乳腺癌基因检测方案

《中国癌症杂志》2018年第28卷第10期 CHINA ONCOLOGY 2018 Vol.28 No.10

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·指南与共识·

通信作者：邵志敏　E-mail: zhimingshao@ 徐兵河　E-mail: xubinghe@ 任国胜　E-mail: l: rengs726@ 基于当前对乳腺癌易感基因（breast cancer

gene 1，BRCA1）和乳腺癌易感基因2（breast

cancer gene 2，BRCA2）在乳腺癌中发病、预

防、治疗及预后认识的深化、检测技术的成熟

以及新靶向药物的应用，中国医师协会精准治

疗委员会乳腺癌专专业委员、中华医学会肿瘤

学分会乳腺肿瘤学组及中国抗癌协会乳腺癌专

业委员会参考美国国立综合癌症网络（National

Comprehensive Cancer Network，NCCN）《遗传/

家族性高风险评估：乳腺癌与卵巢癌（2018年第

1版）》、欧洲临床肿瘤学会（European Society

for Medical Oncology，ESMO）《乳腺癌BRCA基

因筛查ESMO临床实践指南（2011年版）》及美

国乳腺外科医师协会（American Society of Breast

Surgeons，ASBS）《乳腺癌患者遗传基因检测指

南（2016年版）》等指南以及近10年来发表的重

要参考文献（包括中国人群的相关研究），结合

我国部分肿瘤中心的数据和临床经验，在专家组

讨论与投票的基础上，形成本共识。

1 BRCA1/2基因突变的临床意义

乳腺癌是中国女性最常见的恶性肿瘤，居癌

症相关死因的第5位，年龄标化发病率为30.69/10

万 ［1］。中国人群乳腺癌诊断时年龄主要集中

在45~55岁［2-4］，而美国81%的乳腺癌患者年龄大于50岁，平均诊断年龄为62岁，中国乳腺癌

患者总体患病年龄比欧美女性更低［5］。研究表

乳腺癌HER2 FISH检测-检测意义、建议及标本准备

HER2与乳腺癌

乳腺癌是女性恶性肿瘤中发病率最高的一种，正以每年3%～4%的速度急剧上升，已成为女性的第一杀手。临床上大约20-35%的浸润性乳腺癌存在HER2基因的扩增及蛋白的高表达。HER2基因 (又名HER2/neu，c-erbB-2)位于17q12，是表皮生长因子受体（HER）家族成员之一，HER家族在细胞生理过程中发挥重要的调节作用。HER2编码相对分子量185KD的跨膜受体样蛋白，具有酪氨酸激酶活性。HER2是重要的乳腺癌预后判断因子，HER2阳性（过表达或扩增）的乳腺癌，其临床特点和生物学行为有特殊表现，治疗模式也与其他类型的乳腺癌有很大的区别。

HER2检测方法有免疫组化（IHC）和荧光原位杂交（FISH）等。《2014年NCCN乳腺癌临床实践指南》和《乳腺癌HER2检测指南2014版》均强调：FISH是检测HER2基因状态的金标准。

一．检测意义

1. 判断预后：HER2阳性的乳腺癌浸润性强，无病生存期短，预后差。

2. 指导治疗：HER2基因扩增的乳腺癌患者对内分泌治疗药物（如他莫昔芬）产生耐药。HER2基因扩增的乳腺癌患者对CMF方案不敏感，宜采用大剂量蒽环类药物和紫杉醇类药物方案；HER2基因扩增的乳腺癌患者明显受益于Herceptin（赫赛汀，2001年FDA批准上市）等靶向药物治疗。

二．检测建议

IHC和FISH检测HER2的状态一致性很高，但也存在着差异，数据统计如下表1和表2示，对于IHC 2+样本必须要用FISH进一步确认结果； 0、1+或3+，根据条件，可再做FISH验证。

