生混浊，产生气泡，形成薄膜，改变颜色及散发不正常的气味等。因此霉菌和酵母也作为评价食品卫生质量的指示菌，并以霉菌和酵母计数来制定食品被污染的程度。目前已有若干个国家制订了某些食品的霉菌和酵母限量标准。我国已制订了一些食品中霉菌和酵母的限量标准。 二、检验方法： 霉菌和酵母的计数方法，与菌落总数的测定方法基本相似。主要步骤为：将样品制作成10倍梯度的稀释液，选择3个合适的稀释度，吸取1mL于平皿，倾注培养基后，培养观察，计数。对霉菌的计数，还可以采用显微镜直接镜检计数的方法。 具体检测标准参见： GB4789.15-94，《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物检验霉菌和酵母计数》三、说明： 1．样品的处理。为了准确测定霉菌和酵母数，真实反映被检食品的卫生质量，首先应注意样品的代表性。对大的固体食品样品，要用灭菌刀或镊子从不同部位采取试验材料，再混合磨碎。如样品不太大，最好把全部样品放到灭菌均质器杯内搅拌2min。液体或半固体样品可用迅速颠倒容器25次来混匀。 2．样品的稀释：为了减少榈稀释倍数的误差，在连续递增稀释时，每一稀释度应更换一根吸管。在稀释过程中，为了使霉菌的孢子充分散开，需用灭菌吸管反复吹吸50次。 3．培养基的选择：在霉菌和酵母计数中，主要使用以下几种选择性培养基。 马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基（PDA）：霉菌和酵母在PDA培养基上生长良好。用PDA作平板计数时，必项加入抗菌素以抑制细菌。 孟加拉红（虎红）培养基：该培养基中的孟加拉红和抗菌素具有抑制细菌的作用。孟加拉红还可抑制霉菌菌落的蔓延生长。在菌落背面由孟加拉红产生的红色有助于霉菌和酵母菌落的计数。 高盐察氏培养基：粮食和食品中常见的曲霉和青霉在该培养基上分离效果良好，它具有抑制细菌和减缓生长速度快的毛霉科菌种的作用。 4．倾注培养。每个样品应选择3个适宜的稀释度，每个稀释度倾注2个平皿。培养基熔化后冷却至45℃，立即倾注并旋转混匀，先向一个方向旋转，再转向相反方向，充分混合均匀。培养基凝固后，把平皿翻过来放温箱培养。大多数霉菌和酵母在25－30℃的情况下生长良好，因此培养温度25~28℃。培养3d后开始观察菌落生长情况，共培养5d观察记录结果。 5．菌落计数及报告：选取菌落数10~150之间的平板进行计数。一个稀释度使用两个平
1、PDA培养基（用于分离、培养植物内生真菌）： 马铃薯（去皮）200g , 葡萄糖20g , 蒸馏水1000 ml , 琼脂粉15g。用于分离内生真菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的氯霉素和硫酸链霉素各50 μ g/ml，用于抑制细菌的生长。2、NA培养基（用于分离、培养植物内生细菌）： 牛肉膏3g，蛋白胨5g，葡萄糖2.5g，琼脂粉15g，蒸馏水1000ml，pH 7.0。用于分离内生细菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的放线菌酮50μg/ml，用于抑制真菌生长。115℃，20min 灭菌。 3、LB培养基：胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，NaCl 10 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0； 4、DSM1培养基：磷酸三钾26.631 g（pH=7.0)，二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，牛肉膏3 g，NaCl 5 g，胰蛋白胨10 g，葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL，pH=7.0； 5、DSM2培养基：磷酸三钾26.631 g（pH=7.0)，二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，牛肉膏3 g，NaCl 5 g，细菌学蛋白胨10 g，葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0； 6、Msgg培养基：磷酸钾5 mmoL/L(pH7.0)，MOPs 100 mmoL/L（pH7.0），MgCl2 2 mmoL/L，CaCl2 700 mmoL/L，MnCl2 50 μM，FeCl3 50 μM，ZnCl2 1 μM，VB1 2 μM，甘油0.5 %，谷氨酸0.5 %，色氨酸50 μg/mL，苯丙氨酸50 μg/mL，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。 