题目
培养基配制及适用性检查
操作规程共 3
页
编码： OS-
ZL037-02
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批准
人
制定日期审核日
期
批准
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颁发部
门质量部
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量
2份
生效
日期
分发单
位
质量部
1目的：建立一个培养基配制操作规程，保证检验结果的准确。2范围：适用于微生物限度检查用培养基。
3责任人：质检员、化验主管。
4内容：
4．1微生物限度检查用培养基的配制
4．1．1配制用具：蒸汽灭菌器、电炉、搪瓷缸、玻璃棒、三角瓶、棉塞、细绳、牛皮纸、天平、量筒。
4．1．2根据配制量称取干燥培养基质，置搪瓷缸中，加入规定的纯化水或琼脂等使其溶解，将搪瓷缸放到电炉上加热煮沸。
4．1．3根据培养基的配方要求调节PH值，将配好的培养基分装到若干个三角瓶中，瓶口塞好棉塞，盖上牛皮纸捆扎好，放入灭菌器中，灭菌条件为121℃高压灭菌15分钟。
4．1.4 PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液
成分（g/L）蛋白胨氯化钠磷酸二氢钾磷酸氢二钾重量1g 4.3g 3.56g 7.23g
方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水缓冲液16克，加入1000ml纯化水中，微温溶解，分装，115℃高压灭菌30分钟备用。将配好的缓冲液分装到若干支试管中，直接接种法缓冲液9ml/管，试管口塞好棉塞；放入灭菌器中进行灭菌。
4．1.5营养琼脂培养基
成分（g/L）蛋白胨氯化钠牛肉膏粉琼脂重量10g 5g 3g 15g
方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水培养基33克，加入1000ml纯化水中，加热煮沸溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟备用。
4．1.6玫瑰红钠琼脂培养基
成分（g/L）重量成分（g/L）重量
胨5g 葡萄糖10g
硫酸镁0.5g 磷酸二氢钾1g
琼脂14g 玫瑰红钠0.0133g
方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水培养基30.5克，加入1000ml纯化水中，加热煮沸溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟备用。
4．1.7胆盐乳糖培养基
成分（g/L）重量成分（g/L）重量
胨20g 牛胆盐10g
乳糖5g 磷酸氢二钾4g
氯化钠5g 磷酸二氢钾 1.3g
方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水培养基37克，加入1000ml纯化水中，加热煮沸溶解，分装，121℃高压灭菌20分钟备用。
4.1.8培养基配制注意事项：
（1）采用干燥培养基，按说明配制，应对灭菌后的培养基pH进行校
验。
（2）配制的培养基不应有沉淀，应于溶化后趁热过滤，灭菌后使用。
（3）培养基的分装量不得超过容器的2/3，以免灭菌时溢出。包装
时，塞子必须塞紧，以免松动或脱落造成染菌。
（4）培养基配制后应在2小时内灭菌，避免细菌繁殖。
（5）灭菌后的培养基应保存在2～25℃，防止污染，可在3周内用
毕；保存于密闭容器中，可在1年内使用。制备好的培养基放置时间不
宜过长，以免水分散失及染菌。
（6）宜采用水浴加热熔化琼脂培养基，勿用电炉直接熔化琼脂培养
基，以免营养成份过度受热而破坏。
（7）已熔化的培养基应8小时内一次用完，剩余培养基不宜再用。4.2培养基的适用性检查
4．2．1微生物限度检查中计数用培养基包括：（营养琼脂、玫瑰红钠琼脂）、控制菌检查用培养基包括胆盐乳糖培养基。
4．2．2计数培养基适用性检查试验用菌株
大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC（B）44102]
金黄色葡糖球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC（B）26003]
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC（B）63501]
白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC（F）98001]
黑曲霉菌（Aspergillus niger）[CMCC（F）98003]
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[CMCC（B）10104]
4.2.3检查方法
4.2.3.1培养基制备按规定程序新鲜配制营养琼脂（被检培养基和对照培养基）、玫瑰红钠培养基（被检培养基和对照培养基）、胆盐乳糖培养基，灭菌后备用。
4.2.3.2营养琼脂培养基
4.2.3.2.1方法：取7个无菌平皿，分别接种大肠埃希菌、金黄色葡糖球菌、枯草芽孢杆菌各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50～100cfu），另一平皿不接种菌作为空白对照，倾注对照营养琼脂培养基，混匀，凝固后于30～35℃倒置培养
48h，计数；被检培养基同法操作。
4.2.3.2.2结果判断：若被检培养基的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查符合规定。
4.2.3.3玫瑰红钠琼脂培养基
4.2.3.3.1方法：取5个无菌平皿，分别接种白色念珠菌，黑曲霉菌各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50～100cfu），另一平皿不接种菌作为空白对照，倾注对照玫瑰红钠琼脂培养基，混匀，凝固后于倒置培养72h，计数；被检培养基同法操作。
4.2.3.3.2结果判断：若被检培养基的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查符合规定。
4.2.3.4胆盐乳糖培养基
4.2.3.4.1方法：新鲜配制100ml/瓶的对照胆盐乳糖培养基4瓶，121℃灭菌
15min，备用。分别接种大肠埃希菌、铜绿假单胞菌以及金黄色葡糖球菌各一瓶，接种菌液量1ml（不大于100cfu），另一瓶不接种菌作为空白对照；被检培养基同法操作，置规定温度培养。
4.2.3.4.2结果判断：培养18小时，与对照培养基比较，被检培养基中试验菌应生长良好，表现为液体培养基变浑浊；培养48小时，空白培养瓶和接种金黄色葡糖球菌的培养瓶应不得浑浊。
4.2.3.5MUG培养基
4.2.3.
5.1方法：新鲜配制5ml/支的对照MUG培养基，121℃灭菌15min，备用。取3支，接种大肠埃希菌2支，接种菌液0.2ml（不大于100cfu），另一支不接种菌作为空白对照，培养5小时，在366nm紫外光灯下观察结果；被检培养基同法操作，置规定温度培养。
4.2.3.
