BAG-1CDK4蛋白在结直肠癌中的表达及意义

BAG-1\CDK4蛋白在结直肠癌中的表达及意义作者：张朝霞,梁建芳,郑绘霞,肖虹来源：《中国医药导报》2010年第07期[摘要] 目的:探讨BAG-1、CDK4蛋白在结直肠癌中的表达及其与结直肠癌临床病理特征的关系。

方法:应用免疫组化SP法对80例结直肠癌组织、40例结直肠腺瘤组织及25例癌旁正常结直肠组织中的BAG-1、CDK4进行检测。

结果:BAG-1、CDK4在结直肠癌中过度表达,阳性率分别为80.0%(64/80)和65.0%(52/80),并且BAG-1、CDK4与肿瘤的分化程度成反比。

有淋巴结转移的结直肠癌BAG-1、CDK4的阳性率分别为96.7%(29/30)和83.3%(25/30),无淋巴结转移的结直肠癌阳性率分别为70.0%(35/50)和54.0%(27/50),两者比较,差异有高度统计学意义(P[关键词] 结直肠癌;BAG-1蛋白;CDK4蛋白;免疫组织化学[中图分类号] R735.3+7[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2010)03(a)-016-03Expression and significance of BAG-1 and CDK4 in the colorectal cancerZHANG Zhaoxia1, LIANG Jianfang2, ZHENG Huixia2, XIAO Hong2(1.Division of Pathology, Fenyang College of Shanxi Medical University, Fenyang 032200, China; 2.Department of Pathology, the First Clinical Medical College of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China)[Abstract] Objective: To explore the expressions of BAG-1 and CDK4 protein in colorectal cancer and its relationship with clinicopathological features of colorectal cancer. Methods: BAG-1 and CDK4 protein were detected in 80 cases of colorectal cancer, 40 cases of colorectal adenomas and 25 cases of adjacent normal colorectal tissues by immunohistochemistry SP method. Results: The overexpression of BAG-1 and CDK4 in colorectal cancer were 80.0% (64/80) and 65.0% (52/80) respectively, BAG-1 and CDK4 were inversely proportional to the degree of tumor differentiation. The positive rates of BAG-1 and CDK4 were 96.7% (29/30) and 83.3% (25/30) in lymph node metastasis of colorectal cancer, and were 70.0% (35/50) and 54.0% (27/50) in no lymph node metastasis of colorectal cancer, they showed significant difference (P[Key words] Colorectal cancer; BAG-1 protein; CDK4 protein; Immunohistochemistry结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,其发生及发展是一个多基因参与的多步骤过程。

细胞凋亡和增殖的失调都会导致恶性肿瘤的发生。

BAG-1(Bcl-2-associated athanogene 1,BAG-1)是多功能相关蛋白,它具有与抗凋亡基因bcl-2相互结合、相互影响、从而促进细胞抗凋亡的能力[1-4]。

CDK4(cyclin dependent kinase 4,CDK4)具有启动DNA复制和诱发有丝分裂的作用,其表达增加导致DNA合成增加,促进细胞分裂增殖,导致癌变[5]。

目前关于BAG-1、CDK4的表达与结直肠癌的关系鲜见报道,研究这些基因在结直肠癌中的表达及相互作用,对于揭示结直肠癌发生、发展的机制以及治疗和预防结直肠癌有着十分重要的意义。

本实验采用免疫组化染色方法观察结直肠癌中BAG-1、CDK4的表达情况,进一步证实两者在结直肠癌发生及发展中的作用,并对其临床意义作初步探讨。

1 材料与方法1.1 材料收集山西医科大学第一临床医院病理科2005年1月～2007年12月手术切除经病理证实的结直肠腺瘤组织石蜡标本40例及结直肠癌组织石蜡标本80例,同时选择25例结直肠癌手术切除标本远端经病理检查、无癌细胞浸润的正常结直肠组织石蜡标本作对照,所有患者临床和病理资料齐全。

80例结直肠癌患者中,男39例,女41例;年龄38～81岁,平均62岁;年龄1.2试剂BAG-1、CDK4检测均采用SP法。

兔抗人CDK-4单克隆抗体(原液)购自武汉博士德生物工程有限公司,兔抗人BAG-1单克隆抗体(原液)购自杭州华安生物技术有限公司,免疫组化染色SP试剂盒为Maxin公司产品,购自福州迈新生物公司。

1.3方法所有标本常规脱水后,用10%中性甲醛溶液固定,石蜡包埋,连续切片,片厚4 μm,采用免疫组化SP法。

BAG-1(1∶200)用热修复抗原(枸橼酸pH 6.0),CDK4(1∶50)采用微波处理修复抗原。

石蜡常规脱蜡并水化,PBS缓冲液冲洗,过氧化酶阻断内源性过氧化酶的活性。

每张切片加50 μl 一抗,室温下孵育60 min,加50 μl生物素标记的二抗(SPKitC液),孵育10 min。

加50 μl链亲和素-过氧化物酶溶液室温下孵育10 min,再加入新鲜配制的DAB溶液。

流水冲洗,苏木素复染,中性树胶封固。

对标本石蜡切片行SP免疫组化染色。

以PBS代替一抗作为阴性对照,已知阳性切片作为阳性对照。

1.4 结果判定BAG-1蛋白表达位于胞质及胞核,CDK4蛋白表达位于胞核,随机取用目镜网格测微尺任选10个视野(×400),每个视野下数100个肿瘤细胞,计算阳性细胞百分率。

