Western Blot(免疫印迹法)实验方法步骤发布日期:2008-8-25 热门指数:4360Western Blot(免疫印迹法)主要包括以下4个基本步骤：n 样品制备n 电泳分离n 蛋白的膜转移n 免疫杂交与显色――蛋白检测溶液和试剂n 1X 磷酸盐缓冲液(PBS)n Modified RIPA bufferTris-HCl: 50 mM, pH 7

蛋白质免疫印迹技术

蛋白免疫印迹杂交技术手册

蛋白免疫印迹（western blot）实验实验步骤：一、试剂准备1. SDS-PAGE试剂：见聚丙烯酰胺凝胶电泳实验。2. 匀浆缓冲液：1.0 M Tris-HCl(pH 6.8) 1.0 ml；10%SDS 6.0 ml；β-巯基乙醇 0.2 ml；ddH2O 2.8 ml。3. 转膜缓冲液：甘氨酸 2.9 g；Tris 5.8 g；SDS 0.37 g

western blotting(蛋白免疫印迹)

其定量关系符合以下公式： Ve=Vo+KV1 Ve：某一溶质的洗脱体积 Vo：层析柱的外水体积 Vi：层析柱的内水体积 K：某一溶质的分配系数二试剂和器材1．试剂

蛋白质免疫印迹技术

有机溶剂提取法 对于分子中非极性侧链较多的蛋白质可用有机溶剂提取，包括 乙醇、丙酮和丁醇等。 通过层析或电洗脱法制备目的蛋白蛋白样品的定量 Bradford法考马斯亮蓝G-250有

细胞质（细胞骨架等不溶蛋白） Tris-Triton（附录 1）蛋白分级抽提试剂盒细胞质（磷酸化蛋白）磷酸化蛋白抽提试剂盒细胞膜NP-40 or RIPA（附录 1）膜蛋白抽提试剂

Western Blot杂交信号很弱原 因 抗体保存不当抗原不充足 膜的漂洗过度1.1. 2. 3.对 策2.3.抗体长期保存应在－70℃ ，使用前做效价检测 增加蛋白上样量，做已

蛋白质免疫印迹（Western Blot ）实验步骤和原理及注意事项1.收集蛋白样品(Protein sample preparation)可以使用适当的裂解液。收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性

B 电泳B-1 PAGE 胶的制备 聚丙酰胺凝胶 PAGE 电泳根椐蛋白分子量进行分离蛋白，PAGE 胶是由两种化合物聚合 而成的，即丙烯酰胺（acr）和 N,N-甲叉双丙烯酰胺(

3 Western blot3.1 试剂配制1）30%聚丙烯酰胺储备液（Acr/Bis）：丙烯酰胺（Acr），29g；N,N-亚甲基双丙烯酰胺（Bis），1g，去离子水溶解，37℃水浴助溶，定容至100mL。0.45μm滤器过滤，棕色瓶4℃避光保存。2）10%十二烷基硫酸钠（SDS）：SDS，10g；H2O，80mL。68℃加热溶解，浓HCl调pH至7.2，

蛋白质免疫印迹（Western Blot，WB ）标签：western-blot免疫印迹 蛋白质蛋白质免疫印迹可应用于：（1）从蛋白质混合物中检出目标蛋白质；（2）定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况；（3）用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。实验材料蛋白质样品试剂、试剂盒裂解液 PBS SDS上样缓冲液 电泳缓冲液 转

蛋白质免疫印迹（Western Blot ，WB ）标签： western-blot 免疫印迹 蛋白质蛋白质免疫印迹（Western Blot ）可以：（1）从蛋白质混合物中检出目标蛋白质；（2）定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况；（3）用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA 、蛋白质-RNA 相互作用后续分析。 实验方法∙底物化学发光ECL 法∙ We

4.1 细胞裂解 我们公司有针对细胞内的不同蛋白专门的蛋白裂解液试剂盒供您选择。4.11 细胞裂解操作方法： （1）培养的细胞经预冷的 PBS 漂洗 2 次，裂解液中加入蛋白酶和磷

实验用途用于检测样品中特异性蛋白质是否存 在。对特异性蛋白质进行半定量分析。蛋白免疫印迹组成1SDS -聚丙烯酰 胺凝胶电泳，使 待测样品中的蛋 白质按分子量大 小在凝胶中分成 带

1.4.9 细胞裂解液50mM Tris-Cl (pH 8.0) ，1% NP-40， 150mM NaCl，0.5%去氧胆酸钠及0.1% SDS1.4.10 PMSF储存液（100mmol/L）称取PMSF17.4mg,溶于1ml异丙醇，分装后储存于－20℃。1.4.11 5×Tris甘氨酸电泳缓冲液去离子水 500ml，Tris碱 15.1g，甘氨酸 9

三 操作步骤2显色反应 首先进行分子量标记的氨基黑染色。切下转有分子量标记的硝酸纤维素薄膜， 用含有0.3%吐温20的PBS缓冲液漂洗三 次后（每次15分钟），再将其浸入氨基 黑染

有机溶剂提取法 对于分子中非极性侧链较多的蛋白质可用有机溶剂提取，包括 乙醇、丙酮和丁醇等。 通过层析或电洗脱法制备目的蛋白蛋白样品的定量 Bradford法考马斯亮蓝G-250有