5.2结果判断：空白培养管应不得浑浊，且366nm处观察无荧光；与对照培养基比较，被检培养基中试验菌应生长良好，表现为液体培养基变浑浊，366nm处应呈现荧光。若荧光不明显，则可延长至24h。
4.2.3.6麦康凯琼脂培养基
4.2.3.6.1方法：新鲜配制对照麦康凯琼脂培养基，121℃灭菌15min，冷却至60℃倾注平皿，35℃培养箱预培8h后备用。取5个无菌麦康凯琼脂平板，分别涂布接种大肠埃希菌和乙型副伤寒沙门菌各5皿，接种菌液0.1ml（含菌50～
100cfu），另一平板不接种菌作空白对照，涂布均匀后于规定温度倒置培养；被检培养基同法操作。
4.2.3.6.2结果判断：培养18小时，被检培养基菌落大小、形态特征及颜色应与对照培养基上的菌落一致；培养24小时，空白平板应无菌落生长。
4.2.3.7四硫磺酸钠亮绿培养基（TTB）
4.2.3.7.1方法：新鲜配制10ml/支的对照TTB培养基基础，121℃灭菌15min，备用。临用前，无菌操作加入0.2ml碘试液和0.1ml亮绿试液。取5支，分别接种乙型副伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌各2支，接种菌液1ml（不大于100cfu），另一支不接种菌作为空白对照；被检培养基同法操作，置规定温度培养。
4.2.3.7.2结果判断：培养18小时，与对照培养基比较，被检培养基中试验菌应生长良好，表现为液体培养基上清浑浊；培养24h，空白的培养管和接种金黄色葡糖球菌的培养管不得浑浊。
用于TTB中的碳酸钙对浑浊现象观察有影响，因此若浑浊现象不明显，则将各培养物接种至胆盐硫乳琼脂（DHL）或沙门、志贺属琼脂（SS）平板上划线观察TTB培
养物生长情况，空白对照和接种金黄色葡萄球菌的培养管划线后应无菌生长，对照和被检TTB培养划线接种至琼脂平板后应有菌落生长，且颜色形态一致。
常用药物皮试配制方法 一、 青霉素类：包括阿莫西林、呋苄西林、替卡西林克拉维钾、哌拉西林钠舒巴坦钠等。 皮试液配制：80万单位加 NS 至4ml ，取0.1ml 力口 NS 至1ml ，取0.1ml 力口 NS 至1ml ，取 0.1ml 或者 0.25ml 加 NS 至 1ml ， 0.1ml 含 20u 或 50u 。 皮试结果判断：20分钟观察结果。阴性：皮丘无改变，周围不红肿，无自觉症状。阳性： 局部皮丘隆起，并出现红晕硬结，直径大于 1cm 或红晕周围有伪足，痒感，严重则可发生 过敏性休克。 二、 先锋类药物 1、 头孢地嗪、头孢呋辛、头孢唑肟钠、头孢唑林、头孢噻肟钠等。 皮试液配制：取药 1g 力口 NS 至4ml ，取0.1ml 加NS 至10ml ，取0.1ml 力口 NS 至0.8ml （0.1ml 含300ug ）。皮试结果判断同青霉素过敏试验。 2、 头孢替安 皮试液配制：取药 1g 力口 NS3.5ml ，取0.1ml 力口 NS 至1ml ，取0.1ml 力口 NS 至1ml ，取0.1ml 加 NS 至 1ml ，0.1ml 含 286ug 。 皮试结果判断:15-30分钟观察结果。如局部荨麻疹样发红直径 20mm 以上或水疱直径 9mm 以上或有伪足样条痕或有全身反应，即为阳性。 三、 泰能、倍能、氨曲南 皮试配制：方法一：取药 0.5g 力口 NS100ml ，取0.6ml 力口 NS 至1ml ，取0.1ml 力口 NS 至1ml ， 取 0.5ml 力口 NS 至 1ml ，取 0.3ml 力口 NS 至 1ml 。 （500ug/ml ） 方法二：0.5泰能注入2ml ，取0.2ml 加生理盐水至1ml ，取0.1ml ，加生理盐水至 1ml ，取 溶液0.1ml ，加生理盐水至1ml ，即成含500ug/ml 的拟用药物的皮试溶液。 （氨曲南0.5g 皮试同泰能，氨曲南1g 皮试选方法二）皮试结果判断同青霉素过敏试验。 四、TAT 皮试（1500IU/支） 皮试液配制：原液加至 NS 到1ml ，取0.1ml 加NS 至1ml 即成。（皮内注射0.1ml 含15IU ） 皮试结果判断：局部无红肿即为阴性。如局部反应为皮丘红肿，硬结大于 1.5cm ，红晕超过 4cm ，有时有伪足，主诉痒感，甚至全身过敏反应，即为阳性。 脱敏疗法方法： 第一次：取TAT0.1ml+生理盐水至 第二次：取TAT0.2ml+生理盐水至 第三次:取 TAT0.3ml+生理盐水至 第四次：取余液+生理盐水至1ml 肌肉注射. 每隔20分钟注射一次，在脱敏过程中密切观察病人的反应 .如病人有气促、面色苍白、紫绀、 荨麻疹及头晕、心跳等不适时，应即停止注射并从速处理并报告医生 . 五、 硅降钙素（100U/ml ） 皮试液配制：取 0.1ml 加NS 至1ml 。 皮试结果判断：15分钟观察，局部不超过中度红色为阴性，超过中度红色为阳性。 六、 V B1 （ 100mg/2ml ） 皮试液配制：取 0.1ml 加NS 至1ml 。 皮试结果判断同青霉素过敏试验。 1ml 肌肉注 射； 1ml 肌肉注射；
培养基适用性检查规程 目的：建立一个培养基的灵敏度检查，确保培养基性能可靠。 范围：适用于微生物检验。 责任：微生物检验员。 依据：《中国药典》2010年版一部附录、2010版GMP实施指南 规程： 1.不应在同一无菌室内同时操作2个或2个以上菌株。 2.菌株传代次数不得超过5代（以菌种保存中心获及的冷冻干燥菌种为第0代）。 一、计数培养基的适用性检查 1、菌液制备 取大肠埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物少许接种至营养肉汤或营养琼脂培养基中，30-35℃培养18-24h；取白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，培养24～48小时，取上述培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50-100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。 菌液制备后若在室温下放置，应在两小时内使用；若保存在2-8℃，可在24小时内使用。
