PCR和RT-PCR(11-12章)

《DNA复制、转录与翻译练习》参考答案一、名词解释（略）二、问答题1、答：DNA在复制时首先两条链之间的氢键断裂两条链分开，然后以每一条链分别做模板各自合成一条新的DNA链，这样新合成的子代DNA分子中一条链来自亲代DNA，另一条链是新合成的，这种复制方式为半保留复制(semiconservative replication)。并非所有的DNA复制都以半保留

第十九章DNA的复制、修复与重组121958年，F.Crick 提出中心法则,揭示了生物体内遗传信息的传递方向：4子代DNA的一条链来自亲代，另一条是新合成的。★环状DNA复制起点的gene mapping P532图19-3783、复制方向复制方向大多数是双向的，形成两个复制叉，少数是单向复制，形成一个复制叉。4、DNA的几种复制方式¾（1）直线双向复制单

载体、点突变

第三章DNA的复制ppt课件

PCR介导的定点突变与随机突变的应用

20世纪80年代以来，基因克隆技术与DNA化学合成方法相结合，建立和发展了定点突变技术。可以按照预定设计，在已知的DNA序列中增删或转换核苷酸，精确地是靶基因在特定位点发生碱基序列的变化，进而使基因表达及调控，基因产物发生相应改变。这种快速精确的基因突变已经被广泛地应用与基因工程和蛋白质工程之中。定点突变有多种方法，有的改变特定核苷酸，有的则是对一段最可能影

topo克隆和点突变

分子克隆方法之同源克隆方法(20160115)

Powerful PCR Cloning ToolsTopo TA克隆方法（Topo TA Cloning Kit）Topo TA克隆原理与TA克隆一样，唯一不同的是TA克隆用的是T4连接酶把PCR片断连接到T 载体上，而Topo TA Cloning用的是DNA Topoisomerase。Topoisomerase的用途一般使用在复制DNA前把超螺旋DN

Multifocal clonal evolution characterized using circulating tumor DNA in a case of metastatic breast cancerNat Commun Nov 2015文章概述（1）对1位乳腺癌患者（ER+, HER2+）进行了长达3年的治疗和随访（2）对8处肿瘤组织和9份血

患者信息• 基因芯片检出结 果联合EZH2、 TP53基因突变对 OS、EFS的影响。1 MDS克隆性基因突变套餐（20种）目的：寻找MDS病态造血的克隆性证据，辅助疾病亚型分类及

循环数 # 平台出现得迟早与模板的初始量有关，模板 初始量越多，平台出现得越早。 平台效应产生的因素： 引物二聚体的产生、反应产物、各组分的消 耗和变性、引物和已扩增的DNA片段间

图位克隆的步骤：Primary mapping Fine mapping Candidate geneComplementation test Functional analysi

其他克隆技巧1、同尾酶 因同尾酶如 bamh1 GGATCC和 bgl2 AGATCT。 具有相同的黏性末端，所以这两种酶是可以 连接在一起的 用途，当目的DNA上有酶切位点限制时

检测（十九）“基因工程与克隆技术”课后强训卷1．(2018·南充模拟)镰刀型细胞贫血症是一种单基因遗传病，患者的血红蛋白分子β­肽链第6位氨基酸谷氨酸被缬氨酸代替，导致功能异常。回答下列问题：(1)异常血红蛋白的氨基酸序列改变的根本原因是编码血红蛋白基因的________序列发生改变。(2)将正常的血红蛋白基因导入患者的骨髓造血干细胞中，可以合成正常的血红蛋

Clonal evolution of chemotherapy-resistant urothelialcarcinomaNat Genet Oct 2016IF：31.616摘要概述1.通过全外显子测序分析尿路上皮癌化疗前后克隆进化史和突变图谱的变化。2.原位癌与化疗后转移灶癌细胞之间高度克隆分化，突变谱差异显著。3.导致化疗耐药的突变涉及L1细胞粘附分

◆其他的酶和蛋白质因子：引物酶、单链结合蛋白、连接酶、解链酶、 拓扑异构酶，等1、复制的化学反应(dNMP)n + dNTP → (dNMP)n+1 + P

基因定点突变一、定点突变的目的把目的基因上面的一个碱基换成另外一个碱基。二、定点突变的原理通过设计引物，并利用PCR将模板扩增出来，然后去掉模板，剩下来的就是我们的PCR 产物，在PCR产物上就已经把这个点变过来了，然后再转化，筛选阳性克隆，再测序确定就行了。三、引物设计原则引物设计的一般原则不再重复。突变引物设计的特殊原则：（1）通常引物长度为25~45

克隆点突变系列常见问题及解决方法一、克隆1)、平板上长不出克隆或克隆数目很少a)、感受态效率低：使用新制备或妥善冻存的感受态细胞，确保转化效率>107 cfu/μg。每次可设置一组转化质粒的对照实验，以检测感受态细胞的转化效率。b)、线性化克隆载体和插入片段扩增产物的使用量不足/过量，或者比例不佳：请务必预先检测线性化克隆载体和插入片段PCR产物的浓度。常用