阳性细胞5%以下为阴性(-);5%～25%为弱阳性(+);26%～50%为中度阳性(++);50%以上为强阳性(+++)。

1.5 统计学处理采用SPSS 16.0软件分析,统计阳性标本例数,计算阳性率,各组阳性率比较用χ2检验,P2结果2.1 正常结直肠黏膜、结直肠腺瘤和结直肠癌组织中BAG-1、CDK4蛋白的表达情况(图1、2,表1)BAG-1蛋白在正常结直肠黏膜、结直肠腺瘤、结直肠癌组织中的阳性表达见表1,阳性表达率分别为12.0%(3/25)、62.5%(25/40)和80.0%(64/80),阳性表达率呈上升趋势,差异有统计学意义(PCDK4蛋白在正常结直肠黏膜、结直肠腺瘤、结直肠癌组织中的阳性表达见表1,阳性表达率分别为8.0%(2/25)、30.0%(12/40)和65.0%(52/80),阳性表达率呈上升趋势,差异有统计学意义(P图1 BAG-1在结直肠癌中的表达(免疫组化SP法,×400)图2 CDK4在结直肠癌中的表达(免疫组化SP法,×400)表1 BAG-1、CDK4蛋白在正常结直肠黏膜、结直肠腺瘤和结直肠癌中的表达情况[n(%)]与正常结直肠黏膜比较,△P2.2 BAG-1、CDK4蛋白表达与结直肠癌临床病理特征的关系BAG-1、CDK4蛋白阳性表达率与结直肠癌患者的性别、年龄、部位无关(P>0.05)。

BAG-1蛋白表达与结直肠癌组织分化程度和有无淋巴结转移密切相关,随着分化程度的减低,BAG-1蛋白表达阳性率明显增高,阳性率分别为61.5%(16/26)、86.1%(31/36)和94.4%(17/18);有淋巴结转移者BAG-1蛋白表达阳性率明显高于无淋巴结转移者,阳性率分别为96.7%(29/30)和70.0%(35/50),差异有高度统计学意义(P0.05)。

CDK4蛋白表达与结直肠癌组织分化程度、有无淋巴结转移和浸润深度密切相关,随着分化程度的减低,CDK4蛋白表达阳性率明显增高,阳性率分别为88.9%(16/18)和50.0%(13/26)、63.9%(23/36);有淋巴结转移者CDK4蛋白表达阳性率明显高于无淋巴结转移者,阳性率分别为83.3%(25/30)和54.0%(27/50);侵及浆膜层CDK4蛋白表达阳性率明显高于未侵及浆膜层者,阳性率分别为65.2%(30/46)和35.3%(12/34),差异有高度统计学意义(P表2 BAG-1、CDK4的表达与结直肠癌临床病理特点之间的关系(例)3讨论细胞的增殖、分化和凋亡之间的平衡是组织稳定性的先决条件,这种平衡的丧失是肿瘤发生的重要机制。

BAG-1基因是一种抗凋亡基因,BAG-1基因是在筛检与Bcl-2结合的蛋白时发现。

BAG-1基因包括7个外显子,定位于9号染色体上[6],其编码的蛋白是一种新的非Bcl-2家族的Bcl-2结合蛋白[7],但可与Bcl-2相互结合、相互作用,增强其抗凋亡的能力[1-2]。

研究表明,BAG-1在正常组织中几乎不表达,而在乳腺癌、肺癌、前列腺癌、甲状腺癌及胃肠道恶性肿瘤中都有阳性表达[8-9],表明其表达与肿瘤的恶性转化密切相关。

本研究采用免疫组化检测BAG-1蛋白在结直肠癌中的表达情况,结果显示,结直肠癌组织中BAG-1蛋白表达阳性率明显高于正常结直肠黏膜及结直肠腺瘤(P研究表明,肿瘤的发生从生物学角度看主要表现为两个方面:一方面是肿瘤细胞凋亡障碍;另一方面是细胞异常增殖,归结到一点也就是细胞周期调控机制紊乱。

细胞周期的内源性调控主要通过Cyclin-CDK-CDI网络来实现,CDK如同细胞周期引擎,控制细胞生长周期的进展[10]。

在稳定的条件下,细胞增殖周期是由不同的CDK在G1/S和G2/M两个限制点进行自控性调节,当这两个限制点失控时,就有可能使本应停止增殖或生理性凋亡的细胞不停地进入细胞周期,从而导致恶性增生。