2、适用性检查 取大肠埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各1ml（50-100cfu）,分别注入无菌平皿中，立刻注入待检查营养琼脂培养基和对照营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备4个平皿（其中2个注入待检查营养琼脂培养基，另两个注入对照营养琼脂培养基）。30-35℃培养48h，计数。 取白色念珠菌1ml（50-100cfu）,注入无菌平皿中，立刻注入待检查玫瑰红钠琼脂培养基和对照玫瑰红钠琼脂培养基，平行制备4个平皿（其中2个注入待检查玫瑰红钠琼脂培养基，另两个注入对照玫瑰红钠琼脂培养基）。23-28℃培养72h，计数。 3、结果判断 若被检培养基上的菌落数不小于对照培养基上的菌落数的70%，且菌落大小、形态两者一致，判断该培养基的适用性检查符合规定。 二、控制菌检查用培养基的适用性检查 1.菌液制备 取大肠埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌的新鲜培养物少许接种至营养肉汤或营养琼脂培养基中，30-35℃培养18-24h；取白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，培养24～48小时，取上述培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为10-100cfu、每1ml50-100cfu和每1ml大于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。 菌液制备后若在室温下放置，应在两小时内使用；若保存在2-8℃，可在24小时内使用。 2、适用性检查 控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。 (1)、液体培养基促生长能力检查，分别接种不大于100cfu的试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短
非无菌产品微生物限度检查用培养基 适用性验证
目录 1.验证目的 (1) 2.参照标准 (1) 3.验证项目 (1) 4.验证工作小组及职责 (1) 5.试验材料 (2) 6.试验过程 (3) 7.验证周期 (4) 8.附件 (4)
1、验证目的： 需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数用培养基应进行培养基的适应性检查，本次验证的目的是为了确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适合需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数计数的测定。 2、参照标准：《中国药典》2015年版四部 3、验证项目：胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适用性验证 4.验证小组及职责 4.1 验证小组 4.2 验证职责 5.试验材料 5.1验证所用培养基：
5.2验证用菌株培养 5.2. 仪器设备： 5.2.1. XXXXX立式压力蒸汽灭菌器 5.2.2.XXXX水平流净化工作台 5.2.3.XXXXXX干燥箱 5.2.4.XXXXX型霉菌培养箱 (20～25℃) 5.2.5. XXXXX电热恒温培养箱(30～35℃) 5.3. 稀释剂： 0.9%无菌氯化钠溶液 6.试验过程 6.1菌液制备 取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培
养物，加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。 菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2?8℃，可在24小时内使用。 6.2、适用性检查 培养基适用性检查 取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的菌悬液与黑曲霉的孢子悬液（均不大于100cfu），分别注入无菌平皿中，立即倾注适用性检查的胰酪大豆胨琼脂培养基，用于检查胰酪大豆胨琼脂培养基的需氧菌总数计数适用性。其中，接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的培养皿于30-35℃培养，时间不超过3天。接种白色念珠菌与黑曲霉的孢子的培养皿于30-35℃培养，时间不超过5天。 取白色念珠菌的菌悬液与黑曲霉的孢子悬液（均不大于100cfu），分别注入无菌平皿中，立即倾注适用性检查的沙氏葡萄糖琼脂培养基，用于检查沙氏葡萄糖琼脂培养基的霉菌和酵母菌总数计数适用性。培养温度为20-25℃，培养时间不超过5天。 上述每一试验菌株平行制备两个平皿，同时用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述实验。 阴性对照 为确认试验条件符合要求，同时进行培养基阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。
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各种皮试液的配制方法 1、青霉素皮试液的配制 以青霉素一瓶（80万u）为例，注入等渗盐水4ml则每ml含20万u. 取加等渗盐水至1ml，每ml含2万u. 取加等渗盐水至1ml，每ml含2000u. 取加等渗盐水至1ml，每ml含200万u. 取青霉素皮试液（含20u）作皮内注射，观察20分钟后，判断试验结果。 2、头孢唑啉钠皮试液的配制 0．5g/瓶头孢唑啉钠加等渗盐水至5ml －→ml 取瓶加等渗盐水至5ml －→2mg/ml 取瓶加等渗盐水至5ml －→60μg/ml 取头孢唑啉钠皮试液（含6μg）作皮内注射，观察20分钟后，判断试验结果。 3、头孢曲松皮试液的配置 在1 g的头孢曲松钠中加入生理盐水4 ml,充分溶化,使每毫升浓度为250 mg/ml。 用1 ml注射器从上液中抽取 ml,加生理盐水至1 ml，使其浓度为50 mg/ml。 取 ml，加生理盐水至1 ml，使其浓度为5 mg/ml。 取 ml，加生理盐水至1 ml，即成浓度为500 μg/ml的皮试液。 取头孢曲松皮试液（含50 μg/ml）作皮内注射，观察20分钟后，判断试验结果。 4、氨苄青霉素皮试液的配制 0．5g/瓶加等渗盐水至2ml －→250mg/ml 取0．1ml加等渗盐水至1ml －→25mg/ml 取0．1ml加等渗盐水至1ml －→ml 取0．1ml加等渗盐水至1ml －→ml 取氨苄青霉素皮试液（含25μg）作皮内注射，观察20分钟后，判断试验结果。 5、破伤风抗毒素皮试液的配制 （1）每支安瓿内含TAT1500U，加生理盐水至1ml（因原液只有） （2）取加生理盐水充分摇匀，每ml含150u. 取（含15U）于前臂掌侧下段局部消毒后皮内注射，20min观察局部反应。6.门冬酰胺酶①皮试液的配制 a．取门冬酸胺酶1000u加生理盐水lml溶解后 即成1000u／ml. b．取上液0．lml加生理盐水稀释至lml即成。 ②皮试方法及结果观察取皮试液0．lml在前臂作皮内试验，结果判断同青霉素皮试。阳性者不可田。 ③注意事项 a．不同药厂、不同批号产品的纯度和过敏反应均有一差异，使用时必须慎重。 b．有过敏史的病人应十分小心或不用。
培养基适用性检查记录 质量部
