模式植物-拟南芥

拟南芥叶肉原生质体分离条件的优化

基于绿色荧光蛋白瞬时表达的植物亚细胞定位方法_于一帆

溶液配制1、纤维素酶解液：2、PEG4000溶液（一次配置可以保存五天，但是最好现用现配，每个样品需100μl PEG4000溶液，可根据实验样品量调整溶液配置总量）3、W5 溶液4、MMG溶液5、WI溶液拟南芥原生质体制备转化方法整理一、土培室播种种植的拟南芥。二、生长良好情况下在未开花前用于取材叶片制备原生质体。三、剪取中部生长良好的叶片用刀片切成0.5

自噬现象的观测高玲1,2*，张卫娜2,4*，陈文利2,31.青岛农业大学生命科学学院，山东青岛266109；2.华南师范大学激光生命科学教育部重点实验室，广州510631；3.华南师范大学生命科学学院，广东省植物发育生物工程重点实验室，广州510631；4.广东省农业科学院，广州510640收稿日期：2011-03-23；接受日期：2011-04-29基金项

模式植物拟南芥

拟南芥原生质体的提取和转化(1)取4周后抽薹前的叶片，切成1mm宽的长条，置于甘露醇溶液（称1.82g D-甘露醇于20ml双蒸水中）；共需叶片约90片；(2)将步骤1中细条捞出，置于酶解液中；避光，23℃,40-50rpm摇床上酶解3小时；(3)酶解液过100-200目的筛子，收集滤液，置于15ml离心管中，均分为两管；于4℃，60g，离心15min；(4

拟南芥原生质体制备转化操作流程主要试剂1. 纤维素酶解液：试剂15ml酶液体系1．1-1.5﹪Cellulase R10 (YaKult Honsha)0.225g干粉2．0.2-0.4﹪Mecerozyme R10 (YaKult Honsha)0.045g干粉3．0.4M mannitol1.09g干粉4．20mM KCl1 ml 0.3 M KCl母液

模式生物-拟南芥

拟南芥原生质体制备制备酶解液10 ml1．取幼嫩拟南芥叶片，使用新的单面刀片将叶片切为0.5 mm-1 mm大小。（用胶带把下表皮沾掉，效果更好。放一小培养皿里面降解）2．材料侵入10 ml酶解液中，暗培养2 h-2.5 h，至原生质体完全从叶片上解离下来。3．酶解结束后轻轻晃动溶液，镜检酶解结果。4．使用200目不锈钢网筛过滤原生质体至新离心管中10ml。

采用PEG介导拟南芥叶片原生质体瞬时表达法。具体方法如下：1）在MS培养基上用无菌牙签点种拟南芥种子，萌发后待根长至1-3厘米（2周左右），移栽到营养土:蛭石为1:1的培养土中，置于培养箱，温度22℃，光照16h，湿度70%，培养2-3周；2）配制酶解液，选10ml酶解体系，置于90mm培养皿中；3）在长势良好且未抽薹的拟南芥植株上选取鲜嫩叶片10-15片，

大提质粒1．单菌落接种到5 ml含抗生素的LB培养液中（试管体积应比培养液至少大4倍；试管不应盖得太紧；转速应很剧烈）。2．当OD600=0.6时倒入含抗生素的250 ml LB培养液，37℃300 r/min培养约14-18 h。3. 4,000 rpm, 10 min, 4℃收集细胞。4．去上清，加solution I 8 ml，涡旋振荡重悬（4℃）至溶

拟南芥原生质体转化实验每次做大反应（用于CO-IP）最多做8管，每管需3 ml 原生质体溶液，浓度为106 ，10 ml 酶液需要40片叶子。小反应用于用于做蛋白定位，每管需200 μl 原生质体溶液叶片的选取：，取刚刚完全展开，叶面光滑，非凹凸不平的，最上面最中间的叶片，依次向下选取，取瘦长的，叶缘尖锐的叶片为佳。每四棵苗取8-10片叶子。1．打开水浴锅，

拟南芥原生质体制备转化操作

植物生理学报 Plant Physiology Journal 2014, 50 (3): 351~357351收稿 2013-11-21 修定 2014-01-12资助国家重点基础研究发展计划(2012CB944803)、浙江省青年科学基金(LQ13C020002)和浙江省博士后项目择优资助(Bsh1202082和Bsh1202081)。*通讯作者(E-m

拟南芥原生质体制备转化操作流程主要试剂1. 纤维素酶解液：试剂15ml酶液体系1．﹪ Cellulase R10 (YaKult Honsha) 干粉2． Mecerozyme R10 (YaKult Honsha) 干粉3． mannitol 干粉4． 20mM KCl 1 ml M KCl母液5． 20mM MES,，1 ml M MES,母液6．加入1

原生质体培养与诱变解析

拟南芥原生质体制备转化方法整理一、土培室播种种植的拟南芥。二、生长良好情况下在未开花前用于取材叶片制备原生质体。三、剪取中部生长良好的叶片用刀片切成0.5 -1 mm宽的叶条。四、将切好叶条掷入预先配置好的酶解液中（每5-10 ml酶解液大约需10-20片叶子）。并用镊子帮助使叶子完全浸入酶解液。五、用真空泵于黑暗中抽30分钟。（此时可配制PEG4000溶液

PEG介导拟南芥叶片原生质体瞬时表达方法1.B5培养基上萌发拟南芥种子，待根长至1-3厘米时即可移栽到土里，温室培养，光照12h/12h，150μE。2.准备好一个90mm培养皿，称1.82克D－甘露醇于20ml双蒸水中。培养皿的盖子用来切叶片。3.取4周后未抽台前的叶片，约90片。切成1mm宽的长条，置于甘露醇溶液中。可以一边切一边从植株上取。4. 配酶解

Transient Expression in Arabidopsis Mesophyll Protoplasts We share this protocol freely with laboratories conducting basic research. A simple registration form is required to help