7、N%NA培养基：牛肉膏3.0 g，细菌学蛋白胨10 g，NaCl 5 g，琼脂粉N*10 g， 8、BGM1培养基：牛肉膏3 g，胰蛋白胨10 g，NaCl 5 g，磷酸三钾26.631 g（pH7.0），二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，葡萄糖1 g，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。 9、BGDM培养基：牛肉膏3 g，细菌学蛋白胨10 g，NaCl 5 g，磷酸三钾26.631 g（pH7.0），二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，葡萄糖1 g ，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。 10、镰刀菌酸配制：10 mM标准品FA储存液（40 μg/mL）的配制：精密称取0.1792 g定溶于18%（v/v）谱纯甲醇100L，用1N NaOH 调节pH到6.5。换算的质量浓度（w/v）=1792 μg /mL。 11、LB培养基：胰蛋白胨1 g，酵母提取物0.5 g，NaCl 1 g，琼脂1.5 g，水100 mL，pH7.0, 121℃20 min。 24、PCR产物的电泳 主要仪器： 电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、水浴锅、微波炉、离心机等。 主要实验试剂： 1、50×TAE （2 M Tris，1M 醋酸，50 mM EDTA（pH8.0）） 2、10×上样缓冲液（loading buffer） 3、分子量标准DNA Marker 4、琼脂糖 5、EB （溴化乙锭）（黑暗保存） 25、琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA 三羟甲基氨基甲烷（Tris）、硼酸、乙二胺四乙酸（EDTA）、溴酚蓝、蔗糖、琼脂糖、溴化乙锭、DNA marker（λHindIII digest，自带6×loading Buffer，在103房间海尔冰箱中存放）
酵母菌在人类生活中的应用 摘要：涉及到人类食品中的酵母菌种类繁多，其中不同种类有不同的功能，这使得酵母菌在食品中有着广泛的用途，与人类的生活息息相关，随着科学技术的发展，酵母菌一定可以为人类的生活做出更大的贡献。 关键字：酵母菌应用前景 酵母菌是子囊菌、担子菌等几科单细胞真菌的通称。依照荷兰科学家Loddoy在1970年提出的分类系统，将有无形成有性孢子作为分类的起点，属上的分类主要依据形态，种的规划主要依据生理的特性，将酵母菌分为三个亚门：1.能形成子囊孢子的酵母属子囊亚门，共4个科22个属139种酵母。2.能产生冬孢子和担孢子的酵母菌，属于担子菌亚门、冬孢子纲、黑粉菌目、黑粉菌科共9个科。3.能产生掷孢子的酵母菌，属于担子菌亚门、东孢子纲、掷包酵母科、科内有三属。4.不能产生有性孢子，尚未发现有性过程的酵母属于半知菌亚门，共12个属170个种。但就我国目前所常用的分类是将酵母菌分为：鲜酵母、活性干酵母、即发酵母。酵母菌在生物界中的种类繁多，其在人类生活中也得到广泛的应用。据科学家推测，早在史前三千多年，人类就已经懂得酵母的发酵技术，虽不知原理，但却已有相当丰富的经验。据考古学家考证，在史前2500年的埃及Theban法王填墓内找到经发酵的面包实体和证明酒和啤酒酿造的壁画和宝物，以及在公元前2698年中国史记记载了自黄帝开始已有教民烹煮面食的记载，都证明人类在这之前就已懂得种植稻米、小麦以及储存、磨粉和利用酵
母调制不同的食物。由此看来，酵母菌的利用已深入人类的发展史。 1.酵母菌在发酵乳制品中的应用 随着科学技术的发展，酵母菌在酿造、奶制品、焙烤食品等有着飞速的发展。内蒙古农业大学的贺银风教授探究了国内外传统的发酵乳制品中乳酸菌和酵母菌的相互作用关系，指出了酵母菌在发酵品中的与乳酸菌有着同样的作用，菌种间相互促进和相互制约控制产品的风味特点、营养特征、医疗和保健作用。这为研究酵母菌在乳制品中的应用提供了理论的参考，不同的乳制品中的酵母菌存在着多样性，往往是多种酵母菌的共同作用形成不同的风味，不同的品质，而不同地区也有着自己特有的酵母菌，这是由于酵母菌的多样性所决定的。酵母菌在发酵乳制品中存在着许多的优点，主要是对于干酪的成熟有着诸多作用，例如：“（1）酵母菌能利用凝乳中由于乳酸菌的乳糖发酵所产生的乳酸，使凝乳的pH值有所提高，由起初的5到6左右。酸度的降低，刺激了对干酪成熟也有促进作用的细菌的生长繁殖；（2）某些酵母菌能产生胞外蛋白分解酶和脂肪分解酶，分解干酪中的蛋白质和脂肪，加速干酪的成熟，使干酪中可溶性含蛋物和辛酸、癸酸等其他高级脂肪酸增加L3J，对干酪的风味和结构起着至关重要的作用；（3）干酪内部的某些酵母菌能发酵牛奶中的乳糖，产生少量的CO，影响干酪的组织结构；（4）某些酵母菌能影响干酪某些风味物质如甲基酮的形成[IJ]；(5)酵母菌能产生多种水溶性维生素，增加干酪的营养价值；（6）酵母菌在干酪中的生长繁殖和代谢作用，还能抑制腐败微生物和梭状芽孢杆菌的生长LIJ5。酵母菌在乳制食品中的主要