培养基名称：沙氏葡萄糖琼脂培养基来源：批号： 对照培养基：来源：批号： 检验依据：检验人：检验日期： 一、实验菌种： 白色念珠菌[CMCC(F)98 001]第代 黑曲霉[CMCC(F)98 003]第代 二、菌液制备 将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养5～7天；取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml的菌悬液。将黑曲霉接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养5～7天。加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml的菌悬液。 三、培养基适用性检查 取5个无菌平皿，分别接种白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接种1ml菌液（含 菌适宜浓度），另一皿接种1ml PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液作为空白对照，倾注对照沙 氏葡萄糖琼脂培养基，混匀。凝固后倒置培养，20-25℃培养5天计数。被检培养基同 法操作。 四、结果判断 五、结论 本品按《中国药典》2015年版“非无菌产品微生物检查：微生物计数法”及培养基适用性检验操作规程检验，结果：□符合规定□不符合规定。
培养基名称：胰酪大豆胨琼脂培养基来源：批号： 对照培养基：来源：批号： 检验依据：检验人：检验日期： 一、实验菌种： 金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]第代 铜绿假单胞菌[CMCC(B)10 104]第代 枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]第代 白色念珠菌[CMCC(F)98 001]第代 黑曲霉[CMCC(F)98 003]第代 二、菌液制备 将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24 小时；取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml的菌悬液。将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养5～7天；取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml的菌悬液。将黑曲霉接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养5～7天。加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml 的菌悬液。 三、培养基适用性检查 取11个无菌平皿，分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌适宜浓度），另一皿接种1ml PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液作为空白对照，倾注对照胰酪大豆胨琼脂培养基，混匀。凝固后倒置培养，金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌皿30-35℃培养3天计数；白色念珠菌、黑曲霉20-25℃培养5天计数。被检培养基同法操作。 四、结果判断
《皮试液配制方法大全》 1、青霉素80万U/瓶（160万U/瓶）：80万青霉素加生理盐水溶解至4ml（8ml）;(20万U/ml) 取上液0.1ml+生理盐水至1ml;(2万U/ml) 取上液0.1ml+生理盐水至1ml;(2千U/ml) 取上液0.25ml+生理盐水至1ml;(500U/ml) 取上液0.1ml作皮试(即50U) 2、美洛西林舒巴坦钠1.25g/瓶以上所需药物加生理盐水溶解至5ml;(250mg/ml) 取上液0.1ml+生理盐水至1ml;(25mg/ml) 取上液0.1ml+生理盐水至1ml;(2.5mg/ml) 取上液0.2ml+生理盐水至1ml;(0.5mg/ml) 取上液0.1ml作皮试(即0.05mg) 皮试结果判断同青霉素。 3、氨苄西林钠氯唑西林钠2g/瓶以上所需药物加生理盐水溶解至 8ml;(250mg/ml) 取上液0.1ml+生理盐水至1ml;(25mg/ml) 取上液0.1ml+生理盐水至1ml;(2.5mg/ml) 取上液0.2ml+生理盐水至1ml;(0.5mg/ml) 取上液0.1ml作皮试(即0.05mg) 皮试结果判断同青霉素。 4、氨苄西林1g/瓶、氯唑西林1g/瓶、氨苄西林钠氯唑西林钠1g/瓶、阿洛西林舒巴坦钠1g/瓶： 以上所需药物加生理盐水溶解至4ml;(250mg/ml) 取上液0.1ml+生理盐水至1ml;(25mg/ml) 取上液0.1ml+生理盐水至1ml;(2.5mg/ml)
取上液0.2ml+生理盐水至1ml;(0.5mg/ml) 取上液0.1ml作皮试(即0.05mg) 皮试结果判断同青霉素。 5、阿莫西林舒巴坦钠1.5g/瓶、派拉西林舒巴坦钠1.5g/瓶以上所需药物加生理盐水溶解至6ml;(250mg/ml) 取上液0.1ml+生理盐水至1ml;(25mg/ml) 取上液0.1ml+生理盐水至1ml;(2.5mg/ml) 取上液0.2ml+生理盐水至1ml;(0.5mg/ml) 取上液0.1ml作皮试(即0.05mg) 皮试结果判断同青霉素。 6、美洛西林0.5g/瓶、派拉西林0.5g/瓶、氨苄西林0.5g/瓶以上所需药物加生理盐水溶解至2ml;(250mg/ml) 取上液0.1ml+生理盐水至1ml;(25mg/ml) 取上液0.1ml+生理盐水至1ml;(2.5mg/ml) 取上液0.2ml+生理盐水至1ml;(0.5mg/ml) 取上液0.1ml作皮试(即0.05mg) 皮试结果判断同青霉素。 7、长效西林(苄星青霉素)120万U/瓶： 长效西林+生理盐水5.8ml溶解;(20万U/ml) 取上液0.1ml+生理盐水至1ml;(2万U/ml) 取上液0.1ml+生理盐水至1ml;(2千U/ml) 取上液0.25ml+生理盐水至1ml;(500U/ml) 取上液0.1ml作皮试(即50U/0.1ml) 皮试结果判断同青霉素。 8、普鲁卡因： 普鲁卡因40mg/支，浓度为0.25%;
" 起草人Prepared by: 起草日期 Date: ` _____________________ QC 审核人Reviewed by:>审核日期 Date:_____________________ QC？ 审核人Reviewed by:审核日期Date: ： QA 批准人Approved by: 批准日期 ^ Date: 质量部QD
