Western blot实验报告摘要：目的：学习并掌握western blot分离蛋白及观察方法方法：western blot结果：见后文结论：western blot能很好地分离蛋白关键词：western blot、分离、小鼠组织、蛋白Western blot test reportAbstract: objective: Learn and master

蛋白质免疫印迹技术

　万方数据　万方数据　万方数据蛋白质免疫印迹技术的实验研究作者：张燕婉， 叶珏， 时那， 孟宪敏， 王来元， ZHANG Yan-wan， YE Jue， SHI Na， MENG Xian-min， WANG Lai-yuan作者单位：中国医学科学院,阜外心血管病医院中心实验室,北京,100037刊名：实验技术与管理英文刊名：EXPERIMENTAL TE

蛋白免疫印迹杂交技术手册

western blotting(蛋白免疫印迹)

其定量关系符合以下公式： Ve=Vo+KV1 Ve：某一溶质的洗脱体积 Vo：层析柱的外水体积 Vi：层析柱的内水体积 K：某一溶质的分配系数二试剂和器材1．试剂

蛋白质免疫印迹技术

蛋白质免疫印迹技术精品课件

有机溶剂提取法 对于分子中非极性侧链较多的蛋白质可用有机溶剂提取，包括 乙醇、丙酮和丁醇等。 通过层析或电洗脱法制备目的蛋白蛋白样品的定量 Bradford法考马斯亮蓝G-250有

Western Blot杂交信号很弱原 因 抗体保存不当抗原不充足 膜的漂洗过度1.1. 2. 3.对 策2.3.抗体长期保存应在－70℃ ，使用前做效价检测 增加蛋白上样量，做已

蛋白质免疫印迹（Western Blot ）实验步骤和原理及注意事项1.收集蛋白样品(Protein sample preparation)可以使用适当的裂解液。收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性

蛋白质免疫印迹技术曹学敏郭晓华谷中如古泽江河北大学生命科学学院2010生物技术河北保定071002摘要：目的：学习掌握动物抗血清的制备原理及技术，通过实际操作学会动物抗血清的制备，掌握Western－blotting的基本原理，熟悉Western－blotting的实验操作。方法：，使用鸡卵类粘蛋白对小白鼠进行常规免疫，获得抗血清，然后利用Western－b

常见问题分析一.无信号一抗和二抗不匹配：二抗需和一抗宿主的物种相同（如一抗来自兔，二抗为抗兔抗体）。没有足够的一抗或二抗结合目标蛋白：使用高浓度抗体。4 °C 延长孵育时间（如过夜）。封闭剂与一抗或二抗有交叉反应：使用温和的去污剂如吐温-20，或更换封闭剂（常用的脱脂奶粉、BSA、血清或明胶）。一抗不识别待检物种的蛋白：参照说明书，比对免疫原序列和蛋白序列以

蛋白质免疫印迹（Western Blot，WB ）标签：western-blot免疫印迹 蛋白质蛋白质免疫印迹可应用于：（1）从蛋白质混合物中检出目标蛋白质；（2）定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况；（3）用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。实验材料蛋白质样品试剂、试剂盒裂解液 PBS SDS上样缓冲液 电泳缓冲液 转

蛋白质免疫印迹（Western Blot ，WB ）标签： western-blot 免疫印迹 蛋白质蛋白质免疫印迹（Western Blot ）可以：（1）从蛋白质混合物中检出目标蛋白质；（2）定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况；（3）用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA 、蛋白质-RNA 相互作用后续分析。 实验方法∙底物化学发光ECL 法∙ We

4.1 细胞裂解 我们公司有针对细胞内的不同蛋白专门的蛋白裂解液试剂盒供您选择。4.11 细胞裂解操作方法： （1）培养的细胞经预冷的 PBS 漂洗 2 次，裂解液中加入蛋白酶和磷

1.4.9 细胞裂解液50mM Tris-Cl (pH 8.0) ，1% NP-40， 150mM NaCl，0.5%去氧胆酸钠及0.1% SDS1.4.10 PMSF储存液（100mmol/L）称取PMSF17.4mg,溶于1ml异丙醇，分装后储存于－20℃。1.4.11 5×Tris甘氨酸电泳缓冲液去离子水 500ml，Tris碱 15.1g，甘氨酸 9

Western Blot步骤Western Bolt基本步骤组织细胞裂解提蛋白→蛋白定量→配试剂→配胶→上样→电泳→电转→封闭→敷一抗→洗→敷二抗→洗→显影一、组织细胞裂解提蛋白1. 把组织剪切成细小的碎片。2. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使RIPA与PMSF的比例为100:1（现在EP管里配好再分别加）。3.

三 操作步骤2显色反应 首先进行分子量标记的氨基黑染色。切下转有分子量标记的硝酸纤维素薄膜， 用含有0.3%吐温20的PBS缓冲液漂洗三 次后（每次15分钟），再将其浸入氨基 黑染

有机溶剂提取法 对于分子中非极性侧链较多的蛋白质可用有机溶剂提取，包括 乙醇、丙酮和丁醇等。 通过层析或电洗脱法制备目的蛋白蛋白样品的定量 Bradford法考马斯亮蓝G-250有