Vol.27No.42001-08华 东 理 工 大 学 学 报 J ournal of Eas t China University of Science and Tech nology E -mail :juchu@online.s https://www.doczj.com/doc/d317314356.html, 收稿日期:2000-09-15 作者简介:储 炬(1963-),女,江苏宜兴人,教授,博士生导师,工学 博士。研究方向:代谢调控及过程优化 文章编号:1006-3080(2001)04-0349-04 酿酒酵母重组人α2a 干扰素补料分批培养 储 炬1*, 胡千德1, 郭元昕1, 叶 勤1, 林志伟2, 徐 伦2(1.华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海200237; 2.上海万兴生物制品有限公司,上海201206) 摘要:在2.6L 全自动发酵罐中对人α2a 干扰素重组酵母的补料分批培养过程作了初步研究。结果表明,培养过程中待葡萄糖耗尽时流加葡萄糖,并维持低糖浓度;在培养10h ～20h 时,恒速流加20mg /L 的腺嘌呤,能较大幅度提高表达水平,生物活性从原工艺的 3.1×109 IU /L 提高至1.3×1010 IU /L 。表达期p H 值对生产水平有很大影响,宜控制在5.0～ 5.3。 关键词:酿酒酵母;基因工程菌;α2a 型干扰素;补料分批培养;腺嘌呤 中图分类号:TQ 920 文献标识码:A Production of Recombinant Human Interferon α2a by Saccharomyces cerevisiae in Fed -batch Culture C HU J u 1* , HU Qian -de 1, G UO Yuan -x in 1 , YE Qin 1 , LIN Zhi -wei 2 , X U Lun 2 (1.State Key Laboratory of Bioreactor Engineering ECUS T ,Shanghai 200237,China ; 2.Shanghai W anx ing Bio -pharmaceuticals Co .Ltd .,Shanghai 201206,China ) Abstract :Production o f reco mbinant huma n interfero n α2a by Saccharomyces cerevisiae in fed -ba tch culture w as inv estigated sy stematically in 2.6L autom atic ja r fermenter .During the fermentatio n ,suitable am ount o f g lucose wa s added to keep the g lucose co ncentratio n at lo w lev el,when gluco se w as exhausted;20mg /L o f adenine w as supplemented at ev en speed during 10h ～20h o f ferm entatio n.As a consequence,the ex pressio n lev el of human interfero n α2a has increased by 4times to 1.3×1010 IU /L.In ex pression pha se ,p H v alue has an impor tant im pact on ex pressio n lev el ,which sho uld be co ntro lled within 5.0 ～ 5.3.Key words :Saccharomyces cerevisiae ;cultiva tion of recombina nt yea st;IFN-α2a,fed-ba tch cultiva tion;adenine 人α2a 型干扰素(IFN-α2a )是国外已大量生产和广泛应用的抗病毒及抗肿瘤多肽药物。它是由165个氨基酸组成的单链多肽,分子质量为19.219 ku 。它对不同人体肿瘤有抗增生作用,能抑制病毒核酸密码的转录和分解病毒的RN A 核酸,是一种具有调节免疫力,治疗乙型、丙型肝炎,白血病,卡波 氏肉瘤(艾滋病相关的)等的多功能细胞因子[1]。酿酒酵母是迄今为止研究最深入的真核生物,它具有比大肠杆菌更完备的基因表达调控机制,和更强的对表达产物的加工修饰及分泌能力。因此,酿酒酵母作为基因工程的表达系统日益得到广泛应用,并已成功地表达了多种外源基因[2]。本文在研究人α2a 干扰素酵母工程菌高产培养条件的基础上[3],采用2.6L 多参数监控发酵罐对人α2a 干扰素重组酿酒酵母进行了补料分批培养。 349 DOI:10.14135/https://www.doczj.com/doc/d317314356.html, k i .1006-3080.2001.04.006