目的 Purpose 为保障微生物检验的准确性及相关工作特制定本规定。 范围 Scope 本程序适用于微生物限度测定培养基的适用性检查及相关工作。 职责 Responsibility ！ 分析员：严格按照本操作规程执行。及时完成各类相关记录。在主管的指导下进行任何可能的OOS及偏差调查。 主管：监督本操作规程的执行。对检验员进行必要的培训。指导任何可能的OOS和偏差调查。 内容procedure 1检验员应根据培养基配制程序或培养基各自的说明书配制培养基。 2试验用菌种及培养基 2.1菌种: 2.1.1培养基灵敏度测试所用的菌株传代次数不得超过5代，从国家药检所或菌种保藏中心购买。 2.1.2枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[ATCC 6633] 2.1.3~ 2.1.4大肠埃希菌(Escherichia coli) [ATCC 8739] 2.1.5金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [ATCC 6538] 2.1.6白色念珠菌(Candida albicans) [ATCC 10231] 2.1.7黑曲霉(Aspergillus niger)[ATCC 16404] 2.1.8伤寒沙门菌(Salmonella) [ATCC 14028] 2.1.9铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [ATCC 9027] 2.2培养基 2.2.1按照培养基说明书进行配制灭菌。 2.2.2| 2.2.3大豆酪蛋白消化肉汤 Soybean-Casein Digest Broth 2.2.4大豆酪蛋白消化琼脂 Soybean-Casein Digest Agar 2.2.5沙氏葡萄糖琼脂 Sabouraud Dextrose Agar
培养基适用性检查 验证方案 文件编号：VMP-VV-501-00 起草人： 审核人： 批准人： 批准日期：年月日
验证立项申请表
验证方案审批表
1.概述 通过验证以确认所采用的培养基适合于细菌、霉菌及酵母菌的测定及控制菌的检查，根据特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。若符合，按验证的方法和条件进行微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。 2.验证目的及范围 为了确认所采用细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查的培养基是否符合微生物限度检查法的规定要求，以保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。 3.验证风险评估 对于本次验证的执行进行了如下的风险分析： 4.验证前准备 4.1验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。培训人员记录见附件1。 4.2将所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。
无菌移液管。 5.验证内容 5.1测试环境条件要求 所有检查在环境洁净度C级下的局部A级洁净度的单向流空气区域内隔离系统内进行，其全过程严格遵守无菌操作，能防止微生物污染。 5.2计数培养基 5.2.1验证用菌种及培养基： 5.2.1.1来源：食品药品检验所 5.2.1.2菌落计数用菌种 注：编号由菌种首字母-传代代数-配制日期组成。 5.2.2培养基及其制备方法：取市售的脱水培养基，分别按照规定方法进行配制后灌装于洁净的三角烧瓶中，然后加塞灭菌，在实验前加温熔化备用。 5.2.3菌液制备 5.2.3.1接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10ml营养肉汤培养基中，30～35℃培养18～24小时，取此培养液1ml，加0.9％无菌氯化钠溶液至10ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-6～10-7，使菌数约为50～100cfu/ml，做活菌计数备用。5.2.3.2接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml改良马丁培养基中，23～28℃培养24～48小时，取此培养液1ml，加0.9％无菌氯化钠溶液至10ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-6～10-7，使菌数约为50～100cfu/ml，做活菌计数备用。
药物皮试液配制操作规程 一、青霉素类 按《中国药典》2000年版临床用药须知规定，使用青霉素类抗生素前均需做青霉素皮肤试验，阳性反应者禁用。 青霉素类药物在应用前可用青霉素G钠皮试液进行皮试。另外也可用青霉素类原药做皮试（供选用的试液浓度为300μg/ml或按说明书规定）。 青霉素G钠皮试液的配制方法如下： 规格：80万单位 配制方法：取注射用青霉素钠80万单位加生理盐水至4ml溶解摇匀，用1ml注射器取稀释液0.1ml加生理盐水稀释至1ml；取稀释液0.1ml加生理盐水稀释至1ml；取稀释液0.25ml加生理盐水稀释至1ml（每ml稀释液含青霉素钠500单位）；将0.1ml注入皮内。 规格：160万单位 配制方法：取注射用青霉素钠160万单位加生理盐水至8ml溶解摇匀，用1ml 注射器取稀释液0.1ml加生理盐水稀释至1ml；取稀释液0.1ml加生理盐水稀释至1ml；取稀释液0.25ml加生理盐水稀释至1ml（每ml稀释液含青霉素钠500单位）；将0.1ml注入皮内。 其他青霉素类原药皮试液的配制方法如下： 1、注射用氨苄青霉素钠 （1）规格：0.5g （即50万μg） 配制方法：取0.5 g注射用氨苄青霉素钠加生理盐水至5ml溶解摇匀，用1ml 注射器取稀释液0.1ml加生理盐水稀释至1ml；取稀释液0.1ml加生理盐水稀释至1ml；取稀释液0.3ml加生理盐水稀释至1ml（每ml稀释液含氨苄青霉素钠300μg）；将0.1ml注入皮内。 （2）规格：1.0g（即100万μg） 配制方法：取1.0 g注射用氨苄青霉素钠加生理盐水至5ml溶解摇匀，用1ml 注射器取稀释液0.1ml加生理盐水稀释至1ml；取稀释液0.1ml加生理盐水稀释至1ml；取稀释液0.15ml加生理盐水稀释至1ml（每ml稀释液含氨苄青霉素钠300μg）；将0.1ml注入皮内。 2、注射用苯唑西林钠 规格：0.5g （即50万μg）
黑龙江正康生物技术股份有限公司GMP管理文件 一、目的：为保证培养基能够满足生产要求，特定培养基制备岗位操作规程。 二、适用范围：适用于培养基制备岗位的操作。 三、责任者：分发部门负责人，质量监督员，工艺员，操作人员。 四、正文： 1 操作前准备： 1.1 接收指令，根据指令情况填写生产状态标识牌，标明当日生产产品的品名、规格、批号、批量、岗位名称、生产日期。 1.2 检查上批次清场情况，有上一批次生产“清场合格证”，并确认无上次生产遗留物。 1.3 检查生产现场卫生状况，有厂房“已清洁”状态标识，并在效期内。 1.4 检查设备、设施及状态情况，有设备“已清洁”状态标识，并在效期内。 1.5 检查容器具卫生状况，有容器具“已清洁”状态标识，并在效期内。 1.6 检查生产用衡器是否处于水平状态，是否归零，是否有检定合格证，并在有效期内。 1.7 检查确认批生产记录及相应的配套记录已准备齐全。 2 生产操作： 2.1 领料： 2.1.1 根据生产指令开出限额领料单，领取所需用的原辅材料，并有质量管理部的检验合格报告