IHC

FISH

阳性率（%） 阴性 阳性

0

1+

2+

3+ 892

514

327

74 56

211

415

660 5.9

29.1

55.9

89.9

表1：(2004) HER2 Amplification Ratios by

乳腺癌21基因检测解析

问题1：乳腺癌21基因检测是什么，包含哪些基因？

◆乳腺癌21基因检测是指检测乳腺癌肿瘤组织中6组共21个不同基因的表达⽔平，包含增殖组、

侵袭组、HER2组、雌激素组和其它组的16个乳腺癌相关基因，以及参照基因组的5个内参基

因。通过检测21个基因，观察它们之间的相互作⽤来判断肿瘤特性，从⽽可预测乳腺癌复发指

数以及接受化疗的效益⽐。21基因检测包含基因见下图。

◆21基因检测纳⼊NCCN指南并在ASCO和St.Gallen获得肯定。St.Gallen(2015)：21基因检测

不仅能提供1-5年及5年后复发风险，还能预测ER阳性浸润性乳腺癌患者的对化疗和内分泌治疗

的获益程度。

问题2：乳腺癌21基因检测的由来？

◆21基因检测的背景：

►[NSABP]B-14研究（1992）:⼊组2892例ER+、腋窝淋巴结阴性患者⼊组，分组治疗：⼿术并

+安慰剂组vs他莫昔芬治疗组。随访15年发现，他莫昔芬治疗获益更多。

►[NSABP]B-20研究（2004）:⼊组1577例ER+、腋窝淋巴结阴性患者⼊组，分组治疗：他莫昔

芬治疗组 vs 环磷酰胺+甲氨喋呤+5-FU+他莫昔芬联合化疗组（CMFT）。随访12年发现，联合

化疗组与他莫昔芬治疗组相⽐获益程度更⾼。CMFT组与安慰剂组相⽐，可以增加65％的治疗

获益。

B-14、B-20研究证实，淋巴结阴性、ER+乳腺癌患者能从内分泌治疗和化疗中获益。但由于单

⽤他莫昔芬治疗后的10年复发风险仅约15％，若对所有患者⾏辅助化疗，远期疗效来看⾄少有85％的患者有过度治疗之嫌。

2004年有学者根据已有的数据挑选250个候选基因，同时选择了包括B-14和B-20研究（单药他

莫西芬治疗组）在内的临床试验共477个乳腺癌病例。采⽤⾼通量的rt-qPCR技术检测这些病例

⽯蜡切⽚中的基因表达，分析复发率与250个候选基因表达的相关性，最后得出21个基因。

问题3：乳腺癌21基因检测RS评分怎么计算？

HER-2基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）标准化操作流程

1、 预期用途

用于检测乳腺癌组织细胞中的HER-2基因扩增情况°

1.1临床适用人群：临床上确诊为乳腺癌的患者。

1.2不适用的情况：未患有乳腺癌的患者。

1.3临床应用定位：用于检测患者乳腺癌组织细胞中的HER-2基因扩增情况，为乳腺癌的临 床治疗和预后评估提供参考

2、 仪器配置要求

荧光显微镜的配置包括：10x目镜，10x. 40x物镜和100x油镜。

建议顾客使用探针前向滤片组供应商了解所使用的滤片组的详细情况，以便选择与标记荧光 染料相适应的滤片组。

绿色荧光：激发波长为490nm,发散波长为516nm,与FITC类似

橘红色荧光：激发波长为551nm,发散波长为572nm,与rhodamine类似。

移液器，振荡器，微型离心机，分析天平，高压灭菌锅，

3、 耗材要求

玻片，染缸，保子，无菌带滤芯吸头、离心管，无粉一次性乳胶手套。

4、 责任人

基因扩增实验室室长负责技术指导和质量监督。

5、 执行人

操作人员应经过专业培训，具有合格的操作技能的检验专业技术人员

6、 检测原理

乳腺癌组织样本，经处理后可用于荧光原位杂交分析。

杂交操作流程包括：细胞核中核酸DNA与探针位点特异性荧光原位杂交探针在高温下变 性成单链脱氧核糖核酸，在37C环境中，这些己变性成单链的样本及探针核酸根据碱基互 补的原则进行特异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸，洗涤非特异性杂交后，探针上标 记的荧光信号既可在荧光显微镜下被检测。

本试剂盒包含一组探针：HER2（绿色）位点和CEN17 （红色）位点及FTSH操作配套试剂。

正常细胞信号方式：每个细胞显示两个绿色信号及两个红色信号。

异常细胞信号方式：细胞中若出现三个及以上绿色信号且红色信号不小于两个，则提示

HER2基因扩增。

7、 试剂来源

北京鑫诺美迪基因检测技术有限公司

8、 样本要求

福尔马林固定、石蜡包理的乳腺癌组织和细胞。