单。检查报告单上的物料编码、品名、数量、规格及外观质量，合格后才能使用；如不符合要求应拒绝收料； 2.1.2 按照《物料进入生产区标准操作规程》清除原辅料外包装物表面的异物灰尘，并清洁消毒，再复核物料编码、品名，规格、检查外观、数量，避免差错，放入物料暂存间中待用。 2.2 称量： 2.2.1 称量前应核对原辅料物料编码、品名、批号、生产厂家、规格等，应与检验报告单相符。 2.2.2 原辅料的使用量应根据原料的实际含量、含水量等因素进行换算，按检验用培养基制配法或各产品的工艺规程所规定的量进行100%的投料。 2.2.3 称量时所用的取料铲必须专用，不能混用，数量应有复核人，操作人和复核人均应在称量原始记录上签名。 2.2.4 液体药品临用前单独称量，称量完毕要立即清理称量台和台秤。 2.2.5 剩余的原辅料应密封贮存，并在容器外标明物料编码、品名、批号、日期、剩余量及使用人。 2.3 配制： 2.3.1 注意事项： 2.3.1.1 根据规程，核对所用原辅料的物料编码、品名、批号、生产厂、规格等； 2.3.1.2 每一个配制器皿必须标明所配培养基的品名、规格、批号和配制量； 2.3.1.3 配制时，每一种原辅料的加入和调制必须由核对人确认并作好记录； 2.3.1.4 配制过程中的温度调节和配制的最后定量均要有复核人确认，并有操作人和复核人签字。 2.3.2 配制过程 2.3.2.1 使用市售的成品培养基的配制过程按使用说明书配制即可。 2.3.2.2 使用各种原材料配制的配制过程见附注。
培养基适用性检查 计数实验的培养基适用性 该部分内容均为新增 规定了该内容的应用范围 采用标准菌种计数，回收率以及形态比较的判定方法 标准菌种为：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢 杆菌、白色念珠菌、黑曲霉；规定了稀释后的工作菌液 的保存条件和保存期限 引入了对照培养基的概念 判定的依据：回收率大于70％，且形态一致 控制菌检查的培养基适用性 该部分内容均为新增 规定了该部分内容的应用范围以及检查的项目 采用标准菌种比较的判定方法 根据培养基的用途不同，分为增菌培养基的促生长能 力、固体培养基的促生长能力、培养基的抑制能力、固 体培养基的指示能力、液体培养基的指示能力等5种检 查方法 在检查中引入了涂布接种的概念 1. 概述 培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节。计数测定用培养基的促生长能力是微生物限度检查结果判断的重要影响因素，控制菌检查用培养基也可能由于其促生长能力、指示能力、抑制能力的差异，从而对菌落颜色、形态等指标存在较大差异，影响结果判断的客观性。 培养基适用性检查是通过检验用培养基与对照培养基的比较，以阳性菌的生长状态或特征来评价拍段检验用培养基是否符合检验要求。 微生物限度检查用培养基主要分为细菌、霉菌及酵母菌计数测定用培养基和控制菌检查用培养基两部分。2010《版中国药典》微生物限度检
查法中收载了“适用性检查”对培养基质量进行控制。 2、培养基适用性检查实验的一般要求 2.1培养基适用性检查适用范围 2010版《中国药典》规定微生物限度检查中成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。 培养基使用性检查试验可用于确定实验室所用培养基(包括购置的不同批号的成品培养基、不同批号的脱水培养基干粉、按处方自行配制培养基不同批次的原材料等)、制备程序（包括水质控制、配制方法、灭菌程序等）、保存条件（温度、湿度、时间及盛装培养基的容器条件等）等是否满足微生物限度检查用要求。即上述影响培养基质量的各关键控制点应通过培养基使用性检查试验确定，如果任一控制点发生变化应重新进行培养基适用性检查。但是影响培养基质量的关键控制点的变化应掌握在微生物实验室质量控制的一般原则内（见2.2），超过一般原则的培养及是否还能满足微生物限度检查用，无法通过培养基适用性检查确定。 当检查结果出现异常，或实验室质量控制需要，也可通过培养基适用性检查提供一定依据。总之，培养基适用性检查是在正常条件下关于培养基质量的实验室控制措施，并不一定在每次具体的微生物限度检查样品检测试验活动中都必须同时进行培养基使用性检查试验，但每次微生物检查所用培养基均应经过适用性检查。 2.2微生物限度检查用培养基质量控制的一般原则 2.2.1不同处方培养基的替代使用不能通过培养基使用性检查试验简单确定。 2.2.2.培养基适用性检查不能取代供应商或其他法定标准对培养基的有效期、保存条件、制备方法等的更严格等的规定。 2.2. 3.如果没有特殊规定，培养基配制采用蒸馏水或纯化水均可，但应采用一定措施加以检测控制，如蒸馏水应核实PH是否为5~7；采用离子交换法制备的纯化水，电阻值应不小于2MΩ等。
培养基配制及适用性检查标准操作规程 Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT
建立培 养基配 制及适 用性检 查的标 准操作 规程， 规范实验人员的操作流程。 范围： 适用于微生物检验人员对培养基的规范管理。 依据： 《药品生产质量管理规范（2010年修订）》、《中华人民共和国药典》2015年版第四部 职责： 1.微生物检验员：负责实验室所需求的培养基管理工作，使日常检验可以顺利进行。 2.微生物检验主管：负责对日常配制培养基的规范操作进行监督。 内容 1 培养基的申购 根据检验项目、工作量和工作进度的需求，提前一个月进行所需的培养基申购。申购时需指定培养基供应商，必要时进行供应商审计。 2 培养基的验收 培养基到货后，微生物室检验员应进行验收。验收内容包括核对品名、数量、规格、生产厂商， 应与申购单一致；检查培养基包装有无破损、包装是否完整、产品是否在有效期内。
验收合格后，登记于《培养基领用台账》（附记录文件编号：SMP-10-QC-009-02（00））。 3 培养基的贮藏 未开封的脱水培养基贮存于阴凉室，使培养基处于低温、干燥、和避光条件下。已开封的脱水培养基应盖紧，贮存于阴凉库。 灭菌好的培养基应进行预培养72h检查无菌后，置4～8℃冷藏保存待用。灭菌后培养基储存期为7天。 4 培养基的配制 培养基的配制和使用应填写《培养基配制及使用记录》（附记录文件编号：SMP-10-QC-009-02（00））。 培养基配制批号原则：原材料批号-配制日期：比如2011年1月1日配制的培养基，培养基干粉批号000000，配制批号为:000000-110101。配制好的培养基贴《培养基标签》（附记录文件编号：R-SMP-10-QC-009-03）。（注：同一天同一培养基配置多次的，在原批号后加“-”加“数字”表示，如000000-110101-01） 培养基配制方法 使用商品化脱水合成培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配制，如重量/体积、pH、灭菌条件和操作步骤等。实验室使用各种基础成分制备培养基时，应按照配方准确配制，并记录相关信息如：培养基名称和类型及试剂级别，每个成分物质含量、制造商、批号，pH值，培养基体积/分装体积，灭菌条件（灭菌方式、温度及时间），配制日期、人员等，以便溯源。 水、容器具要求：培养基配制均采用纯化水，特殊说明时采用去离子水和蒸馏水。培养基配制所用容器和配套器具应洁净。对热敏感的培养基如糖发酵培养基其分装容器应先进行预灭菌，以保证培养基的无菌性。 称量与分装：快速称量所需量的脱水合成培养基（必要时佩戴口罩或在通风柜中操作，以防吸入含有有毒物质的培养基粉末）。以免吸潮。先加入适量的水，充分混合。注意避免培养基结块，然后加水至所需的量。根据说明书要求选择是否加热。分装体积不超过容器体积的2/3。配制斜面等含琼脂的培养基也需加热煮沸至完全溶解后分装。 pH 值的测定和调整
部分药品皮试液配制方法 1.注射用盐酸头孢吡肟规格0.5g（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液10ml稀释原药后，抽取0.1ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 2.注射用盐酸头孢吡肟规格1g（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.1ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 3.注射用哌拉西林钠规格0.5g（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液10ml稀释原药后，抽取0.1ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 4.注射用哌拉西林他唑巴坦钠规格1.25g（1g：0.25g）（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.1ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 5.注射用哌拉西林舒巴坦钠规格2.5g（2g：0. 5g）（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.05ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 6.注射用哌拉西林舒巴坦钠规格1.5g（1g：0. 5g）（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.1ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 7.注射用头孢哌酮钠他唑巴坦钠规格2.5g（2g：0.5g）（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.05ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.05ml皮内注射。 8.注射用头孢哌酮舒巴坦钠规格3g（2g：1g）（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.05ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.05ml皮内注射。 9.注射用盐酸头孢替安规格1.0g（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.1ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 10.注射用盐酸头孢替安规格2.0g（皮试液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.05ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.05ml皮内注射。 11.注射用氨苄西林钠舒巴坦钠规格3g（2g﹕1g）（皮试药液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液20ml稀释原药后，抽取0.05ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 12..注射用头孢甲肟规格0.5g（皮试药液浓度为500ug/ml） 取0.9%氯化钠注射液10ml稀释原药后，抽取0.1ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，抽取0.1ml皮内注射。 13.注射用青霉素规格80万U（皮试药液浓度为500U/ml） 取0.9%氯化钠注射液8ml稀释原药后，抽取0.1ml，再用0.9%氯化钠注射液稀释至20ml，抽取0.1ml皮内注射。 14.注射用青霉素规格400万U（皮试药液浓度为500U/ml） 取0.9%氯化钠注射液8ml稀释原药后，抽取0.1ml，用0.9%氯化钠注射液稀释至10ml，
无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程 目的：建立无菌检查用培养基适用性检查标准操作规程。 范围：适用于无菌检查使用培养基的适用性检查。 依据：中国药典》2015年版 《药品生产质量管理规范》2010年修订 《中国药品检验标准操作规程》2010年版 责任：QC化验员对实施本规程负责。 内容: 1、概要：无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌检查及灵敏度检查要求。本检查可在供试品的检查前或与供试品的检查同时进行。 2、材料及设备 2.1 生化培养箱 2.2 生物安全柜 2.3 中国浊度标准管（由中国药品生物制品检定所提供） 2.4 灭菌试管、灭菌注射器 2.5 0.9%无菌氯化钠溶液 2.6 0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液：取聚山梨酯80 0.05ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠至100ml，混匀，灭菌即可。3、无菌检查培养基的适用性检查 3.1无菌性检查 取新鲜配制灭菌的培养基各5瓶，硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃，胰酪大豆胨液体培养基置20～25℃，培养14天，应无菌生长。 3.2灵敏度检查 3.2.1菌种 培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0代），
并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 金黄色葡萄球菌[Staphylococcus aureus CMCC(B) 26003] 铜绿假单胞菌[Pseudomonas aeruginosa CMCC(B) 10104] 枯草芽孢杆菌[Bacillus subtilis CMCC(B) 63501] 生孢梭菌[Clostridium sporogenes CMCC(B) 64941] 白色念珠菌[Candida albicans CMCC(F) 98001] 黑曲霉[Aspergillus niger CMCC(F) 98003] 3.2.2菌液制备 3.2.2.1 金黄色葡萄球菌菌悬液制备 3.2.2.1.1 取金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24小时，取新鲜传代菌种一支待用。取一支灭菌中试管，加入3ml 0.9%无菌氯化钠溶液，把新鲜传代菌种培养物用接种环轻轻刮取，在加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液的试管壁上研磨，使之成为均匀悬液。 3.2.2.1.2 取菌悬液1ml于比浊管中，用0.9%无菌氯化钠溶液逐步稀释至与标准管的浊度一致。记录下所加入的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液的量，余下的2ml菌液盖上试管塞以备用。 3.2.2.1.3 打开试管塞，取1ml菌液于中试管中，加入比浊时所需的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液的量一致的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，此时试管中的细菌浓度与标准比浊管相一致。根据细菌浊度标准菌数表的菌数，将菌悬液用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9％无菌氯化钠溶液系列稀释至不大于100cfu/ml。 3.2.2.1.4 铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的菌悬液制备方法同金黄色葡萄球菌。 3.2.2.2 生孢梭菌菌悬液的制备 3.2.2.2.1取生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基上，30～35℃培养18～24小时，取一支灭菌中试管，用灭菌注射器吸取硫乙醇酸盐流体培养基中底部三分之二处的新鲜菌液1ml，加入
编号：FAL-YZ-005.1 R2A培养基适用性 验证报告 科技发展有限公司
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R2A培养基适用性验证报告 1.目的 因2015版药典纯化水检验用培养基变更,依1105 非无菌产品微生物限度检查方法,通过此次实验对所更换的R2A琼脂培养基进行适用性检查，以证明该方法及所采用的培养基适用于纯化水微生物限度检查日常检测。 2.范围 适用于本公司纯化水的微生物限度检查。 3．依据 中华人民共和国药典（2015年版） 4. 职责权限 5. 验证方法 5.1R2A培养基的适用性检查 5.1.1R2A培养基应进行培养基的适用性检查。 5.1.2菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代,试验用菌种应采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 5.1.3菌液制备铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的微生物培养基质控品,使用前注入1.1ml稀释液充分溶解后,在漩涡混合器上振荡混匀,制成1ml(相当于10～
100cfu/0.1ml)菌悬液。 5.1.4适用性检查取铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各10～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注R2A琼脂培养基，每株试验菌平行制备2 个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养不少于5天，计数； 5.1.5结果判定被检定的固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值在0.5～2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。判该培养基的适用性检查符合规定。 5.1.6实验前的准备 5.1. 6.1仪器设备 确认人: 日期: 5.1. 6.2操作环境 微生物限度检查应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的单向流空 气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。 5.1. 6.3器具无菌培养皿：（直径90mm） 1ml注射器
各种药物皮试配制方法 一、青霉素类 1、青霉素80万U/瓶：50u 80万青霉素加生理盐水溶解至4ml；（20万U/ml） 取上液0.1ml+生理盐水至1ml；（2万U/ml） 取上液0.1ml+生理盐水至1ml；（2千U/ml） 取上液0.25ml+生理盐水至1ml；（500U/ml） 取上液0.1ml作皮试（即50U） 2、青霉素160万U/瓶： 160万青霉素加生理盐水溶解至4ml；（40万U/ml） 取上液0.1ml+生理盐水至1ml；（4万U/ml） 取上液0.1ml+生理盐水至1ml；（4千U/ml） 取上液0.1ml+生理盐水至1ml；（400U/ml） 取上液0.5ml+生理盐水至1ml；（200U/ml） 取上液0.1ml作皮试（即20U） 3、美洛西林0.5g/瓶、派拉西林0.5g/瓶、氨苄西林0.5g/瓶 以上所需药物加生理盐水溶解至5ml；（100mg/ml） 取上液0.1ml+生理盐水至1ml；（10mg/ml） 取上液0.1ml+生理盐水至1ml；（1mg/ml） 取上液0.5ml+生理盐水至1ml；(0.5mg/ml即500ug/ml） 取上液0.1ml作皮试（50ug）(皮试结果判断同青霉素) 4、长效西林（苄星青霉素）120万U/瓶： 长效西林+生理盐水5.8ml溶解；（20万U/ml） 取上液0.1ml+生理盐水至1ml；（2万U/ml） 取上液0.1ml+生理盐水至1ml；（2千U/ml） 取上液0.25ml+生理盐水至1ml；（500U/ml） 取上液0.1ml作皮试（即50U/0.1ml）(皮试结果判断同青霉素) 二、头孢类、 原则：头孢类药物皮试液浓度为每ml含500ug，因此溶解药物时每0.5g溶解几毫升，共稀释三次，第二次稀释后就余零点几毫升，第三次再稀释至1ml即可。 1、头孢唑林钠0.5 头孢唑肟0.5 头孢米诺0.5 五水头孢唑林0.5 头孢替胺0.5 头孢匹罗0.5 以上所需药物加生理盐水溶解至4ml；（125mg/ml即0.5g/4ml） 第一次：取上液0.1ml+生理盐水至1ml；（12.5 mg/ml） 第二次：取上液0.1ml+生理盐水至1ml；（1.25mg/ml） 第三次：取上液0.4ml+生理盐水至1ml；（0.5mg/ml即500ug/ml) 皮试时取0.1ml（即50ug/0.1ml）(皮试结果判断同青霉素) 2、头孢替唑1.0 头孢哌酮钠1.0 头孢硫脒1.0 头孢西丁1.0 头孢噻肟钠1.0 头孢甲肟1.0 头孢曲松钠1.0 头孢美唑1.0